第 52 卷 第 9 期 2024 年 9 月 西 北 農(nóng) 林 科 技 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 自 然 科 學(xué) 版 J ou r na l o f No r t hwe s t A 國 家 自 然 科 學(xué) 基 金 項(xiàng) 目 32071825 作 者 簡 介 袁 秋 萍 1999 女 陜 西 安 康 人 在 讀 碩 士 主 要 從 事 園 林 植 物 資 源 與 利 用 研 究 E ma i l yuanq i up i ng b j f u edu cn 通 信 作 者 劉 燕 1963 女 湖 南 永 州 人 教 授 博 士 博 士 生 導(dǎo) 師 主 要 從 事 園 林 植 物 資 源 與 利 用 研 究 E ma i l l i u yan b j f u edu cn 萬 映 伶 1994 女 四 川 成 都 人 講 師 博 士 主 要 從 事 芍 藥 種 質(zhì) 資 源 與 利 用 研 究 E ma i l wan y i ng l i ng b j f u edu cn 袁 秋 萍 倪 巍 萬 映 伶 劉 燕 北 京 林 業(yè) 大 學(xué) 園 林 學(xué) 院 國 家 花 卉 工 程 技 術(shù) 研 究 中 心 花 卉 種 質(zhì) 創(chuàng) 新 與 分 子 育 種 北 京 市 重 點(diǎn) 實(shí) 驗(yàn) 室 城 鄉(xiāng) 生 態(tài) 環(huán) 境 北 京 實(shí) 驗(yàn) 室 北 京 100083 摘 要 目 的 明 確 多 花 芍 藥 生 根 種 子 對(duì) 上 胚 軸 休 眠 解 除 抑 制 作 用 最 強(qiáng) 的 部 位 及 其 潛 在 影 響 原 因 為 闡 明 多 花 芍 藥 種 子 的 休 眠 機(jī) 制 提 供 參 考 方 法 分 別 采 用 多 花 芍 藥 生 根 種 子 胚 乳 種 皮 胚 3 部 分 的 浸 提 液 處 理 白 菜 種 子 確 定 抑 制 作 用 最 強(qiáng) 的 部 位 將 該 部 位 浸 提 液 1 2 g L 添 加 到 多 花 芍 藥 離 體 胚 培 養(yǎng) 基 中 研 究 其 對(duì) 本 體 上 胚 軸 休 眠 解 除 的 影 響 觀 測 生 根 離 體 胚 移 入 成 苗 培 養(yǎng) 基 后 的 形 態(tài) 和 脫 落 酸 赤 霉 素 ABA GA3 值 變 化 確 定 上 胚 軸 休 眠 解 除 過 程 中 的 關(guān) 鍵 時(shí) 間 節(jié) 點(diǎn) 用 各 關(guān) 鍵 節(jié) 點(diǎn) 胚 浸 提 液 處 理 易 萌 發(fā) 的 白 菜 種 子 研 究 其 對(duì) 白 菜 種 子 發(fā) 芽 率 過 氧 化 氫 H2O2 含 量 羥 自 由 基 OH 清 除 能 力 抗 氧 化 酶 超 氧 化 物 歧 化 酶 SOD 過 氧 化 氫 酶 CAT 過 氧 化 物 酶 POD 活 性 抗 壞 血 酸 AsA 和 谷 胱 甘 肽 GSH 含 量 及 NADP 蘋 果 酸 脫 氫 酶 NADP MDH 丙 酮 酸 激 酶 PK 6 磷 酸 葡 萄 糖 脫 氫 酶 G6PDH 活 性 的 影 響 分 析 白 菜 種 子 發(fā) 芽 率 與 這 些 指 標(biāo) 間 的 相 關(guān) 性 結(jié) 果 多 花 芍 藥 生 根 種 子 種 皮 胚 乳 和 胚 浸 提 液 均 可 顯 著 抑 制 白 菜 種 子 萌 發(fā) 及 幼 苗 生 長 抑 制 強(qiáng) 度 由 大 到 小 依 次 為 胚 胚 乳 種 皮 1 2 g L 胚 浸 提 液 均 可 顯 著 降 低 多 花 芍 藥 離 體 胚 上 胚 軸 休 眠 解 除 率 生 根 離 體 胚 移 入 成 苗 培 養(yǎng) 基 的 第 4 8 12 16 天 分 別 觀 測 到 ABA GA3 出 現(xiàn) 拐 點(diǎn) S2 胚 芽 萌 出 S3 胚 芽 伸 長 S4 和 真 葉 展 開 S5 關(guān) 鍵 變 化 多 花 芍 藥 離 體 胚 移 入 成 苗 培 養(yǎng) 基 之 前 S1 及 S2 S5 節(jié) 點(diǎn) 胚 浸 提 液 均 可 抑 制 白 菜 種 子 萌 發(fā) 且 S4 節(jié) 點(diǎn) 胚 浸 提 液 的 抑 制 強(qiáng) 度 最 大 該 節(jié) 點(diǎn) 胚 浸 提 液 處 理 白 菜 種 子 H2O2 含 量 OH 清 除 能 力 SOD 活 性 和 GSH AsA 含 量 均 顯 著 提 高 同 時(shí) CAT POD PK G6PDH 活 性 均 顯 著 降 低 相 關(guān) 性 分 析 結(jié) 果 顯 示 各 節(jié) 點(diǎn) 胚 浸 提 液 處 理 白 菜 種 子 的 發(fā) 芽 率 與 H2O2 含 量 OH 清 除 能 力 GSH 含 量 極 顯 著 負(fù) 相 關(guān) 與 SOD 活 性 顯 著 負(fù) 相 關(guān) 與 CAT POD PK 和 G6PDH 活 性 極 顯 著 正 相 關(guān) 與 AsA 含 量 和 NADP MDH 活 性 相 關(guān) 性 不 顯 著 結(jié) 論 多 花 芍 藥 生 根 種 子 抑 制 作 用 最 強(qiáng) 的 部 位 是 胚 胚 中 內(nèi) 源 抑 制 物 在 胚 芽 伸 長 階 段 抑 制 作 用 最 強(qiáng) 其 作 用 機(jī) 制 是 通 過 影 響 種 子 活 性 氧 及 抗 氧 化 物 質(zhì) 含 量 呼 吸 代 謝 酶 活 性 而 發(fā) 揮 抑 制 作 用 關(guān) 鍵 詞 多 花 芍 藥 上 胚 軸 休 眠 內(nèi) 源 抑 制 物 抗 氧 化 物 質(zhì) 呼 吸 代 謝 酶 中 圖 分 類 號(hào) S682 12 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 A 文 章 編 號(hào) 1671 9387 2024 09 0109 11 E f f e c t s o f e n d o g e n o u s i n h i b i t o r s o n e p i c o t y l d o r m a n c y o f P a e o n i a e m o d i W a l l e x R o y l e s e e d YUAN Qi up i ng NI We i WAN Yi ng l i ng LIU Yan N a t i o n a l E n g i n e e r i n g R e s e a r c h C e n t e r f o r F l o r i c u l t u r e L a b o r a t o r y o f O r n a m e n t a l P l a n t s G e r m p l a s m I n n o v a t i o n M o l e c u l a r B r e e d i n g B e i j i n g L a b o r a t o r y o f U r b a n a n d R u r a l E c o l o g i c a l E n v i r o n m e n t C o l l e g e o f L a n d s c a p e A r c h i t e c t u r e B e i j i n g F o r e s t r y U n i v e r s i t y B e i j i n g 100083 C h i n a A b s t r a c t Ob j e c t i ve I n t h i s s t udy expe r imen t s we r e c a r r i ed ou t t o c l a r i f y t he s t r onge s t i nh i b i t o r y i n t ens i t y o f e a ch pa r t s o f P a e o n i a e m o d i r oo t ed s e eds on ep i co t y l do rmanc y r e l e a s ed and t he po t en t i a l r e a s ons f o r t he i n f l uenc e o f emb r yo i nh i b i t o r s on ep i c o t y l do rmanc y s o a s t o p r ov i de a r e f e r enc e f o r e l uc i da t i ng t he do rmanc y me chan i sm o f P e m o d i s e ed Me t hod The ex t r a c t s f r om endo spe rm s e ed c oa t and emb r yo o f P e m o d i r oo t ed s e eds we r e us ed t o t r e a t B r a s s i c a p e k i n e n s i s s e eds s o a s t o c l a r i f y t he l oc a t i on wi t h t he s t r onge s t i n t ens i t y The ex t r a c t s 1 2 g L o f t h i s pa r t we r e added t o t he exc i s ed embr yo med i um t o s t udy t he e f f e c t on ep i c o t y l do rmanc y o f P e m o d i The change s o f mo r pho l ogy and ABA GA3 o f r oo t ed exc i s ed embr yo we r e obs e r ved a f t e r t hey we r e t r ans f e r r ed i n t o t he s e ed l i ng med i um and t he key t ime node s t o b r e ak ep i c o t y l do rmanc y we r e de t e rmi ned B p e k i n e n s i s s e eds wh i ch we r e e a s y t o ge rmi na t e we r e t r e a t ed wi t h t he embr yo ex t r a c t s f r om t he key node s t o i nve s t i ga t e t he t he ex t r a c t s e f f e c t s on ge rmi na t i on pe r c en t age hyd r ogen pe r ox i de H2O2 con t en t hyd r oxy l r ad i c a l OH s c aveng i ng ab i l i t y an t i ox i dan t en z yme a c t i v i t i e s supe r ox i de d i smu t a s e SOD c a t a l a s e CAT pe r ox i da s e POD a s c o rb i c a c i d AsA and g l u t a t h i one GSH c on t en t r e sp i r a t o r y me t abo l i c enz yme a c t i v i t i e s NADP ma l a t e dehyd r ogena s e NADP MDH py ruva t e k i na s e PK g l uc o s e 6 pho spha t e dehyd r ogena s e G6PDH The co r r e l a t i on be twe en t he ge rmi na t i on r a t e o f B p e k i n e n s i s s e eds and t he s e i ndexe s wa s ana l y z ed Re su l t The ex t r a c t s o f s e ed c oa t endo spe rm embr yo f r om t he r oo t ed s e eds s i gn i f i c an t l y i nh i b i t ed B p e k i n e n s i s s e eds ge rmi na t i on and t he i nh i b i t i on i n t ens i t y embr yo endo spe rm s e ed coa t Me anwh i l e t he embr yo ex t r a c t s 1 2 g L c ou l d s i gn i f i c an t l y r educ e t he ep i co t y l do rmanc y r e l e a s e pe r c en t age o f exc i s ed embr yo On t he 4 t h 8 t h 12 t h and 16 t h days a f t e r t he r oo t ed exc i s ed embr yos we r e t r ans f e r r ed i n t o t he s e ed l i ng med i um t he eme r genc e o f ABA GA3 i n f l e c t i on po i n t S2 p l umu l e ge rmi na t i on S3 p l umu l e e l onga t i on S4 and t rue l e ave s expans i on S5 we r e obs e r ved r e spe c t i ve l y The emb r yo ex t r a c t s o f P e m o d i a t S1 S5 S1 i s be f o r e t he t r ans f e r o f exc i s ed emb r yos i n t o s e ed l i ng med i um i nh i b i t ed t he ge rmi na t i on o f B p e k i n e n s i s s e eds and t he embr yo ex t r a c t s a t S4 had t he g r e a t e s t i nh i b i t o r y s t r eng t h S4 node embr yo ex t r a c t s s i gn i f i c an t l y i nc r e a s ed H2O2 c on t en t OH s c aveng i ng ab i l i t y SOD a c t i v i t y AsA and GSH c on t en t At t he s ame t ime t he a c t i v i t i e s o f CAT POD PK and G6PDH we r e s i gn i f i c an t l y de c r e a s ed Co r r e l a t i on ana l ys i s showed t ha t t he ge rmi na t i on pe r c en t age o f B p e k i n e n s i s s e eds had ve r y s i gn i f i c an t nega t i ve c o r r e l a t i on wi t h H2O2 c on t en t OH s c aveng i ng ab i l i t y and GSH c on t en t had s i gn i f i c an t nega t i ve c o r r e l a t i on wi t h SOD a c t i v i t y and had ve r y s i gn i f i c an t pos i t i ve co r r e l a t i on wi t h CAT POD PK G6PDH a c t i v i t y and had no s i gn i f i c an t co r r e l a t i on wi t h AsA c on t en t and NADP MDH a c t i v i t y Conc l us i on The embr yo wa s t he mo s t s t r ong l y i nh i b i t ed pa r t i n P e m o d i r oo t ed s e eds and t he i nh i b i t o r i n emb r yo exe r t s t he max imum i n h i b i t o r y e f f e c t a t t he p l umu l e e l onga t i on node The i nh i b i t i on i n embr yo may p l ay a r o l e by a f f e c t i ng ROS an t i ox i dan t subs t anc e s and r e sp i r a t o r y me t abo l i c enz yme s K e y w o r d s P a e o n i a e m o d i ep i c o t y l do rmanc y endogenous i nh i b i t o r s an t i ox i dan t subs t anc e s r e sp i r a t o r y me t abo l i c enz yme s 多 花 芍 藥 P a e o n i a e m o d i Wa l l ex Roy l e 是 芍 藥 科 芍 藥 屬 的 一 種 分 布 極 其 狹 窄 的 野 生 植 物 資 源 1 與 芍 藥 屬 其 他 種 相 比 多 花 芍 藥 花 量 多 植 株 高 大 可 達(dá) 115 cm 是 培 育 豐 花 高 大 芍 藥 品 種 的 良 好 育 種 材 料 2 其 根 莖 富 含 芍 藥 苷 酚 類 萜 類 等 抗 氧 化 物 質(zhì) 對(duì) 于 治 療 神 經(jīng) 性 疾 病 具 有 良 好 的 藥 用 價(jià) 值 3 但 尚 未 實(shí) 現(xiàn) 人 工 栽 培 目 前 對(duì) 多 花 芍 藥 的 相 關(guān) 研 究 較 少 主 要 集 中 在 藥 用 價(jià) 值 評(píng) 價(jià) 1 3 和 種 子 休 眠 4 5 方 面 本 課 題 組 前 期 對(duì) 多 花 芍 藥 的 研 究 結(jié) 果 表 明 其 種 子 休 眠 解 除 困 難 需 持 續(xù) 110 d 的 低 溫 層 積 才 能 解 除 上 胚 軸 休 眠 射 線 處 理 與 赤 霉 素 浸 泡 均 不 能 解 除 完 整 種 子 休 眠 4 5 但 是 對(duì) 種 子 休 眠 的 機(jī) 制 尚 不 清 楚 種 子 繁 殖 是 不 破 壞 原 生 境 而 獲 得 大 量 后 代 的 有 效 方 法 是 資 源 利 用 的 第 一 步 解 析 多 花 芍 藥 種 子 上 胚 軸 休 眠 的 原 因 對(duì) 于 其 高 效 繁 殖 利 用 具 有 重 要 意 義 種 子 內(nèi) 抑 制 休 眠 解 除 的 物 質(zhì) 被 稱 為 內(nèi) 源 抑 制 物 其 是 造 成 種 子 休 眠 的 重 要 原 因 廣 泛 分 布 于 各 類 植 物 中 可 以 避 免 種 胚 在 不 適 合 的 環(huán) 境 下 萌 發(fā) 或 提 前 萌 發(fā) 以 保 護(hù) 幼 苗 正 常 生 長 6 7 但 在 實(shí) 際 生 產(chǎn) 中 內(nèi) 源 抑 制 物 會(huì) 延 長 種 子 休 眠 時(shí) 間 降 低 繁 殖 效 率 8 目 前 針 對(duì) 休 眠 種 子 內(nèi) 源 抑 制 物 的 研 究 已 經(jīng) 取 得 一 些 成 果 對(duì) 擬 南 芥 A r a b i d o p s i s t h a l i a n a 9 紅 松 P i n u s k o r a i e n s i s 10 烏 桕 S a p i u m 0 1 1 西 北 農(nóng) 林 科 技 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 自 然 科 學(xué) 版 第 52 卷s e b i f e r u m 11 等 物 種 的 研 究 表 明 內(nèi) 源 抑 制 物 通 過 影 響 種 子 活 性 氧 r e a c t i ve oxygen spe c i e s ROS 水 平 呼 吸 強(qiáng) 度 激 素 含 量 等 發(fā) 揮 作 用 關(guān) 于 芍 藥 屬 植 物 種 子 內(nèi) 源 抑 制 物 的 研 究 已 有 不 少 報(bào) 道 但 主 要 集 中 在 牡 丹 組 12 19 芍 藥 組 僅 見 芍 藥 P l a c t i f l o r a 20 21 及 多 花 芍 藥 5 的 初 步 研 究 研 究 發(fā) 現(xiàn) 芍 藥 屬 種 子 的 胚 乳 12 18 20 21 種 皮 12 18 20 21 和 胚 13 14 中 均 存 在 內(nèi) 源 抑 制 物 張 梅 娟 等 20 研 究 了 芍 藥 胚 乳 種 皮 內(nèi) 源 抑 制 物 在 根 前 期 生 根 期 發(fā) 芽 期 的 抑 制 強(qiáng) 度 發(fā) 現(xiàn) 這 3 個(gè) 時(shí) 期 的 抑 制 強(qiáng) 度 逐 漸 降 低 仇 云 云 等 16 對(duì) 大 花 黃 牡 丹 P l u d l o w i i 的 研 究 取 得 了 相 似 的 結(jié) 果 紫 斑 牡 丹 17 芍 藥 21 胚 乳 和 種 皮 內(nèi) 源 抑 制 物 通 過 影 響 超 氧 化 物 歧 化 酶 supe r ox i de d i s mu t a s e SOD 過 氧 化 氫 酶 c a t a l a s e CAT 和 過 氧 化 物 酶 pe r ox i da s e POD 活 性 來 抑 制 白 菜 種 子 的 萌 發(fā) 目 前 尚 未 見 芍 藥 屬 種 子 內(nèi) 源 抑 制 物 對(duì) 活 性 氧 呼 吸 強(qiáng) 度 和 激 素 含 量 等 生 理 指 標(biāo) 影 響 的 研 究 報(bào) 道 為 此 本 研 究 以 多 花 芍 藥 生 根 種 子 為 材 料 白 菜 為 受 體 確 定 生 根 種 子 抑 制 作 用 最 強(qiáng) 的 部 位 以 及 該 部 位 浸 提 液 對(duì) 多 花 芍 藥 離 體 胚 上 胚 軸 休 眠 解 除 的 影 響 確 定 多 花 芍 藥 上 胚 軸 休 眠 解 除 的 關(guān) 鍵 時(shí) 間 節(jié) 點(diǎn) 并 分 析 各 節(jié) 點(diǎn) 浸 提 液 對(duì) 白 菜 種 子 發(fā) 芽 率 ROS 抗 氧 化 物 質(zhì) 及 呼 吸 代 謝 酶 的 影 響 以 期 為 多 花 芍 藥 內(nèi) 源 抑 制 物 影 響 自 體 休 眠 作 用 機(jī) 制 的 研 究 奠 定 基 礎(chǔ) 1 材 料 與 方 法 1 1 試 驗(yàn) 材 料 研 究 所 用 多 花 芍 藥 種 子 于 2022 年 8 月 上 旬 采 自 西 藏 吉 隆 縣 84 35 86 20 E 28 30 29 30 N 種 子 生 活 力 為 91 11 5 09 種 子 沙 藏 參 考 張 慜 5 的 方 法 在 室 溫 下 用 去 離 子 水 浸 泡 24 h 在 15 相 對(duì) 濕 度 60 的 環(huán) 境 中 進(jìn) 行 沙 藏 獲 取 生 根 2 4 cm 的 種 子 白 菜 種 子 購 自 京 研 益 農(nóng) 北 京 種 業(yè) 科 技 有 限 公 司 種 類 為 結(jié) 球 白 菜 發(fā) 芽 率 85 0 純 度 96 0 1 2 試 驗(yàn) 方 法 1 2 1 多 花 芍 藥 生 根 種 子 浸 提 液 制 備 及 其 抑 制 強(qiáng) 度 確 定 參 考 李 婉 茹 17 的 方 法 取 多 花 芍 藥 生 根 2 4 cm 的 種 子 分 離 胚 乳 種 皮 和 胚 3 個(gè) 部 分 分 別 粉 碎 后 各 取 1 g 加 入 10 mL 蒸 餾 水 在 25 下 密 閉 浸 提 24 h 10 000 r mi n 離 心 15 mi n 取 上 清 液 定 容 至 10 mL 即 得 各 部 位 0 1 g mL 浸 提 液 取 胚 乳 T1 種 皮 T2 胚 T3 浸 提 液 各 3 mL 分 別 加 入 放 有 兩 層 濾 紙 的 培 養(yǎng) 皿 中 以 加 入 等 體 積 蒸 餾 水 的 處 理 為 對(duì) 照 CK 每 個(gè) 培 養(yǎng) 皿 放 50 粒 白 菜 種 子 培 養(yǎng) 設(shè) 3 個(gè) 重 復(fù) 培 養(yǎng) 條 件 為 恒 溫 25 相 對(duì) 濕 度 60 光 照 度 4 000 l x 光 暗 周 期 12 h 12 h 48 h 后 以 胚 根 長 大 于 種 子 直 徑 為 發(fā) 芽 標(biāo) 準(zhǔn) 統(tǒng) 計(jì) 白 菜 種 子 發(fā) 芽 數(shù) 計(jì) 算 發(fā) 芽 率 72 h 后 每 皿 隨 機(jī) 取 20 粒 種 子 用 直 尺 測 量 根 長 和 苗 高 比 較 各 處 理 的 發(fā) 芽 率 根 長 和 苗 高 確 定 多 花 芍 藥 生 根 種 子 不 同 部 位 浸 提 液 對(duì) 白 菜 種 子 萌 發(fā) 的 抑 制 強(qiáng) 度 發(fā) 芽 率 發(fā) 芽 種 子 數(shù) 供 試 種 子 總 數(shù) 100 1 2 2 離 體 胚 破 眠 處 理 離 體 胚 破 眠 處 理 參 考 張 慜 5 的 方 法 進(jìn) 行 用 流 水 將 多 花 芍 藥 種 子 表 面 徹 底 洗 凈 洗 潔 精 浸 泡 20 mi n 后 用 流 水 沖 洗 40 mi n 以 上 在 超 凈 工 作 臺(tái) 上 用 醫(yī) 用 酒 精 體 積 分 數(shù) 為 75 浸 泡 1 mi n 無 菌 水 多 次 沖 洗 種 子 去 除 表 面 殘 留 酒 精 再 用 NaClO 溶 液 體 積 分 數(shù) 2 浸 泡 15 mi n 無 菌 水 洗 凈 從 消 毒 后 的 種 子 中 剝 離 種 胚 接 種 到 生 根 培 養(yǎng) 基 1 2 MS 0 6 g L 活 性 炭 30 g L 蔗 糖 6 5 g L 瓊 脂 pH 5 8 6 0 上 培 養(yǎng) 培 養(yǎng) 條 件 為 光 照 時(shí) 間 14 h d 光 照 度 2 000 3 000 l x 溫 度 23 2 待 離 體 胚 生 根 2 4 cm 時(shí) 將 其 移 入 生 根 培 養(yǎng) 基 0 5 mg L 赤 霉 素 GA3 成 苗 培 養(yǎng) 基 對(duì) 照 同 時(shí) 設(shè) 置 多 花 芍 藥 生 根 種 子 胚 浸 提 液 培 養(yǎng) 基 成 苗 培 養(yǎng) 基 1 或 2 g L 浸 提 液 處 理 培 養(yǎng) 條 件 同 生 根 處 理 每 處 理 接 種 15 個(gè) 胚 設(shè) 3 個(gè) 重 復(fù) 每 天 觀 察 各 處 理 離 體 胚 的 生 長 情 況 統(tǒng) 計(jì) 胚 芽 萌 出 時(shí) 間 上 胚 軸 休 眠 解 除 時(shí) 間 生 根 離 體 胚 移 入 各 處 理 培 養(yǎng) 基 至 真 葉 完 全 展 開 的 時(shí) 間 待 對(duì) 照 真 葉 展 開 40 d 后 統(tǒng) 計(jì) 上 胚 軸 休 眠 解 除 率 上 胚 軸 休 眠 解 除 率 真 葉 展 開 的 離 體 胚 數(shù) 生 根 離 體 胚 總 數(shù) 100 1 2 3 離 體 胚 休 眠 解 除 過 程 關(guān) 鍵 節(jié) 點(diǎn) 的 確 定 多 花 芍 藥 生 根 種 子 胚 移 入 成 苗 培 養(yǎng) 基 之 前 0 d 記 為 S1 根 據(jù) 張 慜 5 的 研 究 結(jié) 果 多 花 芍 藥 種 子 在 低 溫 層 積 到 胚 芽 萌 出 期 間 會(huì) 出 現(xiàn) 脫 落 酸 赤 霉 素 ABA GA3 拐 點(diǎn) 將 此 拐 點(diǎn) 時(shí) 期 定 為 S2 將 胚 芽 萌 出 胚 芽 伸 長 和 真 葉 展 開 的 時(shí) 間 分 別 定 為 S3 S4 和 S5 逐 日 觀 察 破 眠 處 理 離 體 胚 的 上 胚 軸 及 子 葉 形 態(tài) 變 化 記 錄 胚 芽 萌 出 胚 芽 伸 長 和 真 葉 展 開 的 時(shí) 間 每 天 用 體 式 顯 微 鏡 Le i c a EZ 德 國 觀 察 15 個(gè) 胚 以 90 的 胚 出 現(xiàn) 相 應(yīng) 形 態(tài) 特 征 的 時(shí) 間 點(diǎn) 為 準(zhǔn) 拍 照 記 錄 用 酶 聯(lián) 免 疫 法 試 劑 盒 購 自 中 國 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 測 定 S1 S5 各 節(jié) 點(diǎn) 胚 中 ABA 和 GA3 的 含 量 每 份 樣 1 1 1 第 9 期 袁 秋 萍 等 內(nèi) 源 抑 制 物 對(duì) 多 花 芍 藥 種 子 上 胚 軸 休 眠 的 影 響品 取 0 2 g 重 復(fù) 3 次 根 據(jù) 形 態(tài) 指 標(biāo) 和 ABA GA3 值 的 變 化 確 定 休 眠 解 除 的 關(guān) 鍵 節(jié) 點(diǎn) 1 2 4 關(guān) 鍵 節(jié) 點(diǎn) 胚 浸 提 液 對(duì) 白 菜 種 子 相 關(guān) 指 標(biāo) 的 影 響 制 備 S1 S5 節(jié) 點(diǎn) 胚 浸 提 液 處 理 白 菜 種 子 浸 提 液 制 備 方 法 及 白 菜 培 養(yǎng) 條 件 同 1 2 1 節(jié) 48 h 后 計(jì) 算 發(fā) 芽 率 并 測 定 相 關(guān) 生 理 指 標(biāo) 其 中 SOD CAT 和 POD 活 性 過 氧 化 氫 H2O2 抗 壞 血 酸 a s co rb i c a c i d AsA 和 谷 胱 甘 肽 g l u t a t h i one GSH 含 量 及 羥 自 由 基 OH 清 除 能 力 均 采 用 南 京 建 成 試 劑 盒 測 定 NADP 蘋 果 酸 脫 氫 酶 NADP ma l a t e dehyd r ogena s e NADP MDH 丙 酮 酸 激 酶 py ruva t e k i na s e PK 6 磷 酸 葡 萄 糖 脫 氫 酶 g l u c os e 6 pho spha t e dehyd r ogena s e G6PDH 活 性 采 用 蘇 州 科 銘 的 試 劑 盒 測 定 具 體 步 驟 詳 見 說 明 書 每 個(gè) 處 理 的 每 份 樣 品 取 0 1 g 重 復(fù) 3 次 以 蒸 餾 水 處 理 為 對(duì) 照 CK1 1 3 數(shù) 據(jù) 分 析 試 驗(yàn) 數(shù) 據(jù) 采 用 Mi c r os o f t exc e l 2019 進(jìn) 行 統(tǒng) 計(jì) 采 用 SPSS S t a t i s t i c s 26 0 進(jìn) 行 方 差 分 析 及 Pe a r s on 相 關(guān) 性 分 析 用 Gr aphPad Pr i sm 8 進(jìn) 行 圖 表 繪 制 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 多 花 芍 藥 生 根 種 子 各 部 位 浸 提 液 的 抑 制 強(qiáng) 度 由 圖 1 可 知 與 對(duì) 照 相 比 多 花 芍 藥 生 根 種 子 3 個(gè) 部 位 浸 提 液 均 可 顯 著 降 低 白 菜 種 子 的 發(fā) 芽 率 及 根 長 苗 高 抑 制 強(qiáng) 度 由 大 到 小 依 次 為 胚 胚 乳 種 皮 其 中 胚 浸 提 液 處 理 的 白 菜 種 子 發(fā) 芽 率 為 0 種 皮 浸 提 液 處 理 的 白 菜 發(fā) 芽 率 顯 著 高 于 胚 乳 浸 提 液 處 理 但 兩 處 理 的 根 長 和 苗 高 無 顯 著 差 異 可 見 多 花 芍 藥 生 根 種 子 中 胚 對(duì) 白 菜 種 子 萌 發(fā) 及 幼 苗 生 長 的 抑 制 作 用 最 強(qiáng) 因 此 選 擇 胚 浸 提 液 進(jìn) 行 后 續(xù) 試 驗(yàn) CK T1 T2 T3 分 別 代 表 蒸 餾 水 及 胚 乳 種 皮 和 胚 浸 提 液 圖 柱 上 標(biāo) 不 同 小 寫 字 母 代 表 處 理 間 差 異 顯 著 P 0 05 下 圖 同 CK T1 T2 and T3 r ep r e s en t d i s t i l l ed wa t e r endo spe rm s e ed c oa t and embr yo ex t r a c t s r e spe c t i ve l y Di f f e r en t l owe r c a s e l e t t e r s r ep r e s en t s i gn i f i c an t d i f f e r enc e s be twe en t r e a tmen t s P 0 05 The s ame be l ow 圖 1 多 花 芍 藥 生 根 種 子 各 部 位 浸 提 液 對(duì) 白 菜 種 子 萌 發(fā) 及 幼 苗 生 長 的 影 響 F i g 1 Ef f e c t s o f ex t r a c t s f r om d i f f e r en t pa r t s o f P e m o d i r oo t ed s e eds on s e ed ge rmi na t i on and s e ed l i ng g r owt h o f B r a s s i c a p e k i n e n s i s 2 2 多 花 芍 藥 生 根 種 子 胚 浸 提 液 對(duì) 其 離 體 胚 上 胚 軸 休 眠 解 除 的 影 響 由 表 1 可 知 與 成 苗 培 養(yǎng) 基 相 比 成 苗 培 養(yǎng) 基 1 或 2 g L 胚 浸 提 液 處 理 的 離 體 胚 上 胚 軸 休 眠 解 除 率 均 顯 著 降 低 其 中 添 加 2 g L 胚 浸 提 液 處 理 顯 著 延 長 了 胚 芽 萌 出 和 上 胚 軸 休 眠 解 除 的 時(shí) 間 結(jié) 果 表 明 多 花 芍 藥 胚 中 確 實(shí) 存 在 內(nèi) 源 抑 制 物 且 能 顯 著 抑 制 本 體 休 眠 解 除 表 1 多 花 芍 藥 生 根 種 子 胚 浸 提 液 對(duì) 其 離 體 胚 上 胚 軸 休 眠 解 除 的 影 響 Tab l e 1 Ef f e c t o f emb r yo ex t r a c t s o f P e m o d i r oo t ed s e eds on ep i c o t y l do rmancy r e l e a s e o f exc i s ed emb r yo 處 理 方 式 Tr e a tmen t 上 胚 軸 休 眠 解 除 率 Ep i c o t y l do rmanc y r e l e a s e pe r c en t age 胚 芽 萌 出 時(shí) 間 d P l umu l e g r owt h t ime 上 胚 軸 休 眠 解 除 時(shí) 間 d Ep i c o t y l do rmanc y r e l e a s e t ime 成 苗 培 養(yǎng) 基Se ed l i ng med i um 62 22 15 39 a 8 56 0 51 a 16 80 1 09 a 成 苗 培 養(yǎng) 基 1 g L 胚 浸 提 液 Se ed l i ng med i um 1 g L embr yo ex t r a c t s 17 50 4 33 b 9 61 1 68 a 17 30 3 21 a 成 苗 培 養(yǎng) 基 2 g L 胚 浸 提 液 Se ed l i ng med i um 2 g L embr yo ex t r a c t s 15 87 3 61 b 13 33 2 08 b 30 23 1 25 b 注 同 列 數(shù) 據(jù) 后 標(biāo) 不 同 小 寫 字 母 代 表 處 理 間 差 異 顯 著 P 0 05 No t e Di f f e r en t l owe r c a s e l e t t e r s r ep r e s en t s i gn i f i c an t d i f f e r enc e s be twe en t r e a tmen t s f o r s ame c o l umn da t a P 0 05 2 3 多 花 芍 藥 離 體 胚 休 眠 解 除 的 關(guān) 鍵 節(jié) 點(diǎn) 離 體 胚