引文格式 史曉晶 王華杰 石瑞 等 番茄早疫病菌啶菌噁唑抗性菌株的適合度 J 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué) 2022 37 4 553 558 DOI 10 12101 j issn 1004 390X n 202012054 番茄早疫病菌啶菌噁唑抗性菌株的適合度 史曉晶 王華杰 石 瑞 趙麗娟 忻州師范學(xué)院 生物系 山西 忻州 034000 摘要 目的 評(píng)估番茄早疫病菌 茄鏈格孢 Alternaria solani 對(duì)啶菌噁唑的抗性風(fēng)險(xiǎn) 探討抗性菌株的 適合度變化 方法 采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定抗性菌株的啶菌噁唑敏感性 抗性遺傳穩(wěn)定性及生長(zhǎng)速率 評(píng)估抗性菌株的產(chǎn)孢量 孢子萌發(fā)率 孢子競(jìng)爭(zhēng)力 致病性與產(chǎn)毒量的變化 結(jié)果 抗性菌株對(duì)啶菌噁唑 處于低至中抗水平 且在繼代培養(yǎng)20代后抗性仍可穩(wěn)定遺傳 但菌株對(duì)啶菌噁唑的抗性越強(qiáng) 生長(zhǎng)速率越 慢 抗性菌株的產(chǎn)孢量增多 孢子萌發(fā)率未發(fā)生變化 但孢子競(jìng)爭(zhēng)力變差 其產(chǎn)毒量下降 致病性降低 在 啶菌噁唑壓力下致病性強(qiáng)于敏感菌株 結(jié)論 當(dāng)番茄早疫病菌對(duì)啶菌噁唑產(chǎn)生抗性后 抗性可穩(wěn)定遺傳 繁殖能力增強(qiáng) 生存能力和寄生能力減弱 但可借助啶菌噁唑?qū)γ舾腥后w的壓制而壯大抗性菌群 需加強(qiáng)田 間抗性監(jiān)測(cè) 并制訂啶菌噁唑抗性發(fā)展延緩策略 關(guān)鍵詞 番茄早疫病 啶菌噁唑 茄鏈格孢菌 適合度 中圖分類號(hào) S436 412 14 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1004 390X 2022 04 0553 06 Fitness of Pyrisoxazole resistant Isolate Inciting Tomato Early Blight SHI Xiaojing WANG Huajie SHI Rui ZHAO Lijuan Department of Biology Xinzhou Teachers University Xinzhou 034000 China Abstract Purpose To evaluate the resistance risk of Alternaria solani inciting tomato early blight to pyrisoxazole and the fitness of pyrisoxazole resistant isolates was studied Methods The sensitivity to pyrisoxazole stability of resistance and growth rate of resistant isolates were analyzed by mycelial growth rate method And the sporulation germination rate spore competitiveness patho genicity and toxin production were also assessed Results Resistant isolates were low to moder ate resistant to pyrisoxazole and the resistance could be inherited steadily after 20 generations of subculture The mycelial growth of resistant isolates declined along with reduction of sensitivity Their sporulation increased and spore competitiveness became weaker but germination rate did not vary Their toxin production declined so that the pathogenicity turned weaker However the pathogen icity of resistant isolates was stronger than that of sensitive one under the impact of pyrisoxazole Conclusion The pyrisoxazole resistant isolates whose resistance can be inherited steadily pos 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué) 2022 37 4 553 558 Journal of Yunnan Agricultural University Natural Science E mail ynauzkxb 收稿日期 2020 12 24 修回日期 2022 04 08 網(wǎng)絡(luò)首發(fā)日期 2022 06 30 基金項(xiàng)目 山西省基礎(chǔ)研究計(jì)劃 20210302124623 山西省高等學(xué)?？萍紕?chuàng)新項(xiàng)目 2021L464 忻州市科 技計(jì)劃應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目 20210104 作者簡(jiǎn)介 史曉晶 1983 女 山西祁縣人 博士 副教授 主要從事植物病原真菌抗藥性研究 E mail xzsysxj 通信作者 Corresponding author 趙麗娟 1983 女 山西汾陽(yáng)人 博士 副教授 主要從事農(nóng)藥環(huán)境毒 理研究 E mail 545820488 網(wǎng)絡(luò)首發(fā)地址 sessed enhanced reproductive capacity weaken viability and parasitic ability but they can be expand their populations by the suppression of sensitive populations with pyrisoxazole It is necessary to monitor the field resistance continually and make the prevented strategies for development of pyr isoxazole resistance Keywords tomato early blight pyrisoxazole Alternaria solani fitness 由茄鏈格孢菌 Alternaria solani Sorauer 侵染 所致的早疫病 early blight 是番茄的重要病害之 一 1 3 其典型病癥是在葉片上造成黑斑 黑斑上 帶有同心圓狀的輪紋 4 該病害普遍發(fā)生于番茄 的整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育期 嚴(yán)重時(shí)造成落葉 落果和斷 枝 減產(chǎn)35 80 5 8 目前仍以加強(qiáng)田間管理 和噴施殺菌劑為主要防治手段 9 且噴施殺菌劑 是在病害發(fā)生后最快速 有效的解決方式 10 啶菌噁唑 pyrisoxazole SYP Z048 是中國(guó) 沈陽(yáng)化工研究院開(kāi)發(fā)的新型甾醇脫甲基抑制劑類 DMIs 殺菌劑 11 其作用位點(diǎn)是C14 脫甲基化 酶 通過(guò)抑制該酶的活性而抑制細(xì)胞膜中甾醇的 生物合成 12 對(duì)茄鏈格孢菌 A solani 11 灰霉病 菌 Botrytis cinerea 13 14 番茄葉霉病菌 Fulvia fulva 15 桃褐腐病菌 Monilinia fructicola 16 油 菜菌核病菌 Sclerotinia sclerotiorum 17 和辣椒炭 疽病菌 Colletotrichum scoville 18 等的生長(zhǎng)均具有 強(qiáng)烈的抑制作用 DMIs殺菌劑是易產(chǎn)生抗藥性 的殺菌劑之一 存在中度抗性風(fēng)險(xiǎn) 12 長(zhǎng)期頻繁 使用會(huì)使該類藥劑的藥效下降 出現(xiàn)抗藥性問(wèn) 題 因此 需應(yīng)加強(qiáng)該殺菌劑的抗藥性檢測(cè)及抗 性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 以便于制訂抗藥性治理策略 延緩 抗藥性發(fā)展 抗性菌株的適合度是評(píng)價(jià)其抗性風(fēng)險(xiǎn)的重要 參數(shù) 19 代表其生存能力 CHEN等 16 通過(guò)誘導(dǎo) 獲得桃褐腐病菌抗啶菌噁唑菌株 發(fā)現(xiàn)該菌株對(duì) 啶菌噁唑的抗性可穩(wěn)定遺傳 但適合度下降 如 生長(zhǎng)速率減慢 產(chǎn)孢量下降和致病性降低 何磊 鳴 20 檢測(cè)了2017 2019年灰霉病菌對(duì)啶菌噁唑 的敏感性 認(rèn)為啶菌噁唑?qū)ι綎|地區(qū)的灰霉病菌 仍有很強(qiáng)的抑制作用 但也檢測(cè)到一些敏感性下 降的菌株 這些不敏感菌株的產(chǎn)孢量和菌核量增 多 但生長(zhǎng)速率和致病性沒(méi)有發(fā)生變化 可見(jiàn) 不同病原菌對(duì)啶菌噁唑產(chǎn)生抗性后 適合度的變 化并不一致 2019年 在山西省忻州市分離檢測(cè) 到4株對(duì)啶菌噁唑存在一定抗性的菌株 目前 只有番茄早疫病菌對(duì)啶菌噁唑敏感性的報(bào)道 11 還未見(jiàn)抗性菌株適合度的研究 本研究以2019 年檢測(cè)出的抗性菌株為材料 通過(guò)探討抗性菌株 的適合度變化 遺傳穩(wěn)定性 生長(zhǎng)速率 產(chǎn)孢 量 孢子萌發(fā)率 孢子競(jìng)爭(zhēng)力 產(chǎn)毒量及致病 性 評(píng)估其抗性風(fēng)險(xiǎn) 為啶菌噁唑的科學(xué)使用和 防治番茄早疫病用藥策略的制訂提供一定的理論 依據(jù) 1 材料與方法 1 1 材料與儀器 供試菌株 番茄早疫病菌敏感菌株W 11由 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)室提供 XW 1 XW 2 XW 3和XW 4菌株于2019年從山西省忻州市番 茄設(shè)施大棚中患有番茄早疫病的葉片上分離得 到 現(xiàn)保藏于忻州師范學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室 供試藥劑 91 2 啶菌噁唑 pyrisoxazole 原 藥 沈陽(yáng)化工研究院有限公司生產(chǎn) 供試馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 PDA 將馬 鈴薯200 g切塊 煮熟 過(guò)濾 去渣后留濾液 依次加入葡萄糖20 g和瓊脂粉20 g 煮沸 定容 至1 L備用 供試馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液 PD 按 照上述PDA配制方法制備 但不加瓊脂粉 供 試馬鈴薯胡蘿卜瓊脂培養(yǎng)基 PCA 將馬鈴薯20 g 和胡蘿卜20 g切塊 煮熟 過(guò)濾后留濾液 隨后 加入瓊脂粉20 g 煮沸 定容至1 L備用 供試儀器 HD 29型凈化操作臺(tái) 哈爾濱東 聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司 SPX 150B Z型生化 培養(yǎng)箱 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠 1 2 抗性菌株對(duì)啶菌噁唑的敏感性及抗性水平測(cè)定 取啶菌噁唑10 964 9 mg溶于10 mL丙酮溶 液中 配成10 000 mg L的母液 然后用丙酮將 母液分別稀釋成5 000 1 000 500和100 mg L 的啶菌噁唑溶液 將不同質(zhì)量濃度的啶菌噁唑溶 液與PDA按照體積比1 1 000混勻 并倒入無(wú) 菌培養(yǎng)皿中 最終制成質(zhì)量濃度分別為10 0 5 0 1 0 0 5和0 1 mg L的含藥平板 將供試菌 株在PDA上活化 25 黑暗培養(yǎng)4 d 在菌落 554云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)第 37 卷 邊緣近1 3處用無(wú)菌打孔器制備直徑為5 mm的 菌餅 將菌餅接種在含藥平板中心 每皿1塊 以加入相同體積丙酮的PDA平板為對(duì)照 每個(gè) 菌株 每藥劑質(zhì)量濃度重復(fù)3次 25 黑暗培養(yǎng)5 d后采用十字交叉法測(cè)量菌 落直徑 計(jì)算各質(zhì)量濃度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率 抑制率 對(duì)照菌落直徑 藥劑處理菌落直徑 對(duì) 照菌落直徑 菌餅直徑 100 采用DPS軟件 處理數(shù)據(jù) 求出毒力回歸方程和EC50值 番茄 早疫病菌對(duì)啶菌噁唑的敏感基線為0 56 mg L 11 根據(jù)公式計(jì)算菌株的抗性倍數(shù) A A 抗性菌株 EC50 敏感基線 當(dāng)A 5時(shí)為敏感類型 5 A 20 時(shí)為低抗類型 20 A 100時(shí)為中抗類型 A 100時(shí)為高抗類型 10 1 3 抗性菌株的遺傳穩(wěn)定性測(cè)定 將抗性菌株在PDA上連續(xù)繼代培養(yǎng)20代 采用1 2節(jié)的方法 分別測(cè)定第1 5 10 15 和20代抗性菌株對(duì)啶菌噁唑的敏感性 計(jì)算抗 性倍數(shù)和敏感性變化倍數(shù) 敏感性變化倍數(shù) 第 n代抗性倍數(shù) 原代抗性倍數(shù) 1 4 抗性菌株的生長(zhǎng)速率測(cè)定 將敏感菌株與抗性菌株的5 mm菌餅接種于 PDA平板上 25 黑暗培養(yǎng) 于第1 2 3和 4天時(shí)測(cè)量菌落直徑 計(jì)算菌株的生長(zhǎng)速率 每 株菌重復(fù)3次 1 5 抗性菌株的產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)率測(cè)定 將敏感菌株與抗性菌株的5 mm菌餅接種于 PCA平板上 置于34 W冷白熒光燈下40 cm 處 22 黑暗 16 h 冷白熒光 8 h 條件下培養(yǎng) 7 d 取出皿內(nèi)培養(yǎng)物置于三角瓶中 加入無(wú)菌 水50 mL 充分振蕩洗下孢子 經(jīng)4層紗布過(guò)濾 后留濾液 采用血球計(jì)數(shù)法測(cè)定濾液中的孢子數(shù) 個(gè) mL 每株菌重復(fù)3次 將濾液稀釋至1 105 個(gè) mL 取100 L滴于 凹玻片中央 25 保濕培養(yǎng)8 h 顯微鏡下觀察 不低于300個(gè)孢子的萌發(fā)情況 計(jì)算孢子萌發(fā) 率 孢子萌發(fā)率 孢子萌發(fā)數(shù) 觀察總數(shù) 100 每株菌重復(fù)3次 1 6 抗性菌株的孢子競(jìng)爭(zhēng)力測(cè)定 參照任璐等 21 的方法將敏感菌株與抗性菌株 的孢子液按照體積比1 1配置成不同的組合 C1為W 11 XW 1 C2為W 11 XW 2 C3為 W 11 XW 3 C4為W 11 XW 4 用毛筆將孢子 混合液涂抹于經(jīng)過(guò)表面消毒的番茄葉片 25 保濕培養(yǎng) 待發(fā)病后用1 cm打孔器將病斑部位 打下 并懸浮于5 mg L啶菌噁唑中繼續(xù)培養(yǎng) 記錄病斑數(shù)量并觀察其是否擴(kuò)大 每個(gè)處理檢測(cè) 病斑數(shù)50個(gè) 根據(jù)公式計(jì)算抗性菌株頻率 抗 性菌株頻率 病斑擴(kuò)大數(shù)量 病斑總數(shù) 100 1 7 抗性菌株的致病性測(cè)定 采用SCHERPERS等 22 的方法 用含0 2 吐 溫 80的無(wú)菌水將啶菌噁唑母液稀釋成5 mg L 的溶液 將番茄的健康葉片進(jìn)行表面消毒 浸入 5 mg L啶菌噁唑藥液中10 s 晾干 以浸入無(wú)菌 水為對(duì)照 將番茄葉片制成直徑為3 cm的葉盤 將1 5節(jié)中制備的濾液孢子數(shù)稀釋至1 104 個(gè) mL 均勻噴灑在葉盤表面 放入有濕濾紙的空皿中 每皿2片葉盤 每菌株3皿 25 培養(yǎng)5 d 用 透明坐標(biāo)紙統(tǒng)計(jì)葉盤的發(fā)病面積以評(píng)價(jià)其致病性 強(qiáng)弱 試驗(yàn)重復(fù)2次 1 8 抗性菌株的產(chǎn)毒量測(cè)定 將敏感菌株與抗性菌株的5 mm菌餅分別接 種于200 mL PD中 每株菌 每瓶培養(yǎng)液接種 10塊菌餅 于25 160 r min振蕩培養(yǎng)20 d 過(guò) 濾培養(yǎng)液并去除菌絲 3 000 r min離心15 min取 上清液 滅菌 即為粗毒素 分別用體積分?jǐn)?shù)為 0 5 1 0 2 0 5 0 10 0 25 0 50 0 和100 0 的粗毒素浸泡30粒番茄種子 24 h 25 黑暗培養(yǎng)5 d后測(cè)定種子萌發(fā)數(shù) 以 無(wú)菌水浸泡種子為對(duì)照 計(jì)算種子萌發(fā)抑制率 種子萌發(fā)抑制率 1 毒素處理種子萌發(fā)數(shù) 對(duì)照種 子萌發(fā)數(shù) 100 采用DPS軟件 以種子萌發(fā) 抑制率為y值 粗毒素體積分?jǐn)?shù)l g值為x值 求出萌發(fā)抑制中濃度 通過(guò)分析萌發(fā)抑制中濃度 比較菌株的產(chǎn)毒量 試驗(yàn)重復(fù)3次 1 9 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)均由DPS 6 0和Excel 2010分析 顯著 性差異采用Duncan氏新復(fù)極差法分析 2 結(jié)果與分析 2 1 抗性菌株對(duì)啶菌噁唑的敏感性及抗性水平 由表1可知 啶菌噁唑?qū) 11菌株的EC50 值為0 51 mg L 抗性倍數(shù)為0 91 故將其分為 敏感類型 啶菌噁唑?qū)W 1 XW 2 XW 3 和XW 4的EC50值分別為7 73 12 08 12 00和 11 52 mg L 抗性倍數(shù)分別為13 80 21 57 21 43 第 4 期史曉晶 等 番茄早疫病菌啶菌噁唑抗性菌株的適合度555 和20 57 可見(jiàn) XW 1菌株屬于低抗類型 XW 2 XW 3和XW 4菌株為中抗類型 2 2 抗性菌株的遺傳穩(wěn)定性 由表2可知 在無(wú)藥培養(yǎng)基上隨著培養(yǎng)代數(shù) 的增加 抗性菌株的EC50變化不大 且各菌株 的敏感性變化倍數(shù)均大于0 95 第0 10和20 代低抗菌株XW 1的抗性倍數(shù)分別為13 80 14 27和13 66 在20代時(shí)菌株仍處于低抗水 平 抗性倍數(shù)未發(fā)生較大變化 同樣 中抗菌株 XW 2 XW 3和XW 4在第20代后抗性倍數(shù)仍 處于中抗水平 可見(jiàn) 抗性菌株對(duì)啶菌噁唑的抗 性可穩(wěn)定遺傳 2 3 抗性菌株的生長(zhǎng)速率 由圖1可知 不同菌株的菌絲生長(zhǎng)速率有所 差異 敏感菌株W 11的生長(zhǎng)速率最快 抗性菌 株XW 1 XW 2 XW 3和XW 4的生長(zhǎng)速率顯 著慢于W 11 P 0 05 各菌株第4天的生長(zhǎng)速率 與對(duì)應(yīng)EC50值的線性相關(guān)分析 圖2 可知 相 關(guān)系數(shù)r 0 906 3 r0 054 0 874 3 r r0 014 0 937 3 在0 05水平上顯著 說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)速率與其EC50 值呈顯著負(fù)相關(guān) 即 菌株EC50值越大 對(duì)啶 菌噁唑的抗性越強(qiáng) 生長(zhǎng)速率越慢 2 4 抗性菌株的產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)率 由表3可知 敏感菌株W 11的產(chǎn)孢量顯著 低于抗性菌株的產(chǎn)孢量 P0 05 表明抗性菌株 的產(chǎn)孢量雖有所增多 但孢子萌發(fā)率未發(fā)生變化 2 5 抗性菌株的孢子競(jìng)爭(zhēng)力 由圖3可知 在C1 C4組合中 敏感菌株侵 染所致的病斑頻率均高于抗性菌株的病斑 在組 合C1中抗性菌株的競(jìng)爭(zhēng)力最大 達(dá)到40 00 表 1 抗性菌株對(duì)啶菌噁唑的敏感性 Tab 1 Sensitivity of pyrisoxazole resistant isolates 菌株 isolate 毒力回歸方程 regression equation 相關(guān)系數(shù) r 2 EC50 mg L 1 抗性倍數(shù) resistance ratio 抗性水平 resistance level W 11 y 5 25 0 86x 1 00 0 51 0 91敏感 sensitive XW 1 y 4 12 0 99x 1 00 7 73 13 80低抗 low resistant XW 2 y 3 97 0 95x 1 00 12 08 21 57中抗 moderately resistant XW 3 y 4 05 0 88x 0 99 12 00 21 43中抗 moderately resistant XW 4 y 4 16 0 79x 0 99 11 52 20 57中抗 moderately resistant 表 2 抗性菌株對(duì)啶菌噁唑抗性的遺傳穩(wěn)定性 Tab 2 Stability of resistance of pyrisoxazole resistant isolates 菌株 isolate EC50 mg L 1 抗性倍數(shù) resistance ratio敏感性變化倍數(shù) ratio of sensitivity change G0 G1 G5 G10 G15 G20 G10 G20 G10 G20 XW 1 7 73 7 03 6 85 7 99 7 94 7 65 14 27 13 66 1 03 0 99 XW 2 12 08 11 97 12 58 12 15 12 30 11 89 21 70 21 23 1 01 0 98 XW 3 12 00 11 72 12 52 11 62 11 29 11 51 20 75 20 55 0 97 0 96 XW 4 11 52 11 98 11 15 12 08 12 21 11 71 21 57 20 91 1 05 1 02 注 G0 G1 G5 G10 G15和G20分別為繼代培養(yǎng)第0 1 5 10 15和20代 Note G0 G1 G5 G10 G15 and G20 indicates subculture on the 0 1st 5th 10th 15th and 20th generation respectively a a a ab b b b c bc c bcb bc c cc c d d 0 0 3 0 6 0 9 1 2 1 5 1 2 3 4 生長(zhǎng)速率 cm d 1 growth rate 時(shí)間 d time W 11 XW 1 XW 2 XW 3 XW 4 注 不同小寫字母表示經(jīng)Duncan氏新復(fù)極差法檢驗(yàn)在0 05水平下差 異顯著 Note Different letters indicate significant difference at P 0 05 level by Duncan s new multiple range test 圖 1 抗藥菌株與敏感菌株菌落生長(zhǎng)速率 Fig 1 Growth rates of pyrisoxazole resistant and sensitive isolates 556云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)第 37 卷 在組合C3中抗性菌株的競(jìng)爭(zhēng)力最小 為26 00 說(shuō)明抗性菌株孢子的競(jìng)爭(zhēng)力比敏感菌株弱 2 6 抗性菌株的致病性 由表3還可知 敏感菌株W 11的發(fā)病面積 為4 60 mm2 顯著大于抗性菌株的發(fā)病面積 P 0 05 在經(jīng)過(guò)啶菌噁唑處理后 敏感菌株W 11 的發(fā)病面積僅為0 85 mm2 顯著小于抗性菌株的 發(fā)病面積 P 0 05 可見(jiàn) 在無(wú)藥劑壓力下抗性 菌株的致病性顯著降低 但當(dāng)環(huán)境中存在啶菌噁 唑時(shí)則有利于抗性菌株的侵染 2 7 抗性菌株的產(chǎn)毒量 由表3可知 敏感菌株W 11所產(chǎn)毒素的種 子萌發(fā)抑制中濃度為4 89 抗性菌株所產(chǎn)毒素 的種子萌發(fā)抑制中濃度介于14 36 23 22 顯 著高于敏感菌株 P 0 05 表明抗性菌株的產(chǎn)毒 量均有所下降 3 討論 在植物病害防治中 對(duì)殺菌劑進(jìn)行抗性風(fēng)險(xiǎn) 評(píng)估有助于針對(duì)不同的抗性風(fēng)險(xiǎn)制訂殺菌劑施用 策略 以延緩抗藥性的發(fā)生和發(fā)展 延長(zhǎng)殺菌劑 的使用壽命 22 在抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中 抗性菌株的 適合度指標(biāo)是重要的參數(shù) 如遺傳穩(wěn)定性 致病 性和競(jìng)爭(zhēng)力等 19 當(dāng)對(duì)殺菌劑產(chǎn)生抗性后 病原 菌的適合度變化最終會(huì)通過(guò)群體在田間的反應(yīng)有 所體現(xiàn) 因此 評(píng)估適合度對(duì)預(yù)測(cè)未來(lái)整個(gè)抗性 群體的行為和控制病害具有決定性作用 23 本研 究從田間獲得的野生抗性菌株對(duì)啶菌噁唑處于低 抗至中抗水平 且這種抗性可穩(wěn)定遺傳 但這些 抗性菌株的抗性越強(qiáng) 生長(zhǎng)速率越慢 與CHEN 等 16 的報(bào)道結(jié)果相符 抗性菌株在孢子萌發(fā)率不 變的情況下 加大了產(chǎn)孢量 說(shuō)明抗性菌株產(chǎn)生 的活性孢子量增多 這可能是其在自然環(huán)境中生 存的適應(yīng)性進(jìn)化 或許也是抗性菌株在環(huán)境中較 易被檢測(cè)的原因 然而 這些有活性的孢子競(jìng)爭(zhēng) 力和產(chǎn)毒量均下降 致病性降低 但在啶菌噁唑 表 3 抗性菌株的產(chǎn)孢量 孢子萌發(fā)率 致病性及產(chǎn)毒量 Tab 3 Sporulation germination rate pathogenicity and toxin production of pyrisoxazole resistant isolates 菌株 isolate 產(chǎn)孢量 106 個(gè) L 1 sporulation 萌發(fā)率 germination rate 致病面積 mm2 pathogenicity area種子萌發(fā)抑制中濃度 EC50 of inhibited germination無(wú)藥處理 no pyrisoxazole treatment 啶菌噁唑處理 pyrisoxazole treatment W 11 1 70 0 60 b 65 91 3 31 a 4 60 0 44 a 0 85 0 10 c 4 89 0 88 d XW 1 2 73 0 27 a 64 84 2 65 a 3 98 0 31 b 2 35 0 42 b 14 36 2 53 c XW 2 2 94 0 51 a 64 55 2 94 a 3 65 0 50 bc 3 19 0 49 a 23 22 2 17 a XW 3 2 91 0 77 a 62 70 1 65 a 3 58 0 45 c 3 27 0 45 a 19 47 1 56 b XW 4 2 99 0 48 a 62 17 7 90 a 3 31 0 57 c 3 31 0 45 a 16 90 1 85 bc 注 同列中不同小寫字母表示經(jīng)Duncan氏新復(fù)極差法檢驗(yàn)在0 05水平下差異顯著 Note Different lowercase letters in the same column indicate significant differences at P 0 05 level by Duncan s new multiple range test y 44 738x 57 085 R 0 821 3 0 4 8 12 16 0 0 5 1 0 1 5 菌株的 EC 50 mg L 1 EC 50 values of isolates 生長(zhǎng)速率 cm d 1 growth rate 圖 2 菌絲生長(zhǎng)速率和菌株EC50的相關(guān)性 Fig 2 Linear correlation between EC50 values and growth rates 0 25 50 75 100 C1 C2 C3 C4 頻率 frequency 組合 combination 抗性菌株 resistant isolate 敏感菌株 sensitive isolate 注 Note C1 W 11 XW 1 C2 W 11 XW 2 C3 W 11 XW 3 C4 W 11 XW 4 圖 3 抗 感菌株孢子的競(jìng)爭(zhēng)力 Fig 3 Spore competitiveness between pyrisoxazole resist ant isolate and sensitive isolate 第 4 期史曉晶 等 番茄早疫病菌啶菌噁唑抗性菌株的適合度557 壓力下其致病性強(qiáng)于敏感菌株 可推測(cè)當(dāng)番茄早 疫病菌對(duì)啶菌噁唑產(chǎn)生抗性后 抗性雖可穩(wěn)定遺 傳 但除產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)率外 其他適合度指 標(biāo)均下降 生存能力和寄生能力也下降 在與敏 感群體的生存競(jìng)爭(zhēng)中可能會(huì)處于劣勢(shì) 但為了能 在競(jìng)爭(zhēng)中存活 抗性菌株增大產(chǎn)孢量 繁殖能力 增強(qiáng) 以期通過(guò)數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)獲取更多的生存機(jī)會(huì) 且當(dāng)環(huán)境中存在啶菌噁唑時(shí) 抗性菌株可借助藥 劑對(duì)敏感群體的壓制進(jìn)而壯大抗性菌群 后續(xù)還 需加強(qiáng)田間抗性監(jiān)測(cè) 進(jìn)一步深入探究番茄早疫 病菌對(duì)啶菌噁唑的抗性機(jī)制 為延緩啶菌噁唑抗 性的發(fā)展奠定基礎(chǔ) 4 結(jié)論 番茄早疫病菌在對(duì)啶菌噁唑產(chǎn)生抗性后 抗 性可穩(wěn)定遺傳 雖然繁殖能力增強(qiáng) 但是孢子的 競(jìng)爭(zhēng)力變?nèi)?菌株用于致病的毒素產(chǎn)量也下降 致病力變?nèi)?當(dāng)環(huán)境中存在啶菌噁唑壓力時(shí) 其 致病力強(qiáng)于敏感菌株 參考文獻(xiàn) ALHUSSAN K M Morphological and physiological characterization of Alternaria solani isolated from tomato in Jordan Valley J Research Journal of Biological Sci ences 2012 7 8 316 DOI 10 3923 rjbsci 2012 316 319 1 SHOAIB A AWAN Z A Mineral fertilizers improve de fense related responses and reduce early blight disease in tomato Solanum lycopersicum L J Journal of Plant Pathology 2021 103 1 217 DOI 10 1007 s42161 020 00713 0 2 董艷 陳永福 張和平 番茄早疫病害微生物防治研究 進(jìn)展 J 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào) 2015 31 17 111 DOI 10 11924 j issn 1000 6850 casb15010113 3 VAN DER WAALS J E KORSTEN L AVELINO T A S et al Influence of environmental factors of Alternaria solani conidia above a South African potato crop J Phy toparasitica 2003 31 4 353 DOI 10 1007 BF02979806 4 BASU P K Measuring early blight its progress and in fluence on fruit losses in nine tomato cultivars J Cana dian Plant Disease Survey 1974 54 2 45 5 DATAR V V MAYEE C D Assessment of loss in to mato yield due to early blight J Indian Phytopathology 1981 34 191 6 董金皋 農(nóng)業(yè)植物病理學(xué) 北方本 M 北京 中國(guó)農(nóng)業(yè) 出版社 2001 7 GRIGOLLI J F J KUBOTA M M ALVES D P et al Characterization of tomato accessions for resistance to early blight J Crop Breeding and Applied Biotechno logy 2011 11 2 174 DOI 10 1590 S1984 70332011000 200010 8 孫一凡 劉喆 李海洋 等 側(cè)孢芽孢桿菌Bl13對(duì)番茄早 9 疫病防治效果及機(jī)制 J 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào) 2021 32 1 299 DOI 10 13287 j 1001 9332 202101 036 史曉晶 任璐 王華杰 等 山西省番茄早疫病菌對(duì)苯醚 甲環(huán)唑的敏感性及抗性突變體的適合度 J 植物保護(hù) 學(xué)報(bào) 2019 46 1 202 DOI 10 13802 ki zwbhxb 2019 2017174 10 史曉晶 周恩超 任璐 等 番茄早疫病菌對(duì)啶菌噁唑敏 感基線建立及藥劑作用方式初探 J 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào) 2016 18 4 454 DOI 10 16801 j issn 1008 7303 2016 0063 11 Fungicide Resistance Action Committee FRAC FRAC code list 2022 fungal control agents sorted by cross res istance pattern and mode of action including coding for FRAC Groups on product labels EB OL 2022 03 20 2022 05 11 https www frac info knowledge database downloads 12 陳鳳平 韓平 張真真 等 啶菌噁唑?qū)Ψ鸦颐共【?抑菌作用研究 J 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào) 2010 12 1 42 DOI 10 3969 j issn 1008 7303 2010 01 06 13 ZHU H HUANG C T JI M S Baseline sensitivity and control efficacy of pyrisoxazole against Botrytis cine rea J European Journal of Plant Pathology 2016 146 2 315 DOI 10 1007 s10658 016 0917 7 14 劉君麗 司乃國(guó) 陳亮 等 創(chuàng)制殺菌劑啶菌噁唑的生物 活性及應(yīng)用研究 III 番茄葉霉病 J 農(nóng)藥 2004 43 3 103 DOI 10 16820 ki 1006 0413 2004 03 003 15 CHEN F P FAN J R ZHOU T et al Baseline sensitiv ity of Monilinia fructicola from China to the DMI fungi cide SYP Z048 and analysis of DMI resistant mutants J Plant Disease 2012 96 3 416 DOI 10 1094 PDIS 06 11 0495 16 DUAN Y B LI T XIAO X M et al Pharmacological characteristics of the novel fungicide pyrisoxazole aga inst Sclerotinia sclerotiorum J Pesticide Biochemis try and Physiology 2018 149 61 DOI 10 1016 j pest bp 2018 05 010 17 GAO Y Y LI X X HE L F et al Effect of pyrisoxazole on infection of Colletotrichum scovillei and anthrac nose on Chili J Plant Disease 2020 104 2 551 DOI 10 1094 PDIS 06 19 1291 RE 18 ZIOGAS B N MARKOGLOU A N SPYROPOULOU V Effect of phenylpyrrole resistance mutations on eco logical fitness of Botrytis cinerea and their genetical basis in Ustilago maydis J European Journal of Plant Patho logy 2005 113 96 DOI 10 1007 s10658 005 1227 7 19 何磊鳴 山東地區(qū)灰霉病菌對(duì)啶菌噁唑和啶酰菌胺的 抗性及治理新途徑 D 泰安 山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2020 20 任璐 史曉晶 姚眾 等 蘋果斑點(diǎn)落葉病菌對(duì)戊唑醇敏 感基線建立及抗性突變體適合度 J 植物病理學(xué)報(bào) 2017 47 3 386 DOI 10 1326 ki apps 000014 21 SCHERPERS H T A M Fitness of isolates of Sphaer otheca fuliginea resistant or sensitive to fungicides which inhibit ergosterol biosynthesis J Netherlands Journal of Plant Pathology 1985 91 2 67 DOI 10 1007 BF01 974302 22 史曉晶 任璐 陳浩 等 番茄早疫病菌抗啶酰菌胺菌株 的適合度及生物學(xué)特性 J 植物保護(hù)學(xué)報(bào) 2016 43 3 480 DOI 10 13802 ki zwbhxb 2016 03 017 23 責(zé)任編輯 何承剛 558云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)第 37 卷