河南、甘肅和新疆西瓜甜瓜病毒檢測(cè)吳 洋 李俊香 彭 斌 古勤生*（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所，河南鄭州450009）摘 要：從河南、甘肅和新疆等 3 個(gè)地區(qū)采集表現(xiàn)疑似病毒病癥狀的西瓜和甜瓜葉片樣品共 132 份，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附（DAS-ELISA）法和反轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）對(duì)其進(jìn)行病毒檢測(cè)，以期了解這 3 個(gè)地區(qū)的西瓜甜瓜病毒種類及分布，旨在為當(dāng)?shù)匚鞴虾吞鸸喜《静〉姆揽靥峁﹨⒖肌＝Y(jié)果表明：瓜類蚜傳黃化病毒（ Cucurbit aphid-borne yellows virus，CABYV）的檢出率最高，為57.1%，其次為小西葫蘆黃花葉病毒（ Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV）和西瓜花葉病毒 （ Watermelon mosaic virus，WMV），檢出率分別為 45.6%、38.9%，黃瓜花葉病毒（ Cucumber mosaic virus，CMV）和甜瓜蚜傳黃化病毒（ Melon aphid-borne yellows virus，MABYV）的檢出率較低，分別為 20.0%、17.5%，而番木瓜環(huán)斑病毒西瓜株系（ Papaya ring spot virus-watermelon strain，PRSV-W）和南瓜花葉病毒（ Squash mosaic virus，SqMV）未檢出，河南和新疆發(fā)現(xiàn) MABYV 尚屬首次。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在河南通許危害西瓜甜瓜的病毒有 ZYMV、WMV、CABYV、MABYV，在甘肅瓜州為ZYMV、CMV、CABYV，在新疆鄯善為 ZYMV、WMV、CMV、CABYV、MABYV。其中 21.2% 的樣品受到 2 種病毒的復(fù)合侵染。另外，3 個(gè)地區(qū)的病毒優(yōu)勢(shì)種各不相同，鄯善縣的優(yōu)勢(shì)種為 CABYV，通許縣的優(yōu)勢(shì)種是 WMV，瓜州縣的優(yōu)勢(shì)種是 CMV。關(guān)鍵詞：西瓜；甜瓜；病毒；檢測(cè)；復(fù)合侵染2002）。另外，瓜類蚜傳黃化病毒（ Cucurbit aphid-borne yellows virus，CABYV）自 1992 年在法國(guó)首次報(bào)道發(fā)生（Lecoq etal.，1992）以來，已陸續(xù)在全球主要瓜類種植區(qū)發(fā)現(xiàn)該病毒（Lemaire etal.，1993；Aboujawdah etal.，1997；Juarez etal.，2004；Kassemetal.，2007；Yard mc&nullzgnullnen，2007），我國(guó)大部分省份也有該病毒檢出的報(bào)道（Shang etal.，2009）。甜瓜蚜傳黃化病毒（ Melon aphid-borne yellows virus，MABYV） 是 與 CABYV 同 屬的病毒，2008 年首次在中國(guó)發(fā)現(xiàn)（Xiang etal.，2008），目前在其他國(guó)家尚無報(bào)道，關(guān)于該病毒的研究較少。古勤生（2001）對(duì)河北、河南、山西、陜西地區(qū)的葫蘆科作物進(jìn)行檢測(cè)，共發(fā)現(xiàn)了7種病毒，優(yōu)勢(shì)種為ZYMV和WMV；文朝慧和南志標(biāo)（2013）在甘肅省河西地區(qū)的 37 份瓜類作物病毒病樣品中檢出30份陽(yáng)性，其中WMV、CMV、ZYMV、PRSV-W、SqMV 檢 出 率 分 別 為 40.5%、32.4%、21.6%、21.6% 和 8.1%。潘亞南等（2016）對(duì)侵染新疆哈密瓜的 8 種病毒進(jìn)行 DAS-ELISA 和RT-PCR 檢測(cè)，檢出 CMV、WMV、ZYMV、TNV 等4 種病毒，其中 CMV 的檢出率最高，為 70.2%。吳洋，男，碩士研究生，專業(yè)方向：分子植物病理學(xué)，E-mail：wy14530126.com* 通訊作者（Correspondingauthor）：古勤生，男，研究員，博士生導(dǎo)師，專業(yè)方向：植物病理學(xué)，E-mail：guqinshengcaas.cn收稿日期：2016-12-28；接受日期：2017-05-26基金項(xiàng)目 ：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新工程“西甜瓜病蟲害防控”項(xiàng)目（CAAS-ASTIP-2016-ZFRI），國(guó)家西甜瓜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系“病毒病害防控崗位” 項(xiàng)目（CARS-26-13）西瓜和甜瓜是我國(guó)重要的瓜類經(jīng)濟(jì)作物，瓜類病毒病一直是影響瓜果產(chǎn)量和質(zhì)量的主要因素。1980 年 Lovisolo 首次總結(jié)出 25 種為害葫蘆科作物的病毒（Lovisolo，1980），1993 年報(bào)道種類增加到29 種（Provvidenti，1993），2002 年葫蘆科作物病毒確定種上升到38種，另外還有9種暫定種和1種類病毒確定種，此后又有不少新的病毒種出現(xiàn)。這些病毒中，危害嚴(yán)重且普遍發(fā)生的病毒主要有小西葫蘆黃花葉病毒（ Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV）、西瓜花葉病毒（ Watermelon mosaic virus，WMV）、黃瓜花葉病毒（ Cucumber mosaic virus，CMV）、番木瓜環(huán)斑病毒西瓜株系（ Papaya ring spot virus-watermelon strain，PRSV-W）、南瓜花葉病毒（ Squash mosaic virus，SqMV）（古勤生 等，31新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜     CHINA VEGETABLES2017（8）：31-35網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2017-08-03 22:46:30網(wǎng)絡(luò)出版地址：http:/kns.cnki.net/kcms/detail/11.2326.S.20170803.2246.030.html近年來，隨著瓜類種植面積的擴(kuò)大和品種的更新，病毒種類越來越多，癥狀也愈加多樣，病毒病的發(fā)生日益嚴(yán)重。我國(guó)中部和西北地區(qū)是西瓜甜瓜的主要種植區(qū)，本試驗(yàn)從河南通許、甘肅瓜州和新疆鄯善3個(gè)地區(qū)采集表現(xiàn)疑似病毒病癥狀的西瓜甜瓜葉片樣品，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫（DAS-ELISA）法和反轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，以期了解這些地區(qū)的西瓜甜瓜病毒種類及分布，旨在為當(dāng)?shù)毓项愖魑锊《静〉姆揽靥峁?參考。1 材料與方法1.1 樣品采集2015年7月，從河南通許縣西水沃村、甘肅瓜州縣瓜州鄉(xiāng)四工村、新疆鄯善縣后梁村采集表現(xiàn)疑似病毒病癥狀的西瓜甜瓜葉片樣品共 132 份：河南通許 60 份、甘肅瓜州 47 份、新疆鄯善 25 份（表1）。樣品保存于 -80冰箱備用。表 1 采集樣品信息采樣地點(diǎn) 采樣時(shí)間 （月-日） 作物 樣品數(shù) 癥狀河南通許 07-09 甜瓜 26 黃化、花葉、畸形、無籽西瓜 20 蕨葉有籽西瓜 14甘肅瓜州 07-24 甜瓜 42 黃化、花葉、畸形、西瓜 5 斑駁新疆鄯善 07-30 甜瓜 25 黃化、花葉、褪綠1.2 主要試劑抗體包被緩沖液：碳酸鈉 1.59g，碳酸氫鈉 2.93g，用 1L 蒸餾水溶解，調(diào)節(jié) pH 至 9.6。10磷酸鹽緩沖液：氯化鈉80 g，磷酸二氫鉀 2 g，氫二鈉正磷酸鹽 11.5 g，氯化鉀 2 g，用 1 L蒸餾水溶解，調(diào)節(jié) pH 至 7.2。洗滌緩沖液：磷酸鹽緩沖液 1 L，吐溫 20 0.5mL。提取緩沖液：PBST 1L，聚乙烯吡咯烷酮 PVP20g。酶標(biāo)抗體稀釋緩沖液：牛血清白蛋白 BSA 0.2g，PBST100mL。底物緩沖液：二乙醇胺 10mL，氯化鎂 0.11g，用 80mL 蒸餾水溶解，用濃 HCl 調(diào)節(jié) pH 至 9.8。所用的酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自安德珍（ADGEN）生物技術(shù)有限公司，陽(yáng)性對(duì)照樣品為中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室溫室培養(yǎng)的接種毒源的甜瓜植株。植物總 RNA 提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司，RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒及 TaqDNA 聚合酶購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司，pTOPO 載體購(gòu)自北京艾德萊生物科技有限公司，大腸桿菌 TOP10 感受態(tài)由本實(shí)驗(yàn)室自制。1.3 病毒樣品的檢測(cè)對(duì)表現(xiàn)花葉、畸形或蕨葉癥狀的樣品采用DAS-ELISA 方法檢測(cè)。取出樣品，按 1 g10 mL的比例用提取緩沖液研磨提取組織樣品。然后離心取上清，即為待檢樣品。分別檢測(cè)ZYMV、WMV、CMV、PRSV-W、SqMV 共 5 種病毒，檢測(cè)步驟參考試劑盒說明書進(jìn)行。以健康的甜瓜葉片為陰性對(duì)照，感病的葉片為陽(yáng)性對(duì)照，緩沖液為空白對(duì)照。對(duì)部分 DAS-ELISA 陽(yáng)性樣品，使用已報(bào)道的 ZYMV、WMV 和 CMV 特異性引物（趙麗 等，2008）進(jìn)一步進(jìn)行分子鑒定。引物序列詳見表 2。對(duì)表現(xiàn)黃化癥狀的葉片，采用RT-PCR進(jìn)行表 2 本文使用的引物及其序列引物名稱 引物序列（5-3） 參考文獻(xiàn)WMV-F/WMV-R CGGGGGCCCTCGAATACAAGCCCAATC/CGGGGTACCGCGGCCTTCATCTGTGC 趙麗等，2008CMV-F/CMV-R CCCGGATCCTCCGCGGATGCTAACTTT/TGTCGACTCAGACTGGGAGCACC 趙麗等，2008ZYMV-F/ZYMV-R CCCGGATCCTCGGGCACTCAGCAAAC/CCCGTCGACTTACTGCATTGTATTCACAC 趙麗等，2008PoconF/PococpR TGYTCYGGTTTTGACTGG/CGTCTACCTATTTSGGRTTN Robertsonetal.，1991CA3414F/MA3669F GGATTTTCTAGCGGTCTA/CGACGACGACGAAATCCAA Shangetal.，2012檢測(cè)。稱取表現(xiàn)癥狀的葉片 0.1 g，加液氮迅速?gòu)氐籽心ィ缓蟀凑?RNA 提取試劑盒的說明書提取植物總 RNA。以提取的總 RNA 為模板，Random 6mers 為引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，然后利用已報(bào)道的馬鈴薯卷葉病毒屬（ Polerovirus）通用引物 Pocon F/PococpR（Robertson etal.，1991）進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。PCR 為陽(yáng)性的樣品再使用特異性引物 CA3414F/MA3669F/PococpR（Shang etal.，2012）進(jìn)行檢測(cè)。引物序列32新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜     CHINA VEGETABLES詳見表 2。取部分檢測(cè)陽(yáng)性樣品的PCR產(chǎn)物連接到pTOPO 載體，轉(zhuǎn)化 TOP 10 感受態(tài)細(xì)胞；通過菌液PCR 篩選陽(yáng)性克隆。每個(gè)分離物至少選取 2 個(gè)克隆送到生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果通過 Blast 與 NCBI 上的序列進(jìn)行比對(duì)。2 結(jié)果與分析2.1 花葉型疑似病毒病樣的 DAS-ELISA 檢測(cè)  結(jié)果對(duì)表現(xiàn)花葉癥狀的 40 份通許樣品、25 份瓜州樣品和 25 份鄯善樣品進(jìn)行 ZYMV、WMV、CMV、PRSV-W、SqMV 的 DAS-ELISA 檢 測(cè)。90 份 樣 品共檢出 81 份陽(yáng)性。河南通許縣檢出 17 份 ZYMV 陽(yáng)性樣品，檢出率為 42.5%；23 份 WMV 陽(yáng)性樣品，檢出率為57.5%；其余3種病毒未檢出。甘肅瓜州縣檢出 7 份 ZYMV 陽(yáng)性樣品，檢出率為 28.0%；16 份 CMV 陽(yáng)性樣品，檢出率為 64.0%；其余 3 種病毒未檢出。新疆鄯善縣檢出 17 份 ZYMV 陽(yáng)性樣品，檢出率為 68.0%；12 份 WMV 陽(yáng)性樣品，檢出率為 48.0%；2 份 CMV 陽(yáng)性樣品，檢出率為 8.0%；PRSV-W 和 SqMV 未檢出（表 3）。表 3 瓜類病毒的 DAS-ELISA檢測(cè)結(jié)果采樣地點(diǎn)樣品檢測(cè)數(shù)ZYMV WMV CMV PRSV-W SqMV檢出數(shù) 檢出率/% 檢出數(shù) 檢出率/% 檢出數(shù) 檢出率/% 檢出數(shù) 檢出率/% 檢出數(shù) 檢出率/%河南通許縣 40 17 42.5 23 57.5 0 0 0 0 0 0甘肅瓜州縣 25 7 28.0 0 0 16 64.0 0 0 0 0新疆鄯善縣 25 17 68.0 12 48.0 2 8.0 0 0 0 0總計(jì) 90 41 45.6 35 38.9 18 20.0 0 0 0 0所檢測(cè)樣品中，ZYMV的檢出率最高，三地平均為45.6%，是發(fā)生范圍最廣的流行病毒優(yōu)勢(shì)種；其次為 WMV、CMV，三地平均檢出率分別為38.9%、20.0%。3 個(gè)地區(qū)中，鄯善縣檢出病毒種類最多，有 3種，其中 ZYMV 的檢出率最高，為 68.0%，是當(dāng)?shù)亓餍胁《緝?yōu)勢(shì)種；通許縣有 ZYMV 和 WMV 2 種，其中 WMV 的檢出率最高，為 57.5%，是當(dāng)?shù)亓餍胁《緝?yōu)勢(shì)種；瓜州縣有 ZYMV 和 CMV 2 種，其中CMV 的檢出率最高，為 64.0%，是當(dāng)?shù)亓餍胁《緝?yōu)勢(shì)種。為確證血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)部分ELISA檢測(cè)陽(yáng)性的樣本進(jìn)行 ZYMV、WMV 和 CMV 的 RT-PCR檢測(cè)，從 ZYMV、WMV、CMV 陽(yáng)性的樣品中分別擴(kuò)增出 841、458、580 bp 的特異條帶，與預(yù)期的目標(biāo)條帶大小一致（趙麗等，2008）。2.2 黃化型疑似病毒病樣的 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果對(duì)3個(gè)地區(qū)共63份表現(xiàn)黃化癥狀的樣品進(jìn)行 RT-PCR 檢測(cè)，用通用引物 Pocon F/PococpR 進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，有47份樣品出現(xiàn)目的條帶，表明為Polerovirus 病毒侵染；再使用特異性引物 CA3414F/MA3669F/PococpR 進(jìn)行檢測(cè)，36 份樣品為 CABYV陽(yáng)性，三地平均檢出率為57.1%；11份樣品為MABYV 陽(yáng)性，三地平均檢出率為 17.5%（表 4）。隨機(jī)選取 25 份 CABYV 陽(yáng)性和 11 份 MABYV陽(yáng)性樣品的 PCR 產(chǎn)物連接載體后，送樣測(cè)序。測(cè)序結(jié)果經(jīng) Blast 與 NCBI 上的序列比對(duì)分析，結(jié)果表明這些序列與 NCBI 上的序列相似性在 98% 以上，證明檢測(cè)到的是目的病毒，與RT-PCR檢測(cè)結(jié)果 一致。表 4  CABYV 和 MABYV的 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果采樣地點(diǎn)樣本檢測(cè)數(shù)CABYV MABYV檢出數(shù) 檢出率/% 檢出數(shù) 檢出率/%河南通許縣 28 11 39.3 10 35.7甘肅瓜州縣 20 12 60.0 0 0新疆鄯善縣 15 13 86.7 1 6.7總計(jì) 63 36 57.1 11 17.52.3 檢測(cè)結(jié)果匯總對(duì) 所 采 樣 品 進(jìn) 行 RT-PCR 和 DAS-ELISA檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如下：河南通許檢出ZYMV、WMV、CABYV 及 MABYV，檢出率分別為 42.5%、57.5%、39.3%、35.7%； 甘 肅 瓜 州 檢 出 ZYMV、CMV 及 CABYV，檢出率分別為 28.0%、64.0%、60.0%； 新 疆 鄯 善 檢 出 ZYMV、WMV、CMV、CABYV 及 MABYV， 檢 出 率 分 別 為 68.0%、48.0%、8.0%、86.7%、6.7%。PRSV-W 和 SqMV 在33新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜     CHINA VEGETABLES三地均未檢出。在檢測(cè)呈陽(yáng)性的樣品中，94 個(gè)樣品由單一病毒侵染，28 個(gè)樣品為復(fù)合侵染。在通許縣 60 份樣品中，8 份為復(fù)合侵染，復(fù)合侵染率為 13.3%；瓜州縣47份樣品中，7份為復(fù)合侵染，復(fù)合侵染率為 14.9%；在鄯善縣 25 份樣品中，13 份為復(fù)合侵染，復(fù)合侵染率為 52.0%。三地平均復(fù)合侵染率為21.2%。3 結(jié)論與討論病毒病一直是威脅西瓜甜瓜生產(chǎn)的重要因素，近年來，隨著我國(guó)西甜瓜栽培面積和病毒種類的增加，病毒病危害程度愈加嚴(yán)重，了解不同地區(qū)病毒種類的分布以及流行病毒優(yōu)勢(shì)種，有助于防范地域性病毒病和新病害的擴(kuò)散。魏寧生等（1991）在甘肅、新疆共186個(gè)厚皮甜瓜樣品中檢出CMV、WMV-2、SqMV 3 種 病 毒， 其 中 WMV-2 是 流 行優(yōu)勢(shì)種。古勤生等（2003）在河南和陜西的葫蘆科 作 物 上 檢 出 WMV、ZYMV、CMV、CABYV、PRSV-W、SqMV 等，并確定這 2 個(gè)地區(qū)的流行病毒優(yōu)勢(shì)種為WMV和ZYMV，其檢出率分別為86.9%、78.6%。本試驗(yàn)在河南省通許縣、甘肅省瓜州縣、新疆鄯善縣 3 個(gè)地區(qū)共 132 份西瓜甜瓜病毒病樣品中檢出 ZYMV、WMV、CMV、CABYV、MABYV 等 5 種病毒。CABYV 的檢出率最高，為57.1%，且在 3 個(gè)地區(qū)均檢出，表明該病毒的分布范圍最廣。有報(bào)道稱新疆哈密瓜上的病毒病復(fù)合侵染現(xiàn)象嚴(yán)重，復(fù)合侵染率高達(dá)60.19%（潘亞南 等，2016），本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新疆鄯善縣病毒病復(fù)合侵染也很普遍，復(fù)合侵染率為 52.0%。有關(guān)甘肅省河西地區(qū)瓜類作物病毒病的研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合侵染率與新疆地區(qū)相比偏低很多，為27%（文朝慧和南志標(biāo)，2013），而本試驗(yàn)中甘肅瓜州縣的復(fù)合侵染率也較低，為 14.9%，河南通許縣的復(fù)合侵染率更低，僅為 13.3%。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)這 3 個(gè)地區(qū)的病毒優(yōu)勢(shì)種各不相同，鄯善縣的優(yōu)勢(shì)種為 CABYV，通許縣的優(yōu)勢(shì)種是 WMV，瓜州縣的優(yōu)勢(shì)種是 CMV，3 個(gè)地區(qū)的病毒優(yōu)勢(shì)種不同，可能與當(dāng)?shù)卦耘嗟淖魑锖铜h(huán)境條件有關(guān)。CABYV和MABYV均屬于馬鈴薯卷葉病毒屬（ Polerovirus），主要引起瓜類作物葉片黃化癥狀。CABYV自1992年發(fā)現(xiàn)以來，在世界各地多有報(bào)道，而 MABYV 的報(bào)道則相對(duì)較少（Xiang etal.，2008；Knierimetal.，2010）。本試驗(yàn)在河南通許、甘肅瓜州和新疆鄯善均檢出 CABYV，而 MABYV 只在河南通許和新疆鄯善檢出，并且鄯善僅檢出 1 例。本試驗(yàn)系首次在河南和新疆發(fā)現(xiàn) MABYV。目前，這 2種病毒在我國(guó)的研究報(bào)道較少，尤其是 MABYV，其生物學(xué)特性、傳播特性及地理分布尚無詳細(xì)報(bào)道。這2種病毒均可通過蚜蟲傳播，極易造成病毒的大范圍擴(kuò)散，需引起高度重視，加強(qiáng)監(jiān)測(cè) 工作。本試驗(yàn)對(duì)河南通許、甘肅瓜州和新疆鄯善 3 個(gè)地區(qū)的西瓜甜瓜進(jìn)行DAS-ELISA和RT-PCR檢測(cè)，鑒定了當(dāng)?shù)氐闹饕《痉N類。但侵染葫蘆科作物的病毒種類繁多，本試驗(yàn)只檢測(cè)了其中部分病毒，可能有其他病毒未被檢出，因此建立高通量、高靈敏度的檢測(cè)方法，對(duì)于監(jiān)控病毒流行，防止病毒病的蔓延極為重要。同時(shí)，本試驗(yàn)受到地域限制，僅采集了 3 個(gè)省份的樣品進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于侵染葫蘆科作物的主要病毒在我國(guó)的分布，還有待進(jìn)一步 研究。參考文獻(xiàn)古勤生2001葫蘆科主要作物病毒的鑒定和小西葫蘆黃花葉病毒的變異性博士論文北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)古勤生，范在豐，李懷方2002葫蘆科作物病毒名錄中國(guó)瓜 菜，（1）：45-47古勤生，Roggero P，Ciuffo M，Lenzi R，黃學(xué)森，李懷方2003我國(guó)北方地區(qū)葫蘆科作物病毒病的調(diào)查與病原鑒定云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，18（S1）：88-89潘亞南，韓劍，吳海波，吉艷玲，王純利，劉芳，羅明，張祥林2016新疆哈密瓜病毒的 DAS-ELISA 檢測(cè)和分子鑒定園藝學(xué)報(bào)，43（6）：1107-1116魏寧生，張滿良，吳云峰，魏勇良1991新疆、甘肅甜瓜病毒病的鑒定及防治植物保護(hù)學(xué)報(bào)，18（1）：81-85文朝慧，南志標(biāo)2013甘肅省河西地區(qū)瓜類作物病毒病的病原鑒定西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，41（12）：131- 137趙麗，古勤生，陳紅運(yùn)，史團(tuán)省，田延平，胡京昂2008葫蘆科作物 3 種主要病毒的多重 RT-PCR 方法的建立果樹學(xué)報(bào)，（5）：703-707AboujawdahY，Sobh H，F(xiàn)ayyad A1997First reportofCucurbit aphid-borne yellows luteovirusinLebanonPlant Disease，81 （11）：133134新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜     CHINA VEGETABLESJuarezM，Truniger V，Aranda MA2004First reportofCucurbit aphid-borne yellows virusinSpainPlantDisease，88（8）：907KassemMA，Sempere RN，Juarez M，Aranda MA，Truniger V2007 Cucurbit aphid-borne yellows virusisprevalentinfield-growncucurbitcropsofSoutheasternSpainPlantDisease，91（3）：232-238KnierimD，Deng TC，Tsai WS，Green SK，Kenyon L2010MolecularidentificationofthreedistinctPolerovirusspeciesandarecombinantCucurbit aphid-borne yellows virusstraininfectingcucurbitcropsinTaiwanPlantPathology，59（5）：991-1002LecoqH，Bourdin D，Wipfscheibel C，Bon M，Lot H，Lemaire O1992Anewyellowingdiseaseofcucurbitscausedbya luteovirus，Cucurbit aphid-borne yellows virusPlant Pathology，41（6）：749-761LemaireOJ，Gubler WD，Valencia J，Lecoq H，F(xiàn)alk BW1993FirstreportofCucurbit aphid-borne yellows luteovirusintheUnitedStatesPlantDisease，77：1169LovisoloO1980Virus andviroiddiseasesofcucurbitsActa Horticulturae，88：33-82ProvvidentiR1993Resistance toviraldiseasesofcucurbits/KyleMMResistance toViralDiseasesofVegetables：Genetics andBreedingPortland：TimberPress：8-43RobertsonNL，F(xiàn)rench R，Gray SM1991Use ofgroup-specificprimersandthepolymerasechainreactionforthedetectionandidentificationofluteovirusesJournalofGeneralVirology，72（6）：1473-1477ShangQX，Xiang HY，Han CG，Li DW，Yu JL2009Distributionandmoleculardiversityofthreecucurbit-infectingpolerovirusesinChinaVirusResearch，145（2）：341-346ShangQX，Xiang HY，Han CG，Li DW，Yu JL2012Rapid detectionanddifferentiationofthreecucurbit-infectingpolerovirusesbymultiplexRTPCRJournal ofAgriculturalScience，4（4）：209-216XiangHY，Shang QX，Han CG，Li DW，Yu JL2008First reportontheoccurrenceofCucurbit aphid-borne yellows virus onninecucurbitaceousspeciesinChinaPlant Pathology，57（2）：390YardmcN，null zgnullnenH2007First reportofCucurbit aphid-borne yellows virusinTurkeyAustralasian PlantDiseaseNotes，2 （1）：5Detection of Viruses Infecting Watermelon and Melon in Henan， Gansu Provinces and Xinjiang Autonomous RegionWUYang，LIJun-xiang，PENGBin，GUQin-sheng*（ ZhengzhouFruitResearchInstitute， ChineseAcademyofAgriculturalSciences， Zhengzhou450009， Henan， China）Abstract：132 sampleswithsuspectedvirus-likesymptomswerecollectedfromHenan，Gansu ProvincesandXinjiangAutonomousRegionVirus detectionwascarriedoutbyDoubleAntibodySandwichEnzymeLinkedImmunosorbentAssay（DAS-ELISA）and Reversetranscriptpolymerasechainreaction（RT-PCR），hopingtounderstandthevirusspeciesinfectingwatermelonandmelongrowninthese3areasandtheirdistribution TheresultsshowedthatthedetectionratesofCucurbit aphid-borne yellows virus（CABYV）， Zucchini yellow mosaic virus（ZYMV）， Watermelon mosaic virus（WMV）， Cucumber mosaic virus（CMV）， Melon aphid-borne yellows virus（MABYV） amongthe132detectedsampleswere57.1%，45.6%，38.9%，20.0%，17.5%，respectively，whereas Papaya ring spot virus-watermelon strain（PRSV-W） andSquash mosaic virus（SqMV）were notdetectedIt wasthefirsttimetofindMABYVinHenanProvinceandXinjiangAutonomousRegionThis studyalsofoundthatZYMV，WMV，CABYV，MABYV occurredinHenanProvince；ZYMV，CMV，CABYVinGansuProvince；ZYMV，WMV，CMV，CABYV，MABYVinXinjiangAutonomousRegion21.2%ofthesesamplesweremix-infectedby2virusesBesides，the virusdominantspeciesweredifferentfromeachotherinthese3areas，implying thedistributionswereassociatedwithenvironmentalconditionandcultivarsgrownKey words：Watermelon；Melon；Virus；Detection；Mix-infectionYardmcN，35新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜     CHINA VEGETABLES