2024 Vol 44 No 07 農(nóng)業(yè)與技術(shù) null農(nóng)業(yè)科學 寧夏番茄地田間雜草攜帶主要病毒檢測及分析 戴榮 李建設(shè) 寧夏大學葡萄酒與園藝學院 寧夏 銀川 nullnullnullnullnullnull 摘 要 番茄病毒病是導致番茄減產(chǎn)的重要原因 田間雜草是傳播番茄病毒最直接的中間媒介 為明確寧夏地區(qū) 番茄田間雜草攜帶病毒種類與復合侵染情況 采取 nullnullnull 結(jié)合 nullnull nullnullnullnull 技術(shù) 檢測了寧夏 null 個縣 市 null 個鄉(xiāng)鎮(zhèn) nullnull 塊疑似感染番茄病毒田地采集的 nullnull 科 nullnull 種共計 nullnullnull 份雜草樣本 檢測結(jié)果表明 雜草攜帶 nullnullnull 南方番茄病 毒 檢出率最高 為 nullnullnull nullnullnull 其次是 nullnullnullnull 番茄褪綠病毒 為 nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull 番茄花葉病毒 nullnullnullnullnull 番茄黃化曲葉病毒 nullnullnullnull 番茄斑萎病毒 nullnullnullnullnull 番茄斑駁花葉病毒 null 種病毒檢出率分別為 nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull 通過對雜草攜帶番茄病毒復合侵染的現(xiàn)象進行分析 發(fā)現(xiàn)病毒復合侵染率達 nullnullnull nullnullnull 其中 null 種病毒類型復合侵染最嚴重 占復合侵染總比的 nullnullnull nullnullnull null 種病毒復合侵染率占總復合侵染的 nullnullnull nullnullnull null 種病毒復合侵染率略低 占復合侵染總比 nullnullnull nullnullnull null 種病毒侵染率最低 為 nullnull nullnullnull 雜草是番茄病毒傳播的中 間媒介 番茄病毒復合侵染在雜草上呈爆發(fā)狀態(tài) 因此及時清除田間雜草是最簡單有效控制病毒病傳播的方法 關(guān)鍵詞 田間雜草 nullnullnull nullnull nullnullnullnull 檢測 中圖分類號 null nullnull 文獻標志碼 null DOI nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 收稿日期 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 基金項目 寧夏回族自治區(qū)重點研發(fā)計劃項目 項目編號 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 作者簡介 戴榮 nullnullnullnullnull 女 碩士在讀 研究方向 設(shè)施蔬菜栽培 通訊作者李建設(shè) nullnullnullnullnull 男 博士 教授 博士生導師 研究 方向 設(shè)施蔬菜栽培生理與營養(yǎng)施肥 引言 番茄是寧夏設(shè)施冷涼露地主要栽培蔬菜之一 null 其罹患的病毒病呈現(xiàn)出爆發(fā)性強 傳播快且危害范圍 廣的現(xiàn)象 是造成番茄減產(chǎn)的重要原因 null 目前 番 茄可感染病毒病的種類較多 同時番茄出現(xiàn)復合侵染 的情況較為普遍 nullnullnull 而田間雜草對番茄生長會造成 嚴重威脅 null 與番茄競爭生長空間 同時也為番茄病毒 病的傳播提供了媒介 null 目前 已對寧夏番茄植株上攜 帶的病毒病種類做出鑒定 nullnullnullnull 但番茄田間雜草攜帶病 毒種類還未有報道 本研究主要針對寧夏 null 個縣 市 null 個鄉(xiāng)鎮(zhèn) nullnull 塊疑似攜帶病毒的番茄地田間雜草進行采樣 采取 nullnullnull nullnull nullnullnullnull 技術(shù) 明確田間雜草攜帶病毒種類 以期為今后番茄病毒病的防控提供更加科學的指導 1 材料與方法 1 1 試驗材料 nullnullnullnull 年 null 月 對寧夏 null 個縣 市 null 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)共計 nullnull 塊番茄田進行采樣調(diào)查 對疑似發(fā)病番茄周邊 地膜下雜草不取 的雜草進行拍照 采樣 株型小 的雜草采集全株 株型大的雜草使用 nullnullnull乙醇消毒后 的剪刀剪取帶葉片的莖稈 藤蔓 nullnullnull 條 裝入裝樣 袋 做好標記 將采集樣品立即置于液氮中速凍 保 存于 nullnullnullnull 冰箱保存?zhèn)溆?每剪取 null 個樣品后立即用 nullnullnull乙醇擦拭剪刀消毒處理 1 2 植物總 DNA NA 的提取及 cDNA 的合成 參照試劑盒提供的方法 分別使用天根多糖多酚 植物總 nullnullnull 提取試劑盒 貨號 nullnullnullnullnull 與天根多 糖多酚植物基因組 nullnullnull 提取試劑盒 貨號 nullnullnullnullnull 提取田間雜草總 nullnullnullnullnullnullnull 以提取的總 nullnullnull 為模板 進行反轉(zhuǎn)錄 采用 nullnullnullnullnullnull 生物公司的 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull 貨號 nullnullnullnullnullnullnull 進行反 轉(zhuǎn)錄 反應(yīng)的體系及步驟參照產(chǎn)品說明書 1 3 番茄病毒引物信息 寧夏地區(qū)番茄病毒病主要受到番茄花葉病毒 nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 番茄黃化曲葉病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull 番茄斑萎病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 番茄斑駁花葉病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull 南方番茄病毒 nullnullnull 番茄褪綠 病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 黃瓜花葉病毒 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull null 種病毒的侵染 并新 發(fā)現(xiàn)番茄褐色皺紋病毒病 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 42 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null農(nóng)業(yè)科學 農(nóng)業(yè)與技術(shù) 2024 Vol 44 No 07 nullnullnull nullnullnullnullnullnull 同時檢測另外常見的 null 種侵染番茄的 病毒 煙草花葉病毒 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 番茄環(huán)紋斑點病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 引物相關(guān)信息見表 null 1 4 T C C 及電泳檢測 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 檢測 利用病毒特異性引物 見表 null 按下述體系與條件擴增 體系 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull 貨號 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull 上下引物各 nullnull nullnullnull nullnullnullnull 模板 nullnullnull nullnullnull null null nullnullnull 條件 nullnullnull null nullnullnullnull nullnullnull null nullnullnull nullnullnull null nullnullnull nullnullnull null nullnullnull nullnull 個循 環(huán) nullnullnull延伸 nullnullnullnullnull 擴增完成 分別取 nullnullnull 擴增產(chǎn) 物在 nullnull nullnull瓊脂糖凝膠上電泳檢測 并用全自動凝膠 成像系統(tǒng)記錄結(jié)果 表 1 用于 T PC 擴增番茄病毒的特異性引物 引物 名稱 引物序列 nullnullnullnullnull 擴增片 段大小 nullnullnull 參考 文獻 nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull 2 結(jié)果與分析 2 1 雜草感染病毒的表現(xiàn)特征 通過走訪拍照采樣發(fā)現(xiàn) 與正常生長的雜草相 比 感染病毒的苦苣菜上部新葉出現(xiàn)淺黑褐色斑點 見圖 nullnull 下部老葉斑點顏色加深 斑點擴大 輕微萎 縮 葉片蜷曲 可從葉片擴展至整棵植株 見圖 nullnull 葉片背部葉脈由綠轉(zhuǎn)紫 莖稈支撐力變?nèi)?植株倒 伏 部分葉片發(fā)生脫落 見圖 nullnull 馬齒莧葉片出現(xiàn)黃 色斑點 見圖 nullnull 反枝莧新葉呈現(xiàn)黃色斑點 老葉邊 緣黃化 褪綠 從邊緣輻射至葉脈 出現(xiàn)枯斑 見圖 nullnull 打碗花葉片出現(xiàn)黃綠相間的花葉 見圖 nullnull 莖稈 發(fā)黃變脆 葉片向下卷曲 蔓延至整棵植株 凹頭莧 葉片背部與長鬃蓼葉片正面 見圖 nullnull 圖 nullnull 均出 現(xiàn)淺褐色斑點 集中密集 乳苣葉片出現(xiàn)古銅色斑塊 見圖 nullnull 部分斑塊枯萎 葉片背部也清晰可見 2 2 寧夏番茄田間不同種類雜草所攜帶病毒檢測結(jié)果 通過對采集的 nullnull 科 nullnull 種 nullnullnull 份雜草樣品提取總 nullnullnullnullnullnullnull 利用特異性引物進行 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 擴 增 如表 null 所示 結(jié)果表明 共檢測出 null 種病毒 分 別為 nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnull 其中 nullnullnull 份樣品檢出病毒 有 nullnullnull 個樣品未檢測到 病毒 病毒檢出率高達 nullnullnull nullnullnull 注 nullnullnull 為苦苣菜 菊科 null 為馬齒莧 馬齒莧科 null 為反 枝莧 莧科 null 為打碗花 旋花科 null 為凹頭莧 莧科 null 為長 鬃蓼 蓼科 null 為乳苣 菊科 圖 1 幾種雜草侵染病毒田間癥狀 不同病毒感染的雜草種類與感染率有一定差異 nullnullnull 可侵染的雜草種類和數(shù)量最多 除黃花蒿外 nullnull 科 nullnull 種 nullnullnull 株雜草被感染 雜草種類間感染率略有 差異 節(jié)節(jié)草感染率最高為 nullnullnull nullnullnull 馬唐的感染率 最低為 nullnull nullnullnull 其次是 nullnullnullnull 可侵染 nullnull 科 nullnull 種雜 草 采集的菊科雜草 nullnullnull 可被侵染 nullnullnullnull 可感染 nullnull 科 nullnull 種雜草 菊科可侵染雜草種類最多 包括歐洲 千里光 花葉滇苦菜等 null 種雜草 受到 nullnullnullnullnull 侵染 的雜草高達 nullnull 種 采集的禾本科雜草均可感染此病 毒 以冰草最甚 侵染率高達 nullnullnullnull nullnullnullnull 可侵染 的雜草種類最少 涉及 null 科 nullnull 種雜草 十字花科的 null 種雜草皆可感染此病毒 nullnullnull 獨行菜樣品檢測出此病 毒 nullnullnullnullnull 可侵染的雜草種類最少 涉及 null 科 null 種雜 草 包括馬唐 早熟禾 苦苣菜 黃花蒿 藜 地 52 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 2024 Vol 44 No 07 農(nóng)業(yè)與技術(shù) null農(nóng)業(yè)科學 膚 打碗花與野西瓜苗 從被感染雜草種類的角度來分析 nullnullnull 感染雜草 的情況依次為其他科 莧科 藜科 菊科 蓼科 禾 本科 nullnullnullnull 感染率排序為莧科 null其他科 null藜科 null菊科 蓼科 null禾本科 nullnullnullnull 感染雜草的種類最低為藜科 禾 本科 菊科 莧科感染率相差不大 蓼科未檢測到被 侵染雜草 nullnullnullnullnull 感染率排序為莧科 null禾本科 null菊科 null 藜科 null蓼科 null其他科 nullnullnullnull 感染率的高低順序為其他 科 null莧科 null菊科 其中禾本科 蓼科與藜科未檢測到雜 草感染 nullnullnullnullnull 感染率排序為其他科 null禾本科 null藜科 null 菊科 蓼科與莧科未檢測到感染樣本 對雜草感染番茄病毒種類整理并進行數(shù)據(jù)分析 nullnullnull 的檢出比例最高為 nullnullnull nullnullnull 是危害寧夏范圍最 廣的病毒 其次是 nullnullnullnull 檢出率為 nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull 的檢出率分別為 nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull 總檢出率較低 分別為 nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull 表 2 寧夏番茄田間雜草及其攜帶病毒種類 科名 雜草名稱 樣本 數(shù)量 陽性 樣本 數(shù) 檢出率 nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull 禾本科 狗尾草 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 馬唐 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnull null null nullnull nullnull nullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 牛筋草 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnull null nullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 糠稷 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 早熟禾 nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null null nullnull null null nullnull nullnull null null null null 冰草 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull null null null nullnullnull null null null nullnull null nullnull null null 蘆葦 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull null null null nullnull null null null nullnull null nullnull null null 菊科 苦苣菜 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull null null nullnull nullnull nullnullnull nullnull null nullnull nullnull nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 歐洲千里光 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnull null null 蒲公英 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null nullnullnull null null null null nullnull null null null null 乳苣 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 花葉滇苦菜 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull null null nullnullnull nullnull null null null null nullnull null nullnullnull null null null 長裂苦苣菜 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull null null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null nullnullnull nullnull null null null null 抱莖苦荬菜 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null null null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 野薊 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull null nullnull nullnull nullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 野艾蒿 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null null null nullnullnull nullnull null nullnull nullnull null null 青蒿 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null null null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 黃花蒿 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null null null null null nullnullnull null null nullnullnull null null 泥胡菜 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull null null null null null null null nullnull null null null null 黃鵪菜 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnull null null null null null null null nullnull null null null null 毛連菜 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null nullnullnull nullnull null null null null 卷耳草 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 蓼科 酸模葉蓼 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null null nullnull null null null nullnull null nullnull null null 長鬃蓼 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 酸模 nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnull null null null null null null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull 藜科 雜配藜 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull null nullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 藜 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnull nullnull nullnull nullnullnull null