16 中 國 果 樹 2022 9 16 19 本 文 于 2022 07 05 收 到 2022 07 07 收 到 修 改 稿 國 家 桃 產(chǎn) 業(yè) 技 術(shù) 體 系 櫻 桃 熊 岳 綜 合 試 驗 站 項 目 CARS 30 ZY 25 戴 啟 東 電 話 0417 7033463 E mail daiqd 張 琪 靜 為 通 信 作 者 電 話 0417 7039692 E mail qijingzhang DOI 1 0 16626 ki issn1000 8047 2022 09 004 遼寧 省甜櫻 桃葉枯 病病原 鑒定 戴啟東 周朝輝 艾佳音 張琪靜 遼寧省果樹科學(xué)研究所 營口 115009 摘 要 為了明確遼寧省甜櫻桃葉枯病致病菌的種類 為甜櫻桃葉枯病的合理化防治提供理論依據(jù) 在遼南 地區(qū)采集甜櫻桃葉枯病樣本 采用室內(nèi)致病菌組織分離法分離純化菌株 室內(nèi)回接寄主品種確定致病菌株 經(jīng)柯 赫氏法 則驗證 通過常規(guī)形 態(tài)學(xué)觀察 并結(jié)合真 菌 ITS rDNA 技術(shù)對 致病菌進行 分子鑒定 明確致病 菌種類 從 甜 櫻桃 葉 枯病樣 本中 分 離得 到 7 株 分離 物 經(jīng) 致 病性 驗 證 菌 株 LNCY7 對 甜櫻 桃 品種 砂 蜜豆 佳紅 美早 均 具 有 致 病 性 且 與 田 間 發(fā) 病癥 狀基 本 一 致 通 過 擴 增 測 序 和 序列比 對 分 析 菌株 LNCY7 特 異 性 序列與 GenBank 數(shù) 據(jù) 庫中 登錄 號為 MH707085 1 的 層 出鐮 刀菌 Fusarium proliferatum 的 同源 性 為 99 且 在系 統(tǒng)發(fā) 育樹 上 聚 合 在一個分支 根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定及分子鑒定結(jié)果 將引起遼寧省甜櫻桃葉枯病的致病菌鑒定為層出鐮刀菌 關(guān)鍵詞 甜櫻桃 葉枯病 分子鑒定 層出鐮刀菌 中圖分類號 S 436 629 文獻標志碼 A 文章編號 1 000 8047 2022 09 0016 04 Pathogen identification of sweet cherry leaf blight in Liaoning Province DAI Qidong ZHOU Chaohui AI Jiayin ZHANG Qijing Liaoning Institute of Pomology Yingkou 115009 Abstract In order to clarify the types of pathogens of sweet cherry leaf blight in Liaoning and provide theoretical basis for the rational control of sweet cherry leaf blight The samples of sweet cherry leaf blight were collected in the southern of Liaoning Province The strains were isolated and cultured in PDA medium by indoor pathogen tissue isolation method at room temperature The isolated products were verified by Koch s rule The pathogenic strains were identified by routine morphological observation and ITS rDNA technology and the phylogenetic tree was constructed Seven strains were isolated from sweet cherry leaf blight samples After pathogenicity verification strain LNCY7 was pathogenic to sweet cherry varieties Summit Jiahong and Tieton which was basically consistent with the symptoms in the field Through amplification sequencing and sequence alignment analysis the homology between LNCY7 specific sequence and Fusarium proliferatum login number MH707085 1 in GenBank database was 99 and it was aggregated in one branch on the phylogenetic tree According to the morphological and molecular identification results of strain LNCY7 the pathogen causing sweet cherry leaf blight in Liaoning was identified as Fusarium proliferatum Key words sweet cherry leaf blight disease molecular identification Fusarium proliferatum 甜 櫻 桃 是 北 方 地 區(qū) 成 熟 較 早 的 落 葉 果 樹 果 實 口 感 豐 富 商 品 價 值 較 高 具 有 很 好 的 市 場 前 景 隨 著 集 約 化 種 植 近 年 來 甜 櫻 桃 病 害 發(fā) 生 呈 上 升 趨 勢 尤 其 是 葉 部 病 害 的 發(fā) 生 可 抑 制 光 合 作 用 造 成 落 葉 落 果 影 響 干 物 質(zhì) 的 積 累 嚴 重 制 約 產(chǎn) 業(yè) 的 發(fā) 展 國 內(nèi) 外 學(xué) 者 對 甜 櫻 桃 病 害 進 行 了 一 些 相 關(guān) 的 研 究 主 要 有 由 黃 單 孢 桿 菌 Xanthomonas pruni 引 起 的 葉 片 穿 孔 和 枝 干 潰 瘍 病 1 由 疣 雙 胞 銹 菌 Tranzschelia sp 引 起 的 櫻 桃 銹 病 由 土 壤 農(nóng) 桿 菌 Agrobacterium sp 引 起 的 根 瘤 病 由 病 梨 孢 Apiosporina sp 引 起 的 枝 干 黑 結(jié) 病 由 串 珠 菌 Monilinia sp 導(dǎo) 致 的 花 芽 小 枝 及 果 實 腐 爛 2 由 外 囊 菌 屬 Taphrina sp 引 起 的 枝 瘋 病 由 蜜 環(huán) 菌 屬 Armillaria sp 和 單 孢 霉 屬 Phymatotrichum sp 引 起 的 根 腐 病 3 等 楊 麗 萍 等 4 趙 遠 征 等 5 通 過 ITS rDNA 技 術(shù) 分 別 對 甘 肅 遼 寧 櫻 桃 黑 斑 病 病 原 進 行 了 研 究 認 為 交 鏈 格 孢 Alternaria alternata 和 細 極 鏈 格 孢 Alternaria tenuissima 是 引 起 該 病 害 17 中 國 果 樹 2022 9 16 19 本 文 于 2022 07 05 收 到 2022 07 07 收 到 修 改 稿 國 家 桃 產(chǎn) 業(yè) 技 術(shù) 體 系 櫻 桃 熊 岳 綜 合 試 驗 站 項 目 CARS 30 ZY 25 戴 啟 東 電 話 0417 7033463 E mail daiqd 張 琪 靜 為 通 信 作 者 電 話 0417 7039692 E mail qijingzhang DOI 1 0 16626 ki issn1000 8047 2022 09 004 遼寧 省甜櫻 桃葉枯 病病原 鑒定 戴啟東 周朝輝 艾佳音 張琪靜 遼寧省果樹科學(xué)研究所 營口 115009 摘 要 為了明確遼寧省甜櫻桃葉枯病致病菌的種類 為甜櫻桃葉枯病的合理化防治提供理論依據(jù) 在遼南 地區(qū)采集甜櫻桃葉枯病樣本 采用室內(nèi)致病菌組織分離法分離純化菌株 室內(nèi)回接寄主品種確定致病菌株 經(jīng)柯 赫氏法 則驗證 通過常規(guī)形 態(tài)學(xué)觀察 并結(jié)合真 菌 ITS rDNA 技術(shù)對 致病菌進行 分子鑒定 明確致病 菌種類 從 甜 櫻桃 葉 枯病樣 本中 分 離得 到 7 株 分離 物 經(jīng) 致 病性 驗 證 菌 株 LNCY7 對 甜櫻 桃 品種 砂 蜜豆 佳紅 美早 均 具 有 致 病 性 且 與 田 間 發(fā) 病癥 狀基 本 一 致 通 過 擴 增 測 序 和 序列比 對 分 析 菌株 LNCY7 特 異 性 序列與 GenBank 數(shù) 據(jù) 庫中 登錄 號為 MH707085 1 的 層 出鐮 刀菌 Fusarium proliferatum 的 同源 性 為 99 且 在系 統(tǒng)發(fā) 育樹 上 聚 合 在一個分支 根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定及分子鑒定結(jié)果 將引起遼寧省甜櫻桃葉枯病的致病菌鑒定為層出鐮刀菌 關(guān)鍵詞 甜櫻桃 葉枯病 分子鑒定 層出鐮刀菌 中圖分類號 S 436 629 文獻標志碼 A 文章編號 1 000 8047 2022 09 0016 04 Pathogen identification of sweet cherry leaf blight in Liaoning Province DAI Qidong ZHOU Chaohui AI Jiayin ZHANG Qijing Liaoning Institute of Pomology Yingkou 115009 Abstract In order to clarify the types of pathogens of sweet cherry leaf blight in Liaoning and provide theoretical basis for the rational control of sweet cherry leaf blight The samples of sweet cherry leaf blight were collected in the southern of Liaoning Province The strains were isolated and cultured in PDA medium by indoor pathogen tissue isolation method at room temperature The isolated products were verified by Koch s rule The pathogenic strains were identified by routine morphological observation and ITS rDNA technology and the phylogenetic tree was constructed Seven strains were isolated from sweet cherry leaf blight samples After pathogenicity verification strain LNCY7 was pathogenic to sweet cherry varieties Summit Jiahong and Tieton which was basically consistent with the symptoms in the field Through amplification sequencing and sequence alignment analysis the homology between LNCY7 specific sequence and Fusarium proliferatum login number MH707085 1 in GenBank database was 99 and it was aggregated in one branch on the phylogenetic tree According to the morphological and molecular identification results of strain LNCY7 the pathogen causing sweet cherry leaf blight in Liaoning was identified as Fusarium proliferatum Key words sweet cherry leaf blight disease molecular identification Fusarium proliferatum 甜 櫻 桃 是 北 方 地 區(qū) 成 熟 較 早 的 落 葉 果 樹 果 實 口 感 豐 富 商 品 價 值 較 高 具 有 很 好 的 市 場 前 景 隨 著 集 約 化 種 植 近 年 來 甜 櫻 桃 病 害 發(fā) 生 呈 上 升 趨 勢 尤 其 是 葉 部 病 害 的 發(fā) 生 可 抑 制 光 合 作 用 造 成 落 葉 落 果 影 響 干 物 質(zhì) 的 積 累 嚴 重 制 約 產(chǎn) 業(yè) 的 發(fā) 展 國 內(nèi) 外 學(xué) 者 對 甜 櫻 桃 病 害 進 行 了 一 些 相 關(guān) 的 研 究 主 要 有 由 黃 單 孢 桿 菌 Xanthomonas pruni 引 起 的 葉 片 穿 孔 和 枝 干 潰 瘍 病 1 由 疣 雙 胞 銹 菌 Tranzschelia sp 引 起 的 櫻 桃 銹 病 由 土 壤 農(nóng) 桿 菌 Agrobacterium sp 引 起 的 根 瘤 病 由 病 梨 孢 Apiosporina sp 引 起 的 枝 干 黑 結(jié) 病 由 串 珠 菌 Monilinia sp 導(dǎo) 致 的 花 芽 小 枝 及 果 實 腐 爛 2 由 外 囊 菌 屬 Taphrina sp 引 起 的 枝 瘋 病 由 蜜 環(huán) 菌 屬 Armillaria sp 和 單 孢 霉 屬 Phymatotrichum sp 引 起 的 根 腐 病 3 等 楊 麗 萍 等 4 趙 遠 征 等 5 通 過 ITS rDNA 技 術(shù) 分 別 對 甘 肅 遼 寧 櫻 桃 黑 斑 病 病 原 進 行 了 研 究 認 為 交 鏈 格 孢 Alternaria alternata 和 細 極 鏈 格 孢 Alternaria tenuissima 是 引 起 該 病 害 戴 啟 東 周 朝 輝 艾 佳 音 等 遼 寧 省 甜 櫻 桃 葉 枯 病 病 原 鑒 定 的 主 要 致 病 菌 劉 保 友 等 6 對 大 櫻 桃 褐 斑 病 菌 進 行 了 研 究 認 為 引 起 褐 斑 病 的 病 原 菌 為 核 果 釘 孢 菌 Passalora circumscissa 于 曉 麗 等 7 對 煙 臺 地 區(qū) 櫻 桃 莖 腐 病 病 原 菌 以 及 致 病 性 進 行 了 研 究 認 為 煙 草 疫 霉 Phytophthora nicotianae 是 該 病 的 致 病 菌 關(guān) 于 甜 櫻 桃 葉 枯 病 國 內(nèi) 報 道 相 對 較 少 主 要 認 為 由 細 菌 引 起 也 可 由 生 理 脅 迫 所 導(dǎo) 致 8 且 病 斑 后 期 常 伴 隨 有 穿 孔 脫 落 由 于 甜 櫻 桃 葉 部 病 害 種 類 較 多 癥 狀 相 近 且 不 易 區(qū) 分 明 確 甜 櫻 桃 葉 部 病 害 的 致 病 菌 組 成 對 合 理 地 制 定 防 治 策 略 極 為 重 要 筆 者 在 遼 寧 省 甜 櫻 桃 產(chǎn) 區(qū) 采 集 到 1種 近 年 來 發(fā) 生 較 普 遍 的 葉 枯 類 病 害 樣 本 通 過 室 內(nèi) 病 菌 組 織 分 離 培 養(yǎng) 形 態(tài) 學(xué) 觀 察 并 結(jié) 合 分 子 鑒 定 技 術(shù) 將 引 起 遼 寧 省 甜 櫻 桃 葉 枯 病 的 致 病 菌 鑒 定 為 層 出 鐮 刀 菌 Fusarium proliferatum 1 材料與方法 1 1 供 試 材 料 2021 年 在 遼 南 地 區(qū) 采 集 到 甜 櫻 桃 葉 枯 病 的 病 害 樣 品 主 要 集 中 在 大 連 市 金 州 普 蘭 店 地 區(qū) 及 營 口 市 熊 岳 地 區(qū) 甜 櫻 桃 發(fā) 病 較 嚴 重 的 品 種 主 要 有 美 早 砂 蜜 豆 和 佳 紅 等 1 2 試 驗 方 法 1 2 1 病 菌 的 分 離 培 養(yǎng) 及 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 首 先 將 不 同 地 區(qū) 采 集 的 甜 櫻 桃 葉 枯 病 病 樣 于 室 溫 條 件 下 保 濕 24 h 然 后 在 葉 片 發(fā) 病 部 位 病 健 交 接 處 切 取 4 mm 4 mm 大 小 的 病 組 織 于 0 1 升 汞 溶 液 中 浸 泡 30 s 取 出 后 移 入 70 酒 精 溶 液 中 浸 泡 30 s 用 蒸 餾 水 沖 洗 干 凈 后 移 入 PDA 培 養(yǎng) 基 平 板 25 恒 溫 培 養(yǎng) 每 皿 培 養(yǎng) 3 塊 發(fā) 病 組 織 7 d 后 待 長 出 新 鮮 菌 絲 挑 取 邊 緣 菌 絲 再 次 分 離 純 化 黑 光 燈 照 射 以 及 光 暗 交 替 各 12 h 刺 激 菌 落 產(chǎn) 孢 后 光 學(xué) 顯 微 鏡 下 于 無 菌 水 浮 載 液 觀 察 菌 絲 孢 子 形 態(tài) 進 行 分 類 鑒 定 9 1 2 2 葉 片 致 病 性 測 定 將 獲 得 的 純 培 養(yǎng) 菌 株 進 行 葉 片 室 內(nèi) 回 接 試 驗 采 用 菌 塊 涂 抹 法 接 種 10 并 以 無 菌 水 噴 施 作 為 對 照 回 接 的 寄 主 品 種 分 別 為 砂 蜜 豆 佳 紅 美 早 每 個 品 種 接 種 5 片 葉 片 每 片 葉 片 接 種 3 個 菌 塊 分 別 統(tǒng) 計 接 種 發(fā) 病 情 況 1 2 3 純 培 養(yǎng) 菌 株 的 分 子 鑒 定 將 具 有 致 病 性 的 菌 株 平 板 送 生 工 生 物 工 程 上 海 股 份 有 限 公 司 進 行 擴 增 測 序 擴 增 選 用 真 菌 ITS rDNA 通 用 引 物 ITS1 5 TCCGTAGGTGAA CCTGCGG 3 ITS4 5 TCCTCCGCTATTGATATG C 3 PCR 產(chǎn) 物 純 化 與 測 序 工 作 由 生 工 生 物 工 程 上 海 股 份 有 限 公 司 測 序 部 完 成 測 序 結(jié) 果 經(jīng) Chromas 3 0 軟 件 拼 接 后 在 NCBI GenBank 進 行 同 源 性 比 對 以 確 定 菌 株 的 同 源 性 不 同 菌 株 親 緣 關(guān) 系 發(fā) 育 樹 采 用 軟 件 MEGA 7 0 以 鄰 接 法 構(gòu) 建 2 結(jié)果與分析 2 1 甜 櫻 桃 葉 枯 病 菌 的 分 離 及 致 病 性 測 定 從 甜 櫻 桃 葉 枯 病 病 樣 中 共 分 離 得 到 7 株 病 菌 其 中 真 菌 菌 株 有 3 株 編 號 分 別 為 LNCY5 LNCY6 LNCY7 細 菌 菌 株 有 4 株 編 號 分 別 為 BNCY1 BNCY2 BNCY3 和 BNCY4 通 過 對 3 個 甜 櫻 桃 品 種 的 致 病 性 回 接 試 驗 發(fā) 現(xiàn) 只 有 LNCY7 具 有 致 病 性 并 且 與 甜 櫻 桃 葉 枯 病 田 間 發(fā) 生 癥 狀 相 似 其 他 6 株 菌 株 均 無 致 病 性 致 病 菌 株 LNCY7 接 種 美 早 砂 蜜 豆 和 佳 紅 的 發(fā) 病 率 分 別 為 73 3 46 6 86 6 室 內(nèi) 接 菌 5 d 后 在 砂 蜜 豆 葉 片 上 產(chǎn) 生 壞 死 褐 斑 但 擴 展 較 慢 在 佳 紅 上 產(chǎn) 生 水 浸 狀 黑 褐 色 病 斑 在 美 早 上 病 斑 擴 展 較 快 有 白 色 菌 絲 絨 毛 產(chǎn) 生 圖 版 1 A B C 通 過 不 同 甜 櫻 桃 品 種 的 致 病 性 測 定 認 為 菌 株 LNCY7 為 甜 櫻 桃 葉 枯 病 致 病 菌 2 2 甜 櫻 桃 葉 枯 病 發(fā) 病 癥 狀 及 病 菌 種 類 的 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 病 害 發(fā) 生 初 期 葉 片 正 面 出 現(xiàn) 褐 色 小 圓 點 大 小 為 1 2 mm 后 期 病 斑 圓 形 至 不 規(guī) 則 形 直 徑 2 5 mm 且 病 斑 中 心 有 黃 褐 色 暈 圈 逐 漸 擴 展 至 整 個 葉 片 發(fā) 病 后 期 病 斑 褪 綠 中 心 有 穿 孔 狀 導(dǎo) 致 葉 片 干 枯 死 亡 圖 版 1 D 該 病 菌 在 PDA 培 養(yǎng) 基 上 生 長 較 快 氣 生 菌 絲 初 期 白 色 棉 絮 狀 菌 落 濃 密 不 產(chǎn) 生 分 生 孢 子 座 菌 落 表 面 初 期 白 色 后 期 淡 駝 絨 色 分 生 孢 子 梗 不 分 枝 產(chǎn) 孢 方 式 為 單 瓶 梗 型 分 生 孢 子 排 列 成 鏈 狀 或 假 頭 狀 分 生 孢 子 鐮 刀 形 頂 胞 漸 尖 基 孢 明 顯 兩 端 略 彎 曲 分 生 孢 子 大 多 3 5 隔 大 小 為 22 5 55 5 m 2 5 4 5 m 通 過 對 其 菌 落 孢 子 及 產(chǎn) 孢 表 型 等 形 態(tài) 鑒 定 圖 1 認 為 該 菌 為 鐮 刀 菌 屬 Fusarium sp 真 菌 9 2 3 菌 株 ITS rDNA分 子 鑒 定 及 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 的 構(gòu) 建 對 致 病 菌 株 LNCY7 進 行 DNA 提 取 以 提 取 的 總 DNA 為 模 板 利 用 ITS rDNA 通 用 引 物 進 行 PCR 擴 增 PCR 產(chǎn) 物 片 段 測 序 后 利 用 Chromas 3 0 軟 18 戴 啟 東 周 朝 輝 艾 佳 音 等 遼 寧 省 甜 櫻 桃 葉 枯 病 病 原 鑒 定 圖 1 LNCY7 菌株菌落形態(tài) A 及其分生孢子形態(tài) B 件 拼 接 得 到 大 小 為 566 bp 的 特 異 性 片 段 通 過 GenBank BLAST 分 析 比 對 該 菌 株 與 登 錄 號 為 MH707085 1 的 層 出 鐮 刀 菌 Fusarium proliferatum 的 同 源 性 達 到 99 為 了 進 一 步 明 確 該 菌 株 的 分 類 地 位 選 取 了 與 該 菌 株 親 緣 關(guān) 系 較 相 近 的 鐮 刀 菌 菌 株 進 行 了 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 的 構(gòu) 建 結(jié) 果 表 明 菌 株 LNCY7 與 層 出 鐮 刀 菌 聚 在 同 一 個 分 支 而 與 禾 谷 鐮 刀 菌 Fusarium graminearum 尖 孢 鐮 刀 菌 Fusarium oxysporum 擬 輪 生 鐮 刀 菌 Fusarium verticillioides 等 鐮 刀 菌 屬 的 近 緣 種 分 別 聚 在 不 同 的 分 支 圖 2 結(jié) 合 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 和 分 子 鑒 定 結(jié) 果 認 為 該 致 病 菌 株 LNCY7 為 層 出 鐮 刀 菌 屬 于 子 囊 菌 亞 門 肉 座 菌 目 叢 赤 殼 科 鐮 刀 菌 屬 真 菌 9 圖 2 基 于 ITS rDNA序 列 LNCY7相 關(guān) 菌 株 的 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 3 討論與結(jié)論 本 研 究 分 離 得 到 的 甜 櫻 桃 葉 枯 病 的 致 病 菌 為 層 出 鐮 刀 菌 Fusarium proliferatum 是 一 類 重 要 的 植 物 病 原 菌 該 病 菌 寄 主 范 圍 廣 泛 在 小 麥 大 豆 香 蕉 和 柑 橘 上 均 有 報 道 不 僅 可 以 侵 染 植 物 同 時 也 可 侵 染 動 物 和 人 11 15 鐮 刀 菌 常 引 起 作 物 苗 期 根 腐 病 葉 片 枯 萎 病 等 但 近 年 來 發(fā) 現(xiàn) 該 病 菌 也 可 侵 染 果 實 對 采 后 貯 藏 產(chǎn) 生 影 響 16 鐮 刀 菌 屬 真 菌 Fusarium sp 種 類 繁 多 很 多 近 緣 種 均 有 致 病 性 擬 輪 生 鐮 刀 菌 F verticillioides 可 引 起 朱 蕉 葉 斑 病 層 出 鐮 刀 菌 F proliferatum 侵 染 香 蕉 果 實 可 引 起 果 斑 病 11 16 通 過 形 態(tài) 學(xué) 特 征 很 難 快 速 準 確 鑒 定 這 些 近 緣 種 國 內(nèi) 外 學(xué) 者 不 斷 探 索 一 些 具 有 保 守 序 列 的 特 異 基 因 來 區(qū) 分 這 些 近 緣 種 類 針 對 鈣 調(diào) 蛋 白 基 因 設(shè) 計 的 特 異 性 引 物 檢 測 蘆 筍 莖 枯 病 F proliferatum 鈣 調(diào) 蛋 白 基 因 特 異 性 引 物 可 區(qū) 分 處 于 潛 伏 侵 染 階 段 的 層 出 鐮 刀 菌 F proliferatum 和 尖 孢 鐮 刀 菌 F oxysporum 17 18 通 過 保 守 的 ITS rDNA 區(qū) 間 設(shè) 計 引 物 鑒 定 引 起 圓 蔥 黑 腐 病 的 2 種 病 原 菌 F proliferatum 和 F verticillioides 19 20 在 該 病 菌 病 理 生 理 學(xué) 方 面 也 取 得 一 定 進 展 研 究 人 員 發(fā) 現(xiàn) 弱 酸 性 條 件 下 香 蕉 果 實 更 易 感 染 果 斑 病 F proliferatum 原 因 是 病 菌 周 圍 背 景 環(huán) 境 pH 值 發(fā) 生 改 變 從 而 調(diào) 節(jié) 了 細 胞 壁 降 解 酶 和 抗 氧 化 酶 的 數(shù) 量 來 影 響 病 菌 的 侵 染 活 性 16 同 時 層 出 鐮 刀 菌 F proliferatum 代 謝 毒 性 物 質(zhì) 伏 馬 菌 素 等 的 致 病 機 理 也 不 斷 被 揭 示 21 22 本 研 究 認 為 引 起 甜 櫻 桃 葉 枯 病 的 病 原 菌 為 層 出 鐮 刀 菌 F proliferatum 與 已 報 道 的 櫻 桃 葉 片 黑 斑 病 病 原 鏈 格 孢 屬 Alternaria sp 真 菌 不 同 4 5 這 2 種 病 害 從 發(fā) 病 癥 狀 上 也 有 明 顯 的 區(qū) 別 通 過 對 不 同 品 種 的 致 病 性 測 定 發(fā) 現(xiàn) 不 同 品 種 病 斑 擴 展 情 況 有 所 不 同 該 病 菌 是 否 存 在 不 同 品 種 抗 性 差 異 有 待 進 一 步 明 確 參考文獻 1 Marchi G Cinelli T Surico G Bacterial leaf spot caused by the quarantine pathogen Xanthomonas arboricola pv pruni on cherry laurel in central Italy Plant Disease 2011 95 1 74 2 Tamm L Minder C E Fluckiger W Phenological analysis of brown rot blossom blight of sweet cherry caused by Monilinia laxa Phytopathology 1995 85 4 401 408 3 Villamor D E V Pillai S S Eastwell K C Systemic infection and symptom developmentofagro inoculated cDNAcloneofcherryrustymottle associated virusinsweetcherry Prunusavium VirusResearch 2021 296 198330 4 楊 麗 萍 金 夢 軍 崔 凌 霄 等 甘 肅 省 櫻 桃 黑 斑 病 病 原 菌 的 分 離 及 A B 0 4 Fusarium proliferatum Fusarium proliferatum Fusarium oxysporum Fusarium proliferatum Fusarium proliferatum Fusarium fujikuroi Fusarium concentricum Fusarium verticillioides Fusarium proliferatum Fusarium annulatum Fusarium graminearum Fusarium proliferatum LNCY70 4902 0 2859 1 5201 0 3491 0 5591 0 0 8746 1 8068 0 296 0 8365 1 2594 MT372093 1 MT003116 1 MH707085 1 MZ950914 1 KJ634671 1 MT994990 1 MW533966 1 KT192406 1 MN088598 1 KJ767071 1 KU939073 1 JN400690 1 19 戴 啟 東 周 朝 輝 艾 佳 音 等 遼 寧 省 甜 櫻 桃 葉 枯 病 病 原 鑒 定 圖 1 LNCY7 菌株菌落形態(tài) A 及其分生孢子形態(tài) B 件 拼 接 得 到 大 小 為 566 bp 的 特 異 性 片 段 通 過 GenBank BLAST 分 析 比 對 該 菌 株 與 登 錄 號 為 MH707085 1 的 層 出 鐮 刀 菌 Fusarium proliferatum 的 同 源 性 達 到 99 為 了 進 一 步 明 確 該 菌 株 的 分 類 地 位 選 取 了 與 該 菌 株 親 緣 關(guān) 系 較 相 近 的 鐮 刀 菌 菌 株 進 行 了 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 的 構(gòu) 建 結(jié) 果 表 明 菌 株 LNCY7 與 層 出 鐮 刀 菌 聚 在 同 一 個 分 支 而 與 禾 谷 鐮 刀 菌 Fusarium graminearum 尖 孢 鐮 刀 菌 Fusarium oxysporum 擬 輪 生 鐮 刀 菌 Fusarium verticillioides 等 鐮 刀 菌 屬 的 近 緣 種 分 別 聚 在 不 同 的 分 支 圖 2 結(jié) 合 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 和 分 子 鑒 定 結(jié) 果 認 為 該 致 病 菌 株 LNCY7 為 層 出 鐮 刀 菌 屬 于 子 囊 菌 亞 門 肉 座 菌 目 叢 赤 殼 科 鐮 刀 菌 屬 真 菌 9 圖 2 基 于 ITS rDNA序 列 LNCY7相 關(guān) 菌 株 的 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 3 討論與結(jié)論 本 研 究 分 離 得 到 的 甜 櫻 桃 葉 枯 病 的 致 病 菌 為 層 出 鐮 刀 菌 Fusarium proliferatum 是 一 類 重 要 的 植 物 病 原 菌 該 病 菌 寄 主 范 圍 廣 泛 在 小 麥 大 豆 香 蕉 和 柑 橘 上 均 有 報 道 不 僅 可 以 侵 染 植 物 同 時 也 可 侵 染 動 物 和 人 11 15 鐮 刀 菌 常 引 起 作 物 苗 期 根 腐 病 葉 片 枯 萎 病 等 但 近 年 來 發(fā) 現(xiàn) 該 病 菌 也 可 侵 染 果 實 對 采 后 貯 藏 產(chǎn) 生 影 響 16 鐮 刀 菌 屬 真 菌 Fusarium sp 種 類 繁 多 很 多 近 緣 種 均 有 致 病 性 擬 輪 生 鐮 刀 菌 F verticillioides 可 引 起 朱 蕉 葉 斑 病 層 出 鐮 刀 菌 F proliferatum 侵 染 香 蕉 果 實 可 引 起 果 斑 病 11 16 通 過 形 態(tài) 學(xué) 特 征 很 難 快 速 準 確 鑒 定 這 些 近 緣 種 國 內(nèi) 外 學(xué) 者 不 斷 探 索 一 些 具 有 保 守 序 列 的 特 異 基 因 來 區(qū) 分 這 些 近 緣 種 類 針 對 鈣 調(diào) 蛋 白 基 因 設(shè) 計 的 特 異 性 引 物 檢 測 蘆 筍 莖 枯 病 F proliferatum 鈣 調(diào) 蛋 白 基 因 特 異 性 引 物 可 區(qū) 分 處 于 潛 伏 侵 染 階 段 的 層 出 鐮 刀 菌 F proliferatum 和 尖 孢 鐮 刀 菌 F oxysporum 17 18 通 過 保 守 的 ITS rDNA 區(qū) 間 設(shè) 計 引 物 鑒 定 引 起 圓 蔥 黑 腐 病 的 2 種 病 原 菌 F proliferatum 和 F verticillioides 19 20 在 該 病 菌 病 理 生 理 學(xué) 方 面 也 取 得 一 定 進 展 研 究 人 員 發(fā) 現(xiàn) 弱 酸 性 條 件 下 香 蕉 果 實 更 易 感 染 果 斑 病 F proliferatum 原 因 是 病 菌 周 圍 背 景 環(huán) 境 pH 值 發(fā) 生 改 變 從 而 調(diào) 節(jié) 了 細 胞 壁 降 解 酶 和 抗 氧 化 酶 的 數(shù) 量 來 影 響 病 菌 的 侵 染 活 性 16 同 時 層 出 鐮 刀 菌 F proliferatum 代 謝 毒 性 物 質(zhì) 伏 馬 菌 素 等 的 致 病 機 理 也 不 斷 被 揭 示 21 22 本 研 究 認 為 引 起 甜 櫻 桃 葉 枯 病 的 病 原 菌 為 層 出 鐮 刀 菌 F proliferatum 與 已 報 道 的 櫻 桃 葉 片 黑 斑 病 病 原 鏈 格 孢 屬 Alternaria sp 真 菌 不 同 4 5 這 2 種 病 害 從 發(fā) 病 癥 狀 上 也 有 明 顯 的 區(qū) 別 通 過 對 不 同 品 種 的 致 病 性 測 定 發(fā) 現(xiàn) 不 同 品 種 病 斑 擴 展 情 況 有 所 不 同 該 病 菌 是 否 存 在 不 同 品 種 抗 性 差 異 有 待 進 一 步 明 確 參考文獻 1 Marchi G Cinelli T Surico G Bacterial leaf spot caused by the quarantine pathogen Xanthomonas arboricola pv pruni on cherry laurel in central Italy Plant Disease 2011 95 1 74 2 Tamm L Minder C E Fluckiger W Phenological analysis of brown rot blossom blight of sweet cherry caused by Monilinia laxa Phytopathology 1995 85 4 401 408 3 Villamor D E V Pillai S S Eastwell K C Systemic infection and symptom developmentofagro inoculated cDNAcloneofcherryrustymottle associated virusinsweetcherry Prunusavium VirusResearch 2021 296 198330 4 楊 麗 萍 金 夢 軍 崔 凌 霄 等 甘 肅 省 櫻 桃 黑 斑 病 病 原 菌 的 分 離 及 A B 戴 啟 東 周 朝 輝 艾 佳 音 等 遼 寧 省 甜 櫻 桃 葉 枯 病 病 原 鑒 定 鑒 定 果 樹 學(xué) 報 2020 37 6 891 899 5 趙 遠 征 劉 志 恒 李 俞 濤 等 大 櫻 桃 黑 斑 病 病 原 鑒 定 及 其 致 病 性 研 究 園 藝 學(xué) 報 2013 40 8 1560 1566 6 劉 保 友 張 偉 欒 炳 輝 等 大 櫻 桃 褐 斑 病 病 原 菌 鑒 定 與 田 間 流 行 動 態(tài) 研 究 果 樹