程 海 洋 魏 有 海 郭 良 芝 等 馬 鈴 薯 晚 疫 病 生 防 細(xì) 菌 的 篩 選 及 鑒 定 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 馬 鈴 薯 晚 疫 病 生 防 細(xì) 菌 的 篩 選 及 鑒 定 程海洋 魏有海 郭良芝 程 亮 郭青云 青海大學(xué)農(nóng)林科學(xué)院 青海西寧 青海省農(nóng)業(yè)有害生物綜合治理重點實驗室 青海西寧 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部西寧作物有害生物科學(xué)觀測實驗站 青海西寧 摘 要 為明確從矮火絨草根內(nèi)分離獲得的內(nèi)生細(xì)菌對致馬鈴薯晚疫病病菌的抑制作用 采用稀釋平板法分離矮火 絨草內(nèi)生細(xì)菌 以對峙培養(yǎng)法和打孔法分別測試細(xì)菌菌株和發(fā)酵液濾液對晚疫病菌絲生長和孢子囊萌發(fā)的抑制作用 并對優(yōu)勢菌株進行分子生物學(xué)鑒定 結(jié)果表明 在分離的 株細(xì)菌中 有 株細(xì)菌對晚疫病病菌具明顯拮抗作用 有 株抑菌率達 以上 其中 和 菌株對致病疫霉的抑菌率較高 分別為 發(fā)酵濾液 以 和 的抑菌率較高 分別為 的孢子囊抑制率最高 為 盆栽試驗中 細(xì) 菌菌株發(fā)酵濾液處理能夠?qū)е峦硪卟〔∏橹笖?shù)下降 其中 菌株防效最好 達到 低于化學(xué)藥劑嘧菌酯 的防效 田間試驗結(jié)果表明 與化學(xué)殺菌劑 相比 菌株對晚疫病的平均防效達到 經(jīng)鑒定 菌株為熒光假單胞菌 該菌株在馬鈴薯晚疫病防治中有較大潛力 關(guān) 鍵 詞 馬鈴薯晚疫病 致病疫霉 拮抗作用 鑒定 生物防治 內(nèi)生細(xì)菌 中 圖 分 類 號 文 獻 標(biāo) 志 碼 文 章 編 號 收稿日期 基金項目 國家重點研發(fā)計劃 編號 青海省農(nóng) 業(yè)有害生物綜合治理重點實驗室項目 編號 青海省科技成果轉(zhuǎn)化專項 編號 第 二次青藏高原綜合科學(xué)考察研究項目 編號 作者簡介 程海洋 男 河南洛陽人 碩士研究生 從事生物 防治等研究工作 通信作者 程 亮 碩士 研究員 從事生物防治研究工作 馬鈴薯 屬茄科多年生草本植物 糧飼兼用 是 全球第四大重要的糧食作物 僅次于水稻 小麥和 玉米 馬鈴薯產(chǎn)業(yè)已成為我國保障糧食安全和社會 發(fā)展的重要支柱 馬鈴薯晚疫病是由致病疫霉 引起并導(dǎo)致馬鈴薯莖葉死亡 和塊莖腐爛的一種毀滅性真菌病害 常導(dǎo)致馬鈴薯 嚴(yán)重減產(chǎn)甚至絕收 造成全球重大經(jīng)濟損失 目 前 使用化學(xué)殺菌劑是防治馬鈴薯晚疫病的有效方 法 但頻繁使用殺菌劑對環(huán)境和人類健康均有 不利影響 易造成病原菌抗 耐 藥性越來越強 同時加速了馬鈴薯晚疫病病菌群體遺傳結(jié)構(gòu)生理 分化和變異 青海省是馬鈴薯的重要產(chǎn)區(qū)之一 因此 篩選新的用于防治馬鈴薯晚疫病的藥物 尤 其是具有抗菌作用的生防菌迫在眉睫 內(nèi)生細(xì)菌 是指生活史某一階段或 全部階段生活于健康植物組織或器官的細(xì)胞間隙 或細(xì)胞內(nèi)的一類細(xì)菌 內(nèi)生細(xì)菌具有抑菌 誘導(dǎo) 產(chǎn)生次生代謝物 固氮 溶磷及產(chǎn)吲哚乙酸等多方 面的有益生物功能 增強宿主植物抗病蟲害能力及 生長競爭能力等 由于內(nèi)生細(xì)菌作為生防因子具 有巨大優(yōu)勢 因此利用內(nèi)生細(xì)菌對植物病害進行生 物防治已成為研究的熱點之一 許多學(xué)者通過篩 選拮抗菌或其代謝產(chǎn)物抑制致病疫霉 或利用一 些特定的活性物質(zhì)抑制致病疫霉 如申芬等報 道拮抗菌發(fā)酵液能夠顯著抑制致病疫霉菌絲生長 能使菌絲體發(fā)生畸變 降低孢子囊形成的能力 抑 制孢子囊萌發(fā) 阻止休止孢萌發(fā) 王梅菊等從油 菜根莖部分離出來的 株枯草芽孢桿菌 可以有效地防治灰葡萄孢 立枯絲核菌 和 油菜黑脛病病菌 等引起的 病害 同時也可以促進寄主油菜的生長 王玉琴 等從高寒草地針茅葉部分離出的 株枯草芽孢桿菌 對馬鈴薯壞疽病病菌 馬鈴薯炭疽病病菌 和馬鈴薯枯萎病病菌 具有明顯的拮抗作用 同時具有產(chǎn)吲 哚 乙酸 和溶磷等能力 崔月貞等從 東祁連山高寒草地牧草分離出的 株內(nèi)生細(xì)菌 韋 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 氏芽孢桿菌 解淀 粉芽孢桿菌 和枯草芽 孢桿菌 對馬鈴薯晚疫病的抑菌 率分別為 且 和 具有固氮和產(chǎn) 的生物學(xué)功能 本研究從采集自祁連高寒草地矮火絨草根部 樣品中分離篩選對馬鈴薯晚疫病有抑制效果的內(nèi) 生細(xì)菌菌株 并對其進行 序列鑒定 以期 為生防菌劑的研發(fā)提供菌株資源 也為植物內(nèi)生細(xì) 菌防治馬鈴薯晚疫病的生物防治開發(fā)應(yīng)用等提供 理論依據(jù) 材 料 與 方 法 試驗材料 病原菌 致病疫霉 菌株 由筆 者所在實驗室保存 培養(yǎng)基 大豆酪蛋白瓊脂 培養(yǎng)基 胰 蛋白胨 大豆蛋白胨 氯化鈉 蒸 餾水 瓊脂 值為 理 查德合成瓊脂 培養(yǎng)基 黑麥 催芽露白后 使用 番茄汁 瓊脂 蒸餾 水 液體培養(yǎng)基 胰蛋白胨 酵母提取物 蒸餾水 值為 固體培養(yǎng)基 胰蛋白胨 酵母提取物 瓊脂 蒸餾 水 值為 內(nèi)生細(xì)菌分離純化 按胥婷等的方法 分離矮火絨草根內(nèi)生細(xì)菌 用無菌水洗凈矮火絨草根部泥土后 濾紙吸干表面 水分 稱取 根 于無菌室內(nèi) 用 乙醇 次氯酸鈉 乙醇 依 次對根表面進行消毒 最后用無菌水洗滌 次 吸取 最后 次洗滌的無菌水 涂布 培養(yǎng)基平 板 培養(yǎng) 無菌落長出說明表面消毒合格 表面消毒后 用無菌濾紙吸干根部表面的水分 再 用無菌剪刀剪碎后置于無菌研缽中 加入少量滅菌 的石英砂和 無菌水充分研磨 得到 的菌 懸液 梯度稀釋分別得到 濃度的 菌懸液 各取 菌懸液涂布于 培養(yǎng)基平 板上 培養(yǎng) 每個梯度做 次重復(fù) 培養(yǎng) 根據(jù)菌落形態(tài) 顏色 透明度等特征挑取不同的 細(xì)菌菌落分離純化 純化 代后 得到單菌落進 行轉(zhuǎn)管并室溫保存 生防內(nèi)生細(xì)菌篩選 平板拮抗活性測定 將分離獲得的細(xì)菌菌 株接種到 固態(tài)培養(yǎng)基上 活化培養(yǎng)基 后 采用對峙培養(yǎng)法篩選拮抗細(xì)菌 將細(xì)菌菌株轉(zhuǎn) 接到 培養(yǎng)基與經(jīng) 培養(yǎng)基活化的致病疫霉對 峙培養(yǎng) 觀察菌株是否對致病疫霉菌絲生長有抑制 效果 以十字交叉法測量抑菌帶 并計算抑菌率 以未接細(xì)菌菌株的 培養(yǎng)基為對照 選擇具有明 顯抑菌帶的菌株 轉(zhuǎn)接到 培養(yǎng)基上培養(yǎng) 保存 備用 抑菌率 對照菌落直徑 處菌菌落直徑 對照菌落直徑 內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵濾液的抑菌活性測定 內(nèi)生 細(xì)菌發(fā)酵濾液的制備 將離體對致病疫霉的抑菌率 大于 的菌株經(jīng) 固體培養(yǎng)基斜面活化后 接 環(huán)于盛 液體培養(yǎng)基的 三角瓶中 振蕩培養(yǎng) 制成種子液 再按 的接種量 轉(zhuǎn)接至 液體培養(yǎng)基的 三角瓶中 擴大培養(yǎng) 得到菌液原液 將上述培養(yǎng)得 到的菌液經(jīng) 離心 并經(jīng)細(xì)菌過 濾器 除菌后得到發(fā)酵濾液 內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵濾液對致病疫霉菌絲生長的影 響 采用打孔法測試菌株無菌代謝液的抑菌作用 取 的發(fā)酵濾液加入孔中 直徑為 以 滅菌的空白 液體培養(yǎng)基為對照 每個處理 次 重復(fù) 抑菌率統(tǒng)計方法同 節(jié) 內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵濾液對致病疫霉孢子囊萌發(fā)的 抑制作用 參照張鉉哲等的方法 將馬鈴薯晚疫 病病菌制成孢子囊懸浮液 濃度調(diào)至在 倍顯 微鏡下每個視野 個孢子囊 將孢子囊懸浮 液與發(fā)酵濾液按 的體積比混勻 每個處理吸取 液體滴于干凈凹玻片上 于 培養(yǎng) 觀察孢子囊萌發(fā)情況 芽管長于孢子囊直徑視為萌 發(fā) 每個處理 次重復(fù) 每個重復(fù)以視野中所見到 的孢子囊數(shù)為準(zhǔn) 統(tǒng)計萌發(fā)抑制率 溫室盆栽防效測定 試驗于 年在青海省農(nóng)林科學(xué)院植物保護 所溫室中進行 馬鈴薯下寨 品種放在陰暗潮濕 處催芽 將芽眼帶薯塊切下 每盆 塊 每個處理種 植 盆馬鈴薯植株 待其長至 片葉時 分別 噴施內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵濾液和嘧菌酯 以清水為對照 每株馬鈴薯植株噴施 后進行晚疫 病病原菌接種 接種方法參照徐生軍等的方法 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 用無菌水將晚疫病病菌培養(yǎng)平板上的游動孢子囊 洗下 經(jīng)滅菌紗布過濾后制成孢子囊懸浮液 用血 球計數(shù)板將孢子囊數(shù)調(diào)為 個 置于 冰箱中 后取出 采用噴霧法接種 接種后 調(diào)查病害情況 計算病情指數(shù)和防治效果 盆 栽試驗以葉片為單位進行調(diào)查 病情分級標(biāo)準(zhǔn)按方 中達的方法 級 葉片無病斑 級 病斑面積 占整個葉片面積的比例 級 病斑面積占整 個葉片面積的 級 病斑面積占整個葉 片面積的 級 病斑面積占整個葉片面 積的 級 病斑面積占整個葉片面積的 比例 病情指數(shù) 各級病葉數(shù) 相對級數(shù)值 調(diào)查總?cè)~數(shù) 最高級數(shù)值 田間晚疫病防效測定 年田間試驗設(shè)置在青海省農(nóng)林科學(xué)院馬 鈴薯試驗田 采用液體發(fā)酵法制備內(nèi)生菌株發(fā)酵 液 過濾獲得發(fā)酵濾液 試驗小區(qū)面積為 共 設(shè)置 個處理 處理 分別為 發(fā)酵濾液 處理 為 嘧菌酯懸浮劑 處 理 為清水對照 每個處理重復(fù) 次 隨機區(qū)組排 列 田間出現(xiàn)中心病株時進行病情指數(shù)的基數(shù)調(diào) 查并施藥 之后每隔 施藥 次 共施藥 次 每 次施藥前進行病情指數(shù)的調(diào)查 并于施藥后 再 次進行調(diào)查 每個小區(qū)分別進行 點取樣 每點選 株 計算病情指數(shù)及發(fā)病率 統(tǒng)計分析確定防治 效果 田間試驗以整株為單位進行調(diào)查 病情分級 參照方樹民等的方法 級 葉片無任何癥狀 級 葉片上有個別病斑 級 以下葉片有病斑 級 葉片上有病斑 級 以上葉片上 有病斑 級 幾乎整株枯死 病情指數(shù) 病情級別 各級病株數(shù) 調(diào)查總株數(shù) 最高級數(shù)值 防治效果 式中 表示對照組的藥前病情指數(shù) 表示對 照組的藥后病情指數(shù) 表示藥劑處理組的藥前 病情指數(shù) 表示藥劑處理組的藥后病情指數(shù) 采用 軟件 應(yīng)用 新復(fù)極差法 對 試驗數(shù)據(jù)進行差異顯著性分析 菌株 鑒定 本試驗采用分子生物學(xué)鑒定菌株 使用 生工生物工程 上海 股份有限公司的 柱式試劑 盒提取內(nèi)生細(xì)菌基因組 方法參照試劑盒說明書 利 用 對通用引物 和 進行 擴增 引物 由生工生物工程 上海 股份有限公司合成 序列如 下 反應(yīng)體系 模板 上 下引物各 雙蒸水 擴增條件 預(yù)變性 進行 個循環(huán) 延伸 保存 擴增片段用 生工生物工程 上海 股份有限公司的 產(chǎn)物回 收試劑盒純化后 與 載體 連接過 夜 轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 陽性克隆經(jīng)菌落 驗證正確后 提取質(zhì)粒 由生工生物工程 上 海 股份有限公司完成堿基序列測定 將測序獲得 的 通過與 中核酸數(shù)據(jù)庫進行 分析并利用 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹 確 定 的分類地位 結(jié) 果 與 分 析 矮火絨草根內(nèi)生細(xì)菌的分離結(jié)果及其抑制 作用 采集矮火絨草根組織 采用平板稀釋法 共分 離獲得 株內(nèi)生細(xì)菌 編號分別為 大部分菌株在 培養(yǎng)基上迅速生長 大多菌落表 現(xiàn)為濕潤狀 乳白色 不規(guī)則 扁平 光滑 少數(shù)菌落 邊緣褶皺 微黃色 將分離獲得的 株內(nèi)生細(xì)菌分 別于經(jīng) 活化培養(yǎng)的致病疫霉菌株在 平板 上對峙培養(yǎng) 由表 可知 能夠抑制致病疫霉生長 的菌株共有 株 其中 抑菌率達到 以上的 有 株 菌株 以 菌株的抑制作用最強 抑菌率達到 在表現(xiàn)抑菌作用較強的菌株中 和 菌株與致病疫霉之間形成的抑菌帶不明顯 而 抑菌率為 和 抑菌率為 菌株形成的抑菌帶十分明顯 內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵濾液的抑菌活性測定 內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵濾液對致病疫霉菌絲生長的 影響 將抑菌率達到 以上的 個菌株分別擴 大培養(yǎng)后離心過濾得到其發(fā)酵濾液 由圖 可知 供試 個菌株的發(fā)酵濾液對致病疫霉菌絲的抑制率 均在 以上 較菌株對峙培養(yǎng)抑菌率有所下降 分別為 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 表 內(nèi) 生 細(xì) 菌 菌 株 對 致 病 疫 霉 的 抑 制 作 用 供試菌株 抑菌率 供試菌株 抑菌率 注 不同小寫字母表示在 水平上差異顯著 下表同 其中 菌株降幅最大 為 百分 點 其次為 菌株 降幅為 百分點 其他 菌株對峙與發(fā)酵濾液之間幅差在 以內(nèi) 相對較 穩(wěn)定 綜合評價 菌株的抑菌率最高 其次是 菌株 菌 株的抑菌率最低 為 經(jīng)對峙平板觀察發(fā)現(xiàn) 受 個菌株發(fā)酵濾液抑 制的致病疫霉菌落變小 菌絲致密 生長速率降低 顯微鏡檢發(fā)現(xiàn) 發(fā)酵濾液導(dǎo)致致病疫霉菌絲畸變 菌絲無法正常伸展 菌絲尖端呈現(xiàn)球形的畸變 內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵濾液對致病疫霉孢子囊萌發(fā) 的抑制作用 將 株內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵濾液和致病疫霉 的孢子囊懸浮液混合后發(fā)現(xiàn) 無菌發(fā)酵濾液均可強 烈抑制致病疫霉孢子囊的萌發(fā) 抑制率達到 圖 顯微鏡檢發(fā)現(xiàn) 發(fā)酵濾液 引起致病疫霉孢子囊形態(tài)發(fā)生畸變 多為外壁破 裂 中空結(jié)構(gòu) 內(nèi)含物分隔于兩極 空孢子囊類型 溫室盆栽防效測定 由表 可知 致病疫霉游動孢子接種 后 清 水對照組病情指數(shù)達到 而生防菌 處理組馬鈴薯 晚疫病病情指數(shù)顯著降低 防治效果分別達到了 陽性對照嘧菌酯的病情指數(shù)僅為 防治效果達到 各處理組的病情指數(shù)與對 照相比達到顯著性差異 嘧菌酯處理與各個內(nèi)生菌 處理組的防效達到顯著性差異 顯著高于內(nèi)生菌株 處理組 表 內(nèi) 生 細(xì) 菌 對 馬 鈴 薯 晚 疫 病 的 盆 栽 防 效 處理 病情指數(shù) 防效 嘧菌酯 田間防效測定 由表 可知 連續(xù)噴施 次生防菌劑 處理 化學(xué)藥劑 對馬鈴薯晚疫病的防治效果最好 平均 防效可達 其次為處理 菌株 平 均防效達 防效最差的為處理 菌 株 平均防效僅為 內(nèi)生菌株的鑒定 用引物 進行 擴增 擴增獲得約 的片段 將所得序列與 數(shù)據(jù)庫中 其他細(xì)菌 基因序列進行比對 分析其分 類地位 發(fā)現(xiàn)該菌的 與假單胞菌序列有 很高的同源性 構(gòu)建 序列系統(tǒng)發(fā)育樹 發(fā)現(xiàn) 菌株與熒光假單胞菌 聚在一個群組里 圖 初步確定 為熒光假單胞菌 結(jié) 論 與 討 論 植物內(nèi)生細(xì)菌分布于宿主植物的不同部位 由 于其生存環(huán)境相對封閉 因此其生長發(fā)育不易受外 界不良環(huán)境的干擾 這一生境優(yōu)勢使其在植物病害 防治中擁有比根圍 葉圍細(xì)菌更大的應(yīng)用空間 利用內(nèi)生細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物抑制植物病害已有許 多研究 目前用于防治植物病害的內(nèi)生細(xì)菌種類主 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 表 不 同 藥 劑 處 理 對 馬 鈴 薯 晚 疫 病 的 防 治 效 果 處理 編號 藥前 病情指數(shù) 第 次施藥后 第 次施藥后 第 次施藥后 病情指數(shù) 防治效果 病情指數(shù) 防治效果 病情指數(shù) 防治效果 平均防效 要以芽孢桿菌屬和假單胞桿菌屬為主 有文獻 報道 熒光假單胞桿菌的一些菌株已在食品 和環(huán) 境保護 等領(lǐng)域展現(xiàn)出很大潛力 在馬鈴薯晚疫病 防治方面 等研究發(fā)現(xiàn) 株熒光假單胞桿 菌 產(chǎn)生的表面活性劑既能使馬 鈴薯致病疫霉的游動孢子裂解 也能誘導(dǎo)馬鈴薯對 致病疫霉產(chǎn)生抗性 等對熒光假單胞桿 菌 菌株對致病疫霉具有強烈 的抑制作用 抑制率可達 以上 本試驗從 矮火絨草根中分離篩選致病疫霉拮抗細(xì)菌 株細(xì) 菌中有 株有一定的抑菌作用 其中活體菌株 和 的抑菌率最高 分別為 而無菌代謝液以 和 菌株的抑 菌率最高 分別為 綜合菌株和 無菌代謝液的抑菌率 以 菌株的抑菌作用最 為穩(wěn)定 抑菌率均在 以上 經(jīng)初步鑒定 對致 病疫霉抑制能力較強的菌株 為熒光假單胞 桿菌 這與蔣繼志等報道的結(jié)果 相一致 目前 很多在平板上對致病疫霉有拮抗作用的 菌株 當(dāng)用于盆栽或田間防治時 防治效果減弱或 無防治效果 等施用假單胞菌 和 的菌懸液 對馬鈴 薯晚疫病的防治效果分別為 李雙 東等施用枯草芽孢桿菌 的菌懸液和無菌體 發(fā)酵液 對馬鈴薯晚疫病的防治效果分別為 胡軍華等將假單胞菌 的發(fā)酵液先噴于馬鈴薯葉片上再接種馬鈴薯晚疫 病菌 馬鈴薯苗不發(fā)病或發(fā)病很輕 在本研究盆栽 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 試驗中 個菌株處理與對照相比 馬鈴薯晚疫病病 情指數(shù)均有不同程度的下降 說明 個菌株對馬鈴 薯晚疫病有很好的抑菌活性 其中以菌株 的 防效最高 為 略低于化學(xué)農(nóng)藥嘧菌酯的防 效 田間試驗中 菌株 的平均 防效為 嘧菌酯的平均防效為 說 明該菌株在馬鈴薯晚疫病的生物防治中具有應(yīng)用 潛力 綜上 噴施內(nèi)生細(xì)菌有助于馬鈴薯抵抗晚疫病 病菌的侵染 提高馬鈴薯的抗病能力 在田間試驗 中也具有良好的防治效果 未來可通過內(nèi)生細(xì)菌與 化學(xué)殺菌劑聯(lián)合使用 以減少晚疫病病菌的侵染 達到防病增收的效果 關(guān)于內(nèi)生細(xì)菌在大田生產(chǎn) 中的應(yīng)用 仍需大量試驗 其作用機制也需更深入 的研究 參 考 文 獻 謝從華 馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)狀與發(fā)展 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 社 會科學(xué)版 田薈遙 蔣繼志 侯 寧 等 馬鈴薯致病疫霉生理小種鑒別寄主 的組培條件優(yōu)化及部分生理小種的鑒定 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué) 報 李成斌 張紅霞 李 巖 等 年北方 省 區(qū) 致病 疫霉抗藥性監(jiān)測及與嘧菌酯交互抗性 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 方珍娟 張曉霞 馬立安 植物內(nèi)生菌研究進展 長江大學(xué)學(xué) 報 自然版 申 芬 蔣繼志 侯 寧 等 種拮抗菌復(fù)合發(fā)酵對致病疫霉 的抑制及離體防病作用研究 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 王梅菊 劉 晨 吳明德 等 油菜內(nèi)生細(xì)菌多樣性分析及菌株 生防潛力評估 中國油料作物學(xué)報 王玉琴 楊成德 王 穎 等 針茅內(nèi)生細(xì)菌菌株 的鑒 定及其生物學(xué)功能 微生物學(xué)通報 崔月貞 楊小利 楊成德 等 拮抗馬鈴薯晚疫病菌的高寒草地 牧草內(nèi)生細(xì)菌的鑒定及其生物功能測定 植物保護學(xué)報 胥 婷 楊麗強 宋 宇 等 不同草原類型針茅根部可培養(yǎng)內(nèi) 生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及其功能 生態(tài)學(xué)雜志 張鉉哲 李媛媛 李 璐 等 抗病誘導(dǎo)劑與殺菌劑混合處理對 馬鈴薯晚疫病的防治效果 中國蔬菜 徐生軍 姚亮亮 李新新 等 黑龍江省和吉林省馬鈴薯晚疫病 菌對氟啶胺和甲霜靈的敏感性變化 植物保護 方中達 植病研究方法 版 北京 中國農(nóng)業(yè)出版 社 方樹民 翁定河 徐大東 等 馬鈴薯品種對晚疫病的抗性評價 福建農(nóng)業(yè)科技 蔣繼志 郭俊亭 李麗艷 致病疫霉拮抗真菌研究進展 河 北大學(xué)學(xué)報 自然科學(xué)版 王 僑 秦正山 袁 濤 等 兩種假單胞桿菌協(xié)同發(fā)酵產(chǎn)脂肪 酶優(yōu)化和酶性質(zhì)研究 釀酒科技 魏荷芬 韓保安 王田野 等 一株熒光假單胞桿菌的分離鑒定 與反硝化特性 微生物學(xué)通報 蔣繼志 梁延銀 王懷遠(yuǎn) 等 致病疫霉拮抗熒光假單胞桿菌的 篩選及離體防病作用 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 李雙東 曹克強 枯草芽孢桿菌 對馬鈴薯晚疫病菌的 抑菌作用及防病效果 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 胡軍華 周澤楊 藍希鉗 等 假單胞菌 菌株對致病疫霉 的作用 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期