書 書 書 許 媛 成 瑋 顏 偉 中 等 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 的 鑒 定 及 對(duì)4 類 殺 菌 劑 的 敏 感 性 J 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 48 4 115 121 doi 10 15889 j issn 1002 1302 2020 04 019 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 的 鑒 定 及 對(duì)4 類 殺 菌 劑 的 敏 感 性 許 媛 1 成 瑋 2 顏 偉 中 2 肖 婷 1 王 建 華 1 吉 沐 祥 1 楊 敬 輝 1 1 江 蘇 丘 陵 地 區(qū) 鎮(zhèn) 江 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 研 究 所 江 蘇 句 容212400 2 上 海 市 農(nóng) 技 推 廣 中 心 上 海200000 摘 要 為 闡 明 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 原 菌 分 類 地 位 及 對(duì) 藥 劑 的 敏 感 性 運(yùn) 用 真 菌 形 態(tài) 學(xué) 和 分 子 生 物 學(xué) 分 類 方 法 對(duì) 上 海 地 區(qū) 不 同 草 莓 種 植 區(qū) 分 離 得 到 的34 株 病 原 菌 進(jìn) 行 鑒 定 并 采 用 菌 絲 生 長(zhǎng) 速 率 法 測(cè) 定 了 病 原 菌 群 體 對(duì)4 種 不 同 作 用 機(jī) 制 殺 菌 劑 的 敏 感 性 結(jié) 果 表 明 34 株 病 原 菌 均 鑒 定 為 尖 孢 鐮 刀 菌 Fusarium oxysporum 病 原 菌 群 體 對(duì) 多 菌 靈 咪 鮮 胺 戊 唑 醇 和 吡 唑 醚 菌 酯 的 抑 制 中 濃 度 EC 50 范 圍 分 別 為0 3027 0 5562 0 001 1 0 1482 0 036 1 0 2997 0 0368 1 7216mg L 病 原 菌 群 體 對(duì) 多 菌 靈 和 戊 唑 醇 的EC 50 比 值 分 別 為1 8 8 3 而 對(duì) 咪 鮮 胺 和 吡 唑 醚 菌 酯 的EC 50 比 值 分 別 達(dá)134 7 46 8 上 海 市 域 范 圍 內(nèi) 不 同 地 區(qū) 間 的 尖 孢 鐮 刀 菌 對(duì) 同 種 殺 菌 劑 的 敏 感 性 之 間 無 顯 著 性 差 異 對(duì)4 類 不 同 作 用 機(jī) 制 殺 菌 劑 之 間 的 敏 感 性 也 無 顯 著 相 關(guān) 性 P 0 05 本 研 究 結(jié) 果 明 確 了 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 原 菌 的 分 類 地 位 可 以 為 合 理 選 用 殺 菌 劑 防 治 病 害 及 病 原 菌 抗 藥 監(jiān) 測(cè) 提 供 參 考 關(guān) 鍵 詞 草 莓 枯 萎 病 病 菌 病 原 菌 鑒 定 多 菌 靈 戊 唑 醇 咪 鮮 胺 吡 唑 醚 菌 酯 敏 感 性 中 圖 分 類 號(hào) S436 68 4 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 A 文 章 編 號(hào) 1002 1302 2020 04 0115 06 收 稿 日 期 2018 12 26 基 金 項(xiàng) 目 江 蘇 省 第 五 期 333 工 程 培 養(yǎng) 基 金 編 號(hào) BRA2017149 上 海 市 農(nóng) 業(yè) 委 員 會(huì) 示 范 推 廣 計(jì) 劃 編 號(hào) 滬 農(nóng) 推 字 2015 第2 7 號(hào) 江 蘇 省 農(nóng) 業(yè) 工 程 編 號(hào) SXGC 2017 214 作 者 簡(jiǎn) 介 許 媛 1991 女 江 蘇 興 化 人 碩 士 助 理 研 究 員 主 要 從 事 植 病 生 防 和 化 保 方 面 的 研 究 Tel 0511 80978081 E mail xyyuan007 通 信 作 者 楊 敬 輝 博 士 研 究 員 主 要 從 事 農(nóng) 作 物 病 害 防 控 方 面 的 研 究 Tel 0511 80978081 E mail yjhnn32 上 海 地 區(qū) 草 莓 種 植 面 積 約 為2000hm 2 主 要 分 布 在 嘉 定 青 浦 金 山 和 浦 東 等 地 區(qū) 近 幾 年 在 上 海 地 區(qū) 部 分 大 棚 草 莓 移 栽 初 期 土 傳 病 害 危 害 嚴(yán) 重 尤 其 以 枯 黃 萎 病 為 盛 發(fā) 病 植 株 地 上 部 分 新 生 心 葉 呈 黃 綠 色 不 對(duì) 稱 呈 大 小 葉 狀 地 下 根 呈 黑 褐 色 嚴(yán) 重 時(shí) 整 株 枯 死 對(duì) 大 棚 草 莓 的 產(chǎn) 量 和 品 質(zhì) 造 成 了 極 大 的 影 響 由 于 該 病 田 間 危 害 癥 狀 與 黃 萎 病 極 其 相 似 僅 從 田 間 表 現(xiàn) 形 態(tài) 上 難 以 準(zhǔn) 確 區(qū) 分 因 此 本 研 究 對(duì) 從 上 海 地 區(qū) 草 莓 主 產(chǎn) 區(qū) 顯 枯 黃 癥 草 莓 植 株 上 分 離 得 到 病 原 菌 群 體 進(jìn) 行 鑒 定 并 檢 測(cè) 病 原 菌 群 體 對(duì)4 種 不 同 作 用 機(jī) 制 殺 菌 劑 的 敏 感 性 旨 在 為 探 明 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 原 菌 群 體 的 分 類 地 位 明 確 病 原 菌 群 體 對(duì) 不 同 作 用 機(jī) 制 殺 菌 劑 的 敏 感 性 現(xiàn) 狀 以 及 為 科 學(xué) 防 控 和 抗 藥 性 監(jiān) 測(cè) 提 供 參 考 1 材 料 與 方 法 1 1 供 試 培 養(yǎng) 基 馬 鈴 薯 瓊 脂 培 養(yǎng) 基 potatodextrose agar 簡(jiǎn) 稱 PDA 用 于 病 原 菌 的 分 離 保 存 鑒 定 和 藥 劑 敏 感 性 測(cè) 定 1 2 菌 株 采 集 與 分 離 于2016 年9 月 草 莓 移 栽 初 期 從 上 海 市 嘉 定 區(qū) 青 浦 區(qū) 和 金 山 區(qū) 大 棚 草 莓 園 內(nèi) 采 集 初 發(fā) 病 癥 的 新 鮮 草 莓 根 部 組 織 洗 凈 并 用 乙 醇 表 面 消 毒 后 采 用 常 規(guī) 的 組 織 分 離 方 法 1 每 個(gè) 大 棚 分 離3 5 株 經(jīng) 單 孢 純 化 后 共 得 到34 株 菌 株 將 各 菌 株 編 號(hào) 并 保 存 于PDA 斜 面 上 置4 冰 箱 保 存 備 用 1 3 供 試 藥 劑 97 09 多 菌 靈 原 藥 由 上 海 升 聯(lián) 化 工 有 限 公 司 提 供 95 2 咪 鮮 胺 由 江 蘇 輝 豐 農(nóng) 化 股 份 有 限 公 司 提 供 95 戊 唑 醇 由 江 蘇 鹽 城 利 民 農(nóng) 化 有 限 公 司 提 供 95 吡 唑 醚 菌 酯 由 德 國(guó) 巴 斯 夫 股 份 中 國(guó) 有 限 公 司 提 供 多 菌 靈 用0 1 mol L 鹽 酸 溶 解 其 余 原 藥 均 用 丙 酮 溶 解 各 藥 劑 均 配 制 成10000mg L 的 母 液 99 水 楊 肟 酸 salicylhydroxamic acid 簡(jiǎn) 稱 SHAM 購(gòu) 自Sigma Aldrich 公 司 用 甲 醇 配 制 成 20000mg L 的 母 液 所 有 母 液 均 置 于4 保 存 備 用 5 1 1 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 年 第48 卷 第4 期 表1 草 莓 枯 萎 病 病 菌 菌 株 信 息 采 樣 地 點(diǎn) 菌 株 數(shù) 株 菌 株 編 號(hào) 上 海 市 嘉 定 區(qū) 5 16cf01 16cf02 16cf03 16cf04 16cf05 上 海 市 青 浦 區(qū) 9 16cf07 16cf08 16cf09 16cf10 16cf11 16cf12 16cf13 16cf14 16cf17 上 海 市 金 山 區(qū) 20 16cf18 16cf19 16cf20 16cf21 16cf22 16cf24 16cf25 16cf26 16cf27 16cf28 16cf29 16cf30 16cf 31 16cf33 16cf34 16cf35 16cf36 16cf37 16cf38 16cf39 1 4 病 原 菌 形 態(tài) 觀 察 將 經(jīng) 單 孢 分 離 得 到 的 菌 株 移 置 于PDA 培 養(yǎng) 基 上 置 于25 黑 暗 條 件 下 培 養(yǎng) 并 觀 察 其 菌 落 形 態(tài) 顏 色 質(zhì) 地 等 特 征 1 5 病 原 菌 的 致 病 性 測(cè) 定 1 5 1 病 原 菌 分 生 孢 子 液 的 制 備 沿 病 原 菌 25 PDA 上 培 養(yǎng)5d 邊緣 打 取 直 徑 為4mm 的 菌 餅 每 個(gè) 菌 株 分 別 挑 取4 塊 菌 餅 置 于 裝 有80mL 馬 鈴 薯 液 體 培 養(yǎng)液 的 體 積 為250mL 的 三 角 瓶 中 每 個(gè) 病 原 菌 接 種1 個(gè) 三 角 瓶 置 于25 120r min 條 件 下 振 蕩 培 養(yǎng)5d 培 養(yǎng) 液 經(jīng) 雙 層 無 菌 紗 布 過 濾 后 于 顯 微 鏡 下 用 血 球 計(jì) 數(shù) 板 計(jì) 數(shù) 并 用 無 菌 水 稀 釋 菌 液 分 生 孢 子 濃 度 至1 10 5 3 10 5 個(gè) mL 每 個(gè) 病 原 菌 保 留 100mL 稀 釋 好 的 孢 子 懸 浮 液 置 于4 冰 箱 備 用 1 5 2 病 原 菌 的 接 種 方 法 取 紅 頰 草 莓 幼 苗 洗 凈 根 部 將 苗 浸 于 上 述 1 5 1 節(jié) 孢 子 液 中30s 后 移 栽 于 裝 有 滅 菌 基 質(zhì) 與 田 土 混 合 體 積 比 為2 8 的 草 莓 苗 缽 中 每 個(gè) 菌 株 接 種3 株 草 莓 苗 以 無 菌 水 浸 根 草 莓 苗 作 對(duì) 照 苗 缽 置 于 草 莓 大 棚 內(nèi) 培 養(yǎng) 21d 后 調(diào) 查 發(fā) 病 情 況 取 樣 接 種 發(fā) 病 的 草 莓 根 部 組 織 參 照 柯 赫 氏 法 則 進(jìn) 行 病 原 菌 的 再 分 離 1 6 rDNA ITS 基 因 部 分 序 列 的 測(cè) 定 1 6 1 基 因 組DNA 的 提 取 在PDA 平 板 上 新 鮮 生 長(zhǎng) 的 分 離 菌 邊 緣 處 打 取 直 徑 為4mm 的 菌 塊 接 種 于 置 有 滅 菌 玻 璃 紙 的PDA 平 板 上 25 暗 培 養(yǎng) 72h 將 玻 璃 紙 上 的 新 鮮 菌 絲 刮 下 置 于1 5 mL 離 心 管 中 于65 烘 箱 中 烘 干 用 鑷 子 搗 碎 備 用 真 菌 基 因 組 的 提 取 參 照 MEGA 真 菌 基 因 組 提 取 試 劑 盒 說 明 書 進(jìn) 行 1 6 2 PCR 擴(kuò) 增 及 生 物 信 息 學(xué) 分 析 rDNA ITS 引 物 采 用 真 菌rDNA ITS 序 列 的 通 用 引 物 2 ITS1 ITS4 5 TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTC CGCTTATTGATATGC 3 預(yù) 期 擴(kuò) 增 長(zhǎng) 度 為 570bp PCR 反 應(yīng) 程 序 95 預(yù) 變 性4min 94 變 性40s 55 退 火40s 72 延 伸1min 共 進(jìn) 行40 個(gè) 循 環(huán) 最 后72 延 伸10min 取5 L 擴(kuò) 增 產(chǎn) 物 經(jīng)1 瓊 脂 糖 凝 膠 電 泳 檢 測(cè) 后 送 至 南 京 金 斯 瑞 生 物 科 技 有 限 公 司 進(jìn) 行 純 化 和 測(cè) 序 將 所 得 序 列 用 BLAST 搜 索 軟 件 在NCBI 數(shù) 據(jù) 庫(kù) 中 進(jìn) 行 同 源 性 搜 索 比 對(duì) 分 析 1 7 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì)4 種 殺 菌 劑 的 敏 感 性 測(cè) 定 采 用 菌 絲 生 長(zhǎng) 速 率 法 3 將 保 留 的 供 試 菌 種 移 植 到PDA 平 板 中 25 活 化96h 然 后 在 菌 落 邊 緣 用 打 孔 器 制 取 直 徑 為4mm 的 菌 塊 移 到 含 系 列 梯 度 藥 劑 濃 度PDA 平 板 正 中 央 多 菌 靈 系 列 濃 度 為 0 05 0 10 0 20 0 40 0 80 1 60 3 20mg L 咪 鮮 胺 系 列 濃 度 為0 005 0 010 0 020 0 040 0 080 0 160 0 320mg L 戊 唑 醇 系 列 濃 度 為0 05 0 10 0 20 0 40 0 80 1 60 3 20mg L 吡 唑 醚 菌 酯 系 列 濃 度 為 0 625 1 250 2 500 5 000 10 000 20 000mg L 吡 唑 醚 菌 酯 測(cè) 定 時(shí) 所 有 平 板 中 都 含 100mg LSHAM 采 用 無 菌 水 作 對(duì) 照 每 個(gè) 處 理 重 復(fù)3 次 25 培 養(yǎng)72h 后 用 十 字 交 叉 法 測(cè) 量 各 處 理 的 菌 落 直 徑 cm 計(jì) 算 各 處 理 的 菌 落 直 徑 平 均 值 并 按 照 下 列 公 式 計(jì) 算 菌 絲 生 長(zhǎng) 平 均 抑 制 率 菌 絲 生 長(zhǎng) 平 均 抑 制 率 對(duì) 照 菌 落 直 徑 均 值 處 理 菌 落 直 徑 均 值 對(duì) 照 菌 落 直 徑 均 值 接 種 菌 餅 直 徑 100 利 用DPS 軟 件 通 過 濃 度 對(duì) 數(shù) 值 x 與 抑 制 率 概 率 值 y 之 間 的 線 性 回 歸 關(guān) 系 求 出 毒 力 回 歸 方 程 和 有 效 抑 制 中 濃 度 EC 50 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 病 害 癥 狀 及 病 原 菌 培 養(yǎng) 性 狀 觀 察 發(fā) 病 草 莓 植 株 地 上 部 分 復(fù) 葉 呈 黃 綠 色 卷 曲 呈 現(xiàn) 大 小 葉 狀 葉 緣 變 褐 萎 蔫 至 枯 死 地 下 部 分 呈 黑 褐 色 維 管 束 變 褐 采 用 組 織 分 離 法 從 上 海 市 嘉 定 區(qū) 青 浦 區(qū) 金 山 區(qū) 的 不 同 草 莓 大 棚 的 草 莓 病 株 根 頸 內(nèi) 組 織 上 共 分 離 純 化 得 到34 株 單 孢 菌 株 表1 分 離 株 在PDA 培 養(yǎng) 基 上 菌 絲 形 態(tài) 呈 白 色 質(zhì) 密 絮 狀 圖1 6 1 1 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 年 第48 卷 第4 期 2 2 病 原 菌 致 病 性 測(cè) 定 在 人 工 接 種 草 莓 幼 苗21d 后 地 上 部 分 新 生 心 葉 變 黃 呈 現(xiàn) 大 小 葉 或 葉 緣 變 褐 出 現(xiàn) 萎 蔫 癥 狀 病 情 進(jìn) 一 步 發(fā) 展 后 植 株 死 亡 剖 開 根 頸 可 見 內(nèi) 部 變 褐 與 田 間 觀 察 到 的 癥 狀 一 致 從 接 種 發(fā) 病 的 草 莓 根 頸 內(nèi) 分 離 得 到 的 菌 株 與 接 種 所 用 菌 株 的 菌 落 形 態(tài) 相 似 由 此 可 見 接 種 所 用 的 菌 株 是 引 起 草 莓 枯 萎 病 的 病 原 菌 圖2 2 3 rDNA ITS 的PCR 擴(kuò) 增 及 序 列 測(cè) 定 菌 株rDNA ITS 的PCR 擴(kuò) 增 產(chǎn) 物 電 泳 結(jié) 果 表 明 所 有 菌 株 的 擴(kuò) 增 條 帶 都 清 晰 明 亮 大 小 均 約 為 570bp 的 片 段 而 且 不 見 明 顯 的 非 特 異 性 雜 帶 符 7 1 1 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 年 第48 卷 第4 期 合 預(yù) 期 的 擴(kuò) 增 結(jié) 果 測(cè) 序 和 同 源 性 序 列 進(jìn) 行 比 對(duì) 分 析 結(jié) 果 表 明 所 有 菌 株 均 為 尖 把 鐮 刀 菌 Fusarium oxysporum 2 4 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì)4 種 殺 菌 劑 的 敏 感 性 檢 測(cè) 采 用 菌 落 生 長(zhǎng) 直 徑 法 測(cè) 得 多 菌 靈 咪 鮮 胺 戊 唑 醇 和 吡 唑 醚 菌 酯 對(duì)34 株 草 莓 枯 萎 病 病 菌 的EC 50 值 分 別 為 0 4494 0 077 7 0 025 5 0 031 6 0 1227 0 059 1 0 4675 0 4159 mg L 34 株 草 莓 枯 萎 病 群 體 對(duì) 多 菌 靈 和 戊 唑 醇 的 敏 感 性 差 異 較 小 最 大 和 最 小EC 50 比 值 分 別 為1 8 8 3 而 對(duì) 咪 鮮 胺 和 吡 唑 醚 菌 酯 的 敏 感 性 差 異 較 大 最 大 和 最 小EC 50 比 值 分 別 為134 7 46 8 2 5 不 同 地 理 來 源 菌 株 對(duì)4 種 殺 菌 劑 的 敏 感 性 差 異 分 別 比 較 取 自 嘉 定 區(qū) 青 浦 區(qū) 和 金 山 區(qū) 的 草 莓 枯 萎 病 菌 對(duì) 供 試 藥 劑 的 敏 感 性 差 異 結(jié) 果 圖3 表 明 對(duì) 多 菌 靈 的 敏 感 性 表 現(xiàn) 為 金 山 區(qū) 青 浦 區(qū) 嘉 定 區(qū) 圖3 A 對(duì) 咪 鮮 胺 戊 唑 醇 和 吡 唑 醚 菌 酯 的 敏 感 性 均 表 現(xiàn) 為 嘉 定 區(qū) 金 山 區(qū) 青 浦 區(qū) 不 同 地 區(qū) 來 源 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì) 同 種 殺 菌 劑 的 敏 感 性 之 間 存 在 差 異 但 上 述 差 異 均 未 達(dá) 顯 著 水 平 P 0 05 2 6 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì)4 種 殺 菌 劑 敏 感 性 的 相 關(guān) 性 通 過 敏 感 性 EC 50 線 性 回 歸 分 析 圖4 得 出 多 菌 靈 與 咪 鮮 胺 多 菌 靈 與 戊 唑 醇 多 菌 靈 與 吡 唑 醚 菌 酯 咪 鮮 胺 與 戊 唑 醇 咪 鮮 胺 與 吡 唑 醚 菌 酯 及 戊 唑 醇 與 吡 唑 醚 菌 酯 的 決 定 系 數(shù) 分 別 為0 0046 0 0114 0 0631 0 2009 0 0468 0 0076 在P 0 05 水 平 上 均 不 顯 著 表 明 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì) 這4 種 不 同 作 用 機(jī) 制 的 殺 菌 劑 的 敏 感 性 之 間 均 無 顯 著 相 關(guān) 性 3 結(jié) 論 與 討 論 植 物 病 原 菌 的 鑒 定 及 對(duì) 藥 劑 的 室 內(nèi) 敏 感 性 測(cè) 定 與 篩 選 工 作 是 正 確 指 導(dǎo) 田 間 病 害 防 治 的 前 提 本 研 究 首 次 系 統(tǒng) 分 離 了 上 海 市 主 要 草 莓 產(chǎn) 區(qū) 呈 現(xiàn) 草 莓 枯 黃 萎 綜 合 癥 樣 株 的 病 原 菌 種 群 并 采 用 傳 統(tǒng) 的 形 態(tài) 學(xué) 和 現(xiàn) 代 分 子 生 物 學(xué) 相 結(jié) 合 的 方 法 對(duì) 病 原 菌 進(jìn) 行 鑒 定 鑒 定 結(jié) 果 表 明 所 有 分 離 菌 株 均 屬 尖 孢 鐮 刀 菌 其 分 類 地 位 為 半 知 菌 亞 門 瘤 座 菌 科 鐮 孢 屬 尖 孢 鐮 刀 菌 F oxysporum 該 結(jié) 果 與 吳 祥 等 的 報(bào) 道 4 7 相 一 致 值 得 與 同 行 探 討 的 是 本 研 究 取 樣 時(shí) 間 為 草 莓 定 植 期 初 期 取 樣 病 株 為 枯 黃 萎 病 綜 合 癥 病 株 即 發(fā) 病 幼 苗 新 生 葉 失 綠 變 黃 或 彎 曲 畸 形 復(fù) 葉 上 的 兩 側(cè) 小 葉 不 對(duì) 稱 呈 畸 形 典 型 的 大 小 葉 葉 色 黃 化 的 病 株 而 非 萎 蔫 枯 死 的 枯 萎 病 癥 株 組 織 分 離 均 8 1 1 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 年 第48 卷 第4 期 用 根 頸 內(nèi) 部 的 褐 色 組 織 所 有 分 離 菌 株 從 菌 落 培 養(yǎng) 特 征 上 可 以 初 步 判 定 為 鐮 孢 霉 屬 Fusariumspp 沒 有 一 個(gè) 菌 株 的 菌 落 形 態(tài) 類 似 輪 枝 孢 屬 Verticilliumspp 類 似 的 從 江 蘇 省 蘇 南 地 區(qū) 鎮(zhèn) 江 市 蘇 州 市 和 無 錫 市 的 顯 枯 黃 復(fù) 合 癥 病 株 上 也 只 分 離 得 鐮 孢 霉 屬 致 病 真 菌 為 此 從 上 述 病 原 菌 分 離 鑒 定 結(jié) 果 似 乎 可 以 得 出 蘇 南 和 上 海 地 區(qū) 危 害 草 莓 根 部 顯 枯 黃 萎 病 癥 的 病 原 菌 都 是 鐮 孢 霉 屬 真 菌 而 非 輪 枝 孢 屬 真 菌 本 研 究 檢 測(cè) 了 上 海 市 嘉 定 區(qū) 青 浦 區(qū) 和 金 山 區(qū) 3 個(gè) 草 莓 主 產(chǎn) 區(qū) 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 群 體 對(duì) 目 前 生 產(chǎn) 上 常 用 的 苯 并 咪 唑 類 咪 唑 類 甾 醇 脫 甲 基 抑 制 劑 類 和 甲 氧 基 丙 烯 酸 酯 類 殺 菌 劑 的 敏 感 性 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 菌 種 群 對(duì) 多 菌 靈 的EC 50 均 值 為 0 4494mg L 略 小 于 顧 春 波 等 報(bào) 道 的 山 東 省 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì) 多 菌 靈 的 敏 感 基 線 EC 50 均 值 0 561mg L 8 而 與 陳 宏 州 等 報(bào) 道 的 江 蘇 省 草 莓 枯 萎 病 病 菌 抗 多 菌 靈 菌 株 的 EC 50 均 值 24 2783mg L 9 和 楊 煥 青 等 報(bào) 道 的 山 東 省 抗 多 菌 靈 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 菌 株 的 EC 50 49 4900mg L 有 極 顯 著 性 差 異 10 本 研 究 中 草 莓 枯 萎 病 病 菌 種 群 間 對(duì) 多 菌 靈 的 最 大 與 最 小EC 50 的 比 值 只 有1 8 0 3027 0 5562mg L 且 菌 株 敏 感 性 頻 率 分 布 呈 連 續(xù) 性 單 峰 曲 線 可 以 把EC 50 均 9 1 1 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 年 第48 卷 第4 期 值 0 4494mg L 作 為 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 種 群 抗 藥 性 檢 測(cè) 的 敏 感 基 線 綜 上 分 析 可 以 得 出 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 菌 種 群 對(duì) 多 菌 靈 敏 感 裴 龍 飛 等 報(bào) 道112 株 蔬 菜 尖 孢 鐮 刀 菌 F oxysporum 對(duì) 咪 鮮 胺 的 平 均EC 50 為0 0301mg L 并 將 此 值 定 為 抗 性 檢 測(cè) 的 敏 感 基 線 11 本 研 究 取 樣 的34 個(gè) 菌 株EC 50 均 值 0 0255mg L 小 于 報(bào) 道 的 敏 感 基 線 值 但 菌 株 間 的 最 大 和 最 小EC 50 比 值 達(dá) 到134 7 0 0011 0 1482mg L 且 菌 株 敏 感 性 頻 率 呈 不 連 續(xù) 分 布 因 此 種 群 中 可 能 產(chǎn) 生 了 敏 感 性 下 降 的 亞 群 體 本 研 究 取 樣 菌 群 中 只 有6 株 菌 株 的 EC 50 0 0406 0 1482mg L 超 過 報(bào) 道 值 其 余28 株 菌 株 中 EC 50 值 小 于 0 01 mg L 0 0010 0 0099mg L 的 有13 株 菌 株 有15 株 菌 株 的EC 50 在0 0100 0 0298mg L 之 間 基 于 上 述 原 因 在 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì) 咪 鮮 胺 的 敏 感 基 線 EC 50 的 確 立 時(shí) 應(yīng) 取 去 除EC 50 陡 然 增 高 的2 株 菌 株 16cf25 和16cf04 后 的EC 50 均 值 0 0188mg L 為 抗 藥 性 檢 測(cè) 的 敏 感 基 線 較 為 適 合 還 需 要 從 分 子 水 平 確 定EC 50 陡 然 增 高 的2 株 菌 株 是 抗 性 菌 株 還 是 種 群 間 的 極 端 變 異 株 菌 株 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 取 樣 種 群 對(duì) 戊 唑 醇 的EC 50 均 值 為0 1227mg L 低 于 顧 春 波 等 報(bào) 道 的 山 東 省 草 莓 枯 萎 病 菌 敏 感 菌 株 種 群 對(duì) 戊 唑 醇 的 EC 50 0 2130 0 3570 0 4705mg L 8 10 12 近 似 于 陳 宏 州 報(bào) 道 江 蘇 省 草 莓 枯 萎 病 菌 對(duì) 戊 唑 醇 的 EC 50 0 1544mg L 9 本 研 究 中 草 莓 枯 萎 病 病 菌 種 群 間 對(duì) 戊 唑 醇 的 最 大 與 最 小EC 50 比 值 為8 3 0 0361 0 2997mg L 且 種 群 敏 感 性 頻 率 分 布 呈 連 續(xù) 性 單 峰 曲 線 可 以 把 取 樣 種 群EC 50 均 值 0 1227mg L 作 為 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì) 戊 唑 醇 抗 藥 性 檢 測(cè) 的 基 線 并 指 出 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 種 群 對(duì) 戊 唑 醇 敏 感 沒 有 出 現(xiàn) 敏 感 性 下 降 的 亞 群 體 文 獻(xiàn) 檢 索 表 明 國(guó) 內(nèi) 外 有 關(guān) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì) 吡 唑 醚 菌 酯 敏 感 基 線 的 研 究 尚 未 見 報(bào) 道 本 研 究 中 取 樣 種 群 對(duì) 吡 唑 醚 菌 酯 的EC 50 均 值 為0 4675mg L 種 群 間 對(duì) 吡 唑 醚 菌 酯 的 最 大 與 最 小EC 50 比 值 為46 78 0 0368 1 7216mg L 取 樣 的34 株 菌 株 中 有 4 株 菌 株 的EC 50 陡 增 超 過1 0mg L 因 此 在 確 定 種 群 對(duì) 吡 唑 醚 菌 酯 的 敏 感 性 基 線 時(shí) 應(yīng) 取 去 除 EC 50 陡 增 的4 株 菌 株 后 種 群 的EC 50 均 值 為 宜 本 研 究 中 確 定 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì) 吡 唑 醚 菌 酯 的 抗 藥 性 檢 測(cè) 基 線 的EC 50 為0 3347mg L 僅 供 參 考 取 樣 種 群 病 菌 對(duì) 吡 唑 醚 菌 酯 的 敏 感 性 頻 率 呈 不 連 續(xù) 分 布 說 明 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 對(duì) 吡 唑 醚 菌 酯 可 能 產(chǎn) 生 了 敏 感 性 下 降 的 亞 種 群 我 們 還 需 要 從 分 子 水 平 上 確 定EC 50 陡 增 的4 株 菌 株 是 抗 性 菌 株 還 是 極 端 變 異 菌 株 草 莓 枯 萎 菌 是 土 壤 傳 播 病 害 病 原 菌 抗 藥 性 在 跨 區(qū) 域 間 流 行 傳 播 的 可 能 性 較 小 本 研 究 表 明 不 同 地 區(qū) 間 枯 萎 病 病 菌 種 群 對(duì) 同 一 藥 劑 的 敏 感 性 間 有 天 然 異 質(zhì) 性 差 異 除 試 驗(yàn) 操 作 外 的 可 能 性 但 相 鄰 地 區(qū) 來 源 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 對(duì) 同 種 殺 菌 劑 的 敏 感 性 之 間 沒 有 顯 著 性 差 異 P 0 05 因 此 有 必 要 研 究 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 種 群 對(duì) 藥 劑 的 敏 感 性 便 于 與 其 他 省 份 的 報(bào) 道 相 對(duì) 比 本 研 究 中 確 定 的 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 種 群 對(duì) 多 菌 靈 咪 鮮 胺 和 戊 唑 醇 的 敏 感 基 線 值 都 小 于 其 他 省 份 的 報(bào) 道 值 說 明 不 能 通 過 直 接 參 考 其 他 省 份 的 數(shù) 據(jù) 來 當(dāng) 作 上 海 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 菌 種 群 對(duì) 藥 劑 的 敏 感 性 基 線 在 本 研 究 中 雖 然 取 樣 菌 株 不 是 未 接 觸 過 藥 劑 的 野 生 菌 株 但 鑒 于 上 海 地 區(qū) 還 未 有 草 莓 枯 萎 病 病 菌 種 群 對(duì) 苯 并 咪 唑 類 咪 唑 類 甾 醇 脫 甲 基 抑 制 劑 類 和 甲 氧 基 丙 烯 酸 酯 類 殺 菌 劑 的 敏 感 性 研 究 因 此 可 以 把 本 研 究 中 草 莓 枯 萎 病 病 菌 種 群 的 平 均 EC 50 有 些 去 除 陡 增 大 的 值 作 為 抗 藥 性 檢 測(cè) 的 敏 感 基 線 需 指 出 的 是 由 于 任 何 敏 感 基 線 的 建 立 都 是 各 自 實(shí) 驗(yàn) 室 特 有 的 因 此 本 研 究 中 建 立 的 敏 感 基 線 值 僅 供 同 行 研 究 時(shí) 參 考 參 考 文 獻(xiàn) 1 方中 達(dá) 植病研 究方法 M 北京 農(nóng)業(yè) 出版社 1979 124 125 2 hiteTJ BrunsT LeeS etal Amplificationanddirectsequencing offungalribosomalRNAgenesforphylogenetics J PCRProtocols 1990 38 315 322 3 ChenL hu S Lu X et al Assessing the risk that Phytophthora meloniscandevelopapointmutation V1109L inCesA3conferring resistancetocarboxylicacidamidefungicides J PLoS ne 2012 7 7 e42069 4 吳 祥 姚 克 兵 吉 沐 祥 等 句 容 地 區(qū) 草 莓 枯 萎 病 病 原 菌 的 分 離 鑒 定 及 田 間 防 治 J 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報(bào) 2015 31 4 764 770 5 伊 海 靜 陳 艷 劉 正 坪 等 草 莓 枯 萎 病 菌 的 分 離 鑒 定 及 防 治 藥 劑 篩 選 J 西 北 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報(bào) 2016 25 4 626 635 6 于 紅 梅 趙 密 珍 王 靜 等 草 莓 枯 萎 病 菌 的 分 離 鑒 定 及 生 物 學(xué) 特 性 J 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2013 41 11 124 127 7 王 振 華 張 建 坤 龔 國(guó) 祥 等 草 莓 枯 萎 病 菌 的 分 離 與 鑒 定 J 湖 北 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2014 53 14 3297 3299 0 2 1 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 年 第48 卷 第4 期 書 書 書 櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄 櫄 櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄櫄櫄櫄 8 顧 春 波 史 曉 斌 姜 莉 莉 等 草 莓 枯 萎 病 菌 對(duì) 多 菌 靈 的 抗 性 及 其 抗 性 菌 株 生 物 學(xué) 特 性 J 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報(bào) 2010 37 3 266 272 9 陳 宏 州 莊 義 慶 楊 敬 輝 黃 麻 鏈 霉 菌NF0919 菌 株 對(duì) 草 莓 枯 萎 病 的 生 防 活 性 初 探 J 江 西 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報(bào) 2014 26 11 54 57 10 楊 煥 青 王 開 運(yùn) 范 昆 等 草 莓 枯 萎 病 菌 的 生 物 學(xué) 特 性 及7 種 殺 菌 劑 對(duì) 其 抑 制 作 用 J 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報(bào) 2008 35 2 169 174 11 裴 龍 飛 朱 發(fā) 娣 柴 阿 麗 等 中 國(guó) 華 北 地 區(qū) 瓜 類 尖 孢 鐮 刀 菌 對(duì) 咪 鮮 胺 的 敏 感 性 及 抗 藥 突 變 株 生 物 學(xué) 性 狀 研 究 J 農(nóng) 藥 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2016 18 5 575 581 12 林 才 華 王 開 運(yùn) 顧 春 波 等 山 東 省 草 莓 枯 萎 病 菌 對(duì) 四 種 三 唑 類 殺 菌 劑 的 敏 感 性 檢 測(cè) J 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報(bào) 2009 36 1 55 60 楊 呂 娟 張 子 俊 張 衛(wèi) 紅 新 疆 農(nóng) 牧 區(qū) 擬 蛹 螺 屬2 種 蝸 牛 形 態(tài) 特 征 和 分 子 數(shù) 據(jù) 的 比 較 研 究 J 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 48 4 121 126 doi 10 15889 j issn 1002 1302 2020 04 020 新 疆 農(nóng) 牧 區(qū) 擬 蛹 螺 屬2 種 蝸 牛 形 態(tài) 特 征 和 分 子 數(shù) 據(jù) 的 比 較 研 究 楊 呂 娟 張 子 俊 張 衛(wèi) 紅 新 疆 大 學(xué) 生 命 科 學(xué) 與 技 術(shù) 學(xué) 院 新 疆 烏 魯 木 齊830046 摘 要 擬 蛹 螺 屬 Pseudonapaeus 種 類 多 為 農(nóng) 牧 業(yè) 的 害 蟲 不 僅 危 害 各 種 蔬 菜 花 卉 其 中 某 些 種 類 還 是 家 畜 家 禽 雙 腔 科 吸 蟲 的 中 間 宿 主 本 研 究 主 要 探 究 該 屬 形 態(tài) 相 似2 種 蝸 牛 的 形 態(tài) 解 剖 學(xué) 和 分 子 生 物 學(xué) 特 征 確 定 它 們 分 類 為 該 類 動(dòng) 物 的 防 治 和 系 統(tǒng) 分 類 學(xué) 研 究 提 供 數(shù) 據(jù) 基 礎(chǔ) 形 態(tài) 結(jié) 果 顯 示 2 種 蝸 牛 的 生 境 貝 殼 質(zhì) 地 大 小 和 顏 色 齒 舌 以 及 顎 片 的 形 態(tài) 結(jié) 構(gòu) 相 似 但 貝 殼 形 狀 殼 口 齒 數(shù) 生 殖 系 統(tǒng) 的 解 剖 特 征 等 存 在 顯 著 差 異 其 中 一 種 為 鉆 擬 蛹 螺 Pseudonapaeus miser Martens 1874 另 一 種 為 新 種 即 吐 爾 根 擬 蛹 螺 Pseudonapaeus tuegenensissp nov 分 子 結(jié) 果 顯 示 1 基 于 CO 基 因 序 列 651bp 構(gòu) 建 的 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 中 新 種 和 鉆 擬 蛹 螺 以 高 支 持 率 后 驗(yàn) 概 率96 形 成 一 個(gè) 單 系 支 系A(chǔ) 顯 示 二 者 有 密 切 的 親 緣 關(guān) 系 但 是 鉆 擬 蛹 螺3 個(gè) 個(gè) 體 以 高 支 持 率 后 驗(yàn) 概 率100 聚 為 一 支 與 新 種 產(chǎn) 生 分 異 2 基 于ITS1 基 因 序 列 610bp 新 種 與 鉆 擬 蛹 螺 之 間 的 遺 傳 距 離 為13 7 12 5 15 1 與 本 屬 其 他 種 間 的 遺 傳 距 離 更 大 顯 著 高 于 種 內(nèi) 遺 傳 距 離2 5 1 3 3 5 結(jié) 合 CO 基 因 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 的 結(jié) 果 支 持 二 者 為 不 同 種 分 子 分 析 的 結(jié) 果 支 持 比 較 形 態(tài) 學(xué) 的 結(jié) 果 確 定 吐 爾 根 擬 蛹 螺 P tuegenensissp nov 不 同 于 鉆 擬 蛹 螺 P miser Martens 1874 為 一 新 種 利 用 分 子 系 統(tǒng) 學(xué) 方 法 研 究 該 屬 的 分 類 問 題 在 國(guó) 內(nèi) 為 首 次 關(guān) 鍵 詞 擬 蛹 螺 屬 形 態(tài) 解 剖 CO 基 因 ITS1 新 種 新 疆 中 圖 分 類 號(hào) S433 89 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 A 文 章 編 號(hào) 1002 1302 2020 04 0121 06 收 稿 日 期 2018 11 17 基 金 項(xiàng) 目 國(guó) 家 自 然 科 學(xué) 基 金 編 號(hào) 31260506 作 者 簡(jiǎn) 介 楊 呂 娟 1992 女 四 川 遂 寧 人 碩 士 主 要 從 事 貝 類 學(xué) 研 究 E mail YLJ687592 通 信 作 者 張 衛(wèi) 紅 碩 士 副 教 授 主 要 從 事 貝 類 學(xué) 研 究 E mail zwh6879a 擬 蛹 螺 屬 Pseudonapaeus 由 esterlund 于 1887 年 建 立 隸 屬 于 腹 足 綱 Gastropoda 柄 眼 目 Stylommatophora 艾 納 螺 科 Enidae 該 屬 的 多 數(shù) 種 類 是 農(nóng) 業(yè) 和 畜 牧 業(yè) 的 害 蟲 常 危 害 各 種 蔬 菜 花 卉 的 幼 芽 嫩 葉 等 其 中 某 些 種 類 為 家 畜 家 禽 及 野 生 動(dòng) 物 雙 腔 科 吸 蟲 的 中 間 宿 主 1 2 陳 德 牛 等 報(bào) 道 雙 腔 吸 蟲 病 在 新 疆 牧 區(qū) 廣 為 流 行 大 大 影 響 家 畜 的 體 膘 和 產(chǎn) 毛 量 甚 至 引 起 牲 畜 死 亡 其 中 間 宿 主 為 某 些 陸 生 螺 類 包 括 艾 納 螺 科 的 一 些 種 類 3 擬 蛹 螺 屬 地 理 分 布 較 窄 主 要 分 布 于 中 亞 以 及 印 度 半 島 西 北 部 現(xiàn) 記 載 有40 余 種 4 我 國(guó) 對(duì) 該 屬 的 研 究 相 對(duì) 不 足 到 目 前 為 止 僅 報(bào) 道 一 種 即 鉆 擬 蛹 螺 P miser Martens 1874 該 種 在 國(guó) 外 分 布 于 塔 吉 克 斯 坦 哈 薩 克 斯 坦 吉 爾 吉 斯 斯 坦 俄 羅 斯 土 耳 其 等 地 區(qū) 在 我 國(guó) 僅 在 新 疆 阿 勒 泰 木 壘 庫(kù) 爾 勒 烏 什 阿 克 蘇 及 天 山 一 帶 農(nóng) 田 和 牧 區(qū) 有 分 布 5