南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 收 稿 日 期 基 金 項(xiàng) 目 國(guó) 家 自 然 科 學(xué) 基 金 項(xiàng) 目 作 者 簡(jiǎn) 介 王 文 麗 碩 士 研 究 生 通 信 作 者 王 世 梅 教 授 研 究 方 向 為 土 傳 病 害 生 物 防 控 王 文 麗 金 涵 從 炳 成 等 復(fù) 合 微 生 物 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 應(yīng) 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 復(fù) 合 微 生 物 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 應(yīng) 王 文 麗 金 涵 從 炳 成 周 蕾 韋 中 王 世 梅 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 資 源 與 環(huán) 境 科 學(xué) 學(xué) 院 江 蘇 省 固 體 有 機(jī) 廢 棄 物 資 源 化 研 究 重 點(diǎn) 實(shí) 驗(yàn) 室 江 蘇 省 有 機(jī) 固 體 廢 棄 物 協(xié) 同 創(chuàng) 新 中 心 教 育 部 資 源 節(jié) 約 型 肥 料 工 程 技 術(shù) 研 究 中 心 江 蘇 南 京 摘 要 目 的 本 文 旨 在 篩 選 復(fù) 合 微 生 物 菌 劑 并 研 究 其 防 控 番 茄 青 枯 病 的 效 果 方 法 從 土 壤 中 分 離 獲 得 拮 抗 番 茄 青 枯 菌 的 放 線 菌 及 細(xì) 菌 各 株 依 據(jù) 菌 株 的 形 態(tài) 特 征 理 化 特 征 及 基 因 序 列 對(duì) 其 進(jìn) 行 初 步 鑒 定 用 透 射 電 鏡 觀 察 青 枯 菌 經(jīng) 放 線 菌 上 清 液 處 理 前 后 的 細(xì) 胞 形 態(tài) 變 化 定 量 測(cè) 定 細(xì) 菌 產(chǎn) 酶 活 性 利 用 番 茄 盆 栽 試 驗(yàn) 篩 選 及 驗(yàn) 證 復(fù) 合 菌 劑 的 防 病 效 果 利 用 高 通 量 測(cè) 序 探 究 復(fù) 合 菌 劑 對(duì) 根 際 土 壤 細(xì) 菌 群 落 結(jié) 構(gòu) 的 影 響 結(jié) 果 株 拮 抗 放 線 菌 初 步 鑒 定 為 鏈 霉 菌 株 拮 抗 細(xì) 菌 初 步 鑒 定 為 芽 胞 桿 菌 菌 株 發(fā) 酵 上 清 液 與 青 枯 菌 共 培 養(yǎng) 后 經(jīng) 透 射 電 鏡 觀 察 青 枯 菌 細(xì) 胞 分 泌 的 胞 外 多 糖 顯 著 減 少 芽 胞 桿 菌 及 產(chǎn) 活 性 分 別 為 和 利 用 育 苗 基 質(zhì) 小 盆 栽 試 驗(yàn) 篩 選 出 最 佳 的 菌 劑 組 合 為 鏈 霉 菌 芽 胞 桿 菌 經(jīng) 土 壤 盆 栽 試 驗(yàn) 驗(yàn) 證 復(fù) 合 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 防 效 為 高 通 量 測(cè) 序 結(jié) 果 表 明 施 用 復(fù) 合 菌 劑 能 夠 增 加 番 茄 根 際 細(xì) 菌 與 多 樣 性 提 高 潛 在 有 益 細(xì) 菌 類 群 等 的 相 對(duì) 豐 度 降 低 勞 爾 氏 菌 屬 的 相 對(duì) 豐 度 結(jié) 論 施 用 復(fù) 合 菌 劑 能 夠 較 好 防 控 番 茄 青 枯 病 并 改 善 番 茄 根 際 細(xì) 菌 群 落 結(jié) 構(gòu) 關(guān) 鍵 詞 鏈 霉 菌 芽 胞 桿 菌 復(fù) 合 菌 劑 青 枯 勞 爾 氏 菌 生 防 效 果 細(xì) 菌 群 落 結(jié) 構(gòu) 中 圖 分 類 號(hào) 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 文 章 編 號(hào) 第 期 王 文 麗 等 復(fù) 合 微 生 物 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 應(yīng) 番 茄 是 世 界 上 重 要 的 蔬 菜 作 物 全 球 年 產(chǎn) 量 約 億 由 青 枯 勞 爾 氏 菌 引 起 的 青 枯 病 對(duì) 番 茄 的 破 壞 性 高 常 導(dǎo) 致 番 茄 植 株 的 大 面 積 枯 萎 死 亡 造 成 巨 大 的 經(jīng) 濟(jì) 損 失 因 病 原 菌 的 遺 傳 多 樣 性 耐 藥 性 及 廣 泛 的 宿 主 范 圍 用 化 學(xué) 殺 菌 劑 防 治 的 成 功 率 不 高 當(dāng) 前 市 場(chǎng) 上 能 防 治 青 枯 病 的 化 學(xué) 藥 劑 極 少 登 記 的 僅 有 噻 森 銅 且 化 學(xué) 殺 菌 劑 的 長(zhǎng) 期 使 用 也 會(huì) 對(duì) 人 類 健 康 和 環(huán) 境 造 成 許 多 不 利 影 響 近 年 來(lái) 利 用 有 益 功 能 微 生 物 防 控 青 枯 病 已 成 為 一 種 安 全 可 靠 的 防 控 方 法 功 能 微 生 物 包 括 無(wú) 致 病 力 的 勞 爾 氏 菌 青 枯 菌 噬 菌 體 及 拮 抗 生 防 菌 株 研 究 表 明 無(wú) 致 病 力 的 勞 爾 氏 菌 通 過(guò) 與 青 枯 菌 競(jìng) 爭(zhēng) 生 態(tài) 位 而 抑 制 病 害 發(fā) 生 但 其 在 田 間 環(huán) 境 中 難 以 在 根 際 大 量 定 殖 導(dǎo) 致 與 致 病 菌 的 競(jìng) 爭(zhēng) 力 相 對(duì) 較 弱 青 枯 菌 噬 菌 體 能 夠 靶 向 控 制 病 原 菌 在 防 控 番 茄 青 枯 病 中 亦 有 應(yīng) 用 但 噬 菌 體 施 入 土 壤 后 常 面 臨 著 擴(kuò) 散 率 低 失 活 率 高 等 問(wèn) 題 且 病 原 菌 分 泌 的 胞 外 多 糖 也 會(huì) 限 制 噬 菌 體 的 吸 附 從 而 影 響 其 應(yīng) 用 效 果 拮 抗 生 防 菌 主 要 包 括 芽 胞 桿 菌 鏈 霉 菌 木 霉 等 這 些 生 防 菌 株 能 夠 通 過(guò) 產(chǎn) 生 拮 抗 物 質(zhì) 與 病 原 菌 競(jìng) 爭(zhēng) 營(yíng) 養(yǎng) 及 誘 導(dǎo) 植 株 產(chǎn) 生 系 統(tǒng) 抗 性 等 方 式 抑 制 青 枯 菌 生 長(zhǎng) 從 而 降 低 植 物 發(fā) 病 率 生 防 菌 株 因 其 在 根 際 定 殖 后 能 夠 自 行 傳 播 與 維 持 起 到 長(zhǎng) 期 抑 制 土 傳 病 害 的 作 用 能 減 少 非 再 生 資 源 的 投 入 因 此 在 農(nóng) 業(yè) 生 產(chǎn) 中 得 到 廣 泛 應(yīng) 用 鏈 霉 菌 是 土 壤 放 線 菌 中 的 重 要 類 群 約 占 土 壤 可 培 養(yǎng) 微 生 物 的 普 遍 存 在 于 根 際 土 壤 中 可 以 產(chǎn) 生 多 樣 的 次 生 代 謝 產(chǎn) 物 幫 助 植 物 抵 御 病 原 菌 的 入 侵 鏈 霉 菌 在 固 體 發(fā) 酵 基 質(zhì) 上 可 形 成 豐 富 的 分 生 孢 子 易 于 儲(chǔ) 存 和 運(yùn) 輸 芽 胞 桿 菌 營(yíng) 養(yǎng) 要 求 簡(jiǎn) 單 產(chǎn) 生 的 芽 孢 抗 逆 性 強(qiáng) 兼 具 拮 抗 及 促 生 作 用 是 生 防 菌 篩 選 的 重 要 對(duì) 象 單 一 生 防 菌 劑 的 應(yīng) 用 效 果 常 不 穩(wěn) 定 或 持 續(xù) 時(shí) 間 較 短 研 究 不 同 功 能 微 生 物 之 間 潛 在 的 協(xié) 同 效 應(yīng) 探 索 施 用 復(fù) 合 微 生 物 制 劑 控 制 植 物 病 害 是 克 服 單 一 菌 劑 缺 陷 的 途 徑 之 一 本 研 究 以 篩 選 的 拮 抗 放 線 菌 與 芽 胞 桿 菌 為 材 料 研 究 復(fù) 合 菌 劑 防 控 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 應(yīng) 為 土 傳 病 害 的 防 控 提 供 生 防 策 略 材 料 與 方 法 材 料 供 試 菌 株 拮 抗 放 線 菌 細(xì) 菌 青 枯 勞 爾 氏 菌 均 由 本 實(shí) 驗(yàn) 室 分 離 保 存 培 養(yǎng) 基 高 氏 號(hào) 培 養(yǎng) 基 可 溶 性 淀 粉 去 離 子 水 燕 麥 培 養(yǎng) 基 燕 麥 片 瓊 脂 粉 去 離 子 水 牛 肉 膏 蛋 白 胨 培 養(yǎng) 基 葡 萄 糖 蛋 白 胨 酵 母 粉 牛 肉 膏 去 離 子 水 鉻 天 青 檢 測(cè) 培 養(yǎng) 基 十 六 烷 基 三 甲 基 溴 化 銨 磷 酸 鹽 緩 沖 液 去 離 子 水 瓊 脂 色 氨 酸 培 養(yǎng) 基 甘 露 醇 酵 母 膏 色 氨 酸 去 離 子 水 吲 哚 乙 酸 比 色 液 硫 酸 去 離 子 水 種 子 發(fā) 酵 培 養(yǎng) 基 葡 萄 糖 黃 豆 粉 酵 母 粉 去 離 子 水 拮 抗 放 線 菌 及 拮 抗 細(xì) 菌 的 初 步 鑒 定 根 據(jù) 放 線 菌 快 速 鑒 定 與 系 統(tǒng) 分 類 和 鏈 霉 菌 鑒 定 手 冊(cè) 的 方 法 對(duì) 前 期 從 南 京 郊 區(qū) 番 茄 大 棚 土 樣 中 篩 選 獲 得 的 具 有 拮 抗 番 茄 青 枯 菌 能 力 的 放 線 菌 菌 株 及 細(xì) 菌 菌 株 進(jìn) 行 初 步 鑒 定 檢 測(cè) 其 形 態(tài) 及 理 化 特 征 提 取 菌 株 的 總 采 用 細(xì) 菌 基 因 的 通 用 引 物 進(jìn) 行 擴(kuò) 增 并 進(jìn) 行 基 因 序 列 分 析 所 得 序 列 與 數(shù) 據(jù) 庫(kù) 中 已 知 序 列 進(jìn) 行 比 對(duì) 和 同 源 性 分 析 用 的 法 構(gòu) 建 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹(shù) 確 定 菌 株 的 分 類 地 位 鏡 檢 觀 察 菌 株 細(xì) 胞 形 態(tài) 有 無(wú) 芽 孢 及 芽 孢 著 生 的 位 置 并 測(cè) 序 分 析 基 因 序 列 確 定 其 分 類 地 位 拮 抗 放 線 菌 菌 株 對(duì) 青 枯 菌 分 泌 胞 外 多 糖 的 影 響 將 放 線 菌 菌 株 的 斜 面 孢 子 環(huán) 接 種 在 高 氏 號(hào) 液 體 培 養(yǎng) 基 中 三 角 瓶 于 搖 床 發(fā) 酵 離 心 取 上 清 液 于 液 體 培 養(yǎng) 基 接 種 青 枯 菌 再 根 據(jù) 預(yù) 試 驗(yàn) 的 結(jié) 果 添 加 上 述 上 清 液 與 青 枯 菌 共 培 養(yǎng) 取 樣 透 射 電 鏡 下 觀 察 菌 體 形 態(tài) 并 拍 照 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 卷 芽 胞 桿 菌 的 生 物 學(xué) 特 性 芽 胞 桿 菌 產(chǎn) 鐵 載 體 及 的 定 性 檢 測(cè) 將 待 測(cè) 菌 株 接 種 于 培 養(yǎng) 基 上 于 培 養(yǎng) 如 果 菌 落 周 圍 出 現(xiàn) 有 橘 黃 色 透 明 圈 表 明 待 測(cè) 菌 株 產(chǎn) 鐵 載 體 將 待 測(cè) 菌 株 接 種 于 裝 有 色 氨 酸 液 體 培 養(yǎng) 基 的 的 離 心 管 中 振 蕩 培 養(yǎng) 取 樣 離 心 取 上 清 液 在 離 心 管 分 別 加 入 比 色 液 和 上 清 液 靜 置 后 觀 察 如 果 顯 現(xiàn) 紅 色 則 為 陽(yáng) 性 說(shuō) 明 菌 株 分 泌 并 且 顯 色 越 深 表 明 菌 株 分 泌 的 能 力 越 強(qiáng) 耐 受 性 及 活 性 測(cè) 定 將 菌 株 的 菌 體 細(xì) 胞 分 別 接 種 液 體 培 養(yǎng) 基 培 養(yǎng) 后 分 別 添 加 液 體 培 養(yǎng) 基 體 積 的 后 吸 取 于 平 板 涂 布 計(jì) 數(shù) 每 個(gè) 濃 度 設(shè) 個(gè) 重 復(fù) 測(cè) 定 菌 株 產(chǎn) 活 性 采 用 黃 嘌 呤 氧 化 酶 法 酶 試 劑 盒 購(gòu) 自 南 京 建 成 生 物 有 限 公 司 拮 抗 放 線 菌 與 芽 胞 桿 菌 菌 株 間 的 相 容 性 檢 測(cè) 利 用 平 板 交 叉 劃 線 法 檢 測(cè) 菌 株 間 的 相 容 性 分 別 用 接 種 環(huán) 蘸 取 新 鮮 的 放 線 菌 分 生 孢 子 及 芽 胞 桿 菌 菌 苔 于 平 板 上 交 叉 劃 線 培 養(yǎng) 后 觀 察 各 菌 株 在 交 叉 劃 線 接 觸 點(diǎn) 的 生 長(zhǎng) 狀 況 放 線 菌 及 芽 胞 桿 菌 的 固 體 發(fā) 酵 放 線 菌 的 固 體 發(fā) 酵 于 錐 形 瓶 裝 入 種 子 發(fā) 酵 培 養(yǎng) 基 滅 菌 后 分 別 接 種 菌 株 新 鮮 的 孢 子 懸 液 條 件 下 培 養(yǎng) 獲 得 液 體 種 子 懸 液 然 后 接 入 固 體 發(fā) 酵 基 質(zhì) 取 固 體 發(fā) 酵 基 質(zhì) 混 勻 裝 入 錐 形 瓶 滅 菌 接 種 種 子 懸 液 搖 動(dòng) 次 觀 察 基 質(zhì) 顏 色 及 氣 味 的 變 化 發(fā) 酵 后 取 樣 測(cè) 定 孢 子 數(shù) 具 體 方 法 稱 取 菌 劑 添 加 無(wú) 菌 水 振 蕩 層 紗 布 過(guò) 濾 制 取 孢 子 懸 液 將 孢 子 懸 液 進(jìn) 行 適 當(dāng) 稀 釋 顯 微 計(jì) 數(shù) 統(tǒng) 計(jì) 單 位 體 積 的 孢 子 數(shù) 換 算 出 每 克 菌 劑 中 孢 子 數(shù) 芽 胞 桿 菌 固 體 發(fā) 酵 將 芽 胞 桿 菌 分 別 接 種 到 裝 有 的 三 角 瓶 中 培 養(yǎng) 制 備 種 子 懸 液 將 固 體 發(fā) 酵 基 質(zhì) 裝 入 三 角 瓶 滅 菌 接 種 種 子 懸 液 每 翻 動(dòng) 次 培 養(yǎng) 后 取 樣 鏡 檢 菌 體 形 態(tài) 至 形 成 芽 孢 后 取 樣 進(jìn) 行 稀 釋 涂 布 計(jì) 數(shù) 復(fù) 合 菌 劑 的 篩 選 利 用 育 苗 基 質(zhì) 小 盆 栽 試 驗(yàn) 篩 選 防 控 效 果 較 佳 的 復(fù) 合 菌 劑 調(diào) 整 單 一 菌 劑 的 孢 子 或 細(xì) 胞 數(shù) 在 同 一 個(gè) 數(shù) 量 級(jí) 即 復(fù) 合 菌 劑 為 單 菌 劑 體 積 比 混 勻 每 盆 生 防 菌 劑 接 種 量 菌 劑 與 育 苗 基 質(zhì) 攪 拌 均 勻 設(shè) 置 空 白 對(duì) 照 為 不 接 生 防 菌 處 理 基 質(zhì) 對(duì) 照 為 不 接 菌 處 理 排 除 基 質(zhì) 干 擾 在 育 苗 基 質(zhì) 盤(pán) 中 播 種 雜 交 代 紅 矮 生 番 茄 種 子 每 穴 放 置 顆 露 白 的 種 子 在 上 面 覆 蓋 一 層 基 質(zhì) 用 水 澆 透 置 于 溫 室 中 培 育 待 番 茄 苗 長(zhǎng) 到 葉 心 時(shí) 移 栽 到 直 徑 的 小 缽 中 每 缽 裝 入 含 菌 劑 的 基 質(zhì) 番 茄 苗 培 養(yǎng) 周 后 每 缽 接 種 青 枯 菌 每 處 理 缽 根 據(jù) 節(jié) 結(jié) 果 選 擇 菌 株 設(shè) 置 單 一 菌 株 鏈 霉 菌 芽 胞 桿 菌 及 株 菌 兩 兩 復(fù) 合 的 組 合 共 個(gè) 處 理 室 內(nèi) 條 件 白 天 溫 度 光 照 夜 間 溫 度 黑 暗 開(kāi) 始 發(fā) 病 后 記 錄 番 茄 的 發(fā) 病 狀 況 病 情 穩(wěn) 定 后 計(jì) 算 植 株 發(fā) 病 率 復(fù) 合 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 防 控 效 果 及 土 壤 細(xì) 菌 群 落 結(jié) 構(gòu) 的 影 響 盆 栽 試 驗(yàn) 土 壤 采 自 南 京 郊 區(qū) 麒 麟 鎮(zhèn) 后 村 番 茄 種 植 園 土 壤 為 黃 棕 壤 有 機(jī) 質(zhì) 含 量 將 土 壤 晾 干 磨 碎 過(guò) 篩 后 備 用 設(shè) 置 復(fù) 合 菌 劑 組 合 處 理 以 不 加 菌 劑 為 空 白 對(duì) 照 以 單 一 菌 劑 為 對(duì) 照 菌 株 拮 抗 植 物 病 原 真 菌 不 拮 抗 青 枯 菌 菌 株 拮 抗 青 枯 菌 不 拮 抗 病 原 真 菌 共 個(gè) 處 理 每 處 理 缽 生 防 菌 劑 接 種 量 將 各 菌 劑 與 土 壤 混 勻 每 缽 裝 入 含 菌 劑 的 土 壤 在 育 苗 盤(pán) 中 培 育 番 茄 苗 長(zhǎng) 到 葉 心 時(shí) 選 取 大 小 一 致 的 番 茄 苗 移 栽 到 盆 缽 中 室 內(nèi) 條 件 同 節(jié) 周 后 接 種 的 青 枯 菌 終 濃 度 為 開(kāi) 始 發(fā) 病 后 統(tǒng) 計(jì) 番 茄 的 發(fā) 病 情 況 并 計(jì) 算 病 情 指 數(shù) 番 茄 青 枯 病 單 株 病 情 分 級(jí) 標(biāo) 準(zhǔn) 見(jiàn) 文 獻(xiàn) 發(fā) 病 穩(wěn) 定 后 取 植 株 根 際 土 測(cè) 定 并 分 析 各 處 理 對(duì) 根 際 土 壤 細(xì) 菌 群 落 結(jié) 構(gòu) 的 影 響 土 壤 高 通 量 測(cè) 序 樣 品 采 集 及 分 析 分 別 選 取 個(gè) 處 理 中 的 植 株 去 除 表 層 土 壤 后 將 番 茄 植 株 連 同 根 部 土 壤 一 同 拔 出 去 掉 植 株 主 體 土 抖 落 并 收 集 根 部 的 根 際 土 壤 樣 品 充 分 混 勻 取 充 分 混 勻 的 第 期 王 文 麗 等 復(fù) 合 微 生 物 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 應(yīng) 土 壤 樣 品 采 用 提 取 樣 品 利 用 檢 測(cè) 抽 提 濃 度 和 純 度 值 為 將 符 合 要 求 的 樣 品 送 至 上 海 凌 恩 生 物 科 技 有 限 公 司 進(jìn) 行 土 壤 細(xì) 菌 高 通 量 測(cè) 序 數(shù) 據(jù) 處 理 與 分 析 數(shù) 據(jù) 處 理 采 用 軟 件 采 用 軟 件 進(jìn) 行 差 異 顯 著 性 檢 驗(yàn) 結(jié) 果 與 分 析 拮 抗 放 線 菌 及 拮 抗 細(xì) 菌 的 初 步 鑒 定 從 土 壤 中 篩 選 獲 得 的 株 放 線 菌 及 株 細(xì) 菌 對(duì) 青 枯 菌 有 顯 著 的 拮 抗 作 用 如 圖 所 示 圖 放 線 菌 及 細(xì) 菌 對(duì) 青 枯 菌 的 拮 抗 作 用 圖 菌 株 的 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹(shù) 放 線 菌 的 初 步 鑒 定 放 線 菌 形 態(tài) 學(xué) 特 征 菌 株 在 燕 麥 培 養(yǎng) 基 上 氣 生 菌 絲 呈 粉 紅 色 菌 落 形 狀 為 不 規(guī) 則 圓 形 電 鏡 觀 察 其 孢 子 絲 呈 直 鏈 狀 孢 子 為 圓 柱 形 圖 菌 株 在 燕 麥 培 養(yǎng) 基 上 菌 落 呈 規(guī) 則 圓 形 邊 緣 整 齊 表 面 有 褶 皺 氣 生 菌 絲 前 期 呈 淡 綠 色 后 期 逐 漸 變 為 灰 綠 色 電 鏡 觀 察 孢 子 絲 為 螺 旋 狀 分 生 孢 子 為 橢 圓 形 圖 對(duì) 菌 株 的 基 因 測(cè) 序 并 選 取 同 源 性 高 的 相 關(guān) 序 列 信 息 進(jìn) 行 系 統(tǒng) 發(fā) 育 分 析 如 圖 所 示 菌 株 登 錄 號(hào) 與 玫 瑰 綠 鏈 霉 菌 序 列 相 似 性 為 菌 株 與 孟 加 拉 鏈 霉 菌 相 似 性 為 株 菌 初 步 鑒 定 為 鏈 霉 菌 圖 菌 株 及 孢 子 絲 形 態(tài) 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 卷 兼 具 拮 抗 及 促 生 作 用 的 細(xì) 菌 鑒 定 從 土 壤 中 篩 選 出 株 對(duì) 青 枯 菌 具 有 拮 抗 效 果 的 細(xì) 菌 菌 株 對(duì) 青 枯 菌 的 拮 抗 效 果 見(jiàn) 圖 株 菌 在 平 板 上 均 為 乳 白 色 菌 落 邊 緣 整 齊 呈 圓 形 簡(jiǎn) 單 染 色 鏡 檢 發(fā) 現(xiàn) 端 生 芽 孢 中 生 芽 孢 菌 體 形 態(tài) 圖 略 通 過(guò) 菌 株 的 基 因 序 列 測(cè) 序 菌 株 與 貝 萊 斯 芽 胞 桿 菌 序 列 相 似 性 為 菌 株 與 萎 縮 芽 胞 桿 菌 序 列 相 似 性 為 株 菌 初 步 鑒 定 為 芽 胞 桿 菌 放 線 菌 對(duì) 青 枯 菌 分 泌 胞 外 多 聚 物 的 影 響 通 過(guò) 透 射 電 鏡 觀 察 發(fā) 現(xiàn) 經(jīng) 菌 株 發(fā) 酵 上 清 液 處 理 后 與 對(duì) 照 相 比 青 枯 菌 的 莢 膜 厚 度 明 顯 變 薄 圖 說(shuō) 明 拮 抗 菌 株 的 代 謝 產(chǎn) 物 能 顯 著 抑 制 青 枯 菌 胞 外 多 聚 物 的 分 泌 圖 及 對(duì) 照 處 理 對(duì) 青 枯 菌 形 態(tài) 的 影 響 芽 胞 桿 菌 的 生 物 學(xué) 特 征 從 表 可 知 菌 株 分 泌 鐵 載 體 能 力 較 強(qiáng) 定 性 檢 測(cè) 均 為 陽(yáng) 性 在 耐 受 性 試 驗(yàn) 中 株 菌 在 含 條 件 下 仍 能 較 好 生 長(zhǎng) 表 明 其 對(duì) 耐 受 性 較 高 菌 株 具 有 較 高 的 活 性 菌 株 的 活 性 分 別 為 和 表 芽 胞 桿 菌 的 植 物 促 生 特 性 及 對(duì) 耐 受 性 菌 株 產(chǎn) 鐵 載 體 產(chǎn) 吲 哚 乙 酸 濃 度 注 數(shù) 量 代 表 了 菌 株 產(chǎn) 鐵 載 體 或 對(duì) 耐 受 能 力 的 強(qiáng) 弱 放 線 菌 與 芽 胞 桿 菌 菌 株 間 的 相 容 性 株 菌 間 的 相 容 性 結(jié) 果 圖 顯 示 菌 株 對(duì) 有 抑 制 作 用 菌 株 與 交 叉 處 正 常 生 長(zhǎng) 菌 株 間 沒(méi) 有 拮 抗 作 用 株 芽 胞 桿 菌 對(duì) 鏈 霉 菌 生 長(zhǎng) 有 抑 制 作 用 圖 菌 株 及 的 相 容 性 拮 抗 菌 株 的 固 體 發(fā) 酵 經(jīng) 預(yù) 試 驗(yàn) 發(fā) 現(xiàn) 玉 米 粉 黃 豆 粉 麥 麩 與 稻 殼 較 適 宜 鏈 霉 菌 生 長(zhǎng) 通 過(guò) 各 基 質(zhì) 在 不 同 水 平 上 孢 子 數(shù) 量 的 比 較 獲 得 固 體 菌 劑 最 佳 發(fā) 酵 配 方 玉 米 粉 黃 豆 粉 麥 麩 稻 殼 質(zhì) 量 比 為 料 水 比 為 將 培 養(yǎng) 的 種 子 液 接 入 固 體 發(fā) 酵 基 質(zhì) 接 種 量 為 發(fā) 酵 后 孢 子 第 期 王 文 麗 等 復(fù) 合 微 生 物 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 應(yīng) 量 菌 劑 呈 暗 棕 色 有 土 腥 氣 味 產(chǎn) 生 固 體 發(fā) 酵 配 方 玉 米 粉 黃 豆 粉 麥 麩 稻 殼 的 質(zhì) 量 比 為 料 水 比 為 將 培 養(yǎng) 的 種 子 液 接 入 固 體 發(fā) 酵 基 質(zhì) 接 種 量 為 發(fā) 酵 后 孢 子 量 菌 劑 呈 灰 色 有 強(qiáng) 烈 的 土 腥 氣 味 產(chǎn) 生 根 據(jù) 預(yù) 試 驗(yàn) 結(jié) 果 確 定 芽 胞 桿 菌 的 固 體 發(fā) 酵 條 件 菌 株 與 配 方 麥 麩 玉 米 粉 米 糠 的 質(zhì) 量 比 為 料 水 比 為 接 種 量 培 養(yǎng) 菌 劑 細(xì) 菌 數(shù) 量 達(dá) 菌 劑 細(xì) 菌 數(shù) 量 達(dá) 復(fù) 合 菌 劑 的 篩 選 利 用 育 苗 基 質(zhì) 盆 栽 試 驗(yàn) 篩 選 出 最 佳 的 菌 劑 組 合 從 圖 可 以 看 出 對(duì) 照 植 株 發(fā) 病 率 為 菌 劑 處 理 植 株 發(fā) 病 率 為 復(fù) 合 菌 劑 處 理 植 株 發(fā) 病 率 為 單 菌 劑 處 理 發(fā) 病 率 分 別 為 防 控 效 果 較 復(fù) 合 菌 劑 處 理 差 復(fù) 合 菌 劑 顯 示 出 較 強(qiáng) 的 協(xié) 同 作 用 而 復(fù) 合 菌 劑 發(fā) 病 率 與 其 對(duì) 應(yīng) 的 單 菌 劑 沒(méi) 有 顯 著 差 異 未 表 現(xiàn) 出 明 顯 的 協(xié) 同 作 用 所 以 選 擇 復(fù) 合 菌 劑 進(jìn) 行 后 續(xù) 試 驗(yàn) 圖 不 同 處 理 對(duì) 番 茄 植 株 青 枯 病 發(fā) 病 率 的 影 響 空 白 對(duì) 照 基 質(zhì) 對(duì) 照 下 同 不 同 小 寫(xiě) 字 母 表 示 在 水 平 差 異 顯 著 復(fù) 合 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 防 控 效 果 及 根 際 細(xì) 菌 群 落 結(jié) 構(gòu) 的 影 響 圖 不 同 處 理 番 茄 的 病 情 指 數(shù) 復(fù) 合 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 防 控 效 果 從 圖 可 知 發(fā) 病 初 期 空 白 對(duì) 照 番 茄 的 病 情 指 數(shù) 高 于 各 菌 劑 處 理 植 株 發(fā) 病 迅 速 隨 著 種 植 時(shí) 間 的 延 長(zhǎng) 各 處 理 番 茄 的 病 情 指 數(shù) 逐 漸 增 加 左 右 病 情 開(kāi) 始 穩(wěn) 定 復(fù) 合 菌 劑 處 理 的 病 情 指 數(shù) 為 防 控 效 果 為 單 菌 劑 處 理 情 況 相 似 在 左 右 病 情 趨 于 穩(wěn) 定 病 情 指 數(shù) 為 防 控 效 果 為 單 菌 劑 對(duì) 照 處 理 其 在 室 內(nèi) 平 板 對(duì) 峙 試 驗(yàn) 中 未 表 現(xiàn) 出 對(duì) 青 枯 菌 的 拮 抗 作 用 但 在 盆 栽 試 驗(yàn) 中 具 有 一 定 的 防 控 效 果 其 病 情 指 數(shù) 為 防 效 為 左 右 空 白 對(duì) 照 在 時(shí) 病 情 指 數(shù) 為 在 時(shí) 病 情 才 趨 于 穩(wěn) 定 病 情 指 數(shù) 為 復(fù) 合 菌 劑 對(duì) 番 茄 根 際 土 壤 細(xì) 菌 群 落 結(jié) 構(gòu) 的 影 響 從 圖 可 知 復(fù) 合 菌 劑 單 菌 劑 與 的 土 壤 細(xì) 菌 群 落 豐 度 與 多 樣 性 均 高 于 空 白 對(duì) 照 表 明 添 加 菌 劑 顯 著 提 高 土 壤 細(xì) 菌 群 落 的 豐 富 度 與 多 樣 性 其 中 復(fù) 合 菌 劑 群 落 豐 度 最 高 相 對(duì) 于 提 高 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 卷 而 復(fù) 合 菌 劑 單 菌 劑 和 處 理 的 指 數(shù) 相 對(duì) 于 分 別 提 高 和 從 圖 可 以 看 出 不 同 處 理 群 落 組 成 大 致 相 同 但 相 對(duì) 豐 度 有 較 大 差 異 豐 度 較 高 的 前 個(gè) 細(xì) 菌 門(mén) 分 別 為 變 形 菌 門(mén) 酸 桿 菌 門(mén) 擬 桿 菌 門(mén) 芽 單 胞 菌 門(mén) 放 線 菌 門(mén) 綠 彎 菌 門(mén) 疣 微 菌 門(mén) 浮 霉 菌 門(mén) 厚 壁 菌 門(mén) 黏 球 菌 門(mén) 施 用 菌 劑 后 變 形 菌 門(mén) 的 豐 度 顯 著 高 于 其 在 菌 劑 處 理 中 相 對(duì) 豐 度 最 高 為 在 復(fù) 合 菌 劑 中 為 在 菌 劑 中 為 而 在 中 僅 占 酸 桿 菌 門(mén) 各 菌 劑 處 理 均 低 于 復(fù) 合 菌 劑 與 菌 劑 相 對(duì) 豐 度 分 別 為 和 高 達(dá) 擬 桿 菌 門(mén) 芽 單 胞 菌 門(mén) 等 相 對(duì) 于 差 異 不 明 顯 結(jié) 果 表 明 施 用 菌 劑 能 夠 影 響 部 分 根 際 土 壤 細(xì) 菌 門(mén) 水 平 的 相 對(duì) 豐 度 不 同 菌 劑 處 理 對(duì) 根 際 土 壤 細(xì) 菌 屬 水 平 的 影 響 優(yōu) 勢(shì) 菌 屬 如 圖 所 示 復(fù) 合 菌 劑 處 理 中 相 對(duì) 豐 度 為 為 為 菌 劑 處 理 中 相 對(duì) 豐 度 最 高 為 為 菌 劑 處 理 的 相 對(duì) 豐 度 為 為 中 與 相 對(duì) 豐 度 分 別 為 和 均 低 于 種 菌 劑 處 理 而 相 對(duì) 豐 度 為 均 高 于 種 菌 劑 處 理 表 明 菌 劑 處 理 能 顯 著 降 低 病 原 菌 屬 的 相 對(duì) 豐 度 提 高 有 益 菌 屬 的 相 對(duì) 豐 度 圖 不 同 處 理 對(duì) 根 際 土 壤 細(xì) 菌 多 樣 性 門(mén) 水 平 的 群 落 組 成 和 優(yōu) 勢(shì) 菌 屬 相 對(duì) 豐 度 的 影 響 第 期 王 文 麗 等 復(fù) 合 微 生 物 菌 劑 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 應(yīng) 討 論 生 防 菌 劑 是 防 控 番 茄 青 枯 病 的 重 要 措 施 土 壤 放 線 菌 在 生 物 防 治 中 表 現(xiàn) 出 巨 大 的 潛 力 本 研 究 從 番 茄 種 植 區(qū) 土 壤 中 篩 選 出 株 拮 抗 放 線 菌 初 步 鑒 定 為 鏈 霉 菌 鏈 霉 菌 不 僅 抑 制 青 枯 菌 的 生 長(zhǎng) 經(jīng) 透 射 電 鏡 觀 察 細(xì) 胞 形 態(tài) 發(fā) 現(xiàn) 其 發(fā) 酵 上 清 液 還 影 響 青 枯 菌 胞 外 多 糖 的 分 泌 量 等 曾 證 明 玫 瑰 綠 鏈 霉 菌 能 夠 促 進(jìn) 小 麥 生 長(zhǎng) 但 利 用 玫 瑰 綠 鏈 霉 菌 防 控 青 枯 病 鮮 有 報(bào) 道 等 研 究 發(fā) 現(xiàn) 孟 加 拉 鏈 霉 菌 能 夠 代 謝 產(chǎn) 生 鄰 苯 二 甲 酸 乙 基 己 基 酯 可 以 拮 抗 細(xì) 菌 和 真 菌 鏈 霉 菌 產(chǎn) 生 活 性 物 質(zhì) 的 作 用 有 待 進(jìn) 一 步 檢 測(cè) 連 作 障 礙 造 成 的 土 壤 鹽 漬 化 會(huì) 使 植 物 遭 受 逆 境 傷 害 活 性 氧 含 量 增 加 發(fā) 生 膜 脂 過(guò) 氧 化 作 用 細(xì) 胞 生 物 膜 受 損 超 氧 化 物 歧 化 酶 是 生 物 體 防 御 氧 化 損 傷 的 一 種 金 屬 酶 對(duì) 自 由 基 具 有 強(qiáng) 烈 清 除 作 用 功 能 微 生 物 細(xì) 胞 在 根 際 定 殖 菌 體 如 產(chǎn) 生 能 催 化 發(fā) 生 歧 化 反 應(yīng) 減 少 對(duì) 植 物 的 傷 害 具 有 促 進(jìn) 植 物 生 長(zhǎng) 防 治 植 物 病 害 的 作 用 本 試 驗(yàn) 篩 選 獲 得 株 芽 胞 桿 菌 產(chǎn) 活 性 高 且 拮 抗 青 枯 菌 同 時(shí) 能 夠 分 泌 鐵 載 體 與 已 有 研 究 發(fā) 現(xiàn) 萎 縮 芽 胞 桿 菌 能 夠 產(chǎn) 生 多 種 具 有 生 物 活 性 的 代 謝 產(chǎn) 物 如 細(xì) 菌 素 脂 肽 幾 丁 質(zhì) 酶 及 鐵 載 體 生 長(zhǎng) 素 赤 霉 素 等 促 進(jìn) 植 株 的 生 長(zhǎng) 并 具 有 較 好 生 防 潛 力 等 研 究 發(fā) 現(xiàn) 貝 萊 斯 芽 胞 桿 菌 能 產(chǎn) 生 高 效 的 抗 氧 化 肽 具 有 蛋 白 酶 葡 聚 糖 酶 和 纖 維 素 酶 等 多 種 水 解 酶 活 性 青 枯 病 暴 發(fā) 的 主 要 原 因 是 植 物 根 際 有 益 菌 群 數(shù) 量 的 減 少 細(xì) 菌 多 樣 性 的 降 低 和 植 物 病 原 菌 的 積 累 在 控 制 植 物 病 害 方 面 種 或 種 以 上 有 益 微 生 物 的 聯(lián) 合 應(yīng) 用 比 單 一 微 生 物 的 應(yīng) 用 效 果 好 等 報(bào) 道 一 些 微 生 物 組 合 提 供 了 對(duì) 多 種 作 物 的 廣 譜 保 護(hù) 并 改 善 其 生 長(zhǎng) 提 高 其 產(chǎn) 量 和 品 質(zhì) 本 研 究 篩 選 出 芽 胞 桿 菌 與 鏈 霉 菌 組 合 種 菌 之 間 無(wú) 拮 抗 作 用 相 對(duì) 于 單 一 菌 劑 處 理 復(fù) 合 菌 劑 處 理 表 現(xiàn) 出 明 顯 的 協(xié) 同 效 應(yīng) 為 植 物 病 害 的 綜 合 防 治 提 供 了 新 的 選 擇 植 物 健 康 與 土 壤 微 生 物 群 落 多 樣 性 呈 正 相 關(guān) 在 番 茄 根 際 土 壤 中 存 在 一 個(gè) 穩(wěn) 定 而 復(fù) 雜 的 菌 群 網(wǎng) 絡(luò) 維 持 番 茄 植 株 的 健 康 有 助 于 防 止 青 枯 菌 感 染 青 枯 菌 的 入 侵 會(huì) 破 壞 根 際 細(xì) 菌 群 落 結(jié) 構(gòu) 導(dǎo) 致 非 致 病 性 細(xì) 菌 的 多 樣 性 和 豐 度 明 顯 下 降 而 復(fù) 合 菌 劑 的 應(yīng) 用 能 夠 提 高 土 壤 微 生 物 群 落 多 樣 性 增 加 數(shù) 量 和 指 數(shù) 本 研 究 利 用 高 通 量 測(cè) 序 檢 測(cè) 菌 劑 對(duì) 土 壤 細(xì) 菌 群 落 的 影 響 結(jié) 果 發(fā) 現(xiàn) 施 用 單 一 菌 劑 及 復(fù) 合 菌 劑 后 土 壤 中 變 形 菌 門(mén) 與 放 線 菌 門(mén) 等 的 相 對(duì) 豐 度 增 加 等 研 究 發(fā) 現(xiàn) 健 康 土 壤 網(wǎng) 絡(luò) 中 放 線 菌 門(mén) 芽 單 胞 菌 門(mén) 變 形 菌 門(mén) 的 比 例 均 高 于 發(fā) 病 土 壤 在 屬 水 平 上 相 對(duì) 于 空 白 對(duì) 照 單 菌 劑 與 復(fù) 合 菌 劑 處 理 的 鞘 氨 醇 單 胞 菌 屬 與 假 單 胞 菌 屬 相 對(duì) 豐 度 均 在 較 高 水 平 鞘 氨 醇 單 胞 菌 屬 具 有 抑 制 土 傳 疾 病 和 產(chǎn) 生 植 物 激 素 類 化 合 物 的 作 用 而 勞 爾 氏 菌 屬 相 對(duì) 豐 度 均 低 于 對(duì) 照 表 明 菌 劑 處 理 能 顯 著 降 低 病 原 菌 屬 的 豐 度 等 研 究 發(fā) 現(xiàn) 在 微 聚 集 體 中 勞 爾 氏 菌 屬 的 相 對(duì) 豐 度 與 青 枯 病 發(fā) 病 率 呈 顯 著 正 相 關(guān) 盆 栽 試 驗(yàn) 中 選 擇 單 一 菌 株 作 為 對(duì) 照 是 初 篩 時(shí) 由 于 菌 株 處 理 效 果 優(yōu) 于 菌 株 其 與 復(fù) 合 菌 株 比 較 如 果 對(duì) 照 再 設(shè) 置 處 理 就 更 有 說(shuō) 服 力 對(duì) 照 菌 株 鏈 霉 菌 其 主 要 抑 制 植 物 病 原 真 菌 在 平 板 對(duì) 峙 試 驗(yàn) 中 對(duì) 青 枯 菌 無(wú) 明 顯 拮 抗 作 用 但 在 盆 栽 試 驗(yàn) 中 作 為 對(duì) 照 處 理 卻 顯 示 出 對(duì) 青 枯 病 具 有 一 定 的 防 控 效 果 從 細(xì) 菌 的 群 落 結(jié) 構(gòu) 分 析 上 看 其 可 能 原 因 是 改 善 了 根 際 的 微 生 物 區(qū) 系 從 而 間 接 減 弱 了 青 枯 病 的 發(fā) 生 也 從 側(cè) 面 驗(yàn) 證 了 改 善 根 際 微 生 物 區(qū) 系 可 減 低 病 害 發(fā) 生 的 程 度 參 考 文 獻(xiàn) 高 苗 楊 金 廣 劉 旭 等 一 株 裂 解 性 青 枯 雷 爾 氏 菌 噬 菌 體 的 分 離 及 生 物 學(xué) 特 性 分 析 中 國(guó) 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 徐 沛 東 魏 方 林 張 蕊 蕊 等 種 殺 菌 劑 防 治 番 茄 青 枯 病 的 應(yīng) 用 技 術(shù) 世 界 農(nóng) 藥 陳 勝 華 番 茄 青 枯 病 生 物 防 治 策 略 研 究 農(nóng) 業(yè) 與 技 術(shù) 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 卷 陳 慶 河 翁 啟 勇 胡 方 平 無(wú) 致 病 力 青 枯 菌 株 對(duì) 番 茄 青 枯 病 的 防 治 效 果 中 國(guó) 生 物 防 治 陳 志 龍 陳 杰 許 建 平 等 番 茄 青 枯 病 生 物 防 治 研 究 進(jìn) 展 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 沈 婷 張 園 園 王 辰 等 白 刺 鏈 霉 菌 菌 株 固 體 發(fā) 酵 及 防 控 草 莓 根 腐 病 的 研 究 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 阮 繼 生 黃 英 放 線 菌 快 速 鑒 定 與 系 統(tǒng) 分 類 北 京 科 學(xué) 出 版 社 中 國(guó) 科 學(xué) 院 微 生 物 研 究 所 放 線 菌 分 類 組 鏈 霉 菌 鑒 定 手 冊(cè) 北 京 科 學(xué) 出 版 社 黃 明 媛 番 茄 青 枯 病 拮 抗 菌 篩 選 鑒 定 及 發(fā) 酵 條 件 研 究 哈 爾 濱 東 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 劉 郵 洲 陳 夕 軍 梁 雪 杰 等 一 株 萎 縮 芽 胞 桿 菌 的 鑒 定 及 其 脂 肽 類 化 合 物 分 析 中 國(guó) 生 物 防 治 學(xué) 報(bào) 責(zé) 任 編 輯 劉 怡 辰