，（）： 收稿日期 ： 修訂日期 ：基金項目 ：黑龍江省青年科學(xué)基金 （）；黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院引進博士人員科研啟動金項目 （）；國家重點研發(fā)計劃（）；國家特色蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 （）聯(lián)系方式 ：辣椒對疫霉抗性的快速鑒定赫衛(wèi) ，張慧 ，王瑩（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院 ，哈爾濱）摘要研究發(fā)現(xiàn)葉 、莖 、莖基部和果實接種 種方法均能用于鑒定辣椒對辣椒疫霉的抗性 。葉與莖接種法操作簡單 ，接種部位發(fā)病快 ，可同時檢測大量品種 ，但要求空氣濕度大 ；莖基部接種法模擬田間病害的發(fā)生過程 ，最能反映品種的真實抗性 ，但需要菌量大 ，工作量也大 ；果實接種法不僅操作簡單 、接種部位發(fā)病快 、菌需求量小 ，而且可同時篩選大量品種 ，可以通過量化達到有效區(qū)分抗病和感病品種的目的 ，更具有完整保存原有植株的優(yōu)勢 。關(guān)鍵詞辣椒疫病 ；抗病性 ；鑒定中圖分類號 ： 文獻標(biāo)識碼 ： ： ， ， （ ， ， ，） ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ；由辣椒疫霉 引起的辣椒疫病已成為影響辣椒生產(chǎn)的主要病害之一 ，其主要特征是發(fā)病周期短 ，流行速度快 ，發(fā)病面積大 。病原菌通過孢子囊萌發(fā)產(chǎn)生的游動孢子侵入植物的根 、莖 、葉 、花和果實。游動孢子除主要通過雨水或灌溉水在土壤中傳播并引起大面積死苗外 ，還可以通過氣流傳播 。目前 ，抗病品種的選育和推廣是控制辣椒疫病的主要手段 。而抗性鑒定常采用的接種方法為離體葉片接種和游動孢子液灌根接種。雖然這兩種接種方法均可以區(qū)分不同辣椒品種對辣椒疫霉的反應(yīng) ，但是這兩種方法卻都有著自身無 法 克 服 的 缺 點 ，比 如 ：離體葉片接種法是依據(jù)病斑面積占葉面積的比例作為病情分級標(biāo)準的 ，由 于 品 種 間 葉 片 面 積 相 差 較 大 ，因 此 在接種量一樣的情況下 ，根據(jù)病斑面積進行比較就無法反映出品種的抗性 ，同時離體葉片法不適宜進行量化 ，因而不好分級 ，只能進行初步的鑒定 ；游動孢子液灌根接種法基本上是模擬田間病害的發(fā)生過 程 ，能 反 映 品 種 的 真 實 抗 性 ，但 是 需 要培養(yǎng)孢 子 ，尤其是當(dāng)鑒定的品種數(shù)量較多的時候 ，需要大量的孢子 ，工作量大 ，操作較復(fù)雜 。為了獲得簡單有效的方法鑒定辣椒對疫霉的抗性 ，本試驗用種不同的方法 ，為選擇合適的辣椒抗疫病品種的篩選方法提供依據(jù) 。 材料與方法 試驗材料選取份辣椒品種或品系為試材 。播種前用的溫水浸種，硫酸銅溶液浸泡進行種子消毒處理 ，然后用清水沖洗干凈 ，再浸種催芽后播種至穴盤內(nèi) 。葉 、莖和莖基部接種法在辣椒的葉期接種 。 辣椒疫霉的培養(yǎng)將在室內(nèi)低溫保存的辣椒疫霉菌種接種在燕麥固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng) ，在下恒溫暗培養(yǎng)至白色菌絲充分生長繁殖布滿整個培養(yǎng)基表面 ，繼續(xù)培養(yǎng)，然后在恒溫下光 暗交替培養(yǎng)至產(chǎn)生孢子囊 。用無菌水沖洗后放置即可用于葉和莖接種法 ，孢子濃度為 孢子 。 接種方法 葉接種法選取葉期健康的活體植株頂端展開葉 ，用滅菌刷子在葉片正面上制造淺細傷口 ，將制備好的菌液用刷子刷在葉片上 。每個品種接株 ，重復(fù)次 ，共株 。在溫室自制玻璃箱內(nèi)接種及培養(yǎng) ，自然光照 ，溫度，相對空氣濕度，以滅菌水為對照 ，接種后每隔調(diào)查記錄次發(fā)病情況 。 莖接種法選取葉期健康的活體植株子葉上部莖 ，用滅菌接種針劃破表皮制造個傷口 ，將制備好的菌液用滅菌刷子刷在傷口上 ，用塑料薄膜包扎保濕后除去薄膜 。培養(yǎng)條件同。 莖基部接種法選取葉期健康無病的活體植株莖基部 ，將菌塊埋在距植株土壤深處 ，適時澆水以保持土壤濕度達到飽和 。培養(yǎng)條件同。 果實接種法選取健康完整青果期的辣椒果實用滅菌水沖洗后 ，再用乙醇沖洗滅菌 ，在鐵盤內(nèi)墊上雙層濕濾紙 ，將辣椒果實放在上面 ，用滅菌刀片在果實上切去直徑表皮 ，從準備好的菌盤上切割邊長的菌餅 ，將菌餅有菌絲的一面緊貼在傷口上 ，在光照后 ，黑暗培養(yǎng)，采用保鮮膜覆蓋在鐵盤上面保濕 ，促使病害的發(fā)生 。以不含菌的培養(yǎng)基為對照 。 調(diào)查標(biāo)準葉 、莖 、莖基部接種種方法不適宜進行分級 ，只能進行定性觀察 。果實接種法調(diào)查標(biāo)準分級（圖）：級 ，無病斑 ；級 ，果面上出現(xiàn)水浸狀病斑 ，病斑直徑；級 ，果面上出現(xiàn)水浸狀病斑 ，病斑直徑；級 ，果面上的水浸狀病斑已嚴重變軟 ，果表皮與果肉分離 ，病斑直徑；級 ，果面上的水浸狀病斑已完全或幾乎覆蓋果實表面 。病情指數(shù)（各級病果數(shù)相對級值 ）（調(diào)查總果數(shù)最高級值 ）；抗病性劃分標(biāo)準 ：抗病 （），病情指數(shù)；中抗 （），病情指數(shù)；中感 （），病情指數(shù)；感病 （），病情指數(shù)。圖 辣椒果實接種法調(diào)查標(biāo)準 結(jié)果與分析 葉接種后的發(fā)病情況接種后即可發(fā)病 ?？共≈仓陚谔幾兒?，病斑比傷口略大 ，并不再向外擴展 （圖）。感病植株先在傷口處形成褐色病斑 ，逐漸發(fā)展 ，葉片病斑變黑 ，整個葉片皺縮萎蔫 ，病斑沿葉柄向莖擴展 ，直至根部 ，造成整個植株萎蔫 ，最后死亡 （圖）。對照在傷口處變白 ，沒有任何病變 （圖）。 莖接種后的發(fā)病情況接種后即可發(fā)病 ?？共≈仓陜H傷口處變褐縊縮 ，病斑并不向外擴展 （圖），莖部的局部病變縊縮有可能使傷口上部的組織整體掉落 ，留下斷莖 。感病植株在切口處形成黑褐色病斑 ，病斑沿莖稈向上和向下擴展 ，直至根部 ，造成植株萎蔫 ，最后死亡（圖）。對照在傷口處變白 ，沒有任何病變 （圖）。在接種后，抗病植株在留下的斷莖上生出卷第 期 赫衛(wèi)等：辣椒對疫霉抗性的快速鑒定新的葉片 ，植株繼續(xù)生長 ，說明這些抗病植株對辣椒疫病有一定的耐受性 。 莖基部接種后的發(fā)病情況接種后發(fā)病 ，抗病植株莖基部變褐 ，病斑并不擴展 （圖）。感病植株在莖基部形成黑褐色病斑 ，莖基部變黑縊縮 ，病斑沿莖稈擴展 ，造成植株萎蔫 ，最后死亡 （圖）。對照在莖基部沒有任何變化 （圖）。圖 種方法在接種后辣椒植株的發(fā)病情況 果實接種后的發(fā)病情況接種后，有少數(shù)幾份品種開始發(fā)病 ，第天時全部品種都表現(xiàn)出發(fā)病癥狀 ，但也有一些品種的部分辣椒果實未發(fā)病 。發(fā)病初期 ，疫霉從切口處開始擴散 ，先在果內(nèi)長出少量菌絲 ，隨后果外出現(xiàn)水浸狀病斑 ，當(dāng)果內(nèi)長出大量菌絲 ，果外水浸狀病斑迅速擴展 ，果實剖面呈褐色 ，病果果肉松軟 ，直至果皮和果肉分離 ，徹底腐爛 ，菌絲在傷口處或果柄處外露（圖）。對照在切口處干枯 ，無發(fā)病癥狀 。果實接種法可以很好地區(qū)分抗病和感病品種 ?？共∑贩N在切口處無病斑 ，或切口周圍變褐 ，病斑向外略有擴展即被遏制 ，病斑擴展緩慢 ，而感病品種則在切口處形成水浸狀褐色病斑 ，病斑向外擴展 ，造成果肉和果皮分離 ，直至整個果腐爛 。圖 接種后辣椒果實內(nèi)部 應(yīng)用果實接種法可以區(qū)分辣椒品種對疫病抗性 。不同品種抗病性呈現(xiàn)明顯不同 （圖）。選取其中個品種進行鑒定 ，根據(jù)病情指數(shù)與抗病性的關(guān)系 ，可以判斷 、隴椒號 為中抗品種 ，紅 椒 王 ，、龍 椒、野 生 椒 、為感病品種 （圖和表）。這說明 ，果實接種法可用于辣椒品種對疫霉的抗性劃分 。果實接種法選取辣椒果作為鑒定對象具有一致性 。辣椒果實作為試驗材料 ，病斑雖有分級 ，但絕大部分位于一個抗病調(diào)查標(biāo)準 ，總體表現(xiàn)比較均一 。說明辣椒果實作為抗病鑒定材料表現(xiàn)穩(wěn)定 （圖）。圖 果實接種法鑒定不同辣椒品種抗疫病結(jié)果 表 辣椒果實接種法抗疫病鑒定結(jié)果 品種來源病情指數(shù)抗性評價 亞蔬 世界蔬菜中心 隴椒 號 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院 龍椒 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院 野生椒 海南 紅椒王 美國 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院 亞蔬 世界蔬菜中心 結(jié)論與討論 種活體接種方法的比較本試驗摸索了種活體鑒定方法 ，發(fā)現(xiàn)這種接種方法均可使辣椒在幾天內(nèi)發(fā)病 ，并可區(qū)分辣椒品種對疫霉的反應(yīng) ，種方法各有優(yōu)缺點 ，可以根據(jù)需要選擇適宜的接種方法 。以辣椒葉片為接種材料 ，接種葉片在幾天內(nèi)發(fā)病 ，并很快蔓延至整株 ，可快速鑒定對疫霉的抗性 。葉接種法操作簡單 ，能夠同時檢測大量品種 ，但與葉部噴霧接種法一樣 ，需長時間保濕來增加侵染效率 。要求空氣濕度達到左右 ，空氣濕度不一致會導(dǎo)致發(fā)病情況不一致 ，空氣濕度保持均勻一致時 ，同批供試材料的抗性結(jié)果基本一致 。即空氣濕度的強度和均一性是制約葉片侵染法的主要因素 。由于不同品種辣椒的葉片面積相差較大 ，葉接種法在接種量方面存在差異 ，根據(jù)病斑面積不能進行病情分級 。莖接種法同樣操作簡單 ，接種后發(fā)病快 ，可以同時檢查大量品種 。莖接種法可通過接種后病斑長度變化來反映病斑的擴展速度 ，適宜對抗性量化 。根據(jù)病斑擴展的速度即可區(qū)別品種間的抗性差異 。因莖接種部位的上部莖葉有受侵染后整體脫落形成斷莖的現(xiàn)象 ，部分接種后植株的病斑長度不能測量 ，無法判斷受害等級 。且莖接種法對空氣濕度要求高 ，空氣濕度同樣制約侵染效率和發(fā)病程度 。空氣濕度保持均勻一致時 ，同批供試材料的抗性結(jié)果基本一致 。莖接種法與葉接種法，同樣因缺少病原菌與根際微生物間的相互作用而與田間侵染不符 。莖基部接種法更接近田間病害的發(fā)生過程 ，最能反映品種的真實抗性 ，不過 ，該法需要培養(yǎng)孢子囊 ，當(dāng)鑒定品種數(shù)量多時 ，需要菌量大 ，工作量大 。接菌量少時 ，發(fā)病耗時長 ，侵染效率低 。研究者嘗試采用在土壤中包埋菌塊來替代澆灌菌液的方法 ，解決灌根法中對菌量的需求 ，但沒有達到預(yù)期目的 。 辣椒果實接種法的優(yōu)劣果實接種法的優(yōu)勢在于接種后發(fā)病時間短 ，傷口的存在為侵染提供了便利 ，縮短了發(fā)病時間 。接種后，接種部位發(fā)病 ，感病品種大部分腐爛變軟 。果實接種法采用菌餅接種 ，這種方式對病菌的需求量小 ，一個培養(yǎng)皿內(nèi)的菌絲可以接種個果左右 ，解決了大量培養(yǎng)菌耗時耗力的問題 。果實接種法可以應(yīng)用于各種辣椒品種 ，基本不受果形限制 。果實接種法可以根據(jù)病斑擴展的速度區(qū)別品種間的抗性差異 ，對抗性進行量化 ，能有效區(qū)分抗感疫病品種 。（下轉(zhuǎn)頁） ，： ， ， ， ： ，（）： ， ， ， ： ，（）： ， ， ， ，（）： ， ， ， （） ，（）： ： ， ，（）： ， ， ， （，） ，（）： ， ， ， ，（）： ， ， ， ，（）：陳立偉 ，宗曉娟 ，王文文 ，等櫻桃病毒 外殼蛋白基因克隆及其原核表達 中國農(nóng)學(xué)通報 ，（）： ， ， ， ： ，： ， ， ， （），張毅日本垂枝梅花資源世界農(nóng)業(yè)，（）：褚孟姬中國果樹志梅卷北京：中國林業(yè)出版社 ，：李慶衛(wèi)川滇藏黔野梅種質(zhì)資源調(diào)查和梅花抗寒品種區(qū)域試驗的研究 北京 ：北京林業(yè)大學(xué) ，（責(zé)任編輯 ：楊明麗櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍）（上接頁）果實接種法基于同一辣椒品種的果實對疫病抗性的一致性 ，可每個品種選取個果實作為試材進行初步篩選 ，經(jīng)初步篩選后的材料再采取辣椒果實鑒定方法或其他鑒定方法進一步大量接種鑒定 。采用果實接種法進行初步篩選 ，快速簡便 ，操作簡單 ，可同時篩選大量品種 ，有利于抗疫病品種的快速篩選 。果實接種法以離體果實為研究對象 ，能夠在短時間內(nèi)檢測多個品種 ，對辣椒植株無任何損傷 ，不影響植株的生長 ，辣椒原有植株可用于其他試驗或取種 。即使是感病品種 ，也能在進行抗疫病鑒定的同時保存品種資源 ，在對種質(zhì)資源稀少的品種進行抗疫病鑒定方面有優(yōu)勢 。另外 ，果實接種法鑒定在辣椒青果期的任何階段都可以進行 ，試驗周期短 ，試驗時間充足 。果實接種法的缺點在于以離體的果實作為鑒定材料 ，不存在系統(tǒng)抗性反應(yīng) 。另外 ，濾紙的濕度要保持一致 ，避免濕度過大導(dǎo)致果實過度腐爛 ，影響病級判定 。對于果實太小的品種 ，如圓球形的果實 ，也存在病級判定的問題 。參考文獻 ， ， ， ，（）：李智軍 ，龍衛(wèi)平 ，鄭錦榮 ，等 辣椒疫病抗性離體葉鑒定法研究 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 ，（）：馬輝剛 ，何烈干 ，陳學(xué)軍 ，等 兩種方法鑒定辣椒疫病抗性研究 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 ，（）： ， ， ，（）： ， ， ， ，（）： ， ，（）：林柏青 ，張松林 辣椒品種抗疫病鑒定方法的初步研究 中國蔬菜 ，（）：毛愛軍 ，胡洽 ，耿三省 辣椒疫病菌接種鑒定技術(shù)研究 北京農(nóng)業(yè)科學(xué) ，（）：（責(zé)任編輯 ：楊明麗 ）