2022 8 試驗研究 絲瓜 Lufa cylindrica 是夏季主要瓜類蔬菜作物 之一 在各蔬菜產(chǎn)區(qū)均有種植 長期以來 枯萎病一 直是絲瓜生產(chǎn)上的主要病害之一 1 該病害是由尖孢 鐮刀菌絲瓜?；蚽ull染所致 屬土傳病害 2 16 枯萎病 菌可以在作物種子上越冬 主要以菌絲 菌核 厚垣 孢子在土壤 病殘體上及未經(jīng)高溫腐熟的肥料中越 冬 17 19 該菌在土壤中能存活 5 年或更長時間 腐生 性強 前人研究表明 用農(nóng)藥化學(xué)防治該病效果欠 佳 目前最有效 經(jīng)濟的措施是選育和種植抗病品 種 20 26 為了解本所選育的絲瓜品種 系 對枯萎病的 抗性水平 采用室內(nèi)人工接種方法鑒定 初步評價絲 瓜新品種 系 對枯萎病的抗性水平 以期為絲瓜枯 萎病的抗性遺傳改良 選育抗病新品種和砧木新品 種提供抗性材料 1 材料與方法 1 1 供試材料 1 1 1 供試絲瓜自交系及品種 3 個新品種及 11 個 自交系都是福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所自行選 育 自 2005 年起陸續(xù)從國內(nèi)外收集絲瓜種質(zhì)資源經(jīng) 過自交純化按照育種目標篩選 供試絲瓜品種 系 來源及系統(tǒng)序號見表1 絲瓜新品種 系 對枯萎病 抗性的null 與null 基金項目 福建省屬公益類專項 2019R1031 2 財政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部國家大宗蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系福州綜合試驗站 CARS 23 G 53 財 政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部國家特色蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項目 CARS 24 G 07 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新平臺專項 CXPT202001 作者簡介 康玉妹 1972 女 本科 助理研究員 研究方向為蔬菜遺傳育種栽培 E mail 396538074 通訊作者 薛珠政 1971 男 本科 研究員 研究方向為蔬菜育種與栽培 E mail 369654817 康玉妹 薛珠政 李永平 馬慧斐 黃 昊 福建省蔬菜遺傳育種重點實驗室 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所 福建省蔬菜工程技術(shù)研究中心 福建福州350013 摘要 為鑒定與評價絲瓜自交系及新品種的枯萎病抗性水平 通過室內(nèi)人工接種 鑒定了 11 個絲 瓜自交系及3個雜交種 結(jié)果表明 SP08012 SP09001和SP08006這 3個自交系對枯萎病表現(xiàn)為中 抗 SP05008 SP11012 15006 15007和SP15008這5個自交系對枯萎病表現(xiàn)為高感 福研 2 號 福研 3號 福研 6號這3個新品種對枯萎病表現(xiàn)為中抗 說明目前選育的絲瓜新品種 系 大多數(shù)對枯萎 病表現(xiàn)為抗或中抗 可為絲瓜抗病育種提供新材料 關(guān)鍵詞 絲瓜品種 自交系 枯萎病 抗性 表 1 供試絲瓜新品種 系 試驗編號 系統(tǒng)序號 產(chǎn)地來源 1 SP08012 廣州市綠霸種苗有限公司 2 SP09001 農(nóng)友種苗 3 SP05008 汕頭金韓種業(yè)有限公司 4 SP08006 江西華農(nóng)種業(yè)有限公司 5 SP11012 香港田友農(nóng)業(yè)聯(lián)合公司 6 SP15008 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院資源所 7 SP11027 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)良種公司 8 SP11011 East West Seed 9 SP15006 福建龍巖 10 SP15007 福建龍巖 11 SP16015 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所 12 福研 2號 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所 13 福研 3 號 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所 14 福研 6 號 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所 126 試驗研究 2022 8 1 1 2 供鑒定的病原菌菌株 采自廣州市鐘落譚鎮(zhèn) 絲瓜產(chǎn)區(qū)的絲瓜枯萎病樣 經(jīng)過廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護研究所單孢分離 獲得絲瓜枯萎病菌菌株 通過室內(nèi)人工接種測定上null菌株的致病性 保存致 病力中等的菌株待用 挑取少量帶菌絲的培養(yǎng)基至 PDA上 活化培養(yǎng) 保存待用 編號為SPK 3 1 2 抗病性鑒定方法 1 2 1 育苗 準備接種用絲瓜苗 每個品種 系 選 完全成熟 籽粒飽滿的種子 200 粒 清洗后用溫水浸 泡8 10 h 之后將清洗干凈的種子用濕布包裹 催null 于 28 30 光照 300 mol m 2 s 的恒溫生化培養(yǎng) 箱中 在每天早晚清洗種子各1次 當(dāng)80 種子露白 及時播于育苗盤 規(guī)格為5 cm 10 cm 于2021年7月 26 日播種 干濕適中的育苗土覆蓋 1 cm 2葉1心苗 齡進行人工接種 土壤均經(jīng)消毒處理后用于育苗 1 2 2 枯萎病菌培養(yǎng) 從菌種保存箱中取出病原菌 SPK 3菌株活化培養(yǎng) 于PDA試管斜面上接種 待菌 絲長出后 用接種針取出一小塊接種于盛有PDA培養(yǎng) 基的三角瓶中 然后振蕩培養(yǎng)3 d 25 180 r min 用雙 層紗布過濾培養(yǎng)液 去除菌絲 以2 500 3 000 r min離 心10 min后 濾液去上清液 然后滅菌水洗出沉淀的 孢子 制成母液 用紐鮑爾 Neubauer 血球計數(shù)板在 顯微鏡下觀察 80 個格 對每個小格的孢子進行觀察 計數(shù) 以其平均數(shù)乘以4 000 000 得到孢子的數(shù)量 每毫升懸浮液中孢子量 將母液用雙蒸無菌水稀 釋 每毫升含1 10 6 個孢子懸浮液 待用 1 2 3 接種方法 采用苗期抗性鑒定技術(shù)進行人工 接種抗性鑒定絲瓜枯萎病 接種方法為傷浸根法 帶 土拔起 2 葉 1 心幼苗 用接種剪刀 輕輕傷根 然后 在孢子懸浮液中浸入根系 20 min 于營養(yǎng)盆中移植 每個品種 系 每個重復(fù) 30 株苗 以雙蒸無菌水作對 照 3次重復(fù) 1 3 病情調(diào)查與評價 接種后 瓜苗病害發(fā)生情況null天觀察記錄 1 次 瓜苗充分發(fā)病 null止調(diào)查 統(tǒng)計病情指數(shù) DI 調(diào)查 結(jié)果用DMRT 法 根據(jù)病情指數(shù)進行差異顯著性分 析 評價品種抗性水平 絲瓜病株病情分級標準 0級 無病癥 1 級 生長正常 胚軸或子葉出現(xiàn)輕微病癥 3級 影響生長 胚軸或子葉出現(xiàn)明顯壞死斑 或1片 子葉黃化 5 級 2 片子葉黃化 或 1 片子葉枯死 7 級 植株部分萎蔫或null止生長 2 片子葉生長僵化 9級 整株萎蔫 倒伏或枯死 病情指數(shù)計算公式 DI 病株數(shù) 該級代 表值 總株數(shù) 最高級代表值 l00 絲瓜群體抗性水平評價標準如下 高抗 HR 0 DI l5 抗 R 15 DI 35 中抗 M 35 DI 55 感 S 55 DI 75 高感 HS 75 DI 1 4 統(tǒng)計分析方法 應(yīng)用 DPS 統(tǒng)計軟件處理原始數(shù)據(jù) 差異顯著性 分析采用Duncan氏新復(fù)極差法 2 結(jié)果與分析 2 1 絲瓜枯萎病的顯微鏡觀察情況 先直接觀察菌落形態(tài) 將菌株篩選分離后 接種 于PDA平板上 28 培養(yǎng)3 d 發(fā)現(xiàn)其菌絲具有條紋 菌叢呈淡紫色絮狀 整個菌落中央淡紫色 平板背面 帶有深紫色的色素 用倒置顯微鏡400null觀察 可見 其菌絲及分生孢子 分生孢子梗呈瓶頸狀 小型分生 孢子較多 呈橢圓至卵圓形 小型分生孢子具有 1 個 分null 大型分生孢子有2 3個分null 形似鐮刀 圖1 2 2 絲瓜枯萎病發(fā)病癥狀及分級標準 接種枯萎病菌的絲瓜苗 其植株發(fā)病癥狀表現(xiàn) 為由下至上子葉 真葉黃化 葉脈逐漸變黃 隨后葉 片變黃 萎蔫 莖基部褐色到褐色開裂 濕度大時長 淡紫色菌絲霉狀物 植株枯死 病株根尖及維管束變 色不明顯 參考羅方芳等 1 的絲瓜枯萎病病情分級方 法 根據(jù)癥狀特征建立分級標準 表2 絲瓜群體抗 性水平評價標準見表3 分為HR R M S HS 2 3 枯萎病病原菌致病性鑒定中絲瓜苗病害發(fā)生 情況 于絲瓜幼苗上接種分離到的尖孢鐮刀菌孢子懸 液 結(jié)果表明 該菌株對絲瓜具有強致病性 絲瓜植 株接種孢子懸液 3 d 后開始出現(xiàn)發(fā)病癥狀 7 d 后發(fā) 病趨于嚴重 發(fā)病時絲瓜由葉null開始 逐漸向中脈擴 展 病葉萎蔫 隨后1 2 d恢復(fù) 然后萎蔫病葉不再恢 復(fù) 呈現(xiàn)萎蔫 自下而上發(fā)展 最下部葉片及其葉鞘 圖 1 絲瓜尖孢鐮刀菌在倒置顯微鏡下觀察情況 127 2022 8 試驗研究 表 4 絲瓜自交系對枯萎病抗性鑒定結(jié)果 系統(tǒng)序號 病情指數(shù) 0 05水平顯著性 抗性水平 SP08012 3 3 c HR SP09001 25 6 c R SP05008 28 2 R SP08006 44 4 c M SP11012 43 1 M SP15008 40 0 a M SP11027 68 9 b S SP11011 85 2 b HS SP15006 94 4 HS SP15007 95 2 HS SP16015 98 9 d HS 處黃色 隨后其他葉片相繼發(fā)黃 萎蔫 植株倒伏 直 至全株枯死 莖基部褐色至黑褐色開裂 濕度大時長 淡紫色菌絲霉狀物 病株根莖剖開 即可見褐色或淡 紫色斑點狀壞死病變 越近莖基部顏色越深 病變 一直延伸到根莖部 接種孢子懸液的處理植株移栽 10 d后 死亡率高達70 其中有90 絲瓜發(fā)病 發(fā) 病植株與健康植株相比較顯著矮小 生長逐漸null止 接種該菌株的絲瓜植株移栽10 d后 其地上部鮮重 地下部鮮重 株高和莖圍與對照處理均達到差異顯 著水平 從發(fā)病部位重新分離病原菌 接種于尖孢鐮 刀菌加了蛋白胨的選擇性培養(yǎng)基再次進行顯微觀 察 鑒定為尖孢鐮刀菌 Fusarium oxysporum f sp melonis 根據(jù)科赫法則 證實該病原菌是被接入的 尖孢鐮刀菌菌株 2 4 絲瓜自交系抗性鑒定 絲瓜自交系人工接種試驗結(jié)果見表 4 參試的 11 個絲瓜自交系接種枯萎病菌 SPK 3 菌株 10 d 后 病情基本穩(wěn)定 其中 SP15008 與 SP11027 SP11011 自交系間病情指數(shù)差異顯著 SP11027 SP11011自交 系間病情指數(shù)差異不顯著 但這 2 個自交系與 SP08012 SP09001 SP08006 3 個自交系間病情指數(shù) 差異顯著 SP08012 SP09001 SP08006 3 個自交系間 病情指數(shù)差異不顯著 但均與 SP16015 自交系差異 極顯著 SP05008 SP11012 SP15006 SP15007品系間 病情指數(shù)差異不顯著 根據(jù)絲瓜枯萎病抗性水平評價標準 參試的11個 絲瓜自交系中 SP15008 對絲瓜枯萎病表現(xiàn)為高抗 SP11027 SP11011 對絲瓜枯萎病表現(xiàn)為抗病 SP08012 SP09001 SP08006 對絲瓜枯萎病表現(xiàn)為中 抗病 SP16015 對絲瓜枯萎病表現(xiàn)為感病 SP05008 SP11012 SP15006 SP15007 對絲瓜枯萎病表現(xiàn)為 高感 2 5 絲瓜新品種抗性鑒定 絲瓜新品種人工接種試驗結(jié)果見圖2 參試的絲 瓜新品種福研 2 號 福研 3 號 福研 6 號接種枯萎病 菌SPK 3菌株10 d后病情基本穩(wěn)定 3個新品種病 情指數(shù)分別為 47 7 40 2 57 5 差異不顯著 35接種濃度 接種時 期 4葉1心期與2葉1心期接種無顯著性差異 考 慮到更早的時期進行鑒定則瓜苗較弱 接種后不容 易緩苗 而在較早的時期進行鑒定可以節(jié)省時間和 空間 接種適合在瓜苗2葉1心期時進行 影響抗病 鑒定的關(guān)鍵因子是接種方法 用1 10 6 CFU mL左右的 枯萎病孢子懸浮液可獲得較好的鑒定效果 說明傷浸 根法對接種濃度的高低不敏感 即采用傷浸根法接 種效果最好 進行傷灌根接種時采用 1 10 7 CFU mL 或更高濃度才能達到較好的接種效果 而僅僅直接 將菌液灌入土壤中接種效果較差 所以要求較高的 病原菌孢子濃度用于傷灌根接種 由于浸根法和傷 灌根法均存在植株根系傷口 因此如果采用灌根法 為了省工省力 則必須應(yīng)用 1 10 7 CFU mL 或更大的 接種濃度以保證足夠的病原菌數(shù)量 同時人為制造 根系傷口 以加速病原菌null入 根系受傷能夠加速 絲瓜枯萎病病原鐮刀菌的null染和癥狀表現(xiàn) 絲瓜枯 萎病抗性鑒定接種的推薦方法 綜合考慮各因素 采用傷浸根法接種 接種時期為苗齡 2 葉 1 心期 在1 10 6 CFU mL的孢子懸浮液中浸泡 由于絲瓜種 植具有多年不間斷種植和區(qū)域性特點 目前推廣種 植的絲瓜品種以抗和中抗枯萎病品種為主 在長期 與寄主作物互作過程中 絲瓜品種的抗病性降低 枯 萎病菌發(fā)生致病性變異 試驗結(jié)果表明 選育的絲瓜 品種 系 中多數(shù)具有抗枯萎病基因 但還有待于下 一步分析這些抗病基因的種類及抗性機制等 為此 需對資源的抗性水平與抗性機制進行研究 為絲瓜 生產(chǎn)的持續(xù)發(fā)展 廣泛收集絲瓜種質(zhì)資源 有針對性 地培育出一系列具有不同抗性基因的絲瓜品種 參考文獻 1 羅方芳 何自福 虞皓 等 廣東絲瓜主要品種對枯萎病抗性的 鑒定與評價 J 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2009 12 49 50 63 2 虞凡楓 趙進 孫銘悅 等 黃瓜枯萎病拮抗null孢桿菌 A7 3 14 的篩選及鑒定 J 北方園藝 2022 3 41 46 3 羅龍輝 王繼承 劉吉平 桑細菌性枯萎病病原菌的分離鑒定 與全基因組序列分析 J 植物保護 2022 48 1 44 51 89 4 鄧曉娟 陸小雙 陳琴 等 沉默 GbGSTU7 基因?qū)u棉枯萎 病抗性的影響 J 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報 2022 30 3 434 441 5 張涵 趙瑩 仲榮榮 等 生防細菌 TB17 的篩選 鑒定及其對苦 瓜枯萎病的生防作用 J 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 2022 01 11 網(wǎng) 絡(luò)首發(fā) 1 15 6 null大志 王詠坤 陳捷 等 海藻渣復(fù)配微生物菌劑防治黃瓜苗 期枯萎病的協(xié)同增效作用 J 中國生物防治學(xué)報 2022 38 1 97 107 7 吳美艷 羅興錄 劉珊廷 等 木薯葉片 5 種防御null活性與細 菌性枯萎病抗性的關(guān)系 J 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 2022 27 1 109 115 8 呼李樂 黃曉null null曉紅 等 不同抗性黃瓜品種連作對枯萎病 菌群體遺傳分化的影響 J 植物病理學(xué)報 2021 12 21 網(wǎng)絡(luò) 首發(fā) 1 11 9 趙曾強 郭文婷 張析 等 棉花抗枯萎病相關(guān)基因 GhERF5 4D的克隆及功能分析 J 生物技術(shù)通報 2022 38 4 193 201 10 王艷瑋 曾凡云 漆艷香 等 香蕉枯萎病菌比卡菌素聚酮合 null編碼基因 Bik1 的鑒定以及作為內(nèi)源報告基因在 CRISPR Cas9體系中的可行性評估 J 熱帶作物學(xué)報 2021 11 30 網(wǎng) 絡(luò)首發(fā) 1 15 11 王瑤 張丹 王曉梅 黃瓜枯萎病拮抗真菌的篩選與鑒定 J 北方園藝 2021 22 46 52 12 null宜靜 王光null 任國華 等 不同品種砧木抗病性鑒定及嫁 圖 2 絲瓜新品種抗性鑒定 品種 129 2022 8 試驗研究 接對番茄植株生長和果實品質(zhì)的影響 J 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報 2021 37 6 108 113 13 柴丹 韓帥 郭江洪 等 不同絲瓜種質(zhì)資源對枯萎病的抗性 鑒定與評價 J 長江蔬菜 2021 22 71 73 14 關(guān)峰 張景云 石博 等 苦瓜枯萎病病原的鑒定與防治藥劑 篩選 J 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報 2021 33 11 68 72 15 林永勝 張武null 周先治 等 43 個絲瓜種質(zhì)資源枯萎病抗性 的鑒定與評價 J 福建農(nóng)業(yè)科技 2021 52 5 28 32 16 彭家柱 喬燕春 李蓮芳 等 節(jié)瓜和絲瓜枯萎病菌的分離及 ITS分子檢測 J 分子植物育種 2020 18 21 7120 7125 17 郭康迪 苦瓜枯萎病菌的分離鑒定 遺傳多樣性分析及其拮 抗細菌的篩選 D 鄭州 河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019 18 黃愛政 陳仕軍 溫健新 有棱絲瓜江秀 8號的選育與應(yīng)用 J 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019 60 5 730 731 735 19 陳渝文 趙榮茺 null慕潔 等 甜瓜抗枯萎病的遺傳分析 J 分 子植物育種 2022 3 1 18 20 梁金蘭 王null正 黃瓜枯萎病菌專化型鑒定及其防治研究 J 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 1991 3 259 263 21 楊侃侃 劉曉虹 陳宸 等 黃瓜枯萎病研究進展 J 湖南農(nóng)業(yè) 科學(xué) 2019 6 121 124 22 Li M Ma G S Lian H et al The effects of Trichoderma on pre venting cucumber fusarium wilt and regulating cucumber physi ology J Journal of Integrative Agriculture 2019 18 3 607 617 23 Zhang H Zhang Q Wang Y et al Characterization of salt tol erance and Fusarium wilt resistance of a sweetpotato mutant J Journal of Integrative Agriculture 2017 16 9 1946 1955 24 Siamak S B Zheng S J Banana fusarium wilt Fusarium oxys porum f sp cubense control and resistance in the context of developing wilt resistant bananas within sustainable produc tion systems J Horticultural Plant Journal 2018 4 5 208 218 25 Liu Z J Du G F Niu Y et al Fusarium wilt resistance iden tification and genetic analysis of Momordica charantia L germplasm J Asian Agricultural Research 2019 11 9 70 72 26 Liu Z J Du G F Niu Y et al Occurrence and control technology of bitter gourd fusarium wilt J Plant Diseases and Pests 2019 10 4 4 6 創(chuàng)兩優(yōu) 450 是湖南鑫盛華豐種業(yè)科技有限公司 利用湖南金耘水稻育種研究有限公司與湖南農(nóng)業(yè)大 學(xué)共同選育的兩系核不育系創(chuàng) 5S 與恢復(fù)系 R450 雜 交配組選育而成的兩系優(yōu)質(zhì)中稻組合 2019年通過湖 南省審定 審定編號 湘審稻20190029 該品種在湖 南省作遲熟中稻栽培 全生育期 133 8 d 比對照Y 兩 優(yōu)1 號短0 3 d 株高114 9 cm 畝有效穗16 8萬穗 每穗總粒數(shù) 214 7 粒 結(jié)實率 82 3 千粒重 23 3 g 區(qū)試抗性檢測結(jié)果 葉瘟 3 7 級 穗瘟 5 4 級 穗瘟損 失率 2 7 級 稻瘟病綜合抗性指數(shù) 3 3 白葉枯病 施肥水平對創(chuàng)兩優(yōu)450產(chǎn)量的影響初探 摘要 優(yōu)質(zhì)中稻新品種創(chuàng)兩優(yōu) 450 在岳陽市種植推廣已有 2 年 面積逐年增加 為了明確其適宜肥 料施用量 2021年在君山區(qū)廣興洲鎮(zhèn)開展了創(chuàng)兩優(yōu)450肥料施用量的大田試驗 結(jié)果表明 增加基 肥和追肥施用量對創(chuàng)兩優(yōu) 450 有增產(chǎn)作用 創(chuàng)兩優(yōu) 450 作一般栽培時 以每公頃施基肥 750 kg 史 丹利復(fù)合肥 追施160 kg尿素最佳 作高產(chǎn)栽培時 以每公頃施基肥 750 kg 復(fù)合肥 追施 325 kg 尿 素產(chǎn)量最高 實收產(chǎn)量可達11 06 t hm 2 關(guān)鍵詞 創(chuàng)兩優(yōu)450 尿素 復(fù)合肥 施肥水平 產(chǎn)量 作者簡介 姜林 1972 男 本科 農(nóng)藝師 從事農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣工作 通訊作者 鄧松 1981 男 高級農(nóng)藝師 從事優(yōu)質(zhì)水稻育種工作 E mail 375521770 姜 林 1 周春霞 2 李永林 3 鄧 松 4 余 敏 5 黃 雄 5 鄧 猛 5 1 岳陽市君山區(qū)錢糧湖鎮(zhèn)社會事務(wù)服務(wù)中心 湖南君山414008 2 湖南省岳陽縣農(nóng)業(yè)種子技術(shù)推廣站 湖南岳陽414100 3 湖南省岳陽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 湖南岳陽414100 4 湖南龍窖山生態(tài)農(nóng)業(yè)股份有限公司 湖南臨湘414300 5 湖南鑫盛華豐種業(yè)科技有限公司 湖南岳陽414000 130