收 稿 日期 2017 11 29 修回日期 2017 12 15 基金項目 國家大宗蔬菜產(chǎn)業(yè)技術體系?？谠囼炚?作者簡介 黃文楓 1975 男 園藝師 E mail ajv993 163 com 通信作者 郭剛 1972 男 副研究員 研究方向 植物病害生物防治 E mail gggchilly 163 com 第 9 卷 第 2 期 熱 帶 生 物 學 報 Vol 9 No 2 2018 年 6 月 JOU NAL OF T OPICAL BIOLOGY Jun 2018 文 章 編號 1674 7054 2018 02 0203 04 海南辣椒白斑病病菌鑒定及田間藥效試驗 黃 文 楓 1 王 敏 2 胡 艷 平 3 馬 伏 寧 4 郭 剛 4 1 海南省農(nóng)業(yè)科學 院 蔬菜研究所 ?？?571100 2 海南省瓜菜育種工程技術研究中心 ?？?571100 3 海南省蔬菜生物學重點實驗室 ?？?571100 4 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院 ?？趯嶒炚??？?571100 摘 要 近年海南辣椒白斑病發(fā)生嚴重 主要危害辣椒葉片 病株葉片布滿白色孔斑 嚴重影響辣椒品質(zhì)和 產(chǎn)量 從甜椒病葉組織分離病菌 經(jīng)過病原菌形態(tài) rDNA 和 ITS 序列鑒定為番茄匐柄霉 Stemphylium lycoper sici 對田間辣椒白斑病進行 4 種殺菌劑 苯甲 氟唑菌酰胺 SC 健攻 肟菌酯 氟吡菌酰胺 SC 露娜森 苯 醚甲環(huán)唑 WG 世高 四霉素 的藥劑防治實驗結果表明 新型混配殺菌劑 12 苯甲 氟唑菌酰胺 SC 健攻 和 42 8 肟菌酯 氟吡菌酰胺 SC 露娜森 具有較好的防效 14 d 的防治效果分別達到 77 51 和 75 01 而 10 苯醚甲環(huán)唑 WG 世高 的防治效果稍差 防效僅為 27 51 關鍵詞 甜椒 真菌病害 殺菌劑 中圖分類號 S 432 文獻標志碼 A DOI 10 15886 j cnki rdswxb 2018 02 012 海南島是我國冬季瓜菜的重要產(chǎn)地 辣 椒 是海南供應大陸及港澳地區(qū)的重要蔬菜之一 辣椒白斑病 自 2015 年起在海南冬季北運辣椒生產(chǎn)上的危害呈蔓延之勢 主要危害辣椒葉片 病株葉片布滿白色的小 斑點 發(fā)展到后期病斑中間穿孔 嚴重影響辣椒的品質(zhì)和產(chǎn)量 辣椒白斑病原菌為番茄匐柄霉 Stemphyli um lycopersici 以菌絲和分生孢子進行傳播 病部產(chǎn)生分生孢子進行再侵染 1 番 茄 匐柄霉菌 S lycop ersici 也是番茄灰葉斑病的主要病原菌之一 近年來 在我國溫室及大田番茄生產(chǎn)中發(fā)生較重 嚴重時能 造成 80 減產(chǎn) 2 苯 甲 氟 唑菌酰胺 SC 健攻 和肟菌酯 氟吡菌酰胺 SC 露娜森 分別是德國巴斯夫 和拜耳公司 2013 年在我國注冊生產(chǎn)的新型混配殺菌劑 健攻是目前殺菌劑市場最新穎和高端的一類產(chǎn) 品 為新一代琥珀酸脫氫酶抑劑 登記作物為黃瓜白粉病 番茄早疫病和蘋果斑點落葉病 3 露 娜 森是新 型果蔬殺菌劑 由氟吡菌酰胺與肟菌酯復配 可防治黃瓜白粉病 炭疽病 靶斑病 番茄葉霉病 早疫病 辣 椒炭疽病和西瓜蔓枯病 4 目 前 番茄葉斑病防治采用的苯醚甲環(huán)唑 10 世高 是瑞士先正達有限公司 1999 年在我國登記的三唑類殺菌劑 防治對象是小麥全蝕病 散黑穗病 紋枯病 5 四 霉素是我國生產(chǎn)的 生物農(nóng)藥梧寧霉素的主要成分 對多種植物病原真菌有抑 菌活性 6 筆者對海南田間辣椒白斑病原菌進 行 分 離鑒定 確定病原后選取上述 4 種殺菌劑進行防治 取得較好的防治效果 為今后辣椒白斑病的鑒定 及藥劑防治提供參考 1 材 料 與方法 1 1 材 料 辣椒 甜椒 病葉采自海南省文昌市東郊椰林辣椒地 1 2 病原菌的分離純化 田間采集的辣椒病葉用 75 酒精進行表面消毒 30 s 滅菌水沖洗干凈 超凈臺 晾干后剪取病健交界組織塊 0 1 0 5 cm 2 放 置 在 PDA 平板上 27 培養(yǎng) 3 5 d 挑取新長的菌絲到空 白 PDA 平板上進行純化培養(yǎng) 1 3 病原菌的形態(tài)觀察 觀 察 在 PDA 上純化培養(yǎng)的病原菌菌落形態(tài) 顯微鏡觀察菌絲形態(tài) 1 4 病原菌的分子鑒定 提取 PDA 平板上的病原真菌 DNA 采用真菌通用引物 ITS1 ITS4 進行 PC 擴 增 7 PC 擴 增 體系 25 L 包括 DNA 模板 1 L 引物各 1 L MIX 12 5 L ddH 2 O 9 5 L PC 擴 增 條 件 95 預變性 5 min 94 變性 45 s 55 退火 45 s 72 延伸 45 s 共 30 個循環(huán) 最后 72 延伸 10 min 4 保存 取 5 L PC 產(chǎn)物 1 瓊脂糖凝膠電泳 送樣華大科技有限公司測序 在 NCBI 進行 BLAST 比較 1 5 藥劑田間防治試驗 設置 5 組處理 每個處理 20 株已生病且葉片白斑量一致的辣椒植株 空白 對照 10 苯醚甲環(huán)唑 WG 世高 瑞士先正達 12 苯甲 氟 唑菌酰胺 SC 健攻 德國巴斯夫 42 8 氟 吡 菌酰胺 肟菌酯 SC 露娜森 德國拜耳 5 四霉 素 自制不吸水鏈霉菌發(fā)酵液提取物 藥劑噴施按照不同藥劑的使用說明稀釋不同濃度 計算用藥量 2017 03 20 人工手動噴霧器施藥 噴 藥后 14 d 2017 04 03 統(tǒng)計噴藥時植物上部 4 片新葉 參考標準進行病級劃分 7 葉面斑點面積占葉 片 總 面積的 5 定為 1 級 6 10 為 3 級 11 20 為 5 級 21 50 為 7 級 51 以上為 9 級 根據(jù)對照區(qū)和防治區(qū)病情指數(shù)差異計算防治效果 按照參考文獻 7 的方法 根據(jù)分級方法中葉斑面積占 整個葉片面積百分比劃分等級 病情指數(shù) 各級病葉數(shù) 相對級數(shù) 調(diào)查總葉數(shù) 9 100 防治 效果 對照區(qū)病情指數(shù) 防治區(qū)疾情指數(shù) 對照區(qū)病情指數(shù) 100 用鄧肯氏新復極差 DM T 法對 試驗數(shù)據(jù)進行差異顯著性統(tǒng)計分析 2 結 果 與分析 2 1 病原菌形態(tài)特征及分子鑒定 辣椒白斑病原菌在 PDA 培養(yǎng)基上生長緩慢 外部菌絲為灰白色 中 間 菌 絲在培養(yǎng)基里的灰黑色 圖 1 菌落生長到 7 d 后直徑不再擴大 培養(yǎng)皿在室內(nèi)放置 1 個月仍觀察不 到孢子產(chǎn)生 挑取菌絲在顯微鏡下觀察菌絲具有隔斷 圖 2 提取病原菌絲 DNA 進行 ITS 序列擴增 圖 3 測序結果 546 bp 堿基與 Stemphylium lycopersici GenBank KX858848 1 相似度達到 99 番茄匍柄 霉 S lycopersici Enjoji W Yamam 屬于子囊菌門 Ascomycota 盤菌亞門 Pezizomycotina 座囊菌綱 Dothideomycetes 格孢腔菌目 Pleosporales 匐柄霉屬 Stemphylium 真菌 危害番茄葉片造成番茄葉斑 病 在辣椒葉片上危害形成白斑 認定病原菌為辣椒白斑病菌 圖 3 PCR 擴增電泳圖 Fig 3 Electrophoresis of PCR product 圖 1 PDA 平板上病原菌菌落 Fig 1 Pathogenic colonies on PDA plate 圖 2 菌絲顯微照 Fig 2 Micrograph of mycelia 2 2 辣椒白斑病田間 癥 狀 辣椒白斑病菌在辣椒葉上出現(xiàn)白色的小斑點 發(fā)展到后期病斑中間穿孔 圖 4 田間辣椒植株中下部老葉上的白色斑點直徑多為 1 5 mm 對著陽光可看到透光白色斑點 圖 5 在辣椒底部葉片上通常還有一些形狀不規(guī)則的褐色葉斑 椒農(nóng)稱該褐色葉斑病為辣椒瘡痂病 海南 3 月份天氣潮濕多雨加重了辣椒白斑病的病情 402 熱 帶 生 物 學 報 2018 年 圖 4 田間辣椒葉片病狀 圖 5 辣椒病葉透光孔狀 Fig 5 Holes of the infected leaves Fig 4 Symptoms of gray leaf spot disease on the leaves in the field 2 3 田間藥劑防治效果 田 間 噴施 5 種處理的防治效果 表 1 表明 健攻效果最好 14 d 防治效果達到 77 51 露娜森和健攻效果接近 達到 75 01 自制藥劑四霉素防治效果為 45 01 世高效果最差為 27 51 辣椒葉斑病一旦發(fā)病就很難防治 世高長期應用可能已經(jīng)產(chǎn)生抗藥性 單一作用方式的藥劑作 用效果較多種作用方式的混配藥劑效果差 表 1 防治甜椒白斑病田間藥效試驗結果 Tab 1 Controlling effect of fungicides against gray leaf spot disease on sweet pepper 藥 劑 Fungicide 用藥量 Dosage g a i hm 2 平 均 病情指數(shù) Average disease index 防治效果 Controling effect 位次 rank 12 苯 甲 氟 唑菌酰胺 SC 健攻 12 difenoconazole fluxapyroxad SC 108 12 85 77 51a 1 42 8 氟 吡 菌酰胺 肟菌酯 SC 露娜森 42 8 trifloxystrobin fluopyram SC 128 14 28 75 01a 2 5 四霉素 5 tetramycin 270 31 42 45 01b 3 10 苯醚甲環(huán)唑 WG 世高 10 difenoconazole WG 75 41 42 27 51b 4 空白 Blank control 57 14 注 同列數(shù)據(jù)后相同字母代表數(shù)據(jù)間無顯著差異 P 0 05 Note The same letters in the column indicates no significant difference at a level of P 0 05 3 討 論 辣椒白斑病的病原菌鑒定為番茄匐柄霉菌 S lycopersici 該病原菌不僅危害辣椒 還危害木瓜果實 茄子和白何首烏葉片 8 10 也是番茄灰葉斑病的主要病原之一 辣 椒 白斑病的田間藥劑防治試驗結果表 明 2 種新型混配殺菌劑健攻和露娜森的防治效果較單一藥劑世高的效果好 混配劑結合 2 種藥劑作用效 果更佳 健攻中的氟唑菌酰胺是琥珀酸脫抑制劑 具有新的殺菌機理 而且氟唑菌酰胺和苯醚甲環(huán)唑都具有 強的滲透性內(nèi)吸傳導和向頂傳導性 3 露娜森成分之一氟吡菌酰胺是內(nèi)吸 性 殺菌劑 具有向上傳導性 對于同類作用機理的殺菌劑無交互抗性 其另一主成分肟菌酯具有薄層穿透的特點 4 苯醚甲環(huán)唑是甾 醇脫甲基化抑制劑 對病原菌孢子形成和分生孢子 成熟有抑制作用 但其作用位點單一 多 年使用易出現(xiàn) 抗性 11 番 茄 匍柄霉 S lycopersici 在氣溫 20 25 及連續(xù)陰雨后的多濕條件易發(fā)病 在番茄 辣椒和茄子葉 502第 2 期 黃 文 楓等 海南辣椒白斑病病菌鑒定及田間藥效試驗 片發(fā)病初期選用防效好的殺菌劑 一般要多次噴藥 并輪換使用不同作用機制的殺菌劑進行防治 結 合 農(nóng) 業(yè)栽培措施 如合理密植 增施有機肥和磷鉀肥 以控制病害減少經(jīng)濟損失 參 考 文獻 1 謝 玉 前 辣椒白斑病危害癥狀辨析及其防治方法 J 園藝與種苗 2016 4 9 10 2 劉安 敏 孫家棟 陶秀珍 等 保護地番茄灰葉斑病的發(fā)生與綜合防治 J 中國植保導刊 2004 4 22 23 3 余露 巴斯夫新推革命性殺菌劑吡唑時代進入氟唑時代 J 農(nóng) 藥市場信息 2016 14 37 4 拜耳作物科學公司 中國 有限公司 殺菌劑新秀 露娜森 J 四川農(nóng)業(yè)科技 2014 3 41 5 黃露 何 芬 秦智慧 等 殺菌劑對獼猴桃潰瘍病菌的室內(nèi)毒力測定及田間防效 J 中國南方果樹 2017 2 137 140 143 6 郭鵬 豪 劉秀麗 崔穎鵬 等 真菌通用引物 ITS1 和 ITS4 在絲狀真菌鑒定中的價值評價 J 中國微生態(tài)學雜志 2013 8 922 924 7 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所生測室 農(nóng)藥田間藥效試驗準 二 M 北京 中國標準出版社 2000 166 169 8 Chau K F Postharvest fruit rot of papaya caused by Stemphylium lycopersici J Plant Disease 1983 67 11 1279 1281 9 Yang H H Xu X Y Zhao T T et al First report of Stemphylium lycopersici causing gray leaf spot on eggplant in China J Plant Disease 2017 101 5 834 10 Hong S K Choi H W Lee Y K et al Leaf spot and stem rot on Wilford swallowwort caused by Stemphylium lycopersici in Korea J Mycobiology 2012 40 4 268 271 11 孫 娟 苯醚甲環(huán)唑的市場現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢 J 今 日農(nóng)藥 2010 2 44 45 Identification and Field Fungicide Efficacy Test of Gray Leaf Spot Disease on Sweet Pepper Caused by Stemphylium lycopersici in Hainan Province Huang Wenfeng 1 Wang Min 2 Hu Yan ping 3 Ma Fu ning 4 Guo Gang 4 1 HainanVegetable esearch Institute Hainan Academy of Agricultural Sciences Haikou Hainan 571100 China 2 Hainan Engineering and Technology esearch Center for Breeding of Melons and Vegetables Haikou Hainan 571100 China 3 Hainan Key Laboratory for Biology of Vegetables Haikou Hainan 571100 China 4 Haikou Experimental Station Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Haikou Hainan 571100 China Abstract In recent years gray leaf spot disease occurred seriously on sweet pepper in Hainan and mainly infec ted leaves which were covered with gray perforated lesions giving serious impact on the quality and yield of sweet pepper Pathogens were isolated from the leaf tissue of the sweet pepper infected with the gray leaf spot and identified as Stemphylium lycopersici based on their morphology and rDNA ITS sequence A field trial was conducted to control the gray leaf spot disease by using 4fungicides i e difenoconazole fluxapyroxad trifloxys trobin fluopyram tetramycin and difenoconazole The results showed that 2 fungicides 12 difenoconazole fluxapyroxad SC Jiangong and 42 8 Trifloxystrobin fluopyram SC Lunaseng had a good effect on the control of the gray leaf spot on sweet pepper in the field with their respective controlling effect of 77 51 and 75 01 at day 14 The controlling effect of 10 difenoconazole WG Shigao was slightly lower only 27 51 Keywords sweet pepper fungal disease fungicide 責 任 編輯 葉 靜 602 熱 帶 生 物 學 報 2018 年