收稿日期 2019 07 24 基金項目 上海市花卉產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 滬農(nóng)科產(chǎn)字 2019 第8號 作者簡介 孫翊 1985 女 博士 助理研究員 從事觀賞植物資源評價與育種研究 E mail gnsuny 163 com 通信作者 E mail saasflower 163 com 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報 2020 36 6 39 43 http www nyxb sh cn Acta Agriculturae Shanghai DOI 10 15955 j issn1000 3924 2020 06 08 孫翊 殷麗青 張永春 等 礬根葉柄和葉片不定芽高效再生體系優(yōu)化 J 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報 2020 36 6 39 43 礬根葉柄和葉片不定芽高效再生體系優(yōu)化 孫 翊1 殷麗青1 張永春1 庹曉慶1 付正龍2 田 莉1 3 1上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院林木果樹研究所 上海201403 2上海安康園藝工程有限公司 上海201111 3長江大學(xué)園藝園林學(xué)院 荊州434025 摘 要 以礬根 巴黎 和 閃秋 作為試驗材料 分別以葉柄和葉片作為外植體 研究不同暗培養(yǎng)時間以及 不同種類和濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑對礬根不定芽再生的影響 結(jié)果表明 礬根再生的最佳暗培養(yǎng)時間為21 d 礬根葉片和葉柄產(chǎn)生不定芽的最適培養(yǎng)基成分分別為MS 0 5 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA和MS 0 2 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA 礬根 巴黎 的不定芽再生率高達(dá)89 58 不定芽數(shù)為28 50個 礬根 閃秋 的不定芽再 生率可達(dá)75 00 不定芽數(shù)為21 25個 研究建立的礬根直接再生方法取材范圍更廣 且更為簡便高效 能夠 為礬根種苗的快速繁殖 新品種的培育以及利用基因工程手段進(jìn)行礬根性狀的改良提供技術(shù)支持 關(guān)鍵詞 礬根 再生體系 葉片 葉柄 優(yōu)化 中圖分類號 S682 36 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1000 3924 2020 06 039 05 Optimization of the efficient regeneration system of adventitious shoots induced from petioles and leaf blades of Heuchera spp SUN Yi1 YIN Liqing1 ZHANG Yongchun1 TUO Xiaoqing1 FU Zhenglong2 TIAN Li1 3 1 Forest and Fruit Tree Research Institute Shanghai Academy of Agricultural Sciences Shanghai 201403 China 2 Shanghai Ankang Horticulture Engineering Co Ltd Shanghai 201111 China 3 College of Horticulture and Gardening Yangtze University Jingzhou 434025 China Abstract Using Heuchera Paris and H Autumn Bride as experimental varieties petioles and leaf blades were used as explants of initial culture respectively The effects of different periods of darkness culture and different kinds and concentrations of plant growth regulators on the regeneration of adventitious shoots of H spp were studied Results showed that the best darkness culture time for regeneration was 21 days and the optimum medium of adventitious shoots induction were MS 0 5 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA and MS 0 2 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA for petioles and leaf blades respectively Under the optimal treatments established the regeneration rate of adventitious shoots of H Paris was up to 89 58 and the number of adventitious shoots was 28 50 While that of H Paris were 75 00 and 21 25 In this study a more convenient and effective direct regeneration system of H spp was established which could provide important technical support for the rapid propagation of seedlings new varieties cultivations and the improvement of traits by genetic engineering Key words Heuchera spp Regeneration system Leaf blades Petioles Optimization 礬根 Heuchera spp 是虎耳草科礬根屬 Heuchera 植物的統(tǒng)稱 原產(chǎn)于美洲中部 為宿根花卉類群 其花葉兼美 葉色亮麗且顏色豐富 是不可多得的新優(yōu)彩葉地被觀賞植物 可作為邊飾 叢植 地被 盆栽 等材料應(yīng)用 1 也可用于土壤修復(fù) 2 在我國花卉市場上關(guān)注度不斷上升 目前 大部分礬根品種以無性 繁殖方式進(jìn)行種苗生產(chǎn) 3 分株繁殖和扦插繁殖周期長 繁殖系數(shù)低 受季節(jié)影響大 4 組織培養(yǎng)技術(shù) 是現(xiàn)今規(guī)?；庇\根種苗的主要方法 礬根的組培快繁技術(shù)絕大部分以芽作為起始擴繁的材料 5 8 孫翊 等 礬根葉柄和葉片不定芽高效再生體系優(yōu)化 存在取材困難 數(shù)量較少 對母株破壞性大等問題 已有的研究顯示 礬根葉柄和葉片經(jīng)誘導(dǎo)均可獲得愈 傷組織 然而兩者的誘導(dǎo)率不高 分別為19 和11 9 利用礬根葉柄作為起始擴繁材料建立礬根離體 再生體系 不定芽分化率較高 達(dá)81 25 10 然而該方法需經(jīng)過愈傷組織階段 且期間需要更換培養(yǎng)基 操作較為復(fù)雜 植物高效再生體系的建立是成功進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ) 能夠為深入開展植物遺傳機理研究和品質(zhì)改 良提供重要支撐 11 本研究以礬根無菌苗的葉柄和葉片作為外植體 通過對培養(yǎng)條件和植物生長調(diào)節(jié)劑 濃度進(jìn)行篩選 直接誘導(dǎo)并分化獲得不定芽 旨在建立一種更為簡便 經(jīng)濟且有效的礬根直接再生體系 為礬根種苗的快速繁殖及新品種的培育奠定良好基礎(chǔ) 1 材料與方法 1 1 試驗材料 以礬根 巴黎 和 閃秋 無菌苗的葉柄和葉片為外植體 將葉柄剪成0 8 1 cm長 葉片剪成約 0 5 cm 0 5 cm 用于后續(xù)接種 1 2 試驗方法 將外植體接種于培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo) 每皿接種12個外植體 培養(yǎng)基成分 以MS為基本培養(yǎng)基 均添 加3 蔗糖 0 6 瓊脂粉 0 1 mg L萘乙酸 Naphthylacetic acid NAA 并分別添加不同濃度的噻重氮苯 基脲 Thidiazuron TDZ 和6 芐氨基嘌呤 6 Benzylaminopurine 6 BA 所有培養(yǎng)基pH均為5 8 并經(jīng) 121 0 11 MPa的高溫 高壓滅菌20 min 培養(yǎng)室溫度為 24 2 先進(jìn)行暗培養(yǎng) 再轉(zhuǎn)移至光照強 度為 35 3 mol m2 s 光照12 h 黑暗12 h條件下培養(yǎng) 1 2 1 暗培養(yǎng)時間的篩選 將外植體接種于MS 0 2 mg L TDZ 0 1 mg L NAA培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng) 暗培養(yǎng)時間設(shè)置0 d 7 d 14 d 21 d和28 d共5個處理 之后進(jìn)行光照培養(yǎng) 每個處理重復(fù)4次 接種50 d后統(tǒng)計不定芽再生率和 不定芽數(shù) 不定芽再生率 分化獲得有效不定芽的外植體數(shù) 接種的外植體數(shù) 100 不定芽數(shù)為每皿 12個外植體總計分化獲得的有效不定芽數(shù)量 1 2 2 植物生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度的篩選 以MS 0 1 mg L NAA為基礎(chǔ) 分別添加不同質(zhì)量濃度的TDZ 0 1 mg L 0 2 mg L 0 5 mg L 1 0 mg L 或者6 BA 0 2 mg L 0 5 mg L 1 0 mg L 2 0 mg L 配制培養(yǎng)基 將外植體接種于其上進(jìn)行培 養(yǎng) 暗培養(yǎng)時間為21 d 之后進(jìn)行光照培養(yǎng) 每個處理重復(fù)4次 30 d后統(tǒng)計不定芽再生率和不定芽數(shù) 1 3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 分析采用SPSS 17 0軟件進(jìn)行方差分析 ANOVA 和多重比較分析 Duncan 顯著水平P 0 05 表1 不同暗培養(yǎng)時間對礬根葉片不定芽再生的影響 Table 1 Effects of different periods of darkness culture on the adventitious shoot regeneration from leaf blades of Heuchera spp 暗培養(yǎng) 時間 d 不定芽再生率 巴黎 閃秋 不定芽數(shù) 個 巴黎 閃秋 0 20 83 4 81 b 6 25 4 17 d 3 25 0 96 c 0 75 0 50 d 7 25 00 6 80 b 27 08 4 17 c 4 25 0 96 c 3 75 0 96 c 14 39 58 7 98 a 37 50 4 81 b 6 25 1 89 b 6 50 1 29 b 21 45 83 4 81 a 45 83 4 81 a 8 50 0 58 a 7 75 0 96 a 28 37 50 4 81 a 29 17 8 33 c 6 75 0 96 b 3 50 1 00 c 注 數(shù)據(jù)為平均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差 同列數(shù)據(jù)不同小寫字母表示差異顯著 P 0 05 下同 2 結(jié)果與分析 2 1 不同暗培養(yǎng)時間對礬根葉柄和葉片不定芽再生的影響 在不同的暗培養(yǎng)時間條件下 礬根 巴黎 和 閃秋 的葉片和葉柄均能夠產(chǎn)生不定芽 不定芽再生率 和不定芽數(shù)在處理間具有明顯差異 表1和表2 隨著暗培養(yǎng)時間的增加 礬根不定芽再生率和不定芽 數(shù)均呈現(xiàn)出先升高再下降的趨勢 均在暗培養(yǎng)21 d時達(dá)到峰值 而品種間具有一定的差異性 巴黎 的 再生情況優(yōu)于 閃秋 表現(xiàn)為前者的不定芽再生率和不定芽數(shù)總體高于后者 此外 在不同外植體材料 04 上 海 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報 間 巴黎 葉柄的再生情況優(yōu)于葉片 而 閃秋 葉片的再生情況優(yōu)于葉柄 巴黎 的不定芽再生率最高 為56 25 閃秋 為45 83 巴黎 的不定芽數(shù)最高為9 75個 閃秋 為7 75個 表2 不同暗培養(yǎng)時間對礬根葉柄不定芽再生的影響 Table 2 Effects of different periods of darkness culture on the adventitious shoot regeneration from petioles of H spp 暗培養(yǎng) 時間 d 不定芽再生率 巴黎 閃秋 不定芽數(shù) 個 巴黎 閃秋 0 18 75 12 50 c 12 50 4 81 b 2 25 1 50 cd 1 50 0 58 b 7 29 17 4 81 bc 25 00 6 80 a 4 00 0 82 bc 3 25 0 50 a 14 37 50 4 81 b 27 08 4 17 a 5 00 0 82 b 3 50 0 58 a 21 56 25 7 98 a 29 17 4 81 a 9 75 2 22 a 3 75 0 96 a 28 6 25 4 17 d 12 50 4 81 b 0 75 0 50 d 1 75 0 50 b 2 2 植物生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度對礬根葉柄和葉片不定芽再生的影響 以礬根 巴黎 和 閃秋 葉片和葉柄作為外植體 在各自適宜培養(yǎng)基的條件下 葉片為MS 0 5 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA 葉柄為MS 0 2 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA 光照培養(yǎng)10 d左右 即培養(yǎng)30 d左 右 外植體傷口附近均能夠出現(xiàn)淺綠色的凸起 表明外植體已經(jīng)開始進(jìn)行不定芽的分化 經(jīng)過50 d左右 的培養(yǎng) 分化獲得的不定芽形態(tài)十分明顯 圖1 圖2 A B C D A葉片培養(yǎng)30 d B葉柄培養(yǎng)30 d C葉片培養(yǎng)50 d D葉柄培養(yǎng)50 d 圖1 礬根 巴黎 不定芽再生情況 Fig 1 The adventitious shoot regeneration of Heuchera Paris A B C D A葉片培養(yǎng)30 d B葉柄培養(yǎng)30 d的 C葉片培養(yǎng)50 d D葉柄培養(yǎng)50 d 圖2 礬根 閃秋 不定芽再生情況 Fig 2 The adventitious shoot regeneration of Heuchera H Autumn Bride 表3 不同濃度TDZ與6 BA對礬根葉片不定芽再生的影響 Table 3 Effects of different concentrations of TDZ and 6 BA on the adventitious shoot regeneration from leaf blades of H spp 質(zhì)量濃度 mg L 1 不定芽再生率 巴黎 閃秋 不定芽數(shù) 個 巴黎 閃秋 TDZ 0 1 37 50 4 81 b 31 25 7 98 b 6 75 0 96 b 5 00 0 82 b 0 2 47 92 4 17 a 43 75 4 17 a 8 00 0 82 a 8 25 0 50 a 0 5 6 25 4 17 c 37 50 4 81 ab 1 00 0 82 c 7 25 1 26 a 1 0 0 00 0 00 d 0 00 0 00 c 0 00 0 00 c 0 00 0 00 c 6 BA 0 2 56 25 10 49 a 66 67 11 79 a 16 75 4 03 a 16 75 3 77 a 0 5 62 50 14 43 a 75 00 6 80 a 20 50 4 04 a 21 25 3 40 a 1 0 60 42 23 94 a 70 83 10 76 a 19 75 5 80 a 18 25 1 71 a 2 0 58 33 6 80 a 58 33 13 61 a 16 50 3 11 a 11 00 3 37 b 由表3可知 隨著植物生長調(diào)節(jié)劑濃度的增加 礬根葉片不定芽再生率和不定芽數(shù)均呈現(xiàn)先上升后 下降的趨勢 低濃度處理效果優(yōu)于高濃度 而6 BA的處理效果要優(yōu)于TDZ 前者處理的 巴黎 平均不定 芽再生率為59 38 閃秋 為67 71 遠(yuǎn)高于后者的22 92 和28 13 兩個品種的葉片再生不定芽 情況均在0 5 mg L 6 BA的培養(yǎng)基上表現(xiàn)最佳 礬根的不定芽再生率達(dá)到最高 巴黎 為62 50 閃 秋 為75 00 與此同時 不定芽數(shù)也最多 分別為20 50個和21 25個 綜上 MS 0 5 mg L 6 BA 14 孫翊 等 礬根葉柄和葉片不定芽高效再生體系優(yōu)化 0 1 mg L NAA是礬根葉片產(chǎn)生不定芽的最適培養(yǎng)基 由表4可知 隨著TDZ及6 BA濃度的增加 礬根葉柄不定芽再生率和不定芽數(shù)均呈現(xiàn)下降趨勢 且 6 BA的處理效果要優(yōu)于TDZ 前者處理的 巴黎 平均不定芽再生率為81 25 閃秋 為59 90 遠(yuǎn)高 于后者處理的34 38 和14 06 在0 2 mg L 6 BA的培養(yǎng)基上 礬根 巴黎 和 閃秋 的葉柄再生不定 芽情況表現(xiàn)最佳 分別為89 58 和77 08 不定芽數(shù)也最多 分別為28 50個和12 50個 巴黎 的再 生情況略優(yōu)于 閃秋 綜上 MS 0 2 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA是礬根葉柄產(chǎn)生不定芽的最適培 養(yǎng)基 表4 不同濃度TDZ與6 BA對礬根葉柄不定芽再生的影響 Table 4 Effects of TDZ and 6 BA concentrations on the adventitious shoot regeneration from petioles of H spp 質(zhì)量濃度 mg L 1 不定芽再生率 巴黎 閃秋 不定芽數(shù) 個 巴黎 閃秋 TDZ 0 1 79 17 10 76 a 22 92 4 17 a 14 50 2 65 a 3 00 0 82 a 0 2 56 25 7 98 b 25 00 6 80 a 10 25 1 71 b 3 25 0 96 a 0 5 2 08 4 17 c 6 25 4 17 b 0 25 0 50 c 0 75 0 50 b 1 0 0 00 0 00 c 2 08 4 17 b 0 00 0 00 c 0 25 0 50 b 6 BA 0 2 89 58 7 98 a 77 08 4 17 a 28 50 5 69 a 12 50 2 38 a 0 5 85 42 4 17 a 62 50 4 81 b 27 25 8 85 a 10 50 1 29 a 1 0 87 50 8 33 a 72 92 12 50 ab 28 00 5 35 a 10 00 2 16 a 2 0 62 50 4 81 b 27 08 7 98 c 13 75 1 26 b 3 25 0 96 b 3 討論 不同基因型礬根屬植物愈傷組織誘導(dǎo)效果不同 紅花礬根 H sanguinea 葉柄在MS 4 40 mol L 6 BA 0 19 mol L NAA培養(yǎng)基上的愈傷組織誘導(dǎo)率最高可達(dá)90 12 而礬根 H micrantha 葉柄在 MS 6 BA 0 5 mg L的培養(yǎng)基上愈傷組織誘導(dǎo)率僅為19 9 田莉等 10 以礬根 巴黎 葉柄作為起始擴 繁材料 經(jīng)過60 d左右的誘導(dǎo)及分化培養(yǎng) 獲得的不定芽分化率為81 25 相對較低 且操作復(fù)雜 污染 幾率大 本文建立的方法適用于兩種不同的礬根品種 其外植體在同一種培養(yǎng)基上經(jīng)過50 d左右的培養(yǎng) 可獲得不定芽 是今后進(jìn)行礬根屬植物不定芽再生研究的首選方法之一 光照對植物器官的形成具有誘導(dǎo)作用 外植體在暗培養(yǎng)下進(jìn)行脫分化 在光照培養(yǎng)下進(jìn)行再分化 最 終可形成愈傷組織和不定芽 13 14 在蝴蝶蘭 棗樹等的研究中發(fā)現(xiàn) 適當(dāng)長度的暗培養(yǎng)有利于不定芽的 再生 15 16 本研究結(jié)果表明 暗培養(yǎng)時間過短或過長均不利于礬根不定芽再生 21 d是礬根不定芽再生 的最佳暗培養(yǎng)時間 植物生長調(diào)節(jié)劑的種類 濃度與配比是調(diào)節(jié)外植體形成愈傷組織或不定芽的重要影響因素 17 18 田 莉等 10 研究顯示 低濃度的NAA更適宜礬根 巴黎 愈傷組織的誘導(dǎo) 且在MS 0 5 mg L 6 BA 0 5 mg L NAA培養(yǎng)基上僅產(chǎn)生愈傷組織 無法分化獲得不定芽 10 鄒清成等 19 利用礬根葉片作為外植 體 在MS 2 0 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA培養(yǎng)基上誘導(dǎo)獲得愈傷并進(jìn)一步形成不定芽 分化率為 68 67 相對較低 礬根 巴黎 和 閃秋 在MS 2 0 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA培養(yǎng)基上 誘導(dǎo)率不高 的同時還會出現(xiàn)一定程度的玻璃化現(xiàn)象 會對后續(xù)獲得種苗的質(zhì)量產(chǎn)生不利影響 本研究結(jié)果表明 多 種植物生長調(diào)節(jié)劑的復(fù)合使用 能夠達(dá)到在同一種培養(yǎng)基上完成脫分化和再分化過程的效果 使礬根獲 得較高的不定芽再生率 培養(yǎng)基中添加的NAA能夠與細(xì)胞分裂素相互作用促進(jìn)礬根愈傷組織的誘導(dǎo) 添加TDZ或6 BA能夠有效促進(jìn)礬根不定芽的分化 但是 若植物生長調(diào)節(jié)劑濃度過低 則不能夠有效促 進(jìn)外植體再生 濃度過高 則易產(chǎn)生玻璃化問題 1 本研究建立的礬根不定芽再生方法 利用含有較低濃 度植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基 結(jié)合光照條件的變化 21 d暗培養(yǎng)和30 d光照培養(yǎng) 葉柄和葉片兩種外植 體上均再生出優(yōu)質(zhì)的礬根不定芽 該方法在獲得較高不定芽再生率的同時解決了不定芽的玻璃化問題 并可減少變異產(chǎn)生 不定芽再生效果良好 綜上 本研究以葉柄和葉片作為外植體 通過開展不同暗培養(yǎng)時間以及不同植物生長調(diào)節(jié)劑種類和 濃度對礬根不定芽再生影響的研究 建立了一種取材范圍更廣且更為簡便 經(jīng)濟且有效的礬根不定芽再 生方法 該方法可以克服以芽作為起始擴繁材料的局限 進(jìn)一步擴大了外植體取材范圍 提高礬根的不 24 上 海 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報 定芽再生率 礬根 巴黎 高達(dá)89 58 在同一種培養(yǎng)基上經(jīng)誘導(dǎo)和分化直接再生獲得不定芽 有效簡 化操作并節(jié)約生產(chǎn)成本 同時 優(yōu)化了礬根不定芽高效再生體系 能夠為種苗的快速繁殖 新品種培育以 及利用基因工程手段進(jìn)行性狀的改良提供良好的技術(shù)支持 本研究顯示 礬根葉柄比葉片更容易誘導(dǎo)產(chǎn) 生不定芽 但在相同外植體個數(shù)下獲得的不定芽數(shù)量在不同品種間具有差異 針對特定礬根品種 可對 其葉柄和葉片誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽數(shù)量進(jìn)行比較 從而確定該品種不定芽再生的最佳外植體材料 參 考 文 獻(xiàn) 1 孫翊 殷麗青 支月娥 等 礬根 紫色宮殿 離體培養(yǎng)與快繁技術(shù)研究 J 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報 2019 35 3 85 89 2 SAKOL G MIROSLAWSKI J BREWCZYNSKI P Z Efficient Pb translocation by Purple Petticoats cv of Heuchera L from contaminated soil in a coal 6 Basin J Pol J Environ Stud 2014 23 6 2199 2205 3 殷麗青 謝苗苗 孫翊 等 彩葉植物礬根的研究進(jìn)展 J 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報 2018 34 1 138 143 4 李春輝 黃少玲 郭翔 等 我國礬根研究進(jìn)展 J 安徽農(nóng)學(xué)通報 2017 23 15 109 111 134 5 孫國峰 張金政 吳東啟 礬根雜種 銀王子 的組織培養(yǎng)和快速繁殖 J 植物生理學(xué)報 2007 43 3 500 6 陳宏 唐瑩 施月歡 等 礬根的組織培養(yǎng)與快速繁殖 J 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報 2011 27 4 80 82 7 高燕 宋垚 葉康 等 礬根歐布西迪昂組培快繁技術(shù) J 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015 1 6 895 898 8 李川 封夢 張浩 四種不同礬根品種組培快繁技術(shù)研究 J 安徽科技學(xué)院學(xué)報 2019 33 2 39 43 9 陳錦 楊侃侃 王志偉 等 美洲礬根愈傷組織誘導(dǎo)及其快繁技術(shù)體系研究 J 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017 56 5 973 975 10 田莉 孫翊 張永春 等 礬根葉柄愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生技術(shù) J 分子植物育種 2019 17 14 4769 4775 11 黃帆 李俊 劉磊 等 無芒雀麥組織培養(yǎng)再生體系的建立 J 植物生理學(xué)報 2018 54 5 783 789 12 HOSOKI T KAJINO E Shoot regeneration from petioles of coral bells Heuchera sanguine Engelm cultured in vitro and subsequent planting and flowering ex vitro J Vitro Cellular Developmental Biology Plant 2003 39 2 135 138 13 楊秀蓮 胡蝶 宋佳妮 等 海州常山葉片愈傷組織誘導(dǎo)及不定芽再生 J 東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報 2018 46 7 28 32 101 14 張旭紅 王頔 梁振旭 等 歐洲百合愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生體系的建立 J 植物學(xué)報 2018 53 6 840 847 15 陸順教 易雙雙 任羽 等 TDZ和暗培養(yǎng)對蝴蝶蘭葉片不定芽發(fā)生的影響 J 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015 35 7 22 26 35 16 HOU L WANG Y CUI Y H et al Optimisation of a highly efficient shoot regeneration system using leaf explants of Chinese jujube Ziziphus jujuba Mill by response surface methodology J The Journal of Horticultural Science and Biotechnology 2018 93 3 289 295 17 吳麗芳 魏曉梅 陸偉東 白刺花胚性愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生體系建立 J 植物生理學(xué)報 2019 55 2 218 224 18 肖望 涂紅艷 張愛玲 白姜花胚性愈傷組織的誘導(dǎo)與植株再生體系的建立 J 園藝學(xué)報 2016 43 8 1605 1612 19 鄒清成 馬廣瑩 史小華 等 礬根葉片離體快繁及工廠化生產(chǎn)技術(shù)研究 J 分子植物育種 2018 16 9 2920 2925 責(zé)任編輯 郭嬌 34