南瓜屬 （Cucurbita L）葫蘆 科 南瓜屬的一年生草本植物 ， 起源于美洲 ， 在 16 世紀(jì) 中 葉明中期傳入中國(guó)1。 南瓜 全 球目前栽培種主要有 5 個(gè) ： 分別 是中 國(guó)南瓜 ， 印度南瓜 ， 美洲南瓜 ， 灰籽南瓜和黒籽南瓜 ， 在中國(guó)主要是栽培前 3 種 。 南瓜 是 人類(lèi)最早栽培的古老作物之一 ， 在公元前 4050 年就 開(kāi) 始了美洲南瓜的栽培 ， 公元前 50003000 年就 有 了中國(guó)南瓜和墨西哥南瓜的殘片存在2。 據(jù)統(tǒng)計(jì) ， 中 國(guó)已經(jīng)入庫(kù)保存的南瓜份數(shù)總共有 1813 份 ， 其中 中 國(guó)南瓜 1 064份 ， 印度 南 瓜 357 份 ， 美洲 南 瓜 389 份 ， 黑籽 南 瓜占 3 份3。 由于 地 區(qū)間相互引種 、 種子公司自繁自育 、 農(nóng)民自繁自育 ， 導(dǎo)致市場(chǎng)上南瓜品種的名稱(chēng)眾多 ，同名異物或同物異名的情況頻繁出現(xiàn) ， 給南瓜種質(zhì)資源的收集工作和南瓜的育種工作造成困難 。 因此對(duì)于育種工作者來(lái)說(shuō) ， 種質(zhì)資源收集完成后 ， 通過(guò)對(duì)收集的資源進(jìn)行系統(tǒng)的評(píng)價(jià)分析 ， 才能夠更加明確需要選擇的育種親本 ， 實(shí)現(xiàn)相應(yīng)的育種目標(biāo) 。SRAP（sequence-related amplified polymorphism）又稱(chēng) 為 相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性 ， 2001 年由 美 國(guó)加州蔬菜作物系的 Li 等4發(fā)明 的 ， 是 一種基于 PCR 反應(yīng)熱 帶 作物學(xué)報(bào) 2015， 36（12）： 2142-2148Chinese Journal of Tropical Crops收稿 日 期 2015-03-28 修回 日 期 2015-06-03基金 項(xiàng) 目 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院瓜類(lèi)育種科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì) （No. CXTD-1-04）； 福 建 省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目 （No. CXTD-1-1304）； 福 建 省屬公益類(lèi)科研院所基本科研專(zhuān)項(xiàng) （No. 2014R1026-11）。作 者 簡(jiǎn)介 盧 麗 芳 （1990 年 ）， 女 ， 在 讀 碩 士 ； 研 究 方 向 ： 園 藝 植 物 分 子 生 物 學(xué) 。 * 通 訊 作 者 （Corresponding author）： 朱 海 生（ZHU Haisheng）； 溫 慶 放 （WEN Qingfang）。南瓜種質(zhì)資源遺傳多 樣性的 SRAP 分析盧麗 芳1， 朱海 生2，3，4*， 溫慶 放2，3，4*， 林義 章11 福建 農(nóng) 林大學(xué)園藝學(xué)院 ， 福建福州 3500022 福建省 農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所 ， 福建福州 3500133 福 建 省 農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究中心 ， 福建福州 3500134 福建 省 蔬菜工程技術(shù)研究中心 ， 福建福州 350013摘 要 本 研 究應(yīng)用 SRAP 分子 標(biāo) 記技術(shù)對(duì)所收集的 85 份南 瓜 資源進(jìn)行親緣關(guān)系分析 ， 從 100 對(duì)引 物 中挑出 17對(duì) 引 物 對(duì)其進(jìn)行條帶擴(kuò)增 。 結(jié)果表明 ： 共獲得條帶 200 條 ， 差 異 帶 有 187 條 ， 13 條 條 帶 為所有南瓜品種所共有 ， 多態(tài)性比例為 93.5 。 基 于 SRAP 數(shù) 據(jù) 通 過(guò) Ntsys2.10e 軟 件 計(jì) 算出 85 份 南 瓜 資源的遺傳 相似 系 數(shù) 在0.450 00.985 0。 通過(guò) 聚 類(lèi)分析將所收集的南瓜資源分為 3 大類(lèi) ： 中 國(guó) 南瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 ， 親緣關(guān)系較近的是中國(guó)南瓜與美洲南瓜 ， 二者與印度南瓜的親緣關(guān)系較遠(yuǎn) 。關(guān)鍵詞 南瓜 ； SRAP； 親緣 關(guān) 系 ； 聚類(lèi)分析中圖分類(lèi)號(hào) S642.1 文獻(xiàn) 標(biāo) 識(shí)碼 AAnalysis of Genetic Diversity in Squash by SRAP MarkersLU Lifang1， ZHU Haisheng2，3，4*， WEN Qingfang2，3，4*， LIN Yizhang11 College of Horticulture， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350002， China2 Crops Research Institute， Fujian Academy of Agricultural Sciences， Fuzhou， Fujian 350013， China3 Vegetable Research Center， Fujian Academy of Agricultural Sciences， Fuzhou， Fujian 350013， China4 Fujian Engineering Research Center for Vegetables， Fuzhou， Fujian 350013， ChinaAbstract In this study， SRAP was used to analyse the genetic relationship of 85 accessions in squash.Seventeen pairs of primers were screened out of 100 primer pairs which produced 200 DNA bands, with 187bands of polymorphic and 13 bands for all squash. The ratio of polymorphic bands was 93.5%. Based on theSRAP data， the genetic similarity coefficient of 85 accessions in squash was between 0.450 0 to 0.985 0, whichwas calculated by Ntsys2. 10e. Through cluster analysis， Squashes were divided into three groups： Cucurbitamoschata， C. maxima， C. pepo. The relationship of C. moschata and C. pepo were close， the kinship with the C.maxima was far.Key words Squash； SRAP； Genetic relationship； Cluster analysisdoi 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.12.006第 12 期盧麗 芳 等 ： 南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性的 SRAP 分析編號(hào) 種質(zhì) 名稱(chēng) 來(lái)源 種質(zhì)類(lèi)型 編號(hào) 種質(zhì)名稱(chēng) 來(lái)源 種質(zhì)類(lèi)型1 密本 南 瓜 （特別種 ） 澄海 中國(guó)南瓜 44 一串 鈴 1號(hào)南 瓜 （花 皮 ） 衡陽(yáng) 中國(guó)南瓜2 原 種 密 本南瓜 湖北 中國(guó)南瓜 45 蜜 棗 南 瓜 （998） 澄 海 中 國(guó)南瓜3 密 本 南 瓜 晉中 中國(guó)南瓜 46 甜 面 大 南瓜 山西 印度南瓜4 夷香 密 本 山西 中國(guó)南瓜 47 五月 早 南瓜 湖北 中國(guó)南瓜5 密本 南 瓜 河北 中國(guó)南瓜 48 金密 南 瓜 河北 中國(guó)南瓜6 密本 南 瓜 江西 中國(guó)南瓜 49 金勾 南 瓜 山西 中國(guó)南瓜7 密本 南 瓜 金塔 中國(guó)南瓜 50 紅栗 南 瓜 河北 印度南瓜8 密本南 瓜 山西 中國(guó)南瓜 51 一串鈴 4號(hào)南瓜 衡 陽(yáng) 中國(guó)南瓜9 密本 南 瓜王 金塔 中國(guó)南瓜 52 勝栗 晉 中 印度南瓜10 密 本 南 瓜 8-2-2 福 建 福 州 中國(guó)南瓜 53 黑 蜜 寶 山 西 印度南瓜11 密 本 2 號(hào) 福 建 福州 中國(guó)南瓜 54 君 川 金 栗 吉林 印度南瓜12 密本 南 瓜 山西 中國(guó)南瓜 55 黑冠 軍 山 西 印度南瓜13 金鉤 南 瓜 遼寧 中國(guó)南瓜 56 謝花 面 南瓜 河北 印度南瓜14 大金 鉤 南瓜 河北 中國(guó)南瓜 57 黑蜜 南 瓜 山西 中國(guó)南瓜15 青豐金 鉤南瓜 河北 中國(guó)南瓜 58 迷你貝 貝 日本 印度南瓜16 庭院 南 瓜 韓國(guó) 中國(guó)南瓜 59 臺(tái)友 紅 南瓜 臺(tái)灣 印度南瓜17 星早 南 瓜 韓國(guó) 中國(guó)南瓜 60 中夏 南 瓜一號(hào) 廈門(mén) 中國(guó)南瓜18 巨 型 南 瓜 美國(guó) 印度南瓜 61 中 夏 南 瓜二號(hào) 廈門(mén) 中國(guó)南瓜19 無(wú) 蔓 一 號(hào) 遼寧 中國(guó)南瓜 62 綠 皮 南 瓜 F1 廈 門(mén) 印 度南瓜20 新無(wú) 蔓 一號(hào) 山西 中國(guó)南瓜 63 世龍 金 密南瓜 衡陽(yáng) 中國(guó)南瓜21 短蔓 紅 吉 林 印度南瓜 64 無(wú)蔓 一 號(hào) 福建福州 中國(guó)南瓜22 短蔓 紅 韓 國(guó) 印度南瓜 65 李白 福 建 福州 印度南瓜23 日本南 瓜 青縣 印度南瓜 66 早熟京 綠栗 甘肅 印度南瓜24 日本 南 瓜 遼寧 印度南瓜 67 紅板 栗 山 西 印度南瓜25 江西 農(nóng) 家種 江西 中國(guó)南瓜 68 韓香 栗 甘 肅 印度南瓜26 圓南 瓜 （三 明 ） 福建三明 印度南瓜 69 京銀 栗 南瓜 山西 印度南瓜27 三 明 長(zhǎng) 南瓜 福建三明 中國(guó)南瓜 70 晶 珠 早 南瓜 衡陽(yáng) 美洲南瓜28 永定 南 瓜 1 福建 永 定 中國(guó)南瓜 71 美國(guó) 綠 丹 山西 美洲南瓜29 永定 南 瓜 2 福建 永 定 中國(guó)南瓜 72 晶瑩 翠 青 縣 美洲南瓜30 武夷 山 南瓜本地種 2 號(hào) 福 建 武夷山 中國(guó)南瓜 73 改良 早 青一代 河北 美洲南瓜表 1 供試 材 料及來(lái)源Table 1 The test materials and sources的新 型 標(biāo)記系統(tǒng) ， 具有多態(tài)性高 、 樣品信息量大 、操作簡(jiǎn)便 、 重復(fù)穩(wěn)定 、 可靠性高 、 費(fèi)用低 、 非等位檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)5。 其 原 理 是通過(guò)對(duì)富含 GC 堿 基 的 外顯子和富含 AT 的內(nèi) 含 子及啟動(dòng)子的 ORF（開(kāi)放 式閱 讀框 ）設(shè)計(jì)一對(duì)獨(dú)特的引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增 ， 從而表現(xiàn)出多態(tài)性6。 為 了 從 分子水平上了解南瓜種質(zhì) 資 源 的 遺 傳 多 樣 性 ， 人 們 已 經(jīng) 用 RAPD7-11、ISSR10-11、 AELP12對(duì)遺傳 多樣性進(jìn)行分析 。 關(guān)于利用 SRAP 分 子 標(biāo) 記對(duì)南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性進(jìn)行研究的報(bào)道較少 ， 劉小俊等13利用 SRAP 對(duì)收 集 的76 份南 瓜 資源進(jìn)行遺傳多樣性分析 。 本研究在廣泛收集南瓜種質(zhì)資源 、 優(yōu)化南瓜 SRAP 擴(kuò)增 體 系的基礎(chǔ)上14， 對(duì)所 收 集到的 85 份南 瓜 種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析 ， 建立遺傳聚類(lèi)圖 ， 鑒定品種間的親緣關(guān)系 ， 為南瓜種質(zhì)資源的鑒定 、 分類(lèi)和南瓜的育種工作提供相應(yīng)的理論依據(jù) 。1 材料 與 方法1.1 材 料供 試 材料共 85 份 ， 見(jiàn)表 1。 包括 中 國(guó)南瓜 ，印度南瓜和美洲南瓜 3 個(gè)栽培 種 。 材料來(lái)源于全國(guó)各地 。1.2 方法1.2.1 供試 南 瓜 DNA 的提 取 參 考盧麗芳等14的方法 。1.2.2 PCR 反應(yīng) 及 電泳 反應(yīng)在 PCR 儀上 進(jìn) 行 ，2143- -第 36 卷熱 帶 作 物 學(xué) 報(bào)引物 類(lèi) 型 序列 （53）ME4 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGACCME6 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGTAAME7 正向引 物 TGAGTCCAAACCGGTCCME8 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGTGCME9 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGME10 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGEM1 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTAATEM2 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTTGCEN3 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTGACEM5 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTAACEM8 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTCTGEM9 反 向 引 物 GACTGCGTACGAATTCGAEM10 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTCAG表 2 SRAP 分析 所 用的正向引物序列和反向引物序列Table 2 The forward and reverse primersused in the SRAP analysis編號(hào) 種 質(zhì) 名稱(chēng) 來(lái)源 種質(zhì)類(lèi)型 編號(hào) 種質(zhì)名稱(chēng) 來(lái)源 種質(zhì)類(lèi)型31 武夷 山 南瓜本地種 1 號(hào) 福 建 武夷山 中國(guó)南瓜 74 西葫 蘆 早青一代 貴州 美洲南瓜32 武夷 山 南瓜本地種 3 號(hào) 福 建 武夷山 中國(guó)南瓜 75 新早 青 一代 山西 美洲南瓜33 本地南 瓜子 福建莆田 中國(guó)南瓜 76 湘葫一 號(hào) 湖南 美洲南瓜34 廬 豐 安 3 福 建 莆 田 中國(guó)南瓜 77 西 葫 蘆 福 建福州 美洲南瓜35 長(zhǎng) 型 南 瓜 福建莆田 美洲南瓜 78 碧 珠 山 西 美洲南瓜36 圓 形 種 福 建福州 中國(guó)南瓜 79 京 株 甘 肅 美洲南瓜37 南 瓜 子 福 建福州 中國(guó)南瓜 80 京 香 蕉 甘 肅 美洲南瓜38 日本 甜 栗 山西 印度南瓜 81 金榜 晉 中 美洲南瓜39 日本 甜 栗 晉中 印度南瓜 82 金珠 晉 中 美洲南瓜40 日本 紅 栗 荷蘭 印度南瓜 83 京葫 一 號(hào) 甘肅 美洲南瓜41 進(jìn)口紅 栗 日本 印度南瓜 84 滿田雅 綠 河北 美洲南瓜42 短蔓 京 紅栗 B 甘肅 印 度 南瓜 85 雪玉 遼 寧 美洲南瓜43 短 蔓 京 綠栗 甘肅 印度南瓜續(xù)表 1 供試 材 料及來(lái)源Table 1 The test materials and sources （continued)擴(kuò) 增 反 應(yīng) 體 系 為 20 uL， 其 中 包 括 0.2 mmol/LdNTP， 1.5 U Taq 酶 ， 80 ng DNA， 0.16 umol/L 的 單條 引 物 ， 1.5 mmol/L 的 Mg2+， 2 uL 10Buffer。 擴(kuò) 增程 序 ： 94 5 min 預(yù) 變 性 ； 接 著進(jìn)入 5 個(gè) 循 環(huán) ， 包括 94 1 min， 35 1 min， 72 1 min； 然后 進(jìn)入 35 個(gè)循 環(huán) ， 包 括 94 1 min， 52 1min， 72 1 min； 最 后 72 延 伸 10 min。 將 擴(kuò) 增 產(chǎn) 物 用1.8 的瓊 脂 糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè) ， 電泳緩沖液為1TBE， 采用 DL 2 000 DNA Marker 作為標(biāo) 準(zhǔn)分子量對(duì)照 ， 電泳時(shí)間 45 min。 電泳完 成后 ， 在 EB 中染色 10 min 左右 ， 放入 到凝膠成像分析系統(tǒng)中觀察 、 拍照 。1.2.3 數(shù)據(jù) 統(tǒng) 計(jì) 根據(jù)所獲得的電泳圖進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和處理 。 電泳圖中的每一條帶代表著模板DNA 和引 物 之間的一個(gè)結(jié)合位點(diǎn) ， 根據(jù) DNA 擴(kuò)增結(jié) 果 ， 進(jìn) 行人工計(jì)數(shù) ， 統(tǒng)計(jì)不同品種之間有重復(fù)性的多態(tài)性擴(kuò)增條帶 ， 有條帶的記為 1， 沒(méi)有 條 帶的則記為 0， 從而 形 成由 0 和 1 組成 的 原始矩陣 。 采用 Ntsys2.10e 軟件 進(jìn) 行數(shù)據(jù)處理 ， 獲得相應(yīng)的相似系數(shù)表和樹(shù)狀聚類(lèi)圖 。2 結(jié)果 與 分析2.1 引物 篩 選通過(guò)選用外觀形狀差異較大的 5 個(gè)南 瓜 品種對(duì)100 對(duì)引 物 進(jìn)行篩選 ， 選出 13 條引 物 （表 2）將其 用于 南瓜 SRAP 分析 ， 其 中 上游引物 6 條 ， 下游 引 物7 條 。 組成 17 對(duì)多 態(tài) 性高 、 重復(fù)性好 、 條帶清晰的 SRAP 引物 ， 以 此 對(duì) 85 份南 瓜 材料進(jìn)行 SRAP遺傳 多 樣性分析 ， 結(jié)果見(jiàn)表 3。2.2 17 對(duì)引 物 的 SRAP 擴(kuò)增 結(jié) 果由表 3 可知 ， 17 對(duì)引 物 共擴(kuò)增出條帶 200 條 ，平 均 每 個(gè)引物擴(kuò)增出條帶 11.76 條 ， 其中 差 異帶有187 條 ， 13 條條 帶 為所有南瓜品種所共有 ， 多態(tài)性比例為 93.5 。 其中 ME7EM1 組合 擴(kuò) 增條帶數(shù)最多 ， 達(dá) 到 17 條 ， 多 態(tài) 性 為 100 ， 見(jiàn) 圖 1。ME6EM9 擴(kuò)增 條 帶數(shù)最少 ， 為 8 條 ， 差異 帶 有 7條 ， 多態(tài) 性 為 87.5 。 17 對(duì)引 物 擴(kuò)增條帶的多態(tài)性 ， 最高為 100 ， 最低 為 77.78 。 結(jié)果 表 明 ，南瓜種質(zhì)資源的遺傳多樣性很高 ， 同時(shí)也表明了SRAP 分 子 標(biāo) 記能夠很好地檢測(cè)南瓜種質(zhì)資源的遺傳多樣性 。2144- -第 12 期盧麗 芳 等 ： 南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性的 SRAP 分析種質(zhì) 類(lèi) 型 中國(guó)南瓜 印度南瓜 美洲南瓜 中國(guó) -印度 南 瓜 中國(guó) -美洲 南 瓜 印度 -美洲 南 瓜多態(tài)性 / 45 51.5 31.5 78.5 76 81.5表 4 17 對(duì)引 物 對(duì)各種質(zhì)類(lèi)型南瓜的擴(kuò)增多態(tài)性Table 4 The polymorphism of different Squash type by 17 primer pairs圖 1 引物 ME7EM1 對(duì) 85 份南 瓜 的擴(kuò)增結(jié)果Fig. 1 The amplification result of primer ME7EM1引物 總帶 數(shù) 差異帶 基本帶 多態(tài)性 /ME10/EM10 16 15 1 93.75ME10/EM9 12 12 0 100.00ME7/EM1 17 17 0 100.00ME4/EM5 9 8 1 88.90ME4/EM2 11 10 1 90.90E6/EM9 8 7 1 87.50ME6/EM10 11 10 1 90.90ME7/EM3 12 12 0 100.00ME8/EM8 14 11 3 78.57ME9/EM1 9 7 2 77.78ME9/EM5 13 12 1 92.31ME10/EM2 11 10 1 90.90ME10/EM3 14 14 0 100.00ME10/EM5 10 9 1 90.00ME7/EM2 13 13 0 100.00ME6/EM3 9 9 0 100.00ME9/EM2 11 11 0 100.00合 計(jì) 200 187 13 93.50表 3 17 對(duì)引 物 的擴(kuò)增統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 3 The amplicon of 17 primer pairs由 表 4 可 知 ， 3 個(gè) 栽 培 種的種內(nèi)多態(tài)性高低順序?yàn)?： 印度南瓜 中國(guó) 南 瓜 美洲 南 瓜 ， 分別為51.5 、 45 、 31.5 。 而種 間 兩兩多態(tài)性為 ： 中國(guó) -印度 南 瓜為 78.5 ， 中國(guó) -美洲 南 瓜為 76 ，印 度 -美洲 南 瓜為 81.5 。2.3 85 份南 瓜 聚類(lèi)結(jié)果基于 SRAP 數(shù)據(jù) 通 過(guò) Ntsys2.10e 軟件 計(jì) 算出 85南瓜 資 源的遺傳相似系數(shù) 。 85 份南 瓜 遺傳相似系數(shù)在 0.450 00.985 0， 平 均 為 0.7155。 其 中 材 料 10與材 料 83 的遺 傳 相似系數(shù)最小 （為 0.450 0）， 說(shuō) 明材 料 10 與材 料 83 的親 緣 關(guān)系最遠(yuǎn) 。 材料 52 與材料 54 的遺 傳 相似系數(shù)最大 （為 0.985 0）， 說(shuō) 明 材料52 與材 料 54 的親 緣 關(guān)系最近 。采用 Ntsys2.10e 軟件 對(duì) 85 份南 瓜 資源親緣關(guān)系進(jìn)行 SRAP 分析 。 根 據(jù) 圖 2 可知 ， 在 遺 傳相似系數(shù)為 0.616 0 處 ， 可將 南 瓜分為 3 大類(lèi) ， 分 別 是中2145- -第 36 卷熱 帶 作 物 學(xué) 報(bào)12453626113314282915192032347893764494748511327303157633612251617606144457071747576857784827879808183357273234640421018212241383924525456535562656667685859435068圖 2 85 份南瓜 聚類(lèi)圖Fig. 2 A dendrogram of 85 Squash0.55 0.66 0.77 0.88 0.98Coefficient2146- -第 12 期盧麗 芳 等 ： 南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性的 SRAP 分析國(guó)南 瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 。 親緣關(guān)系較近的是中國(guó)南瓜與美洲南瓜 ， 2 類(lèi)南 瓜 與印度南瓜的親緣關(guān)系較遠(yuǎn) 。第一類(lèi) ： 中國(guó)南瓜 （41份 ）， 包 括 密本南瓜特別種 （1）、 原 種 密本南瓜 （2）、 夷 香 密本 （4）、 密 本 南瓜 （5）、 密 本 南瓜 （3）、 密 本 南瓜 （6）三 明 圓 南瓜（26）、 密 本 2 號(hào) （11）、 本 地 南瓜子 （33）、 大 金 鉤南瓜 （14）、 永定 南瓜 1號(hào) （28）、 永定 南瓜 2 號(hào) （29）、青豐 金鉤南瓜 （15）、 無(wú) 蔓 一號(hào) （19）、 新 無(wú) 蔓一號(hào)（20）、 武 夷 山南瓜 本 地 種 3 號(hào) （32）、 廬 豐 安 3（34）、 密 本 南瓜 （7）、 密 本 南瓜 （8）、 密 本 南瓜王（9）、 南 瓜 子 （37）、 無(wú) 蔓 一 號(hào) （64）、 金 勾 南 瓜（49）、 五 月 早南瓜 （47）、 金 密 南瓜 （48）、 一 串 鈴一號(hào)南瓜 （51）、 金鉤 南瓜 （13）、 三明 長(zhǎng)南瓜 （27）、 武夷山 南瓜本地種 2 號(hào) （30）、 武 夷 山南瓜本地種 1 號(hào)（31）、 黑 密 南瓜 （57）、 世 龍 金密南瓜 （63）、 圓 形 種（36）、 密本 南瓜 （12）、 江西 農(nóng)家種 （25）、 庭院 南瓜（16）、 星 早 南瓜 （17）、 中 夏 南瓜 1 號(hào) （60）、 中 夏 南瓜 2 號(hào) （61）、 一 串 鈴 1 號(hào)南 瓜 （花 皮 ）（44）、 蜜 棗 南瓜 （998）（45）。第 二 類(lèi) ： 美洲南瓜 （17 份 ）， 有 晶 珠早南瓜（70）、 美 國(guó) 綠丹 （71）、 西 葫 蘆早青一代 （74）、 新 早青 一代 （75）、 湘 葫 一號(hào) （76）、 雪 玉 （85）、 西 葫 蘆（77）、 滿 田 雅綠 （84）、 金 珠 （82）、 碧 珠 （78）、 京 珠（79）、 京 香 蕉 （80）、 金 榜 （81）、 京 葫 一號(hào) （83）、 長(zhǎng)型 南 瓜 （35）、 晶瑩 翠 （72）、 改良 早青一代 （73）。第三 類(lèi) ： 印度南瓜 （27份 ）， 有 日 本南瓜 （23）、甜 面 大南瓜 （46）、 日 本 紅栗 （40）、 短 蔓 紅栗 （42）、密 本 南瓜 （10）、 巨 型 南瓜 （18）短蔓 紅 （21）、 短 蔓 紅（22）、 進(jìn) 口 紅栗 （41）、 日 本 甜栗 （38）、 日 本 甜栗（39）、 日 本 南瓜 （24）、 勝 栗 （52）、 君 川 金栗 （54）、謝 花 面南瓜 （56）、 黑 蜜 寶 （53）、 黑 冠 軍 （55）、 綠 皮南 瓜 F1（62）、 李 白 （65）、 早 熟 京綠栗 （66）、 紅 板栗 （67）、 韓 香 栗 （68）、 迷 你 貝貝 （58）、 臺(tái) 友 紅南瓜（59）、 短 蔓 京綠栗 （43）、 紅 栗 南瓜 （50）、 京 銀 栗南瓜 （69）。3 討論 與 結(jié)論SRAP 分子 標(biāo) 記在蔬菜15-17、 花卉18、 果樹(shù)19的親 緣 關(guān) 系鑒定和遺傳多樣性分析上應(yīng)用廣泛 ， 在南瓜上應(yīng)用不多 。 僅劉小俊等13利用 SRAP 分子 對(duì) 南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性進(jìn)行分析 ， 結(jié)果表明 SRAP分子 標(biāo) 記將 76 份南 瓜 材料分為 3 大類(lèi) ， 分 別 是中國(guó)南瓜 、 美洲南瓜和印度南瓜 。 劉小俊等8應(yīng)用RAPD 分子 標(biāo) 記對(duì) 30 份在 中 國(guó)栽培的南瓜進(jìn)行遺傳多樣性分析 ， 分類(lèi)結(jié)果與其應(yīng)用 SRAP 標(biāo)記 獲 得的分類(lèi)結(jié)果一致 。 李俊麗等9對(duì) 70份南 瓜 的遺傳多樣性進(jìn)行 RAPD 分 析 ， 結(jié) 果 將其分為 3 類(lèi) ， 分 別是 中 國(guó)南瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 ， 認(rèn)為親緣關(guān)系最近的是中國(guó)南瓜和美洲南瓜 ， 但 2 類(lèi)南 瓜 與印度南瓜的關(guān)系較遠(yuǎn) 。 張?zhí)烀?2對(duì) 4 個(gè) 南 瓜 屬栽培種進(jìn)行 AFLP 分析 ， 聚 類(lèi) 結(jié)果能夠?qū)?4 個(gè)栽 培 種分開(kāi) ，且美洲南瓜與黑籽南瓜關(guān)系較近 ， 兩者與中國(guó)南瓜的親緣關(guān)系稍遠(yuǎn) ， 三者與印度南瓜的關(guān)系最遠(yuǎn) 。 趙福寬等7應(yīng)用 RAPD 分子 標(biāo) 記對(duì) 76 份南 瓜 進(jìn)行親緣關(guān)系分析 ， 分類(lèi)結(jié)果與劉小俊等13、 李俊 麗 等9的分 類(lèi) 結(jié)果一致 ， 并認(rèn)為中國(guó)南瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 3 個(gè)栽 培 種的種間差異明顯 。 此外 ， 肖祖梅10應(yīng)用 RAPD 和 ISSR 分子標(biāo) 記對(duì)觀賞南瓜進(jìn)行遺傳多樣性分析 ， 楊正安等11應(yīng) 用 ISSR 和 RAPD 分 子 標(biāo)記 對(duì)云南黑籽南瓜進(jìn)行親緣關(guān)系分析 。 除了應(yīng)用分子標(biāo)記對(duì)南瓜的親緣關(guān)系和遺傳多樣性進(jìn)行分析外 ， 形態(tài)學(xué)標(biāo)記 、 細(xì)胞學(xué)標(biāo)記和同工酶標(biāo)記在南瓜上也有應(yīng)用 ， 如李俊麗20對(duì) 70 份南 瓜 資源的 45 個(gè)植物 學(xué) 性狀進(jìn)行鑒定 ， 通過(guò)聚類(lèi) ， 將 70 份南 瓜 分為 3 大類(lèi) 群 ， 分 別是中國(guó)南瓜 、 美洲南瓜和印度南瓜 ， 且美洲南瓜與中國(guó)南瓜的親緣關(guān)系最近 ， 印度南瓜與中國(guó)南瓜 、 美洲南瓜與印度南瓜的關(guān)系稍遠(yuǎn) 。 巴林21對(duì)南 瓜 F1 代雜 種 的一價(jià)染色體和細(xì)胞二價(jià)染色體進(jìn)行比較 ， 認(rèn)為中國(guó)南瓜和美洲南瓜的親緣關(guān)系最近 ， 與印度南瓜的關(guān)系次之 。 孫正海等22對(duì)中 國(guó) 南瓜 、 美洲南瓜 、 印度南瓜的 41個(gè)品 種 進(jìn)行過(guò)氧化物同工酶分析 ， 聚類(lèi)分析表明中國(guó)南瓜和美洲南瓜親緣關(guān)系近 ， 兩者與印度南瓜的關(guān)系較遠(yuǎn) 。本研究對(duì) 100 對(duì) SRAP 引 物 進(jìn) 行篩選 ， 挑出17 對(duì)引 物 進(jìn)行擴(kuò)增 ， 獲得擴(kuò)增條帶 200 條 ， 其中差 異 帶 187 條 ， 多態(tài) 性 比例為 93.5 ， 表明 所 收集的南瓜種質(zhì)資源的遺傳基礎(chǔ)范圍較廣 。 從種間差異來(lái)看 ， 印度 -美洲 南 瓜 中國(guó) -印度 南 瓜 中國(guó) -美洲南 瓜 。 從 種內(nèi)差異來(lái)看 ， 印度南瓜 中國(guó) 南 瓜 美洲 南 瓜 ， 這 一結(jié)果與孫正海等22對(duì)中 國(guó) 南瓜 、 美洲南瓜 、 印度南瓜的 41 個(gè)品 種 進(jìn)行過(guò)氧化物同工酶分析獲得的結(jié)果不一致 ， 孫正海等22認(rèn)為 中 國(guó)南瓜種內(nèi)差異最大 ， 印度南瓜種內(nèi)差異最小 。 通過(guò)聚類(lèi)分析 ， 將收集的 85 份南 瓜 分為 3 大類(lèi) ， 分 別 是中國(guó)南瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 ， 親緣關(guān)系較近的是中國(guó)南瓜和美洲南瓜 ， 它們與印度南瓜的親緣關(guān)系則較遠(yuǎn) 。 分類(lèi)結(jié)果與劉小俊8、13、 李俊 麗9、 張?zhí)?明12、趙福 寬 等7應(yīng)用 RAPD、 SRAP、 AFLP 分子 標(biāo) 記技2147- -第 36 卷熱 帶 作 物 學(xué) 報(bào)術(shù)得 到 的結(jié)果一致 ， 與形態(tài)學(xué)標(biāo)記 、 細(xì)胞學(xué)標(biāo)記和同工酶標(biāo)記獲得的結(jié)果也一致 。由于市場(chǎng)上南瓜品種名稱(chēng)眾多 ， 同名異物或異物同名的現(xiàn)象嚴(yán)重 ， 加上地區(qū)間的引種頻繁 ， 對(duì)育種工作造成困難 。 如本研究中 ， 10 號(hào)材 料 在種質(zhì)資源收集時(shí) ， 將其歸類(lèi)為中國(guó)南瓜 ， 實(shí)驗(yàn)后 ， 根據(jù)聚類(lèi)樹(shù)狀圖 ， 發(fā)現(xiàn)其屬于印度南瓜 ， 通過(guò)對(duì)其田間植株形態(tài) 、 果實(shí)外觀特征進(jìn)行觀察鑒定 ， 確定其為印度南瓜 。 印度南瓜類(lèi)群中 ， 52 號(hào) 勝 栗 與 54 號(hào) 君川 金 栗 2 個(gè)品 種 名稱(chēng)不同 ， 但兩者間的遺傳相似系數(shù)達(dá)到 0.985 0， 認(rèn)為 二 者是同一個(gè)品種 ， 即同物異名 。 中國(guó)南瓜類(lèi)群中 ， 19 號(hào)材 料 、 11 號(hào)材 料 、12 號(hào)材 料 均命名為密本類(lèi)南瓜 ， 但相互間的遺傳相似系數(shù)存在差異 ， 如 1 號(hào)材料 與 2 號(hào)材料 間遺傳相似系數(shù)最大為 0.9800。 1 號(hào) 與 9 號(hào) 、 12 號(hào) ， 2 號(hào)與 9 號(hào) 、 12 號(hào) ， 3 號(hào)與 12 號(hào) ， 4 號(hào)與 12 號(hào) ， 5 號(hào)與 12 號(hào) ， 6 號(hào)與 12 號(hào) ， 9 號(hào)與 11 號(hào) ， 11 號(hào)與 12號(hào) ， 這些 材 料間的遺傳相似系數(shù)均小于 0.900， 表明 11 個(gè)密 本 類(lèi)南瓜中并非都是密本南瓜 ， 存在同名異物現(xiàn)象 。本研究通過(guò) SRAP 分子 標(biāo) 記 ， 揭示了南瓜種質(zhì)資源的遺傳多樣性 ， 掌握了不同南瓜栽培種間的遺傳多態(tài)性和種內(nèi)多態(tài)性的情況 ， 對(duì)所收集的南瓜進(jìn)行分類(lèi) ， 建立了遺傳聚類(lèi)圖 ， 鑒定了品種間的親緣關(guān)系 ， 為南瓜親本的選配和品種選育提供了理論依據(jù)參考 文 獻(xiàn)1 張 箭 . 南瓜 發(fā) 展傳播史初探 J. 煙臺(tái) 大 學(xué)學(xué)報(bào) （哲學(xué)社會(huì)科學(xué)版 ）， 2010， 23（1）： 100-108.2 林 德 佩 . 南 瓜 植 物的起源和分類(lèi) J. 中 國(guó) 西 瓜甜瓜 ，2000（1）： 36-38.3 戚 春 章 ， 胡 是麟 ， 漆小泉 . 中 國(guó) 蔬 菜種質(zhì)資源的種類(lèi)及分布 J. 作物 品 種資源 ， 1997（1）： 2.4 Li G， Quiros C F. Sequence- related amplified polymorphism（SRAP）， a new marker system based on a simple PCRreaction：its application to mapping and gene tagging inBrassicaJ. Theor Appl Genet， 2001， 103： 455-461.5 史倩 倩 ， 王 雁 ， 周 琳 ， 等 . SRAP分子 標(biāo) 記在園林植物遺傳育種中的應(yīng)用 J. 生物 技 術(shù)通報(bào) ， 2011（11）：75-78.6王曉 菡 ， 郭 先鋒 ， 孫憲芝 ， 等 . SRAP標(biāo)記 在 園藝植物研究中的應(yīng)用 J. 山東農(nóng) 業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) （自然科學(xué)版 ）， 2009，40（4）： 650-654.7 趙福寬 ， 李 海英 ， 趙曉萌 . 南瓜種 質(zhì)資源親緣關(guān)系的RAPD分析 J. 分析 分 子植物育種 ， 2006， 4（3S）： 45-50.8 劉小 俊 ， 李 躍建 ， 趙 云 ， 等 . 中國(guó) 部 分栽培南瓜種質(zhì)資源遺傳多態(tài)性 RAPD分析 J. 西南 農(nóng) 業(yè)學(xué)報(bào) ， 2004，17（5）： 567-571.9 李俊 麗 ， 向 長(zhǎng)萍 ， 張宏榮 ， 等 . 南瓜 種 質(zhì)資源遺傳多樣性的 RAPD分析 J. 園藝 學(xué) 報(bào) ， 2005， 32（5）： 834 -839.10肖祖 梅 . 觀賞 南 瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性的 RAPD和 ISSR分析 D. 重慶 ： 西 南 大學(xué) ， 2008.11 楊正 安 ， 孟 平紅 ， 代 賢 . 云南 黑 籽南瓜種質(zhì)遺傳多樣性的 RAPD和 ISSR分 析 J. 植 物 遺 傳資源學(xué)報(bào) ， 2011，12（6）： 860-864.12 張 天 明 . 南 瓜 種 質(zhì)資源遺傳多樣性及親緣關(guān)系的 AFLP分析 D. 北京 ： 中 國(guó) 農(nóng)業(yè)科學(xué)院 ， 2005.13 劉小 俊 ， 李 躍建 ， 梁根云 ， 等 . 南瓜 資 源遺傳多樣性的 SRAP分析 J. 四川 大 學(xué)學(xué)報(bào) （自然科學(xué)版 ）， 2010， 47（5）： 1 195-1 200.14 盧麗 芳 ， 朱 海生 ， 溫慶放 ， 等 . 南瓜 SRAP反應(yīng) 體 系的建立與優(yōu)化 J. 福建農(nóng) 業(yè)學(xué)報(bào) ， 2014， 29（1）： 44-46.15 崔竣 杰 ， 宋 建文 ， 汪國(guó)平 ， 等 . 絲瓜 種 質(zhì)資源親緣關(guān)系的 SRAP分析 J. 植物遺 傳資源學(xué)報(bào) ， 2012， 13（6）：1 061-1 066.16 周坤 華 ， 張 長(zhǎng)遠(yuǎn) ， 羅劍寧 ， 等 . 苦瓜 種 質(zhì)資源遺傳多樣性的 SRAP分析 J. 廣東 農(nóng) 業(yè)科學(xué) ， 2013（2l）： 136-140.17 李永 平 ， 康 建坂 ， 林 琿 ， 等 . 10個(gè)佛 手 瓜栽培品種親緣關(guān)系的 SRAP分析 J. 福建 農(nóng) 林大學(xué)學(xué)報(bào) （自然科學(xué)版 ）， 2012， 41（6）： 590-594.18 智 麗 ， 滕 中 華 ， 李先源 ， 等 . 23種野 生 百合遺傳關(guān)系的 SRAP分析 J. 農(nóng)業(yè) 生 物技術(shù)學(xué)報(bào) ， 2011， 19（4）：677-684.19 劉 忠 ， 李 俊 ， 楊 武云 ， 等 . 利用 SRAP分析 岷 江下游荔枝資源的遺傳多樣性與親緣關(guān)系 J. 西 南 農(nóng) 業(yè)學(xué)報(bào) ， 2013， 26（3）： 1 152-1 159.20 李 俊 麗 . 南 瓜 種 質(zhì)資源遺傳多樣性與多糖多樣性的研究 D. 武漢 ： 華 中 農(nóng)業(yè)大學(xué) ， 2006： 9-64.21 巴 林 . 中 國(guó) 蔬 菜 栽 培 學(xué) M. 北 京 ： 農(nóng) 業(yè) 出 版 社 ，1987： 567-571.22 孫正 海 ， 李 躍建 ， 宋 明 ， 等 . 南瓜 屬 三個(gè)種種質(zhì)的遺傳多樣性 J. 西南 農(nóng) 業(yè)學(xué)報(bào) ， 2004， 17（1）： 71-73.責(zé)任 編 輯 ： 林海妹2148- -