不 同 培 養(yǎng) 基 對 鐵 皮 石 斛 種 子 萌 發(fā) 和 壯 苗 生 根 的 影 響 馬 盼 1 趙 萌 2 王 寶 玲 3 1 濟 南 市 農(nóng) 業(yè) 科 學 研 究 院 山 東 濟 南2 50316 2 濟 南 市 農(nóng) 業(yè) 綜 合 行 政 執(zhí) 法 支 隊 山 東 濟 南25002 1 3 濟 南 市 農(nóng) 產(chǎn) 品 質(zhì) 量 檢 測 中 心 山 東 濟 南2 50316 摘要 以 鐵皮石斛種子 為材料 通過組織培養(yǎng)技術(shù) 不 添加植物 生長 調(diào) 節(jié) 劑 直 接 得 到 叢 生 芽 并 比 較 天 然 有 機 物 活 性 炭 等 添 加 物 對 鐵 皮石斛叢 生芽壯苗生根 的影響 優(yōu)化鐵皮石斛組培快繁 技術(shù)體系 結(jié)果顯 示 鐵 皮 石 斛 種 子 分 化 最 佳 培 養(yǎng) 基 為MS 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 香 蕉泥 芽苗的壯苗生根試驗 中 最佳培養(yǎng)基為1 2MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊脂 80g L 香 蕉泥 0 5g L 活 性炭 有 利于 芽苗 的壯苗和生根 該研究可以一次性 直 接 得 到 優(yōu) 質(zhì) 鐵 皮 石 斛 幼 苗 減 少 了 試 驗 步 驟 節(jié) 省 人 工 降 低 成本 提高了試驗 效率 促進原球莖增殖 提高分化率 促進壯苗 和生 根 可為 鐵皮 石斛 快繁 和大 規(guī)模 化生 產(chǎn)提 供技 術(shù)支 持 關(guān)鍵詞 鐵皮石斛 培養(yǎng)基 種子萌發(fā) 壯苗生根 影響 中圖分類 號 S567 文獻標識碼 A 文章編號 051 7 661 1 2 02 1 01 01 54 03 doi 1 0 3969 j issn 051 7 661 1 2 02 1 01 041 開 放科學 資源 服務(wù) 標識 碼 OSID EffectsofDifferentMediaonSeedGerminationandStrongSeedlingRootingof D e n d r o b i u m c a n d i d u m MAPan 1 ZHAOMeng 2 WANGBao ling 3 1 JinanAcademyofAgriculturalSciences Jinan Shandong2 5031 6 2 JinanIntegratedAg riculturalAdministrativeLawEnforcementDetachment Jinan Shandong2 5002 1 3 TestCenterforAgri ProductQualityofJinan Jinan Shandong2 5031 6 Abstract The D e n d r o b i u m c a n d i d u mseedswereusedastestmaterialstogettheclusterbudsdirectlywithoutaddingtheplantgrowthregula tor Theeffectofnaturalorganicmatterandactivatedcarbonwascomparedontheadventitiousbudsproliferationandshootsstrengtheningand rootsinduction Theresultsshowedthatthebestmediumforseeddifferentiationof D e n d r o b i u m c a n d i d u mwasMS 6g Lagar 2 0g Lsugar 80g Lbananamud Intherootingtestofstrongseedlings thebestmediumwas1 2MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g Lsucrose 6g Lagar 80g Lbananamud 0 5g Lactivatedcarbon whichwasbeneficialtothestrongseedlingandrooting Theseedlingsofhighquali ty D e n d r o b i u m c a n d i d u mcanbeobtaineddirectlyatonetime whichreducetheexperimentalsteps savelabor reducethecost improvetheef ficiencyoftheexperiment promotetheproliferationoftheoriginalbulbs improvetherateofdifferentiation andpromotethestrongseedlingand rooting Itcanprovidetechnicalsupportfortherapidandlarge scaleproductionof D e n d r o b i u m c a n d i d u m Keywords D e n d r o b i u m c a n d i d u m Medium Seedgermination Strongseedlingrooting Effect 基金 項 目 濟南市 農(nóng) 業(yè)科學研 究院預研項 目 zy2 01 702 yy2 01 806 作者 簡 介 馬盼 1 983 女 山 東 濱 州 人 助 理 研 究 員 博 士 從 事 土 壤 改良 鐵皮石 斛栽培 研究 收稿 日 期 2 02 0 05 06 鐵 皮 石 斛 D e n d r o b i u m c a n d i d u m 又 名 鐵 皮 蘭 黑 節(jié) 草 為蘭 科 Orchidaceae 石 斛 屬 D e n d r o b i u m 植 物 全 球 約 有 1500 種 主 要分 布 于亞 洲 的熱帶 和 太 平 洋 島 嶼 既 是 觀 賞 植 物 又 是 十 分 重 要 的 藥 用 植 物 是 我 國 傳 統(tǒng) 名 貴 藥 材 被 列 為 國家 重點保 護藥 用 植 物之 一 我國有76 種 其中 可 作 藥 用 的 約有40 種 主 要 分布 于 我國 廣 西 和南 方沿 海 各 省 具 有 強 陰 益精 補 腎 益力 潤 肺 止 咳 明 目 和 延 年 益 壽 的 功 效 1 2 鐵 皮石 斛的蒴 果中 含 有 幾萬 到十幾 萬 粒 種 子 鐵 皮 石 斛 的 種 子 細 如 粉 塵 沒 有 胚 乳 在 自 然 條 件 下 較 難 存 活 從 而 導 致 鐵 皮 石 斛 的 自 然 繁 殖 率 較 低 難 以 獲 得 實 生 苗 加 上 人 們 濫 采 亂 挖和 生態(tài)環(huán) 境破 壞 野 生 鐵 皮 石 斛 資 源 已 瀕 臨 滅 絕 3 4 采 用鐵 皮石斛 的種 子 進 行無 菌萌發(fā) 并 通 過 組 織 培 養(yǎng) 的 方 法 快 速 大 量 繁 殖 瓶 苗 是 解 決 鐵 皮 石 斛 種 苗 供 不 應(yīng) 求 的 有 效 途 徑 是對 鐵皮 石 斛 資源 進行 保 護與開 發(fā)利用 的 有 效 手 段 5 7 該 研 究 旨 在 優(yōu) 化 組 培 條 件 提 高 鐵 皮 石 斛 種 子 芽 苗 增 殖 率 生長 速度及 質(zhì)量 為改 進鐵 皮 石斛種 苗 生 產(chǎn) 技 術(shù) 措 施 提 供 理 論和 技術(shù)參 考 1 材料 與方 法 1 1 試驗 材 料 鐵 皮 石 斛 種 子 采 摘 自 院 內(nèi) 連 棟 溫 室 人 工 授粉 后結(jié)成 優(yōu)質(zhì) 成 熟 未開 裂的蒴 果 1 2 試 驗方 法 1 2 1 材料 消 毒 將 鐵 皮 石 斛 的 蒴 果 先 用 洗 潔 精 洗 涮 然 后 用 流水 沖 洗30min 在 超 凈 工 作 臺 上 先 用75 乙 醇 浸 泡 30s 再用8 次 氯酸 鈉 浸泡8min 最后用 無菌水 沖洗5 次 1 2 2 種胚 萌 發(fā) 及幼 苗 分 化 試 驗 培 養(yǎng) 基 的 篩 選 在 超 凈 工 作 臺 中 將 消 毒 后 的 蒴 果 用 鑷 子 夾 緊 果 柄 一 端 用 解 剖 刀 將 蒴 果 另 一 端 切 一 小 口 輕 輕 抖 動 將 種 子 均 勻 撒 在 誘 導 分 化 培 養(yǎng) 基上 立 即 蓋上 瓶 蓋 放 在 培養(yǎng) 箱進 行 培養(yǎng) 基礎(chǔ) 培 養(yǎng)基 為2 種 CK 1 CK 2 添 加 物 分 別 為 香 蕉 泥 芋 頭 泥 蘋果 泥 土 豆 泥 地 瓜 泥 誘 導 分 化 培 養(yǎng) 基 設(shè)1 2 個 處 理 MS 6g L 瓊脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 香蕉 泥 MS 6g L 瓊脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 芋頭 泥 MS 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗糖 80g L 蘋 果泥 MS 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 土 豆泥 MS 6g L 瓊脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 地 瓜 泥 MS 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗 糖 CK 1 N6 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗糖 80g L 芋 頭 泥 N6 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 蘋 果 泥 N6 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 土 豆 泥 N6 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 香 蕉 泥 1 1 N6 6g L 瓊脂 2 0g L 蔗 糖 80g L 地瓜 泥 1 2N6 6g L 瓊 脂 2 0g L 蔗 糖 CK 2 每 處理 接 種2 0 瓶 重 復3 次 放 入 培 養(yǎng) 箱 進行 黑 暗培 養(yǎng)7d 培 養(yǎng) 溫 度2 5 后 調(diào) 整 為 光 照 強 度 2000 3000lx 光 照 時間1 2h d 培養(yǎng) 時 間1 8 周 統(tǒng) 計生 長 情 況 1 2 3 壯苗 生 根 培養(yǎng) 基 篩 選 試 驗 試 驗 材 料 為 上 述 剛 分 化 安 徽 農(nóng) 業(yè) 科 學 J AnhuiAgric Sci 2021 49 1 1 54 1 56 不久 的鐵皮 石斛 幼 苗 具 有2 3 片 真 葉 莖 高 為7 1 5mm 莖 粗 約 為1mm 莖節(jié)數(shù) 為2 節(jié) 呈 綠色 無根 基礎(chǔ) 培養(yǎng)基 為3 種 CK 1 CK 2 CK 3 添加物 分 別 為 香 蕉 汁 活 性 炭 在 超凈 工作臺 上 接 種 叢 生 芽 每 個 處 理 接 種1 0 瓶 重 復3 次 每瓶 接 種1 0 個 點 培 育 溫 度 為2 5 光 照 強 度2000 2500lx 光照時 間 為1 0h d 培 養(yǎng)1 6 周 壯 苗 培 養(yǎng) 基 設(shè) 1 2 個 處 理 1 2 MS 0 33 g L NH 4 2 SO 4 0 52 5g LKNO 3 NAA0 4mg L 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊 脂 CK 1 1 2 MS 0 33g L NH 4 2 SO 4 0 52 5g LKNO 3 NAA0 4mg L 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊 脂 80g L 香 蕉 泥 1 2 MS 0 33g L NH 4 2 SO 4 0 52 5 g L KNO 3 NAA0 4 mg L 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊 脂 0 5g L 活 性 炭 1 2 MS 0 33g L NH 4 2 SO 4 0 52 5g LKNO 3 0 4mg L NAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊脂 80g L 香蕉 泥 0 5g L 活 性炭 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊 脂 CK 2 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊脂 80g L 香蕉泥 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊 脂 0 5g L 活 性炭 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗糖 6g L 瓊脂 80g L 香 蕉泥 0 5g L 活 性 炭 1 2 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗糖 6g L 瓊 脂 CK 3 1 2 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6 g L 瓊 脂 80 g L 香 蕉 泥 1 11 2 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊 脂 0 5g L 活 性 炭 1 21 2 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊脂 80g L 香 蕉泥 0 5g L 活性炭 2 結(jié)果 與分 析 2 1 種 胚 萌 發(fā) 及 幼 苗 分 化 試 驗 培 養(yǎng) 基 的 篩 選 近 年 的 研 究 中 鐵 皮 石 斛 組 織 培 養(yǎng) 中 用 種 子 作 為 外 植 體 培 養(yǎng) 組 培 苗 時 一 般 經(jīng)過誘 導 增 殖 分 化 壯苗 生 根這 幾 個 步 驟 8 9 為 了 達到 簡化鐵 皮石 解 組 織培 養(yǎng)步驟 縮 短 培 養(yǎng) 時 間 及 為 快 速 育 苗 和 工廠 化 生產(chǎn) 提 供便 利 的目 的 該 研 究 采 用 不 添 加 植 物 生 長 調(diào) 節(jié)劑 直 接得 到 叢生 芽 的研 究 方法 由表1 和圖1 可 知 不 同 培 養(yǎng) 基 上 鐵 皮 石 斛 種 胚 萌 發(fā) 幼 苗 分化 情 況不 同 1 0 在1 2 個 處 理 的 培 養(yǎng) 基 中 不 添 加 天 然 有 機物 的 處 理CK 1 CK 2 種 子 萌 發(fā) 情 況 不 佳 MS 加 香 蕉 泥 的 配方 處 理 種子 萌 發(fā)情 況 最好 原 球莖 顏 色 深 綠 萌 發(fā) 度 高 且 基 本 分 化 成 鐵 皮 石 斛 幼 苗 顯 著 優(yōu) 于 其 他 配 方 較 好 的是MS 加 土豆 泥 處理 MS 加 地 瓜泥 處 理 N6 加 芋 頭泥 處 理 以及N6 加 土 豆 泥 處 理 N6 加 香 蕉 泥 處理 萌 發(fā)度 高 但 是顏 色 發(fā)黃 效果 不 好 由 此 可 知 MS 中 加入一 定濃度 的香蕉 泥 有 利 于 促 進 種 子 萌 發(fā) 使 萌 發(fā) 時 間 數(shù) 量 分 化 狀 況 生 長 狀 況 均 達 到 較 理 想 的 水 平 圖 1 這種 培 養(yǎng)基 可 以一 次 性直 接 得到 優(yōu) 質(zhì) 鐵 皮 石 斛 幼 苗 減 少 了 試驗 步 驟 提高 了 試驗 效 率 表1 不 同培養(yǎng)基上 鐵皮石斛種胚 萌發(fā)情況 Table1 Germinationof D e n d r o b i u m c a n d i d u membryosondifferent media 處理 Treatment 原球莖大 小 Protocormsize mm 萌發(fā)度 Degreeof germination 生長 狀況 Growthstatus 3 0 部分深 綠 0 8 部分淺 綠 2 5 大 部分黃綠 2 0 部分黃 綠 2 0 部分黃 綠 CK 1 2 0 大 部分黃色 1 5 全深綠 2 0 大 部分黃綠 2 5 全 深綠 3 0 大部 分黃綠 1 1 1 5 小 部分黃綠 1 2 CK 2 1 5 全黃色 注 萌發(fā)度分為4 個等級 越多 種 子 萌 發(fā) 的 越 多 原 球 莖 生 長 狀 況 分3 個等 級 越 多原球莖生 長的越多 Note Germinationisdividedinto4levels themore themoreseeds willgerminate theprotocormgrowthstatusisdividedinto3levels themore themoreprotocormgrowth 圖1 不同培養(yǎng) 基上鐵皮石 斛種胚萌發(fā)原 球莖 叢生芽情況 Fig 1 Germinationofprotocormandclusterbudsfromembryosof D e n d r o b i u m c a n d i d u mondifferentmedia 2 2 壯苗 生 根 培 養(yǎng) 基 篩 選 試 驗 由 表2 和 圖2 可 知 不 同 培養(yǎng) 基上鐵 皮石 斛 壯 苗生 根 情 況 不 同 在1 2 個 處 理 的 培 養(yǎng) 基中 不 添 加天 然 有 機 物 的 處 理CK 1 CK 2 CK 3 幼 苗 生 長 情 況不 佳 基 礎(chǔ)配 方 一 致 的 情 況 下 添 加 活 性 炭 的 配 方 處 理 1 1 普 遍 比 添 加 香 蕉 泥 的 配 方 處 理 表 現(xiàn) 好 添 加 活 性 炭 可 以 有 效 地 防 治 鐵 皮 石 斛 幼 苗 褐 化 現(xiàn) 象 顯 著 促 進根 系 生長 既 添 加活 性 炭又 添 加香 蕉 泥 的 配 方 處 理 1 2 表現(xiàn) 最 好 根 長 根 數(shù) 莖 高 莖 粗 葉 片 數(shù) 均 有 顯 著 提 高 在1 2 種配 方 中 1 2 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L 6 BA 2 0g L 蔗 糖 6g L 瓊 脂 80g L 香 蕉 泥 0 5g L 活 性 炭 的配 方 處理 1 2 表 現(xiàn) 最 好 鐵 皮 石 斛 苗 長 得 粗 壯 高 大 葉 片 數(shù)多 根 多 根長 5 5 1 49 卷1 期 馬 盼 等 不 同 培 養(yǎng) 基 對 鐵 皮 石 斛 種 子 萌 發(fā) 和 壯 苗 生 根 的 影 響 表2 不 同培養(yǎng)基上 鐵皮石斛幼 苗壯苗生根情 況 Table2 Rootingsituationofstrongseedlingsof D e n d r o b i u m c a n d i d u mseedlingsondifferentmedia 處理 Treatment 根長 Rootlength cm 根數(shù) Root number 莖高 Stemheight cm 莖粗 Stemthickness cm 葉 片數(shù) Leaf number 增殖系數(shù) Proliferation coefficient 圓球莖平均 分化率 Averagedifferentiation rateofbulbous stem 生 長勢 Growthvigor CK 1 0 06 0 1 6 0 30 0 1 0 3 33 1 00 58 0 黃綠 不整齊 不飽滿 0 57 3 00 0 33 0 1 2 4 00 2 83 52 3 黃綠 不整齊 不飽滿 1 37 3 1 7 0 55 0 1 3 3 1 7 3 67 53 3 淺 綠 不 飽滿 整齊 3 1 3 4 1 7 1 1 0 0 2 7 3 67 3 1 7 54 7 黃 綠 不 整齊 飽滿 CK 2 0 2 2 0 50 0 2 3 0 1 0 4 50 3 67 61 3 黃綠 不整齊 不飽滿 1 68 4 00 0 37 0 1 3 3 50 6 83 56 0 淺綠 不飽滿 不整齊 1 1 7 3 00 0 40 0 1 3 3 33 4 00 63 8 淺 綠 不 飽滿 整齊 4 2 1 6 00 1 90 0 2 0 5 33 6 83 82 5 深綠 整齊 飽滿 CK 3 0 03 0 1 7 0 2 2 0 1 0 2 83 1 50 53 8 黃 不整 齊 不 飽滿 1 78 3 00 0 37 0 1 2 4 00 1 50 58 2 黃綠 不整齊 不飽滿 1 1 2 52 4 33 0 50 0 1 0 3 33 4 50 46 5 淺綠 不飽滿 不整齊 1 2 5 52 6 83 3 95 0 2 5 6 50 6 67 66 0 深 綠 不 整齊 飽滿 圖2 不 同培養(yǎng)基上 鐵皮石斛幼 苗壯苗生根情 況 Fig 2 Rootingofstrongseedlingsof D e n d r o b i u m c a n d i d u mseedlingsondifferentmedia 3 結(jié)論 通 過大 量 的培 養(yǎng) 基篩 選試驗 MS 培 養(yǎng) 基比N6 培 養(yǎng)基得 到叢 生芽 的 效 果 要 好 MS 培 養(yǎng) 基 中 加 入 一 定 濃 度 的 香 蕉 泥 有利 于 促進 種 子萌 發(fā) 使萌 發(fā) 時 間 數(shù) 量 分 化 狀 況 生 長 狀況 均達到 較理 想 的 水 平 這 種 培 養(yǎng) 基 可 以 一 次 性 直 接 得 到優(yōu) 質(zhì)鐵 皮 石 斛 幼 苗 減 少 了 試 驗 步 驟 提 高 了 試 驗 效 率 鐵 皮 石 斛 壯 苗 生 根 試 驗 中 1 2 MS 0 4mg LNAA 0 1mg L 6 BA 2 0g L 蔗糖 6g L 瓊 脂 80g L 香 蕉 泥 0 5g L 活 性 炭 的 配 方 表 現(xiàn) 最 好 鐵 皮 石 斛 苗 長 得 粗 壯 高 大 葉 片 數(shù) 多 根多 根 長 參 考 文 獻 1 宋 經(jīng) 元 郭 順 星 肖 培 根 近1 0 年 來 石 斛 屬 植 物 的 研 究 進 展 J 中 國 藥 學 雜 志 2 004 39 1 0 72 5 72 7 2 邵 華 張 玲 琪 李 俊 梅 等 鐵 皮 石 斛 研 究 進 展 J 中 草 藥 2 004 35 1 1 09 1 1 2 3 王 春 鄭 勇 平 羅 蔓 等 鐵皮 石斛試管 苗快繁體系 J 浙 江 林 學 院 學 報 2 007 2 4 3 372 376 4 盧 莉 劉 曉 芳 SAADABDELRAHMAN 等 鐵 皮 石 斛 高 效 快 速 繁 殖 體 系 研 究 J 山 西 農(nóng) 業(yè) 科 學 2 01 8 46 6 885 888 909 5 胡 佳 麗 戚 正 華 馬 美蘭 等 鐵皮石 斛種子組織培 養(yǎng)條 件 的 優(yōu) 化 J 浙 江 農(nóng) 業(yè) 學 報 2 01 5 2 7 8 1 399 1 402 6 斯 金 平 諸 燕 朱 玉 球 鐵 皮 石 斛 人 工 栽 培 技 術(shù) 研 究 與 應(yīng) 用 進 展 J 浙 江 林 業(yè) 科 技 2 009 2 9 6 66 70 7 袁 正 仿 張 衛(wèi) 明 丁 小余 等 鐵皮石 斛的組織培養(yǎng) 研究 J 中 國 醫(yī) 學 生 物 技 術(shù) 應(yīng) 用 2 002 3 58 60 8 段 金 玉 梁 漢 興 天 麻種子的 萌發(fā)率與種 子成熟度的關(guān) 系 J 云 南植 物 研 究 1 982 4 3 303 306 9 周 雅 琴 余 麗 瑩 譚 小 明 鐵 皮 石 斛 組 織 培 養(yǎng) 研 究 進 展 J 中 國 民 族 民 間 醫(yī) 藥 雜 志 2 01 2 2 1 1 48 49 1 0 袁 穎 丹 李 志 胡 冬 南 等 鐵 皮 石 斛 組 織 培 養(yǎng) 研 究 進 展 J 湖 北 農(nóng)業(yè) 科 學 2 01 6 55 1 9 1 2 6 5 1 安徽農(nóng)業(yè) 科學 2 02 1 年