ICS 65.020.20 B 31 備案號(hào): DB11 北京市地方標(biāo)準(zhǔn) DB11/T 9052012 草莓種苗 Strawberry seedling 2012 - 09 - 27發(fā)布 2013 - 01 - 01實(shí)施 北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局   發(fā)布 DB11/T 9052012 I 前  言 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。 本標(biāo)準(zhǔn)由北京市農(nóng)業(yè)局提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由北京市農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)由北京市農(nóng)業(yè)局組織實(shí)施。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京市種子管理站、北京市農(nóng)林科學(xué)院林業(yè)果樹研究所。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：賈希海、張運(yùn)濤、董清華、徐全明、律寶春、吳明生、宋歌、云曉敏、郭慧杰。 DB11/T 9052012 1 草莓種苗 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了草莓種苗的相關(guān)定義、質(zhì)量要求、檢驗(yàn)和質(zhì)量判定規(guī)則。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于生產(chǎn)和銷售的草莓種苗。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 3543.5   農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程  真實(shí)性和品種純度鑒定 NY/T 406   脫毒草莓種苗病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程 3 術(shù)語和定義 下列術(shù)語和定義適用于本文件。 3.1  莖尖培養(yǎng)苗 shoot tip culture seedling（F0） 從經(jīng)過熱處理脫毒及病毒檢測(cè)后的草莓植株取莖尖分生組織，進(jìn)行莖尖培養(yǎng)后獲得的、經(jīng)檢測(cè)后確認(rèn)不攜帶本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢測(cè)病毒的試管苗。 3.2  原原種苗 pre-basic seedling（F1） 莖尖培養(yǎng)苗在網(wǎng)室中經(jīng)過一年繁殖培養(yǎng)后獲得并不攜帶本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢測(cè)病毒的植株。 3.3  原種苗 basic seedling（F2） 原原種苗經(jīng)過一年繁殖培養(yǎng)后獲得并經(jīng)檢測(cè)后達(dá)到規(guī)定質(zhì)量要求的植株。 3.4  生產(chǎn)用種苗 certified seedling（F3） 原種苗經(jīng)過一年繁殖培養(yǎng)后獲得并經(jīng)檢測(cè)后達(dá)到規(guī)定質(zhì)量要求的植株。 3.5  成活種苗 survival seedling DB11/T 9052012 2 種苗定植一定時(shí)間后生長出新根、芽、葉的植株。 3.6  無毒種苗 virus-free seedling 不攜帶草莓斑駁病毒（Strawberry mottle virus，SMoV）、草莓輕型黃邊病毒（Strawberry mild yellow edge virus，SMYEV）、草莓鑲脈病毒（Strawberry vein banding virus，SVBV）以及草莓皺縮病毒（Strawberry crinkle virus，SCV）中任一種病毒的植株。 4 質(zhì)量要求 草莓種苗質(zhì)量要求見表1。 表1 草莓種苗質(zhì)量要求 單位為% 作物名稱 種苗類別 純度 無毒率 病株率 成活率 單株要求 草莓 原原種苗 100.0 100.0 0 90.0 四個(gè)葉柄并一個(gè)芯；芯莖粗不小于0.6cm；須根不少于6條，根長不小于6cm。 原種苗 99.0 100.0 0 生產(chǎn)用種苗 96.0 95.0 炭疽病1.0； 葉斑病3.0 5 檢驗(yàn) 5.1 抽樣 5.1.1 原原種苗 每株應(yīng)檢測(cè)。 5.1.2 原種苗 在整個(gè)組培擴(kuò)繁過程的前、中和后期，采用隨機(jī)取樣法抽取1%2%的組培苗。 5.1.3 生產(chǎn)用種苗 5.1.3.1 采用隨機(jī)取樣方法抽取樣品，抽樣數(shù)量見表2。 表2 生產(chǎn)用種苗抽樣數(shù)量 種苗總數(shù)量（株） 抽樣百分率（%） 抽樣最低數(shù)量（株） 10000 610 100 10000 35 注：不足抽樣最低數(shù)量的全部作為混合樣品 5.1.3.2 將初次抽取的樣品組成混合樣品，從混合樣品中隨機(jī)抽取10%的樣品作為檢測(cè)樣品。 DB11/T 9052012 3 5.2 純度鑒定 5.2.1 檢測(cè)方法 按GB/T 3543.5執(zhí)行。 5.2.2 結(jié)果計(jì)算和表示 按GB/T 3543.5執(zhí)行。 5.3 無毒率檢測(cè) 5.3.1 檢測(cè)病毒種類 草莓斑駁病毒、草莓輕型黃邊病毒、草莓鑲脈病毒和草莓皺縮病毒。 5.3.2 檢測(cè)方法 5.3.2.1 分子生物學(xué)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)法（PCR/RT-PCR） 草莓斑駁病毒（SMoV）：取草莓種苗的葉片，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行PCR檢測(cè)。利用引物（上游引物5TAAGCGACCACGACTGTGACAAAG3和下游引物5TCTTGGGCTTGGATCGTCACCTG3）擴(kuò)增得到219 bp的片段。 草莓輕型黃邊病毒（SMYEV）：取草莓種苗的葉片，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行PCR檢測(cè)。利用引物（上游引物5GTGTGCTCAATCCAGCCAG3和下游引物5CATGGCACTCATTGGAGCTGGG3）擴(kuò)增得到271 bp的片段。 草莓鑲脈病毒（SVBV）：取草莓種苗的葉片，提取基因組DNA，進(jìn)行PCR檢測(cè)。利用引物（上游引物5GAATGGGACAATGAAATGAG3和下游引物5GTGAGGAGAACTTAGGACA3）擴(kuò)增得到574 bp的片段。 草莓皺縮病毒（SCV）：取草莓種苗的葉片，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行 PCR 檢測(cè)。利用引物（上游引物5 CATTGGTGGCAGACCCATCA3和下游引物5TTCAGGACCTATTTGATGACA3）擴(kuò)增得到345bp的片段。 5.3.2.2 指示植物小葉嫁接法 具體檢測(cè)方法應(yīng)按NY/T 406執(zhí)行。 5.3.2.3 結(jié)果計(jì)算和表示 計(jì)算見公式（1），結(jié)果保留一位小數(shù)。 100% = 供檢種苗數(shù)的種苗數(shù)不攜帶本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定病毒）無毒率（  . (1) 5.4 病株率檢測(cè) 5.4.1 檢測(cè)方法 目測(cè)法檢測(cè)。 5.4.2 結(jié)果計(jì)算和表示 DB11/T 9052012 4 計(jì)算見公式（2），結(jié)果保留一位小數(shù)。 100% = 供檢種苗數(shù)的種苗數(shù)感染本標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定病害）病株率（  . (2) 5.5 成活率鑒定 5.5.1 檢測(cè)方法 以100株為一次重復(fù)，計(jì)4次重復(fù)。 在溫室中進(jìn)行，溫度保持在2025；選擇沙壤土做苗床并消毒；使用防蟲網(wǎng)隔離，防止感染外界病毒；使用遮陽網(wǎng)進(jìn)行遮陰，日蓋夜揭；定植后及時(shí)灌水，滿足植株生長對(duì)水分的需求；20天后，進(jìn)行種苗成活率鑒定。 5.5.2 結(jié)果計(jì)算和表示 計(jì)算見公式（3），結(jié)果保留一位小數(shù)。 100% = 供檢種苗數(shù)成活種苗數(shù)）成活率（  . (3) 5.6 單株要求檢測(cè) 5.6.1 檢測(cè)方法 芯莖粗和根長用精確度達(dá)0.1mm的長度計(jì)量器具進(jìn)行測(cè)定。 5.6.2 結(jié)果計(jì)算和表示 單株要求試驗(yàn)結(jié)果以樣品單株數(shù)據(jù)平均數(shù)表示，結(jié)果保留一位小數(shù)。每個(gè)重復(fù)取單株試驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均數(shù)，最后結(jié)果按兩次重復(fù)平均數(shù)計(jì)算。 6 質(zhì)量判定規(guī)則 6.1 純度、無毒率、病株率、成活率、單株要求其中一項(xiàng)未達(dá)到質(zhì)量要求的，判為劣質(zhì)種苗。 6.2 純度、無毒率、病株率、成活率、單株要求其中一項(xiàng)達(dá)不到標(biāo)簽上相應(yīng)標(biāo)注值的，判為劣質(zhì)種苗。 6.3 帶有國家規(guī)定檢疫性有害生物的，判為劣質(zhì)種苗。 _