d i b l e f u n g i 育 種 馴 化 2 0 2 2 年 第 4 4 卷 第 6 期 d i b l e f u n g i 1 2 試 驗(yàn) 方 法 1 2 1 供 試 灰 樹 花 菌 株 拮 抗 試 驗(yàn) 將 供 試 菌 株 兩 兩 組 合 接 種 于 P D A 平 板 培 養(yǎng) 基 2 5 黑 暗 培 養(yǎng) 觀 察 菌 絲 接 觸 區(qū) 有 無 拮 抗 反 應(yīng) 3 次 重 復(fù) 如 果 檢 測 菌 株 間 無 帶 線 出 現(xiàn) 表 示 2 個 菌 株 間 親 緣 關(guān) 系 較 近 需 要 采 用 其 他 方 法 進(jìn) 一 步 鑒 定 如 果 檢 測 菌 株 間 出 現(xiàn) 拮 抗 拮 抗 線 或 隆 起 或 溝 狀 表 示 兩 菌 株 間 親 緣 關(guān) 系 較 遠(yuǎn) 1 2 2 供試灰樹花菌株在 P D A 平板上菌絲生長情況 將 對 照 菌 株 和 野 生 菌 株 轉(zhuǎn) 接 到 P D A 培 養(yǎng) 基 上 活 化 于 2 5 恒 溫 暗 培 養(yǎng) 1 5 d 用 打 孔 器 取 直 徑 為 摘 要 對 在 河 北 省 唐 山 市 承 德 市 等 采 集 到 的 6 株 野 生 灰 樹 花 菌 株 與 當(dāng) 地 主 栽 菌 株 及 慶 灰 1 5 1 進(jìn) 行 拮 抗 試 驗(yàn) 并 進(jìn) 行 菌 絲 培 養(yǎng) 及 出 菇 試 驗(yàn) 結(jié) 果 表 明 1 0 1 菌 株 產(chǎn) 量 高 朵 形 大 深 褐 色 適 合 當(dāng) 地 覆 土 栽 培 9 6 菌 株 產(chǎn) 量 中 等 蓮 花 形 黑 褐 色 適 合 鮮 銷 具 有 良 好 的 馴 化 潛 能 關(guān) 鍵 詞 灰 樹 花 栗 蘑 菌 株 篩 選 中 圖 分 類 號 S 6 4 6 1 文 章 編 號 1 0 0 0 8 3 5 7 2 0 2 2 0 6 0 0 3 0 0 3 灰 樹 花 G r i f o l a f r o n d o s a 又 名 舞 茸 屬 擔(dān) 子 菌 亞 門 B a s i d i o m y c o t i n a 層 菌 綱 H y m e n o m y c e t e s 多 孔 菌 目 P o l y p o r a l e s 皺 孔 菌 科 M e r u l i a c e a e 樹 花 菌 屬 G r i f o l a 是 一 種 珍 稀 食 藥 用 菌 1 2 灰 樹 花 營 養(yǎng) 豐 富 含 1 8 種 人 體 必 需 的 氨 基 酸 和 多 種 有 益 礦 物 質(zhì) 有 醫(yī) 療 保 健 作 用 是 一 種 優(yōu) 良 的 食 藥 用 菌 3 4 當(dāng) 前 灰 樹 花 的 市 場 需 求 量 逐 年 上 升 但 唐 山 市 遷 西 縣 灰 樹 花 栽 培 品 種 較 單 一 加 上 菌 種 退 化 等 因 素 的 影 響 導(dǎo) 致 灰 樹 花 產(chǎn) 量 下 降 為 此 筆 者 開 展 野 生 灰 樹 花 菌 株 馴 化 研 究 旨 在 篩 選 適 合 遷 西 縣 氣 候 的 優(yōu) 質(zhì) 高 產(chǎn) 灰 樹 花 菌 株 并 為 灰 樹 花 育 種 提 供 種 質(zhì) 資 源 1 材 料 與 方 法 1 1 試 驗(yàn) 材 料 1 供 試 菌 株 試 驗(yàn) 對 照 菌 株 為 遷 西 3 號 慶 灰 1 5 1 供 試 野 生 菌 株 6 株 均 為 唐 山 市 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 食 用 菌 研 究 所 實(shí) 驗(yàn) 室 野 外 采 集 分 離 獲 得 詳 見 表 1 表 1 供 試 野 生 灰 樹 花 菌 株 菌 株 號 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 菌 株 來 源 河 北 省 唐 山 市 遷 西 縣 野 生 菌 株 河 北 省 承 德 市 寬 城 縣 野 生 菌 株 河 北 省 承 德 市 寬 城 縣 野 生 菌 株 河 北 省 唐 山 市 遵 化 市 野 生 菌 株 河 北 省 唐 山 市 遵 化 市 野 生 菌 株 河 北 省 唐 山 市 遵 化 市 野 生 菌 株 2 供 試 培 養(yǎng) 基 P D A 加 富 固 體 培 養(yǎng) 基 為 去 皮 馬 鈴 薯 2 0 0 g 葡 萄 糖 2 0 g 硫 酸 鎂 1 g 磷 酸 二 氫 鉀 1 g 瓊 脂 2 0 g p H 自 然 栽 培 料 配 方 為 栗 木 屑 4 0 棉 籽 殼 4 2 麩 皮 1 6 紅 糖 1 石 膏 1 料 水 比 為 1 0 8 p H 自 然 灰 樹 花 野 生 優(yōu) 勢 菌 株 篩 選 初 報 彭 學(xué) 文 陶 月 詹 云 達(dá) 解 文 強(qiáng) 吳 志 會 唐 山 市 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 研 究 院 河 北 唐 山 0 6 3 0 0 1 收 稿 日 期 2 0 2 2 0 8 2 5 一 稿 2 0 2 2 0 9 2 6 修 改 稿 基 金 項(xiàng) 目 河 北 省 重 點(diǎn) 研 發(fā) 項(xiàng) 目 課 題 編 號 2 1 3 2 7 5 0 8 D 作 者 簡 介 彭 學(xué) 文 碩 士 副 研 究 員 主 要 從 事 食 用 菌 及 相 關(guān) 工 作 聯(lián) 系 電 話 1 5 0 3 3 9 0 3 9 6 3 E m a i l p x w w z h s i n a c o m 通 信 作 者 吳 志 會 碩 士 副 研 究 員 主 要 從 事 食 用 菌 及 相 關(guān) 工 作 E m a i l w z h 4 0 6 s i n a c n 圖 1 部 分 野 生 灰 樹 花 子 實(shí) 體 生 態(tài) 照 2 0 2 2 4 4 6 3 0 3 2 彭 學(xué) 文 等 灰 樹 花 野 生 優(yōu) 勢 菌 株 篩 選 初 報 3 0d i b l e f u n g i 育 種 馴 化 2 0 2 2 年 第 4 4 卷 第 6 期 5 m m 菌 餅 接 種 到 新 P D A 培 養(yǎng) 基 中 央 置 2 5 恒 溫 暗 培 養(yǎng) 培 養(yǎng) 1 1 d 后 觀 察 菌 落 生 長 情 況 并 采 用 十 字 交 叉 法 測 量 菌 落 直 徑 每 處 理 設(shè) 4 個 重 復(fù) 試 驗(yàn) 計 算 菌 絲 平 均 生 長 速 度 觀 察 記 錄 菌 絲 長 勢 菌 絲 生 長 速 度 菌 落 直 徑 菌 餅 直 徑 2 1 1 1 2 3 供 試 灰 樹 花 菌 株 出 菇 比 較 試 驗(yàn) 栽 培 袋 1 7 c m 3 6 c m 0 0 0 5 c m 裝 濕 料 1 k g 折 干 0 5 5 k g 1 0 0 滅 菌 1 2 h 后 冷 卻 中 心 軸 接 種 顆 粒 菌 種 發(fā) 菌 期 管 理 同 常 規(guī) 出 菇 采 用 遷 西 縣 當(dāng) 地 常 規(guī) 模 式 地 栽 覆 土 出 菇 每 個 菌 株 栽 培 3 畦 每 畦 3 6 袋 菌 棒 試 驗(yàn) 記 錄 菌 絲 生 長 情 況 包 括 菌 絲 滿 袋 時 間 接 種 到 子 實(shí) 體 形 成 時 間 測 定 子 實(shí) 體 性 狀 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 供 試 灰 樹 花 菌 株 拮 抗 試 驗(yàn) 結(jié) 果 表 2 供 試 灰 樹 花 菌 株 拮 抗 試 驗(yàn) 結(jié) 果 菌 株 號 遷 西 3 號 慶 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 遷 西 3 號 慶 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 注 表 示 有 拮 抗 反 應(yīng) 由 表 2 可 知 8 個 灰 樹 花 菌 株 間 兩 兩 組 合 均 發(fā) 生 拮 抗 反 應(yīng) 說 明 供 試 8 個 灰 樹 花 菌 株 親 緣 關(guān) 系 較 遠(yuǎn) 2 2 供 試 灰 樹 花 菌 株 菌 絲 在 P D A 平 板 上 生 長 情 況 由 表 3 可 知 試 驗(yàn) 灰 樹 花 菌 株 菌 絲 顏 色 均 潔 白 從 菌 絲 長 勢 菌 落 形 態(tài) 來 看 都 均 勻 慶 灰 1 5 1 菌 株 菌 絲 較 稀 疏 9 5 號 9 6 號 9 8 號 1 0 0 號 1 0 1 號 菌 株 菌 絲 生 長 旺 盛 從 菌 絲 平 均 生 長 速 度 來 看 9 6 號 菌 株 生 長 速 度 較 慢 且 與 8 8 號 9 5 號 遷 西 3 號 慶 灰 1 5 1 菌 株 差 異 顯 著 生 長 速 度 最 快 的 是 慶 灰 1 5 1 菌 株 4 7 4 m m d 其 次 是 遷 西 3 號 菌 株 8 8 號 菌 株 表 3 供 試 灰 樹 花 菌 株 P D A 平 板 培 養(yǎng) 菌 絲 生 長 情 況 菌 株 號 遷 西 3 號 慶 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 菌 絲 長 勢 菌 落 形 態(tài) 潔 白 粗 壯 均 勻 潔 白 較 稀 疏 均 勻 潔 白 均 勻 潔 白 旺 盛 濃 密 均 勻 潔 白 旺 盛 均 勻 潔 白 旺 盛 均 勻 潔 白 旺 盛 均 勻 潔 白 旺 盛 均 勻 菌 絲 生 長 速 度 m m d 1 4 4 4 0 3 5 b c 4 7 4 0 0 6 c 4 4 3 0 2 1 b c 4 5 2 0 3 1 b c 3 7 4 0 4 4 a 4 2 0 0 2 7 b c 3 9 3 0 4 1 a b 4 0 2 0 3 7 a b 2 3 供 試 灰 樹 花 菌 株 出 菇 試 驗(yàn) 結(jié) 果 由 表 4 可 知 接 種 到 菌 絲 滿 袋 時 間 最 短 的 是 遷 西 3 號 菌 株 2 2 d 其 次 是 8 8 號 菌 株 9 8 號 菌 株 滿 袋 用 時 最 長 的 是 慶 灰 1 5 1 菌 株 9 5 號 菌 株 接 種 到 子 實(shí) 體 形 成 時 間 最 短 的 是 遷 西 3 號 9 6 號 菌 株 9 8 號 菌 株 均 為 4 8 d 1 0 0 號 菌 株 時 間 最 長 為 5 4 d 子 實(shí) 體 形 態(tài) 及 顏 色 所 有 菌 株 都 是 蓮 花 狀 但 遷 西 3 號 菌 株 慶 灰 1 5 1 菌 株 8 8 號 菌 株 9 5 號 菌 株 9 6 號 菌 株 1 0 0 號 菌 株 色 深 葉 片 大 小 9 6 號 菌 株 1 0 0 號 菌 株 葉 片 較 大 但 9 6 號 菌 株 子 實(shí) 體 屬 于 中 等 圖 2 部 分 灰 樹 花 菌 株 拮 抗 情 況 表 4 供 試 灰 樹 花 菌 株 子 實(shí) 體 特 性 菌 株 號 遷 西 3 號 慶 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 接 種 到 菌 絲 滿 袋 用 時 d 2 2 0 2 6 0 2 3 0 2 6 0 2 4 0 2 3 0 2 5 0 2 3 5 接 種 到 形 成 子 實(shí) 體 用 時 d 4 8 0 5 3 0 4 5 5 5 2 0 4 8 0 4 8 0 5 4 0 4 1 0 子 實(shí) 體 形 狀 顏 色 蓮 花 狀 灰 黑 色 蓮 花 狀 黑 褐 色 蓮 花 狀 灰 黑 色 蓮 花 狀 黑 色 蓮 花 狀 灰 黑 色 蓮 花 狀 灰 褐 色 蓮 花 狀 灰 黑 色 蓮 花 狀 深 褐 色 葉 片 長 寬 c m 3 3 5 5 2 6 3 9 2 8 4 3 1 7 2 9 2 6 5 3 1 8 3 2 2 3 5 4 1 4 3 1 3 8 9 4 4 2 7 4 2 4 5 3 1 2 3 4 3 2 7 5 2 6 5 4 2 4 5 8 2 8 3 9 子 實(shí) 體 長 寬 高 c m 3 6 2 1 8 3 1 4 5 1 5 2 1 2 3 1 3 5 1 7 9 1 1 4 1 1 2 1 8 2 1 2 3 1 4 5 2 6 2 2 0 3 1 6 5 1 8 2 1 2 3 1 5 5 3 5 2 1 8 3 1 6 1 4 0 3 1 9 7 1 2 3 9 6 9 6 9 7 9 7 1 0 2 1 0 2 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 9 8 9 8 9 5 9 5 9 7 9 7 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 9 5 9 5 9 6 9 6 1 0 2 1 0 2 9 8 9 8 9 8 9 8 9 7 9 7 9 5 9 5 1 0 1 1 0 1 1 0 0 1 0 0 1 0 2 1 0 2 9 6 9 6 9 6 9 6 9 7 9 7 1 0 2 1 0 2 1 0 0 1 0 0 9 5 9 5 1 0 1 1 0 1 9 8 9 8 9 8 9 8 1 0 2 1 0 2 9 7 9 7 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 9 5 9 5 9 6 9 6 1 0 0 1 0 0 9 8 9 8 9 7 9 7 9 5 9 5 1 0 1 1 0 1 9 6 9 6 1 0 2 1 0 2 3 1d i b l e f u n g i 育 種 馴 化 2 0 2 2 年 第 4 4 卷 第 6 期 大 小 子 實(shí) 體 最 大 的 為 1 0 1 號 菌 株 其 次 是 遷 西 3 號 菌 株 由 表 5 可 知 產(chǎn) 量 最 高 是 遷 西 3 號 菌 株 5 1 4 3 g 袋 其 次 是 1 0 1 號 菌 株 5 0 8 0 g 袋 但 兩 者 沒 有 顯 著 差 異 3 小 結(jié) 拮 抗 試 驗(yàn) 表 明 所 采 集 野 生 灰 樹 花 菌 株 與 對 照 遷 西 3 號 及 慶 灰 1 5 1 均 有 拮 抗 且 野 生 灰 樹 花 菌 株 之 間 也 有 拮 抗 下 一 步 將 通 過 I S S R 和 S R A P 進(jìn) 一 步 鑒 定 他 們 之 間 的 親 緣 關(guān) 系 供 試 灰 樹 花 菌 株 出 菇 試 驗(yàn) 結(jié) 果 1 0 1 號 菌 株 產(chǎn) 量 較 高 但 是 顏 色 淺 9 6 號 菌 株 生 物 轉(zhuǎn) 化 率 為 9 0 9 6 較 遷 西 3 號 稍 低 葉 片 較 大 色 深 適 合 鮮 銷 具 有 一 定 的 市 場 前 景 參 考 文 獻(xiàn) 1 圖 力 古 爾 蕈 菌 分 類 學(xué) M 北 京 北 京 科 學(xué) 出 版 社 2 0 1 8 2 3 9 2 4 0 2 卯 曉 嵐 中 國 蕈 菌 M 北 京 科 學(xué) 出 版 社 2 0 0 9 3 劉 芳 秀 張 丹 灰 樹 花 菌 種 選 育 初 報 J 中 國 食 用 菌 1 9 8 6 5 3 5 4 趙 銘 灰 樹 花 的 抗 艾 滋 病 功 效 日 本 藥 學(xué) 會 第 1 1 3 次 年 會 報 告 J 中 國 食 用 菌 1 9 9 3 5 4 9 表 5 供 試 灰 樹 花 菌 株 產(chǎn) 量 比 較 菌 株 號 遷 西 3 號 慶 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 小 區(qū) 平 均 袋 產(chǎn) 量 g I 4 6 9 5 4 8 0 2 5 0 2 1 3 5 4 6 5 3 3 4 4 0 0 3 4 4 4 1 4 8 0 6 I I 5 5 3 2 4 9 2 3 4 7 6 8 4 3 2 1 4 9 6 8 4 3 2 6 4 0 6 2 5 3 0 9 I I I 5 2 0 1 4 7 5 2 5 3 0 2 3 8 9 2 4 7 0 6 4 5 0 1 4 7 0 3 5 1 2 4 平 均 袋 產(chǎn) 量 g 5 1 4 3 c 4 8 2 6 b c 5 0 3 0 c 3 9 2 0 a 5 0 0 3 c 4 2 7 7 a b 4 4 0 2 a b 5 0 8 0 c 生 物 轉(zhuǎn) 化 率 9 3 5 0 8 7 7 4 9 1 4 6 7 1 2 7 9 0 9 6 7 7 7 6 8 0 0 4 9 2 3 6 圖 1 部 分 供 試 灰 樹 花 菌 株 子 實(shí) 體 9 8 9 8 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 合 白 耙 齒 菌 菌 絲 生 長 及 干 物 質(zhì) 積 累 表 4 多 種 培 養(yǎng) 基 培 養(yǎng) 白 耙 齒 菌 菌 絲 結(jié) 果 培 養(yǎng) 基 Y P A D 優(yōu) 化 培 養(yǎng) 基 C P D A P D A P G Y T Y S E M 菌 絲 平 均 長 速 m m d 1 8 1 3 a 8 3 5 a 7 4 8 b 7 2 9 b 6 5 2 c 5 1 8 d 6 1 3 c 菌 絲 干 重 m g 1 7 8 6 a 1 2 9 3 b 1 2 5 6 b 1 2 0 5 b 8 9 1 c 3 0 3 d 1 5 8 e 菌 絲 長 勢 濃 密 濃 密 濃 密 較 濃 密 較 濃 密 稀 疏 稀 疏 菌 落 邊 緣 規(guī) 則 規(guī) 則 規(guī) 則 規(guī) 則 比 較 規(guī) 則 不 規(guī) 則 不 規(guī) 則 注 小 寫 字 母 表 示 P 0 0 5 水 平 上 的 差 異 顯 著 性 3 小 結(jié) 將 I T S 序 列 結(jié) 果 在 N C B I 中 進(jìn) 行 B L A S T 比 對 發(fā) 現(xiàn) 目 標(biāo) 序 列 與 白 耙 齒 菌 親 緣 關(guān) 系 最 近 并 與 登 錄 號 為 M K 3 4 3 5 8 8 1 M H 8 9 0 6 8 9 1 M H 3 0 1 1 1 4 1 J X 3 1 1 9 2 4 1 M K 8 8 3 6 5 2 1 等 1 0 個 白 耙 齒 菌 菌 株 相 似 性 達(dá) 9 9 8 5 進(jìn) 一 步 驗(yàn) 證 了 其 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 結(jié) 果 在 試 驗(yàn) 范 圍 內(nèi) 促 進(jìn) 白 耙 齒 菌 菌 絲 快 速 生 長 萌 發(fā) 并 且 使 菌 絲 品 質(zhì) 優(yōu) 良 致 密 的 培 養(yǎng) 基 為 優(yōu) 化 培 養(yǎng) 基 葡 萄 糖 2 0 g L 酵 母 膏 1 0 g L 磷 酸 二 氫 鉀 0 5 g L 硫 酸 鎂 0 5 g L 瓊 脂 2 0 g L 能 夠 獲 得 較 大 菌 絲 干 重 并 且 適 宜 白 耙 齒 菌 生 長 的 培 養(yǎng) 基 為 Y P A D 培 養(yǎng) 基 參 考 文 獻(xiàn) 1 圖 力 古 爾 戴 玉 成 長 白 山 主 要 食 藥 用 木 腐 真 菌 多 樣 性 及 其 保 育 J 菌 物 研 究 2 0 0 4 2 2 6 2 戴 玉 成 圖 力 古 爾 中 國 東 北 野 生 食 藥 用 真 菌 圖 志 M 北 京 科 學(xué) 出 版 社 2 0 0 7 1 0 0 3 楊 真 威 姜 瑞 芝 高 其 品 等 耙 齒 菌 糖 蛋 白 的 提 取 分 離 理 化 性 質(zhì) 及 抗 炎 活 性 J 天 然 產(chǎn) 物 研 究 與 開 發(fā) 2 0 0 5 1 7 3 2 8 0 2 8 2 4 李 蒙 杜 林 娜 張 野 等 響 應(yīng) 面 法 結(jié) 合 滿 意 度 函 數(shù) 優(yōu) 化 白 囊 耙 齒 菌 發(fā) 酵 培 養(yǎng) 基 J 中 國 醫(yī) 藥 工 業(yè) 雜 志 2 0 1 1 4 2 1 1 7 2 0 上 接 第 2 9 頁 3 2