2020 46 5 42 46 收稿日期 修訂日期 基金項目 國家自然科學(xué)基金 湖南省科技計劃 國家大宗蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 湖 南省自然科學(xué)基金 通信作者 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)粉虱發(fā)生對番茄褪綠病毒 流行的影響 王帥鑫 史曉斌 張戰(zhàn)泓 鄭立敏 劉 勇 張德詠 譚新球 周序國 湖南大學(xué)研究生院隆平分院 長沙 湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù) 研究所 長沙 湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所 長沙 摘要 番茄褪綠病毒 對我國番茄種植業(yè)破壞極大 而粉虱類昆蟲是其主要傳播介 體 本研究調(diào)查了我國內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市和貴州省貴陽市的番茄褪綠病毒病發(fā)生情況 發(fā)現(xiàn)赤峰市的發(fā)病率為 貴陽市的發(fā)病率為 兩個地區(qū)均存在 型煙粉虱和溫室白粉虱 赤峰市的 型煙粉虱和溫室白粉 虱分別占 和 貴陽市的 型煙粉虱和溫室白粉虱分別占 和 對兩個地區(qū)的兩種粉虱 種群在室內(nèi)進(jìn)行傳毒特性研究 結(jié)果發(fā)現(xiàn) 經(jīng)過 獲毒后 型煙粉虱和溫室白粉虱的獲毒量沒有明顯差異 但無 論 頭或 頭粉虱 型煙粉虱的傳毒量都高于溫室白粉虱 結(jié)果說明 近年來隨著 型煙粉虱發(fā)生的日益嚴(yán) 重 番茄褪綠病毒通過 型煙粉虱的傳播值得人們重視和進(jìn)一步研究 關(guān)鍵詞 番茄褪綠病毒 型煙粉虱 溫室白粉虱 傳毒特性 中圖分類號 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 卷第 期 王帥鑫等 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)粉虱發(fā)生對番茄褪綠病毒流行的影響 粉虱屬于昆蟲綱 半翅目 粉虱亞目 是世界上 最重要的農(nóng)業(yè)害蟲之一 在世界各地均有分布 粉 虱包括很多種 生產(chǎn)上為害最嚴(yán)重的是煙粉虱 和溫室白粉虱 煙粉虱的取食和擴散行為對世界各國的作物 種植 生產(chǎn)等造成了嚴(yán)重的不利影響 由此帶來了巨 大的經(jīng)濟損失和各種資源的浪費 全球的煙粉虱 種類已知至少有 個生物型 目前全球為害嚴(yán) 重的煙粉虱主要是 型 隱種 和 型 隱種 型煙粉虱和 型煙粉虱先后侵 入我國 并且?guī)砹藝?yán)重的損失和危害 番茄褪綠病毒 屬于長線形病毒科 毛形病毒屬 是由煙粉虱和溫室白粉虱傳播的雙分體 單鏈 病毒 除了感染番茄外 還可以 侵染辣椒 煙草 茄子 等植物 最早在 美國佛羅里達(dá)州被發(fā)現(xiàn)并報道 隨后在南美洲 非洲 歐洲 相繼被報道 年 在中國臺 灣 首次發(fā)現(xiàn) 隨后在北京 河北 湖 南 云南 山東 等地逐漸蔓延傳播 本研究調(diào)查了我國西南部的貴州省貴陽市花溪 區(qū)和東北部的內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市兩個地區(qū)番茄褪 綠病毒病的發(fā)生情況 調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn) 這兩個地區(qū) 均存在煙粉虱和溫室白粉虱種群 因此 我們調(diào)查 了兩種粉虱在發(fā)病植株上的分布比例 并根據(jù)調(diào)查 結(jié)果 采集了煙粉虱和溫室白粉虱并在室內(nèi)研究了 二者對番茄褪綠病毒的獲毒和傳毒情況 以期為我 國南北方的番茄褪綠病毒及其介體昆蟲防治提供 參考 材料與方法 樣品采集 年 月 在內(nèi)蒙古赤峰市和貴州省貴陽市 花溪區(qū)大棚內(nèi) 發(fā)現(xiàn)有疑似感染番茄褪綠病毒的番 茄植株 分別在兩地的大棚內(nèi)隨機采集番茄葉片 份 帶回實驗室通過 方法檢測 同時在大 棚內(nèi)發(fā)現(xiàn)有煙粉虱和溫室白粉虱 調(diào)查葉片上兩種 粉虱數(shù)量并記錄 葉片樣品采用以 基因設(shè)計的特異性引物 表 進(jìn)行檢測 煙粉虱生 物型鑒定參考王雪忠等 的方法進(jìn)行 粉虱種群的建立 從貴陽市和赤峰市帶回?zé)煼凼蜏厥野追凼?分別飼喂于健康無毒棉花植株上 棉花是粉虱的寄 主植物 但不會感染番茄褪綠病毒 且番茄褪綠病毒 在粉虱體內(nèi)為半持久性傳播 經(jīng)過一段時間病毒會 從粉虱體內(nèi)消失 此時鑒定粉虱無毒后進(jìn)行后續(xù)試 驗 同時在顯微鏡下將煙粉虱的雌性和雄性分開 每一雌一雄為一組 在養(yǎng)蟲籠內(nèi)分開飼養(yǎng) 每一代進(jìn) 行生物型鑒定 只選取鑒定后種群全部為 型煙粉 虱的組合進(jìn)行下一代飼養(yǎng) 飼養(yǎng) 代后的成蟲經(jīng)生 物型鑒定后 用于本試驗 番茄總 的提取 番茄總 采用 法提取 將液氮速凍過 的番茄葉片用磨樣機充分研磨后加入 振 蕩 將勻漿室溫放置 加入 氯仿 渦旋 振蕩 室溫放置 下 離心 移取上清液 至 的 離心管中 加入等體積異丙醇 輕輕顛倒混勻 靜置 下 離心 棄上清液 用現(xiàn)配無核酸酶的 乙醇洗滌沉淀 離心 重復(fù) 次 將離心管內(nèi)剩余液 體吸出 加入 溶解 經(jīng)檢測 合格后立即反轉(zhuǎn)錄合成 的合成 的合成使用 生物公司 按照 產(chǎn)品說明書進(jìn)行 在 管中分別加入 加熱 后在冰上靜置 混 合液中加入 吹打混勻 后 混合液中加入 程序如下 保存?zhèn)溆?擴增和電泳檢測 體系中使用的引物為 基因特 異性引物 和 表 使用 生物公司 進(jìn)行 反應(yīng) 體系如下 模板 共 以質(zhì)粒作為陽性 對照 體系內(nèi)其余成分不變 程序為 個循環(huán) 延伸 將 產(chǎn)物通過 瓊脂糖凝 膠電泳進(jìn)行檢測 剩余產(chǎn)物送至北京擎科新業(yè)生物 技術(shù)有限公司測序 測序結(jié)果在 利用 進(jìn)行比對 每個地區(qū)的樣品進(jìn)行 個重復(fù) 粉虱獲取 的特性 取剛羽化的經(jīng)飼養(yǎng)和鑒定無毒的 型煙粉虱 和溫室白粉虱 用微蟲籠分別將其夾在感染 的番茄上 每個處理 株番茄 每株番茄放 個微 蟲籠 每個微蟲籠內(nèi)接 頭粉虱 分別在兩個時間 點 和 從飼喂 型煙粉虱和溫室白粉虱的 株帶毒番茄中隨機選取 株 每株番茄上取 頭粉虱 保存于 冰箱 最后提取兩種粉虱 熒光定量 法分別測定不同時間內(nèi)溫室 白粉虱 型煙粉虱的獲毒量 重復(fù) 次 所獲得 的數(shù)據(jù)采用 分析 粉虱傳播 的特性 選取室內(nèi)飼養(yǎng)在棉花上的無毒 型煙粉虱和 溫室白粉虱 設(shè)置 頭 頭兩個處理 在獲毒 后 分別將 頭和 頭獲毒后 型煙粉虱和溫室白 粉虱轉(zhuǎn)移到 片真葉的健康小番茄苗上 后 將 煙粉虱移走 并分別將 型煙粉虱和溫室白粉虱接 毒后的植株放入不同的干凈育苗籠中進(jìn)行培養(yǎng) 隔 絕粉虱 分別在 后用熒光定量 法比較番 茄葉片帶毒量 明確煙粉虱傳毒與煙粉虱數(shù)量的關(guān) 系 重復(fù) 次 所獲得的數(shù)據(jù)采用 分析 表 引物信息 引物 序列 作用 溫室白粉虱內(nèi)參基因 煙粉虱內(nèi)參基因 番茄內(nèi)參基因 結(jié)果與分析 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū) 發(fā)生情況 將采集到的番茄葉片提取 之后進(jìn)行 檢測 經(jīng)電泳檢測后 將有條帶的 產(chǎn)物測 序 并在 比對之后 發(fā)現(xiàn)與 的同 源性最高 相似度達(dá) 確定番茄葉片帶毒 圖 圖 結(jié)合田間病毒病發(fā)生情況 證實了內(nèi)蒙古 的發(fā)生率高于貴州地區(qū) 表 圖 貴陽番茄樣品的 檢測結(jié)果 圖 赤峰番茄樣品的 檢測結(jié)果 表 在貴陽和赤峰的番茄葉片中的發(fā)生率 采樣地區(qū) 檢測數(shù)量 個 發(fā)病數(shù)量 個 發(fā)病率 貴州省貴陽市花溪區(qū) 內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市 卷第 期 王帥鑫等 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)粉虱發(fā)生對番茄褪綠病毒流行的影響 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)粉虱數(shù)量分布情況 通過調(diào)查內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)大棚內(nèi)的粉虱種類 和數(shù)量發(fā)現(xiàn) 表 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)都是 型煙 粉虱和溫室白粉虱復(fù)合侵染 其中內(nèi)蒙古赤峰市的 型煙粉虱比例為 溫室白粉虱比例為 貴州省貴陽市 型煙粉虱比例為 溫室白粉虱比例為 表 內(nèi)蒙古赤峰和貴州貴陽地區(qū) 種粉虱數(shù)量比例 采樣地區(qū) 粉虱總數(shù) 頭 型煙粉 虱數(shù)量 頭 型煙粉虱 比例 溫室白粉 虱數(shù)量 頭 溫室白粉 虱比例 貴州省貴陽市花溪區(qū) 內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市 兩種粉虱獲取 的對比 在感病番茄上取食 后 型煙粉虱和溫室 白粉虱的獲毒量并未表現(xiàn)出顯著差異 但從數(shù)值上 看 型煙粉虱的獲毒量高于溫室白粉虱的獲毒量 圖 兩種粉虱傳播 的對比 分別用 頭 頭 型煙粉虱和溫室白粉虱進(jìn) 行傳毒研究發(fā)現(xiàn) 不同數(shù)量 型煙粉虱和溫室白粉 虱的傳毒能力不同 總體來說 頭 型煙粉虱和 溫室白粉虱的傳毒量均高于 頭的傳毒量 單獨對 比 頭或 頭粉虱的傳毒情況 發(fā)現(xiàn) 型煙粉虱傳 播到植株上的病毒量較溫室白粉虱更高 差異顯著 圖 圖 兩種粉虱在感染 的番茄上獲毒量對比 圖 不同數(shù)量粉虱的 傳毒量對比 討論 本研究調(diào)查了內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市和貴州省貴 陽市番茄褪綠病毒病的發(fā)生情況 并以采集到的番 茄樣品為試驗材料 通過 的方法 分別檢 測了兩個地區(qū)番茄植株感染番茄褪綠病毒的情況 發(fā)現(xiàn)赤峰市的番茄感染率比貴陽市花溪區(qū)的高 同 時調(diào)查了大棚里番茄植株上 型煙粉虱和溫室白 粉虱的數(shù)量 以及通過在室內(nèi)利用 技術(shù)比較 溫室白粉虱和 型煙粉虱的獲毒和傳毒情況 證實 了番茄褪綠病毒的傳播主要是以 型煙粉虱為主 型煙粉虱和溫室白粉虱在全世界范圍內(nèi)都是 對作物產(chǎn)量有嚴(yán)重影響的昆蟲 同時也都是很重要 的病毒載體 本研究通過對 型煙粉虱和溫室 白粉虱傳播番茄褪綠病毒特性的研究 發(fā)現(xiàn)了 型 煙粉虱較強的獲毒和傳毒能力 這與之前的研究結(jié) 果一致 本研究還比較了 頭和 頭 型煙粉 虱和溫室白粉虱傳毒效率 發(fā)現(xiàn) 頭粉虱的傳毒量 高于 頭粉虱 由此可以推測 隨時間的積累 通過 粉虱傳毒的番茄發(fā)病情況將加重 這說明田間煙粉 虱數(shù)量較多的時期 的發(fā)病率也將提高 需要 提前防治煙粉虱 從而減輕病毒病的發(fā)生 此 外 本研究證實了在我國溫室白粉虱也是番茄褪綠 病毒的重要傳播介體 值得引起人們的重視 在 田間防治的時候 尤其是有白粉虱發(fā)生的地區(qū) 不能 忽視對白粉虱的防治 目前 型煙粉虱和溫室白粉虱通過傳播病毒 給蔬菜產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的損失 番茄褪綠病毒 是近年來在我國發(fā)生日益嚴(yán)重的病害 已在很多地 區(qū)暴發(fā)成災(zāi) 造成嚴(yán)重?fù)p失 本研究可為研究番茄 褪綠病毒病的發(fā)生機制及有效控制病害的發(fā)生提供 理論依據(jù) 參考文獻(xiàn) 周瑩 黃金寶 喬廣行 等 北京地區(qū)茄子感染番茄褪綠病毒 的分子鑒定 植物保護(hù)學(xué)報 孫國珍 高利利 陸文利 等 河北省設(shè)施番茄褪綠病毒分子 檢測和鑒定研究 北方園藝 王雪忠 張戰(zhàn)泓 鄭立敏 等 番茄褪綠病毒在湖南省首次發(fā) 生 中國蔬菜 劉微 史曉斌 唐鑫 等 云南番茄褪綠病毒和番茄黃化曲葉病 毒復(fù)合侵染的分子鑒定 園藝學(xué)報 趙黎明 李剛 劉永杰 等 侵染番茄的番茄褪綠病毒山東泰安 分離物的分子鑒定和序列分析 植物保護(hù) 下轉(zhuǎn) 頁 嚴(yán)儀寬 安打 茚蟲威 在蔬菜害蟲上的防治應(yīng)用 新農(nóng)藥 吳霞 擬除蟲菊酯 氟蟲腈和茚蟲威作用機制的最新進(jìn)展 世界農(nóng)藥 中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會 中華人民共和國農(nóng)業(yè) 農(nóng)村部 國家市場監(jiān)督管理局 食品中農(nóng)藥最大殘留限量 北京 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所 中國農(nóng)藥信息網(wǎng)農(nóng)藥綜合查詢系統(tǒng) 食品伙伴網(wǎng) 食品數(shù)據(jù)庫 日本肯定列表查詢 廖丹 茚蟲威在水稻中的殘留及其光降解研究 長沙 湖 南師范大學(xué) 李暢方 何強 徐偉松 等 茚蟲威在甘藍(lán)和土壤中的殘留量 及消解動態(tài)研究 農(nóng)藥科學(xué)與管理 楊淑娟 郭建輝 蔡恩興 等 茚蟲威在豇豆中殘留動態(tài)及安全 使用技術(shù)研究 亞熱帶植物科學(xué) 趙學(xué)平 袁玉偉 胡秀卿 等 茚蟲威和毒死蜱在小白菜中的殘 留及其膳食暴露評估 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報 董豐收 鄭永權(quán) 沙憲英 等 茚蟲威 懸浮劑在棉花和土 壤中的殘留動態(tài)研究 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所 農(nóng)藥登記殘留田間試驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 北京 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種植業(yè)管理司 農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 吳永寧 李筱薇 第四次中國總膳食研究 北京 化學(xué)工 業(yè)出版社 劉清浩 劉新濤 倪云霞 等 吡蟲啉在金銀花及土壤中的殘留 動態(tài)研究 植物保護(hù) 王玉潔 薛健 金紅宇 等 金銀花中氟啶蟲胺腈的殘留規(guī)律及 膳食風(fēng)險評估 中成藥 責(zé)任編輯 田 喆 櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍 上接 頁 劉萬才 邵振潤 姜瑞中 小麥白粉病測報與防治技術(shù)研究總 結(jié)報告 劉萬才 邵振潤 姜瑞中 小麥白粉病測報與防治 技術(shù)研究 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 周益林 盛寶欽 肖悅巖 小麥白粉病預(yù)測預(yù)報的研究 趙美琦 麥田植保系統(tǒng)工程的研究 北京 北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版 社 邵振潤 劉萬才 姜瑞中 等 豫北麥區(qū)小麥白粉病中期測報 技術(shù)研究 植物保護(hù) 肖悅巖 預(yù)測預(yù)報準(zhǔn)確度評價方法的研究 植保技術(shù)與推 廣 刁春友 沈龍元 江蘇省小麥白粉病預(yù)測預(yù)報技術(shù)研究 劉萬才 邵振潤 姜瑞中 小麥白粉病測報與防治技術(shù)研究 北 京 中國農(nóng)業(yè)出版社 沈麗 劉牛 廖華明 等 四川省小麥白粉病中期預(yù)測模型初 探 劉萬才 邵振潤 姜瑞中 小麥白粉病測報與防治技術(shù) 研究 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 李金鎖 南陽盆地小麥白粉病中期測報技術(shù)研究 劉萬才 邵 振潤 姜瑞中 小麥白粉病測報與防治技術(shù)研究 北京 中國農(nóng)業(yè) 出版社 李彤霄 河南省小麥白粉病綜合發(fā)生等級預(yù)測技術(shù)研究 河 南農(nóng)業(yè)科學(xué) 楊萬海 董禮濤 王光寶 等 山東省小麥白粉病中長期預(yù)報 技術(shù)研究 劉萬才 邵振潤 姜瑞中 小麥白粉病測報與防 治技術(shù)研究 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 責(zé)任編輯 田 喆 櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍 上接 頁 李嬌嬌 張秀霞 周仙紅 等 日光溫室番茄褪綠病毒病的發(fā) 生規(guī)律及其與 型煙粉虱種群動態(tài)關(guān)系 植物保護(hù)學(xué)報 張友軍 吳青君 王少麗 等 我國蔬菜重要害蟲研究現(xiàn)狀與 展望 植物保護(hù) 責(zé)任編輯 田 喆