34(5)762-770 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào) Chinese Journal of Biological Control 2018 年 10 月 收稿日期： 2018-02-01 基金項(xiàng)目：黑龍江省自然科學(xué)基金（ QC2016035）；黑龍江省農(nóng)墾總局科技項(xiàng)目（ HNK125B-02-12）；黑龍江省學(xué)位與研究生教育教學(xué)改革研究研究項(xiàng)目（ JGXM_HLJ_2015117） 作者簡(jiǎn)介：高長(zhǎng)敏，碩士研究生， E-mail： 983503544qq.com； *通信作者，馬光恕，教授， E-mail： mgs_lh163.com；廉華，教授， E-mail：yy6819184126.com。 DOI: 10.16409/j.cnki.2095-039x.2018.05.016 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)和膜脂過(guò)氧化指標(biāo)的影響 及對(duì)枯萎病的防治效果 高長(zhǎng)敏1，馬光恕1*，廉 華1*，劉明鑫1，張春秋1，曲虹云2（ 1 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)農(nóng)學(xué)院，大慶 163319； 2. 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院，哈爾濱 150069） 摘要： 本文開(kāi)展了 3 種生防木霉菌，包括棘孢木霉 Trichoderma asperellum 525、哈茨木霉 T. harzianum 610和擬康氏木霉 T. pseudokoningii 886 防治黃瓜枯萎病的盆栽試驗(yàn)，研究這 3 種木霉菌對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)、膜脂過(guò)氧化指標(biāo)的影響及對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果。結(jié)果表明，木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病的田間防治效果均達(dá)到78%以上，且以棘孢木霉 525 的田間防治效果最高，達(dá)到 81.53%。與只接種枯萎病病原菌的對(duì)照相比， 3株木霉菌單獨(dú)接種或與黃瓜枯萎病病原菌同時(shí)接種均可以顯著提高黃瓜幼苗株高、莖粗、葉面積、根體積、地上部鮮重、地下部鮮重，顯著提高黃瓜葉片超氧化物歧化酶（ SOD） 、過(guò)氧化物酶（ POD） 、過(guò)氧化氫酶（ CAT） 、多酚氧化酶（ PPO）活性，顯著降低質(zhì)膜透性和丙二醛（ MDA）含量，其中以擬康氏木霉 886單獨(dú)接種促進(jìn)效果最強(qiáng)。研究表明， 3 種木霉菌通過(guò)促進(jìn)黃瓜幼苗生長(zhǎng)，增強(qiáng)植物抗氧化酶活性，降低質(zhì)膜透性和丙二醛含量，從而提高對(duì)黃瓜枯萎病的抗性。 關(guān) 鍵 詞： 木霉菌；黃瓜枯萎?。挥酌缟L(zhǎng)；膜脂過(guò)氧化 中圖分類(lèi)號(hào)： S476 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1005-9261(2018)05-0762-09 Effect of Trichoderma on the Growth of Cucumber Seedlings, Membrane Lipid Indexes and Control Effect against Fusarium Wilt GAO Changmin1, MA Guangshu1*, LIAN Hua1*, LIU mingxin1, ZHANG Chunqiu1, QU Hongyun2(1. College of Agriculture, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China; 2. Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences Horticulture Branch, Harbin 150069, China) Abstract: Cucumber Fusarium wilt is one of the major destructive soil-borne disease in the cucumber production, and the application of biocontrol fungi to control cucumber wilt is of great significance to the safe production of cucumber. To clarify the effect of biocontrol Trichoderma on the growth of cucumber seedlings, membrane lipid peroxidation and the control effect against cucumber Fusarium wilt, three antagonistic fungi against pathogen of cucumber Fusarium wilt, T. asperellum 525, T. harzianum 610 and T. pseudokoningii 886, were used to carry out pot experiment in this paper. The results showed that the field control effect of three Trichoderma strains against cucumber Fusarium wilt were more than 78%, and the field control effect of T. asperellum 525 was the highest, reaching 81.53%. Compared with the treatment with the cucumber Fusarium Wilt pathogen alone, all those treatments with Trichoderma alone and simultaneous inoculation with Trichoderma and pathogen significantly improved cucumber plant height, stem diameter, leaf area, root volume, above ground fresh weight and underground fresh weight of cucumber, increased the activities of superoxide dismutase (SOD), peroxidase (POD), 第 5 期 高長(zhǎng)敏等：木霉菌對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)和膜脂過(guò)氧化指標(biāo)的影響及對(duì)枯萎病的防治效果 763 catalase (CAT) and polyphenol oxidase (PPO) activity, and decreased membrane permeability and malondialdehyde (MDA) content. The results indicated that the three Trichoderma strains have the function of controlling cucumber Fusarium wilt and promoting growth of cucumber. Trichoderma can induce cucumber resistance to Fusarium wilt by promoting cucumber seedling growth, increasing plant antioxidant enzyme activity and reducing plasma membrane permeability and malondialdehyde content. Key words: Trichoderma; cucumber Fusarium wilt; seedlings growth; membrane lipid peroxidation 黃瓜是我國(guó)設(shè)施栽培的主要蔬菜之一，其種植面積已達(dá)到設(shè)施蔬菜栽培面積的 5%1。由于黃瓜種植規(guī)模的不斷擴(kuò)大，黃瓜輪作倒茬時(shí)間逐漸縮短，使黃瓜土傳病害日益嚴(yán)重，黃瓜枯萎病是由尖孢鐮刀菌黃瓜專(zhuān)化型（ Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum， FOC）引起的一種土傳真菌病害2，在我國(guó)各地均有發(fā)生。在我國(guó)黃瓜主要種植區(qū)造成黃瓜產(chǎn)量下降 10% 30%，嚴(yán)重時(shí)可達(dá) 80% 90%3，嚴(yán)重影響了黃瓜產(chǎn)業(yè)的健康和可持續(xù)發(fā)展。 黃瓜枯萎病的防治主要采用化學(xué)防治和農(nóng)業(yè)防治，雖有一定的防治效果，但存在抗藥性、破壞土壤微生物區(qū)系和污染環(huán)境等問(wèn)題。利用生防微生物防治黃瓜土傳病害，具有安全、持久、有效等特點(diǎn)，有重要的應(yīng)用潛力4，其中木霉菌是研究和應(yīng)用最多的生防微生物之一。目前，有關(guān)生防木霉菌研究，一部分集中于木霉菌在促進(jìn)植物生長(zhǎng)方面作用，如施用深綠木霉 Trichoderma atroviride 可提高番茄根、莖和葉的干重，明顯提高番茄產(chǎn)量5；哈茨木霉 T. harzianum T17 可通過(guò)調(diào)控激素水平而促進(jìn)甜瓜幼苗期的生長(zhǎng)6；棘孢木霉 T. asperellum ACCC30536 能改善黃花蒿的光合能力，促進(jìn)干物質(zhì)積累7；施棘孢木霉 PZ6 能促進(jìn)香蕉苗增高，明顯提高香蕉苗的根系活力8。另一部分研究集中于木霉菌的防病、抗病特性，研究發(fā)現(xiàn)綠色木霉 T. viride、棘胞木霉、深綠木霉、哈茨木霉等均可誘導(dǎo)植物獲得對(duì)廣譜性致病真菌、細(xì)菌、病毒等微生物的局部或系統(tǒng)抗性9,10。 其中以綠色木霉、 哈茨木霉的研究最多， 對(duì)棘孢木霉、 擬康氏木霉 T. pseudokoningii的研究較少，如哈茨木霉菌 T39 能較好地防治灰葡萄孢菌 Botrytis cinerea 引起的番茄灰霉病，誘導(dǎo)抗性可能是 T39 的重要生防機(jī)制之一11；哈茨木霉菌 T23 在黃瓜根部能產(chǎn)生誘導(dǎo)性抗性，提高抗枯萎病菌侵染能力12；莊敬華等13報(bào)道，用綠色木霉 T23 灌根處理，可以降低黃瓜枯萎病的病情指數(shù)和發(fā)病率，誘導(dǎo)黃瓜體內(nèi) POD（過(guò)氧化物酶）、 PPO（多酚氧化酶）及 CAT（過(guò)氧化氫酶）等活性上升；唐琳等14報(bào)道，哈茨木霉菌 T6 處理茄子根系后，抗病品種遼茄 7 號(hào)體內(nèi)的 SOD（超氧化物歧化酶）、 POD、 CAT 和 PPO等 4 種防御反應(yīng)酶活性高于感病品種西安綠茄，認(rèn)為是誘導(dǎo)抗性的結(jié)果。艾力江 麥麥提等15研究發(fā)現(xiàn)，尖果沙棗的細(xì)胞膜透性、 MDA（丙二醛）含量與 SOD、 POD 和 CAT 等抗氧化酶活性之間密切相關(guān)。 盡管有關(guān)木霉菌的防病及促生作用的研究較多，但木霉菌施用后對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)、膜脂過(guò)氧化指標(biāo)影響以及對(duì)枯萎病防治效果缺乏系統(tǒng)研究。本研究采用前期篩選出的具有對(duì)黃瓜枯萎病菌有拮抗作用的 3 株木霉菌菌株，棘孢木霉 525、哈茨木霉 610 和擬康氏木霉 886，系統(tǒng)研究木霉菌對(duì)黃瓜幼苗形態(tài)建成、物質(zhì)積累、膜脂過(guò)氧化特性的作用效應(yīng)及對(duì)枯萎病的防治效果，為木霉菌劑的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)，為黃瓜的安全、高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)栽培提供技術(shù)支撐。 1 材料與方法 1.1 供試材料 1.1.1 供試黃瓜品種 長(zhǎng)春密刺，購(gòu)買(mǎi)于山東新泰市裕園種業(yè)有限公司。 1.1.2 供試培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基（ PDA）：馬鈴薯 200 g，葡萄糖 20 g，瓊脂 10 g，蒸餾水 1000 mL，自然 pH。 1.1.3 供試菌株 試驗(yàn)中涉及 3 株木霉菌菌株，棘孢木霉 525、哈茨木霉 610 和擬康氏木霉 886 均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所木霉菌研究組提供。黃瓜枯萎病病原菌尖孢鐮刀菌黃瓜專(zhuān)化型（ Fusarium oxysporum f. sp. cucumebrium Owen）由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所土傳病害生物防治研究組提供。 1.1.4 供試土壤 供試土壤為草炭土，土壤過(guò) 1 mm 篩后于烘箱中 160 高溫滅菌 2 h，自然冷卻后繼續(xù)160 烘 2 h 后放涼備用。 764 中 國(guó) 生 物 防 治 學(xué) 報(bào) 第 34 卷 1.2 木霉菌孢子懸液和病原菌孢子懸浮液的制備 1.2.1 木霉孢子懸液的制備 木霉菌在 PDA 培養(yǎng)基上 28 活化培養(yǎng) 3 d，從菌落邊緣取直徑 5 mm 的菌 餅，轉(zhuǎn)接到 PDA 平板中央， 28 下培養(yǎng) 7 d，用無(wú)菌水洗下孢子。用血球記數(shù)板測(cè)定孢子數(shù)，并將孢子數(shù)調(diào)整 1.5 108個(gè) /mL 備用。 1.2.2 病原菌孢子懸浮液的制備 將黃瓜枯萎病病原菌在 PDA 培養(yǎng)基上 28 活化培養(yǎng) 3 d，轉(zhuǎn)接到 PDA培養(yǎng)基上， 28 下培養(yǎng) 7 d，發(fā)酵液過(guò)濾獲得孢子懸浮液。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板記錄孢子懸液的孢子數(shù)，并將孢子懸浮液稀釋至 1 105個(gè) / mL。 1.3 3 株木霉菌防治黃瓜枯萎病的盆栽試驗(yàn) 1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)在黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)農(nóng)學(xué)院教學(xué)基地現(xiàn)代化溫室內(nèi)進(jìn)行，取滅菌后試驗(yàn)土，裝入塑料育苗盤(pán)（ 34.5 cm 24 cm 11 cm）中，每盤(pán)播種催芽后的黃瓜種子 120 粒，出苗后均勻保留 50 株。播種后每 2 d 澆施 1000 mL 無(wú)菌水，保持黃瓜正常生長(zhǎng)狀態(tài)。 黃瓜播種后 5 d 即真葉初展時(shí)，挑取長(zhǎng)勢(shì)較一致的黃瓜，利用木霉孢子懸液和病原菌孢子懸浮液進(jìn)行灌根接種。每棵黃瓜苗的根莖部加入 3 mL 相應(yīng)的接種液即每盤(pán)加入 150 mL 的接種量。試驗(yàn)設(shè)置 9個(gè)處理，每個(gè)處理 3 盤(pán)，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，設(shè)置 5 次重復(fù)。試驗(yàn)處理如下：棘孢木霉 T. asperellum 525 和枯萎病病原菌同時(shí)接種（ T1B）；哈茨木霉 T. harzianum 610 和枯萎病病原菌同時(shí)接種（ T2B）；擬康氏木霉 T. pseudokoningii 886 和枯萎病病原菌同時(shí)接種（ T3B）；只接種枯萎病病原菌（ B）；稀釋 800倍液的 50%多菌靈可濕性粉劑與病原菌同時(shí)接入為化學(xué)對(duì)照（ CB）；只接種棘孢木霉 T. asperellum 525（ T1）；只接種哈茨木霉 T. harzianum 610（ T2）；只接種擬康氏木霉 T. pseudokoningii 886（ T3）；只接種無(wú)菌水對(duì)照（ P）。 1.3.2 試驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)與方法 播種后 8、 10 和 12 d 分別取樣 3 次，對(duì)黃瓜幼苗質(zhì)量進(jìn)行測(cè)定；播種后 12 d取樣，對(duì)黃瓜幼苗膜脂過(guò)氧化指標(biāo)和抗病性指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 莖粗，子葉節(jié)下 1 cm 處粗度，用游標(biāo)卡尺測(cè)定；株高，莖基部到生長(zhǎng)點(diǎn)之間的距離，用直尺測(cè)定。根體積，采用排水法測(cè)定；葉面積，采用稱(chēng)重法測(cè)定。 地上部、地下部鮮重測(cè)定：植株利用清水反復(fù)沖洗，再用吸水紙吸干，用 1/1000 電子天平測(cè)定鮮重。 葉片質(zhì)膜透性：采用相對(duì)電導(dǎo)率法；葉片丙二醛（ MDA）含量：采用硫代巴比妥酸法測(cè)定；葉片超氧化物歧化酶（ SOD）活性：采用氮藍(lán)四唑法測(cè)定；葉片過(guò)氧化物酶（ POD）活性：采用愈創(chuàng)木酚比色法測(cè)定；葉片過(guò)氧化氫酶（ CAT）活性：采用高錳酸鉀滴定法測(cè)定；葉片多酚氧化酶（ PPO）活性：采用滴定法測(cè)定。 1.3.3 抗病性指標(biāo)測(cè)定 黃瓜苗期枯萎病參照張素平16的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)， 病情指數(shù)參照宗兆鋒和康振生17的計(jì)算方法。 0 級(jí)：無(wú)癥狀； 1 級(jí)：真葉、子葉黃化或萎蔫面積不超過(guò)總面積的 50%； 2 級(jí)：真葉、子葉黃化或萎蔫面積超過(guò)總面積的 50%； 3 級(jí)：葉片萎蔫或枯死，僅生長(zhǎng)點(diǎn)存活； 4 級(jí)：全株嚴(yán)重萎蔫，以致枯死。病情指數(shù) （病級(jí)株數(shù)代表級(jí)數(shù)） /（植株總數(shù)最高代表級(jí)值） 100；防治效果（ %）（對(duì)照病情指數(shù)處理病情指數(shù)） /對(duì)照病情指數(shù) 100。 1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 利用 Microsoft Excel 2007 軟件進(jìn)行圖表制作，試驗(yàn)數(shù)據(jù)取 3 次重復(fù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，利用 DPS 7.05進(jìn)行差異顯著性分析。 2 結(jié)果與分析 2.1 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)指標(biāo)的影響 2.1.1 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗株高和莖粗的影響 T1、 T3 處理的幼苗株高均顯著高于其他處理（播種后 8 d，T1B、 T3B 除外；播種后 10 d， T2 除外），但二者差異不顯著。當(dāng)病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、T2B、 T3B 和 CB），幼苗株高顯著高于處理 B，顯示木霉菌和多菌靈均能夠減弱病原菌對(duì)幼苗生長(zhǎng)的抑制作用（表 1）。 T3 處理的莖粗顯著高于其他處理， T1、 T2 處理的莖粗差異不顯著， T1B、 T2B、 T3B 和 CB 處理的幼苗莖粗高于 B 處理，說(shuō)明木霉菌與多菌靈能夠減弱病原菌對(duì)幼苗莖粗增加的不利影響。以上結(jié)果說(shuō)明， 3第 5 期 高長(zhǎng)敏等：木霉菌對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)和膜脂過(guò)氧化指標(biāo)的影響及對(duì)枯萎病的防治效果 765 株木霉菌處理對(duì)黃瓜幼苗的株高和莖粗都有顯著的促進(jìn)作用， 其中處理 T1 和 T3 對(duì)幼苗株高的促進(jìn)作用高于處理 T2， T3 處理對(duì)幼苗莖粗的促進(jìn)作用高于 T1、 T2（表 1）。 表 1 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗株高和莖粗的影響 Table 1 Effect of Trichoderma on plant height and stem diameter of cucumber seedlings 播種后天數(shù) Days after sowing (d) 8 10 12 處理 Treatment 株高 (cm) 莖粗 (mm) 株高 (cm) 莖粗 (mm) 株高 (cm) 莖粗 (mm) T1B 5.28 0.04 Aa 1.70 0.02 Bb 5.87 0.03 Bb 1.96 0.04 Bc 7.97 0.02 Bb 2.43 0.02 Ac T2B 4.62 0.03 Cd 1.68 0.04 Bb 5.80 0.01 Bb 2.05 0.02 Bc 7.86 0.04 Bbc 2.44 0.05 Ac T3B 4.94 0.05 Ab 1.86 0.03 Aa 5.93 0.02 Bb 2.24 0.02 Aa 8.04 0.05 Bb 2.62 0.03 Ab B 4.60 0.02 Cd 1.51 0.01 Cd 5.18 0.03 Dd 1.78 0.03 Cd 6.66 0.04 Ef 2.02 0.02 Be CB 4.92 0.04 Ab 1.62 0.02 Bc 5.85 0.04 Bb 1.83 0.02 Cd 7.43 0.04 Cd 2.21 0.03 Bd T1 5.25 0.02 Aa 1.70 0.02 Bb 6.27 0.04 Aa 2.14 0.03 Ab 8.49 0.02 Aa 2.53 0.04 Ac T2 4.72 0.05 Bc 1.69 0.02 Bb 6.24 0.02 Aa 2.15 0.01 Ab 7.80 0.07 Bc 2.57 0.04 Abc T3 5.12 0.04 Aab 1.86 0.01 Aa 6.19 0.04 Aa 2.24 0.03 Aa 8.58 0.02 Aa 2.73 0.02 Aa P 4.74 0.02 Bc 1.63 0.01 Bc 5.67 0.03 Cc 1.85 0.03 Cd 6.84 0.04 De 2.13 0.02 Bde 注：表中的數(shù)值分別代表平均值標(biāo)準(zhǔn)差，同一列中不同大、小寫(xiě)字母分別代表在 0.01 和 0.05 水平差異顯著，下同。 Note: Values were mean standard error in the table, different capital and lowercase letters indicated significant difference at 0.01 and 0.05 level, respectively within the same column, similarly hereinafter. 2.1.2 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉面積和根體積的影響 T3 處理的幼苗葉面積均顯著高于其他處理，說(shuō)明 T3 對(duì)幼苗生長(zhǎng)的促進(jìn)作用最強(qiáng)，而 T1、 T2 的促進(jìn)作用相對(duì)較弱。 B 處理不利于幼苗葉面積的增加，當(dāng)病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、 T2B、 T3B、 CB）的幼苗葉面積顯著高于 B，顯示木霉菌和多菌靈均能夠減弱病原菌對(duì)幼苗生長(zhǎng)的抑制作用； T1、 T3 處理的根體積均顯著高于其他處理（播種后 8 d， T2 除外；播種后 10 d， T3B、 T2 除外），但二者差異不顯著。 T1B、 T2B、 T3B、 CB 處理的幼苗根體積均顯著高于B 處理。以上結(jié)果說(shuō)明， 3 株木霉菌處理對(duì)黃瓜幼苗的葉面積和根體積都有顯著的促進(jìn)作用，其中 T3 對(duì)幼苗葉面積的促進(jìn)作用高于 T1 和 T2， T3 對(duì)幼苗根體積增加的促進(jìn)作用高于 T1 和 T2（表 2）。 表 2 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉面積和根體積的影響 Table 2 Effect of Trichoderma on leaf area and root volume of cucumber seedlings 播種后天數(shù) Days after sowing (d) 8 10 12 處理 Treatment 葉面積 (cm2) 根體積 (mL) 葉面積 (cm2) 根體積 (mL) 葉面積 (cm2) 根體積 (mL) T1B 25.38 0.20 Bd 0.41 0.02 Cc 31.34 1.16 Bcd 0.48 0.03 Bc 34.76 1.41 Ac 0.53 0.01 Cc T2B 25.76 0.92 Bc 0.41 0.02 Cc 30.31 1.18 Bd 0.47 0.03 Bc 34.13 0.33 Bd 0.53 0.02 Cc T3B 25.81 1.15 Bbc 0.42 0.03 Cc 32.18 1.44 Ab 0.51 0.02 Ab 34.96 1.22 Abc 0.54 0.01 Cc B 24.68 1.17 Df 0.39 0.02 Dd 27.38 1.07 Ce 0.42 0.02 Bd 31.50 0.91 Bf 0.51 0.04 Cd CB 25.27 0.59 Bd 0.42 0.02 Cc 31.35 2.10 Bcd 0.48 0.0 3Bc 33.93 0.91 Bde 0.57 0.03 Bb T1 25.86 1.03 Bb 0.48 0.03 Aa 31.69 1.56 Bc 0.52 0.02 Aab 35.19 2.45 Ab 0.61 0.05 Aa T2 25.73 0.52 Bc 0.47 0.03 Aa 31.62 1.59 Bc 0.53 0.03 Aa 34.96 0.37 Abc 0.58 0.05 Bb T3 26.69 1.01 Aa 0.48 0.03 Aa 33.00 1.15 Aa 0.54 0.02 Aa 36.39 0.83 Aa 0.62 0.02 Aa P 25.09 0.46 Ce 0.45 0.02 Bb 29.94 1.21 Bd 0.45 0.01 Bcd 32.19 00.82 Be 0.53 0.04 Cc 2.1.3 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗地上部鮮重和地下部鮮重的影響 T3 處理的幼苗地上部鮮重高于其他處理，但T1、 T2、 T3 之間差異不顯著。 B 處理不利于幼苗地上部鮮重的增加，當(dāng)病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、 T2B、 T3B、 CB），幼苗地上部鮮重均高于 B，但 T2B、 T3B、 CB 與 B 之間差異均不顯著； T1、T3 處理的地下部鮮重均高于其他處理（播種后 8 d， T2、 T3B 除外），但二者與 T2 之間差異均不顯著。T1B、 T2B、 T3B、 CB 處理的幼苗地下部鮮重均高于 B 處理，但 T2B、 T3B、 CB 與 B 之間差異均不顯著。766 中 國(guó) 生 物 防 治 學(xué) 報(bào) 第 34 卷 以上結(jié)果說(shuō)明， 3 株木霉菌處理對(duì)黃瓜幼苗的地上部鮮重和地下部鮮重都有促進(jìn)作用，其中 T3 對(duì)幼苗地上部鮮重的促進(jìn)作用最高， T1、 T3 對(duì)幼苗地下部鮮重增加的促進(jìn)作用也高于 T2（表 3）。 表 3 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗地上部鮮重和地下部鮮重的影響 Table 3 Effect of Trichoderma on the above ground fresh weight and under ground fresh weight of cucumber seedlings 播種后天數(shù) Days after sowing (d) 8 10 12 處理 Treatment 地上部鮮重 Fresh weight above ground (g) 地下部鮮重 Fresh weigh under ground (g) 地上部鮮重 Fresh weight above ground (g) 地下部鮮重 Fresh weigh under ground (g) 地上部鮮重 Fresh weight above ground (g) 地下部鮮重 Fresh weigh under ground (g) T1B 1.06 0.01 Ab 0.21 0.02 Ab 1.16 0.01 Ab 0.26 0.06 Ab 1.26 0.02 Ab 0.33 0.03 Ab T2B 1.03 0.04 Ac 0.22 0.02 Ab 1.11 0.02 Ac 0.25 0.02 Abc 1.22 0.02 Abc 0.31 0.02 Abc T3B 1.06 0.03 Ab 0.24 0.03 AAb 1.14 0.05 Abc 0.26 0.05 Ab 1.23 0.05 Abc 0.31 0.02 Abc B 1.02 0.07 Ac 0.21 0.03 Ab 1.13 0.03 Ac 0.24 0.03 Ac 1.21 0.07 Ac 0.29 0.04 Ac CB 1.09 0.07 AA 0.22 0.02 Ab 1.19 0.06 Ab 0.25 0.03 Abc 1.22 0.06 Abc 0.31 0.02 Abc T1 1.11 0.02 AA 0.24 0.02 AAb 1.17 0.02 Ab 0.29 0.03 AA 1.28 0.02 AA 0.36 0.03 AA T2 1.11 0.03 AA 0.24 0.02 AAb 1.20 0.08 Ab 0.26 0.01 Ab 1.29 0.07 AA 0.35 0.02 AAb T3 1.13 0.04 AA 0.26 0.02 AA 1.23 0.09 Aa 0.29 0.04 Aa 1.30 0.07 Aa 0.36 0.02 Aa P 1.10 0.05 Aa 0.23 0.01 Aab 1.17 0.09 Ab 0.25 0.02 Abc 1.25 0.04 Ab 0.30 0.03 Ac 2.2 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉片膜脂過(guò)氧化指標(biāo)的影響 2.2.1 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉片質(zhì)膜透性和丙二醛含量的影響 測(cè)定播種 12 d 的黃瓜幼苗葉片質(zhì)膜透性結(jié)果表明，與 P（只接種無(wú)菌水）處理相比， 3 個(gè)木霉菌處理（ T1、 T2、 T3）葉片質(zhì)膜透性均顯著高于 P； T3的質(zhì)膜透性顯著低于 T1 和 T2， T1 和 T2 間差異不顯著；說(shuō)明木霉菌處理都不同程度的提高了幼苗葉片質(zhì)膜透性，其中 T3 對(duì)降低質(zhì)膜透性作用最大。 B 處理的葉片質(zhì)膜透性最高，病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、 T2B、 T3B、 CB）的葉片質(zhì)膜透性均顯著低于 B 處理， T3B 處理質(zhì)膜透性最低， T3B 與 T1B間差異不顯著，說(shuō)明木霉菌和病原菌同時(shí)施用有利于降低幼苗質(zhì)膜透性（圖 1）。 測(cè)定播種 12 d 幼苗葉片丙二醛含量結(jié)果顯示，與 P 處理相比， 3 個(gè)木霉菌處理（ T1、 T2、 T3）葉片丙二醛含量均顯著高于 P， T1、 T2、 T3 之間差異不顯著；說(shuō)明木霉菌處理都不同程度的提高了幼苗葉片丙二醛含量。 B 處理的葉片丙二醛含量最高，病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、 T2B、 T3B、 CB）的葉片丙二醛含量均顯著低于 B 處理， T3B 處理丙二醛含量最低， T2B 與 T1B、 CB 間差異不顯著，說(shuō)明木霉菌或多菌靈和病原菌同時(shí)施用有利于降低幼苗葉片丙二醛含量，提高細(xì)胞膜脂過(guò)氧化水平，與葉片相對(duì)電導(dǎo)率水平相對(duì)應(yīng)（圖 1）。 相對(duì)電導(dǎo)率Relative conductivity(%)丙二醛含量Malondialdehyde content(mol/g)注：圖中正負(fù)誤差線(xiàn)表示標(biāo)準(zhǔn)差大小，不同字母代表處理間差異顯著（ P 0. 05）。下同。 Note: Values in the chart were mean SE, different letters mean significant among different treatments at 0.05 level. Similarly hereinafter. 圖 1 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉片質(zhì)膜透性和丙二醛含量的影響 Fig. 1 Effect of Trichoderma on plasma membrane permeability and malondialdehyde content of cucumber seedlings leaves 第 5 期 高長(zhǎng)敏等：木霉菌對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)和膜脂過(guò)氧化指標(biāo)的影響及對(duì)枯萎病的防治效果 767 2.2.2 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉片超氧化物歧化酶和過(guò)氧化物酶活性的影響 測(cè)定播種 12 d 的黃瓜幼苗葉片超氧化物歧化酶（ SOD）和過(guò)氧化物酶（ POD）酶活性結(jié)果表明，與 P 處理相比， 3 個(gè)木霉菌處理（ T1、T2、 T3）葉片 SOD 活性均顯著高于 P， T3 處理 SOD 活性顯著高于 T1 和 T2，說(shuō)明木霉菌處理都不同程度的提高了幼苗葉片 SOD 酶活性，其中 T3 對(duì)提高 SOD 酶活性促進(jìn)作用最大。 B 處理的 SOD 活性最低，病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、 T2B、 T3B、 CB）處理的 SOD 活性均顯著高于 B 處理， T3B 處理SOD 活性顯著高于其他處理，說(shuō)明木霉菌或多菌靈和病原菌同時(shí)施用有利于提高幼苗葉片 SOD 活性，其中 T3B 促進(jìn)作用最大（圖 2）。 測(cè)定播種 12 d 幼苗葉片 POD 酶活性結(jié)果顯示，與 P 處理相比， 3 個(gè)木霉菌處理（ T1、 T2、 T3）葉片POD 酶活性均顯著高于 P， T3 處理 POD 活性最高， T3、 T2 之間差異不顯著，說(shuō)明木霉菌處理都不同程度的提高了幼苗葉片 POD 酶活性，其中 T3 對(duì)提高 POD 酶活性促進(jìn)作用最大。 B 處理的 POD 活性最低，病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、 T2B、 T3B、 CB）的 POD 活性均顯著高于 B 處理， T3B 處理 POD活性顯著高于其他處理， 說(shuō)明木霉菌或多菌靈和病原菌同時(shí)施用有利于提高幼苗葉片 POD 活性， 其中 T3B促進(jìn)作用最大（圖 2）。 c cbeddbafcd c bedbc abaf0100200300400500600T1B T2B T3B B CB T1 T2 T3 P處理 Treatment超氧化物歧化酶Superoxide dismutase activity(/g)0246810過(guò)氧化物酶活性Peroxidase activity (/g)超氧化物歧化酶活性 Superoxide dismutase activity過(guò)氧化物酶活性 Peroxidase activity圖 2 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉片超氧化物歧化酶和過(guò)氧化物酶活性的影響 Fig. 2 Effect of Trichoderma on superoxide dismutase and peroxidase activity of cucumber seedlings leaves 2.2.3 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉片過(guò)氧化氫酶和多酚氧化酶活性的影響 3個(gè)木霉菌處理（ T1、 T2、 T3）葉片CAT 活性均顯著高于 P 處理， T3 處理 CAT 活性最高， T3、 T2 之間差異不顯著，說(shuō)明木霉菌處理都不同程度的提高了幼苗葉片 CAT 酶活性，其中 T3 對(duì)提高 CAT 酶活性促進(jìn)性作用最大。 B 處理的 CAT 活性最低，病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、 T2B、 T3B、 CB）的 CAT 活性均顯著高于 B 處理， T3B處理 CAT 活性最高， T3B、 T2B 之間差異不顯著，說(shuō)明木霉菌或多菌靈和病原菌同時(shí)施用有利于提高幼苗葉片 CAT 活性，其中 T3B 促進(jìn)作用最大（圖 3）。 數(shù)值(mg/gmin)圖 3 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉片過(guò)氧化氫酶和多酚氧化酶活性的影響 Fig. 3 Effect of Trichoderma on catalase and polyphenol oxidase activity of cucumber seedlings leaves 768 中 國(guó) 生 物 防 治 學(xué) 報(bào) 第 34 卷 3 個(gè)木霉菌處理（ T1、 T2、 T3）葉片 PPO 酶活性均顯著高于 P 處理， T3 處理顯著高于其他處理，說(shuō)明木霉菌處理都不同程度的提高了幼苗葉片 PPO 酶活性，其中 T3 對(duì)提高 PPO 酶活性促進(jìn)性作用最大。 B處理的 PPO 活性最低，病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（ T1B、 T2B、 T3B、 CB）的 PPO 活性均顯著高于 B 處理， T3B 處理 PPO 活性最高， T3B、 T1B 之間差異不顯著，說(shuō)明木霉菌或多菌靈和病原菌同時(shí)施用有利于提高幼苗葉片 PPO 活性，其中 T3B 促進(jìn)作用最大（圖 3）。 2.3 木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病防治效果的影響 木霉菌（ T1B、 T2B、 T3B）、 800 倍液的 50%多菌靈處理（ CB）及單獨(dú)病原菌處理（ B）的病情指數(shù)分別為 9.12、 10.69、 10.55、 23.94 和 49.39， B 處理病情指數(shù)顯著高于其他處理。 T1B、 T2B、 T3B 的防治效果分別為 81.53%、 78.36%和 78.64%，三者的差異不顯著，但均顯著高于 800 倍液的 50%多菌靈可濕性粉劑處理（ 51.52%）（圖 4）。以上結(jié)果說(shuō)明， 3 株木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病均有較好的防治效果，并優(yōu)于化學(xué)藥劑處理。 cc cbaaa abc01020304050607080T1B T2B T3B CB B處理 Treatment020406080100病情指數(shù) Disease index 防治效果 Control efficiency圖 4 木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病防效的影響 Fig. 4 Effect of the control efficiency of Trichodermav against cucumber Fusarium wilt 3 討論 木霉菌 Trichoderma spp.