果 樹 資 源 學(xué) 報(bào) 2020 1 4 66 7 1 草 莓 病 毒 病 脫 毒 技 術(shù) 及 病毒檢測研究進(jìn)展 霍 辰 思 樊 新 萍 劉 偉 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹研究所 山 西 太 原 030031 收 稿 日 期 2020 03 24 基 金 項(xiàng) 目 脫毒草莓立體設(shè)施集約化育苗技術(shù)研發(fā) 項(xiàng) 目 編 號(hào) 晉 財(cái) 農(nóng) 2017 48 1 第 一 作 者 簡 介 霍 辰 思 1988 女 碩 士 研 究 實(shí) 習(xí) 員 主要從事草莓栽培育種的研究 電 話 1 3 5 4 6 3 0 2 2 6 8 通 訊 作 者 樊 新 萍 197 3 女 博 士 研 究 員 主要從事草莓栽培育種的研究 電 話 1 3 8 3 4 8 3 6 8 0 7 摘 要 針對(duì)草莓主要病毒病及其為害特點(diǎn) 草莓脫毒主要技術(shù)及病毒檢測技術(shù)進(jìn)行綜述 介 紹 了 近年來草莓脫毒苗繁育技術(shù) 以期對(duì)草莓生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)作用 關(guān) 鍵 詞 草 莓 病 毒 病 脫 毒 技 術(shù) 病 毒 檢 測 文 章 編 號(hào) 2096 8108 2020 04 0066 06 中 圖 分 類 號(hào) S668 4 文 獻(xiàn) 標(biāo) 識(shí) 碼 A Re s e a r c h Ad v a n c e in De t o x i f ic a t io n T e c h n iq u e a n d V ir u s De t e c t io n o f S t r a w b e r r y V ir u s Dis e a s e H UO Ch ens i FAN Xi np i ng LIU Wei Fr u i t Tr ee Res ear chIns t i t u t e o fSh anx iAg r i cu l t u r alUni v er s i t y Tai y u an 030031 Ch i na Ab s t r a c t Th e i nj u r i o u s ch ar act er i s t i cs o fs t r aw ber r y v i r u s di s eas e mai n t ech no l o g i es o fs t r aw ber r y det o x i f i cat i o n andv i r u s det ect i o n t ech ni q u es w er e s u mmar i z edi n t h i s r es ear ch Th e br eedi ngt ech ni q u eo fv i r u s f r ee s t r aw ber r y w as i nt r o du ced i n o r der t op r o v i de t h eo r et i cal g u i dance o fs t r aw ber r y p r o du ct i o n Ke y w o r d s s t r aw ber r y v i r u s di s eas e det o x i f i cat i o n t ech no l o g y v i r u s det ect i o n 草 莓 Ro s aceae Fr a g a r i a 在 園 藝 學(xué) 上 屬 漿 果 類 果 樹 多 年 生 薔 薇 科 草 本 植 物 1 其 資 源 類 型 多 樣 適 應(yīng) 強(qiáng) 栽 培 面 積 廣 是 一 種 重 要 的 經(jīng) 濟(jì) 作 物 果 肉 香 甜 多 汁 含 有 大 量 微 量 元 素 和 維 生 素 營 養(yǎng) 價(jià) 值 極 高 素 有 水 果 皇 后 之 美 稱 是一種深受大眾喜 愛 的 水 果 多 以 無 性 繁 殖 為 主 其 繁 殖 方 式 有 匍 匐 莖 繁 殖 新 莖 分 株 繁 殖 和 離 體 繁 殖 然 而 通 過 傳 統(tǒng) 繁 殖 方 法 并 不 能 有 效 脫 除 病 毒 很多農(nóng)業(yè)企業(yè)只注 重 產(chǎn) 量 對(duì)生產(chǎn)中出現(xiàn)的病毒病并沒有得到有效重 視 由 于 多 年 連 作 種 性 退 化 嚴(yán) 重 草莓病毒病嚴(yán)重 影 響 產(chǎn) 量 其主要表現(xiàn)為植株生長緩慢 葉 片 皺 縮 見 斑 駁 果 實(shí) 畸 形 品 質(zhì) 變 差 2 目 前 草 莓 斑 駁 病 毒 草 莓 輕 型 黃 邊 病 毒 草 莓 鑲 脈 病 毒 草 莓 皺 縮 病 毒和草莓潛隱環(huán)斑病毒是栽培生產(chǎn)上廣泛侵染草莓 的 幾 種 病 毒 53 草 莓 同 馬 鈴 薯 甘 薯 山 藥 等 無 性 繁 殖 植 物 一 樣 一 旦 感 染 病 毒 就 會(huì) 傳 染 給 后 代 隨 著 無 性 繁 殖 系 數(shù) 不 斷 擴(kuò) 大 病毒傳播速度也逐漸加快 草 毒 植 株 本 身 對(duì) 病 毒 并 沒 有 免 疫 能 力 目 前 尚 沒 有 特 效 方 法 或 外 用 藥 劑 可 以 治 愈 病 毒 病 獲 得 草 莓 無 病 毒 苗 的 有 效 方 法 仍 是 通 過 組 培 脫 毒 得 到 無 病 毒 原 種 植 株 然 后 將 無 病 毒 苗 進(jìn) 行 擴(kuò) 繁 從 而 達(dá) 到 滿 足 市 場 的 需 求 量 4 目 前 在草莓病毒脫除方面 熱 處 理 結(jié) 合 莖尖培養(yǎng)脫毒法國內(nèi)外普遍采用的一種方法 5 6 但這種方法存在操作時(shí)技術(shù)難度大 培 養(yǎng) 周 期 耗 時(shí) 長 脫 毒 環(huán) 境 要 求 高 脫毒苗成活率低等問題 本 文 通 過 對(duì) 草 莓 病 毒 病 的 研 究 現(xiàn) 狀 脫 毒 技 術(shù) 及 病 毒 檢 測 鑒 定 等 方 面 的 研 究 進(jìn) 行 綜 述 以 期 對(duì) 草 莓 生 產(chǎn) 起 到 指 導(dǎo) 作 用 1 草莓主要病毒病類型 1 1 草 莓 斑 駁 病 毒 s t r a w b e r r y m o t t l e v i r u s S Mo V 草 莓 斑 駁 病 毒 又 叫 草 莓 輕 型 皺 縮 病 毒 屬 伴 生 豇 豆 病 毒 科 S e c o v i r i d a e S a d w a v i r u s 病 毒 屬 2 病 毒 粒 子 形 狀 為 球 形 通 常 存 在 于 植 株 葉 片 的 表 層 韌皮部以及薄壁細(xì)胞里 1938 年 第 1 次 在英格蘭鳳梨草莓上發(fā)現(xiàn)該病毒 存 在 范 疇 廣 該 6 6 病 毒 屬 典 型 的 半 持 久 類 蚜 蟲 傳 染 其 傳 播 途 徑 以 草 莓 釘 毛 蚜 為 主 托 馬 斯 毛 管 蚜 花 毛 管 蚜 棉 蚜 等 蚜 蟲 皆 可 傳 播 通過嫁接和機(jī)械接種進(jìn)行傳染 不 能 通 過 草 莓 種 子 傳 染 植株間相互觸碰也不會(huì)被傳染 感 染 該 病 毒 草 莓 的 主 要 癥 狀 為 葉 脈 透 明 水 漬 化 脈 序 雜 亂 葉 片 褪 綠 見 斑 駁 植 株 矮 化 病 癥 隨 季 節(jié) 變 化 其 表 現(xiàn) 略 有 不 同 或 無 癥 狀 但隨著侵染時(shí)間延長 也 會(huì) 導(dǎo) 致 植 株 生 長 勢 減 弱 產(chǎn) 量 降 低 1 2 草 莓 鑲 脈 病 毒 s t r a w b e r r y v e i n b a n d v i r u s S V BV 草 莓 鑲 脈 病 毒 屬 花 椰 菜 花 葉 病 毒 科 Ca u l i m o v i r i d a e 花 椰 菜 病 毒 屬 Ca u l i m o v i r u s 2 病 毒 粒 子 體 積 較 大 呈 球 型 沒 有 包 膜 通常于細(xì)胞質(zhì)里進(jìn) 行 復(fù) 制 依 附 于 葉 片 表 面 植 株 表 皮 跟 木 質(zhì) 部 連 接 的 維 管 束 以 及 細(xì) 胞 質(zhì) 英 國 科 學(xué) 家 于 1952 年 從 美 國 巴 西 等 地 引 進(jìn) 的 草 莓 品 種 Fai r f ax 上 首 次 發(fā) 現(xiàn) 該 病 毒 隨 后 在 全 球 范 圍 廣 泛 傳 播 它 屬 于 半 持 久 性 蚜 傳 病 毒 同 草 莓 斑 駁 病 毒 類 似 主要通過草莓釘 毛 蚜 進(jìn) 行 傳 播 鑒于其在傳播媒介里不能進(jìn)行復(fù)制 所 以 無 法 通 過 汁 液 傳 染 也不能通過種子及花粉傳 染 研 究 發(fā) 現(xiàn) 弗 吉 尼 亞 草 莓 叢 林 草 莓 智 利 草 莓 等被該病毒侵染后植株癥狀為葉脈發(fā)黃 葉 片 邊 緣 呈 不 規(guī) 則 黃 色 新 葉 細(xì) 弱 畸 形 等 由 于 該 病 毒 來 源 復(fù) 雜 不 同 地 域 壞 境 下 SVBV 基 因 組 分 子 存 在 差 異 這 也 導(dǎo) 致 危 害 特 點(diǎn) 傳 播 媒 介 各 不 相 同 1 3 草 莓 皺 縮 病 毒 s t r a w b e r r y c r i n k l e v i r u s S CV 草 莓 皺 縮 病 毒 屬 彈 狀 病 毒 科 Rh a b d o v i r i d a e 細(xì) 胞 質(zhì) 彈 狀 病 毒 屬 Cy t o r h a b d o v i r u s 2 病 毒 學(xué) 家 普 遍 認(rèn) 為 草 莓 潛 A 和 潛 B 病 毒 與 SCV 同 屬 一 類 病 毒 現(xiàn) 如 今 大 范 疇 存 在 于 國 內(nèi) 外 還 有 著 株 系 分 化 的 情 況 病毒粒子形狀呈子彈狀 通 常 依 附 在 植 株 表 皮 導(dǎo)管跟篩管周圍的軟體組織細(xì)胞里 該 病 毒 的 傳 播 媒 介 通 常 是 草 莓 釘 毛 蚜 傳 染 性 持 久 可 以 在 昆 蟲 的 體 內(nèi) 完 成 復(fù) 制 還 可 以 通 過 接 種 及 嫁 接 的 形 式 傳 播 植 株 彼 此 觸 碰 不 會(huì) 發(fā) 生 傳 染 種 子 跟 花 粉 同 樣 不 會(huì) 傳 播 病 毒 在生產(chǎn)上主要危害叢林草 莓 受 其 侵 染 后 花 瓣 變 形 缺 瓣 植 株 葉 片 畸 形 葉 脈 邊緣出現(xiàn)大面積不規(guī)則褪綠斑及壞死斑 葉 脈 由 綠 色 變 為 水 漬 透 明 狀 幼葉生長大小不均 皺 縮 扭 曲 小 葉 黃 化 植 株 矮 化 果 實(shí) 畸 形 嚴(yán)重制約草莓產(chǎn)量 1 4 草 莓 潛 環(huán) 斑 病 毒 s t r a w b e r r y l a t e n t r i n g s p o t v i r u s S LRS V 草 莓 潛 環(huán) 斑 病 毒 屬 豇 豆 花 葉 病 毒 科 S e c o v i r i d a e 線蟲傳多面體病毒屬 Ne p o v i r u s 2 通 常 存 在 于 歐 洲 美 國 及 俄 羅 斯 等 國 家 中 國 目 前 尚 未 發(fā) 現(xiàn) 該 病 毒 病毒粒子形狀尚不確定 有 文 獻(xiàn) 報(bào) 道 其 粒 子 形 態(tài) 為 球 型 主要以長劍線蟲為媒介傳播 主 要 感 染 種 球 苗 木 以 及 塊 莖 植 株 受 到 病 毒 侵 染 后 主 要 表 現(xiàn) 為 葉 片 畸 形 褪 綠 黃 化 植 株 矮 小 果 實(shí) 品 質(zhì) 下 降 危 害 嚴(yán) 重 時(shí) 可 絕 產(chǎn) 1 5 草 莓 輕 型 黃 邊 病 毒 s t r a w b e r r y m i l d y e l l o w e d g e v i r u s S MY EV 草莓輕型黃邊病毒屬甲型線性病毒科 Al p h a f l e x i v i r i d a e 暫 定 為 馬 鈴 薯 病 毒 屬 Po t e x v i r u s 2 蘇 代 發(fā) 2 在 文 獻(xiàn) 中 闡 述 在 1992 年 時(shí) 這 種 病 毒 首 次 發(fā) 現(xiàn) 于 美 國 加 州 之 后 澳 大 利 亞 歐 洲 和 日 本 等 地 相 繼 發(fā) 現(xiàn) 此 病 毒 現(xiàn) 如 今 在 國 內(nèi) 外 廣 泛 傳 播 病 毒 粒 子 呈 線 性 屬 單 鏈 正 義 RNA 該 病 毒 傳 播 媒 介 通 常 是 草 莓 釘 毛 蚜 不 能 在 其 他 傳 播 媒 介 中 繁 殖 這種病毒單獨(dú)侵染危害小 通 常 是 跟 其 他 多 種 病 毒 共 同 侵 襲 植 株 受病毒復(fù)合侵染后表現(xiàn) 嫩 葉 綠 色 褪 除 出 現(xiàn) 黃 色 斑 點(diǎn) 老 葉 出 現(xiàn) 壞 死 條 斑 葉 片 大 面 積 枯 死 植 株 變 矮 果 實(shí) 畸 形 果 品 變 差 極 大 程 度 影 響 草 莓 產(chǎn) 量 2 草 莓 脫 毒 技 術(shù) 2 1 草莓莖尖培養(yǎng)脫毒 植物莖尖分生組織由不斷分裂的細(xì)胞組成 由 于 其 生 長 旺 盛 細(xì) 胞 分 裂 快 且 在 1 0 mm 范 圍 內(nèi) 受 病 毒 浸 染 小 因 此 生 產(chǎn) 上 廣 泛 使 用 的 方 法 仍 是 草 莓 莖 尖 脫 毒 13 Bel k eng r en andM i l l er 最 早 應(yīng) 用 組 培 法 獲 得 了 草 莓 無 病 毒 苗 法 國 學(xué) 者 M o r el 14 證 明 已感染病毒的植株通過莖尖分生組織培養(yǎng) 可 以 恢 復(fù) 成 無 病 毒 植 株 莖尖大小直接影響著脫毒效果 由于病毒廣泛存在于無維管束的分生區(qū)域內(nèi) 需 依 靠 胞 間 連 絲 進(jìn) 行 傳 遞 莖尖分生區(qū)域的細(xì)胞分裂 生 長 速 度 較 快 病毒的傳遞速度較莖尖分生細(xì)胞慢 所 以 生 長 點(diǎn) 病 毒 含 量 最 低 15 然 而 組 培 中 剝 取 莖 尖 大 小 直 接 影 響 其 脫 毒 率 莖尖越小脫毒率越高 而 成 活 率 卻 有 所 降 低 且 剝 取 范 圍 越 小 操 作 難 度 越 大 因 此 掌 握 合 適 的 剝 取 范 圍 對(duì) 脫 毒 率 和 成 活 率 至 關(guān) 重 要 沈 磊 童 堯 明 51 等切取草莓莖尖分生組織 0 2 0 4 mm 進(jìn) 行 組 培 出 苗 率 為 83 90 脫 毒 率 高 達(dá) 100 高 山 林 16 把切取的草莓芽沖洗 后 通 過 高 溫 短時(shí)間快速熱處理 用 莖 尖 培 養(yǎng) 法 獲 得 無 病 毒 草 莓 苗 高 遐 虹 17 在 試 驗(yàn) 中 采 用 二 次 脫 毒 方 法 即 第 1 次不剝離莖芽的苞葉 直 接 切 割 莖 尖 7 6 霍 辰 思 等 草 莓 病 毒 病 脫毒技術(shù)及病毒檢測研究進(jìn)展 進(jìn) 行 組 培 脫 毒 將 培 養(yǎng) 2 個(gè)月后的組培苗從瓶中取 出 再 次 切 取 0 4 0 6mm 的 莖 尖 進(jìn) 行 第 2 次 脫 毒 培 養(yǎng) 獲 得 分 化 率 和 脫 毒 率 分 別 為 7 9 2 和 84 5 的 草 莓 脫 毒 苗 何 歡 樂 18 等 研 究 表 明 取 大 約 0 5 mm 莖 尖 進(jìn) 行 二 次 脫 毒 培 養(yǎng) 脫 毒 率 高 達(dá) 100 但 成 活 率 卻 大 大 降 低 為 26 綜 合 前 期 研 究 表 明 采 用 莖 尖 脫 毒 莖 尖 大 小 通 常 控 制 在 0 2 0 4 mm 左 右 脫 毒 率 最 高 若 熱 處 理 時(shí) 間 過 長 會(huì) 阻 礙 莖 尖 正 常 生 長 導(dǎo) 致 存 活 率 下 降 綜 上 所 述 傳 統(tǒng)莖尖培養(yǎng)及二次脫毒莖尖培養(yǎng)技術(shù)雖是獲得無毒 苗 的 有 效 手 段 但 存 在 操 作 復(fù) 雜 耗 時(shí) 長 工 作 效 率 低 的 問 題 因 此 摸 索 出 一 套 高 效 快 捷 簡 便 的 脫 毒 方 法 至 關(guān) 重 要 2 2 熱 處 理 脫 病 毒 自 然 界 大 多 數(shù) 的 病 毒 粒 子 都 有 不 耐 高 溫 特 性 熱處理脫毒就是利用高溫能使病毒粒子失活 達(dá) 到 滅 活 效 果 21 熱 處 理 包 括 熱 水 處 理 和 熱 氣 處 理 目 前脫毒效果較好的方法是利用恒溫或變溫的熱空氣 處 理 帶 病 植 株 剪取熱處理后長出的新芽進(jìn)行嫁接 或 進(jìn) 行 組 織 培 養(yǎng) 得到無病毒的草莓原種植株 肖 君 澤 19 通 過 37 38 恒 溫 或 35 38 變 溫 處 理 草 莓 莖 尖 有 效 降 低 熱 處 理 后 植 株 死 亡 率 廖 俊 杰 20 等 將 育 苗 缽 培 養(yǎng) 的 草 莓 苗 于 38 恒 溫 箱 處 理 15 d 后 并 沒 有 脫 除 病 毒 處 理 90 d 后 脫 毒 率 僅 為 66 劉 健 21 在 文 獻(xiàn) 中 表 述 莖 尖 在 40 與 42 水 浴 處 理 的 脫 毒 率 均 可 達(dá) 100 綜 合 考 慮 成 活 率 與 脫 毒 率 熱 處 理 溫 度 以 40 為 好 2 3 化 學(xué) 試 劑 脫 毒 化學(xué)療法脫毒就是利用化學(xué)試劑在植物體內(nèi)可 以 延 遲 或 是 抑 制 病 毒 復(fù) 制 從而使植物擺脫病毒的 一 種 外 界 干 預(yù) 法 該方法對(duì)莖尖大小要求不高 無 需特定范圍的莖尖也能得到較好的脫毒效果 對(duì) 于 化學(xué)藥劑處理脫毒的機(jī)制尚未有很深入的研究 目 前 植 物脫毒的化學(xué)試劑主要有三氮唑核苷 病 毒 唑 5 二 氫 尿 嘧 啶 DH T 放 線 菌 素 堿 性 孔 雀 綠 及 環(huán) 乙 酰 胺 等 其中病毒唑是應(yīng)用最廣的化學(xué)試劑 1953 1954 年 D No r r i s 最 早 將 孔 雀 綠 用 于 馬 鈴 薯 無 病 毒 苗 培 育 脫 掉 了 馬 鈴 薯 X 病 毒 獲 得 了 馬 鈴 薯 無 病 毒 苗 廖 俊 杰 20 等 采 用 培 養(yǎng) 基 化 學(xué) 療 法 和 田 間 化 學(xué) 療 法 進(jìn) 行 對(duì) 比 試 驗(yàn) 在 培 養(yǎng) 基 中 加 入 化 學(xué) 試 劑 后 切 取 適 當(dāng) 莖 尖 進(jìn) 行 組 培 獲 得 比 對(duì) 照 田 間 化 學(xué) 療 法 高 7 0 的 脫 病 毒 率 秦 梅 22 在 甘 薯 脫 毒 培 養(yǎng) 基 中 加 入 10 mg L 的 三 氮 唑 核 苷 后 脫 毒 率 可 達(dá) 到 7 6 Cas s el l s 23 等 將 病 毒 唑 加 入 培 養(yǎng) 基 中 通 過 組 培 可 脫 除 馬 鈴 薯 多 種 病 毒 通 過 化 學(xué) 療 法 雖 然 能 得 到 脫 病 毒 植 株 但 是 會(huì) 有 輕 度 藥 害 現(xiàn) 象 發(fā) 生 有研究表明其毒性會(huì)遺留在新生植株內(nèi) 隨 后 進(jìn) 入 人 體 與現(xiàn)在提倡的綠色環(huán)保無公害作物相駁 出 于 安 全 實(shí) 效 性 考 慮 很難在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用 2 4 熱處理與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合脫毒 利 用 傳 統(tǒng) 的 熱 處 理 脫 毒 由 于 莖 尖 在 高 溫 高 濕 環(huán) 境 下 處 理 時(shí) 間 過 長 植 株 易 枯 死 容 易 受 紅 蜘 蛛 蚜 蟲 等 昆 蟲 危 害 且 不 同 病 毒 對(duì) 高 溫 的 耐 受 性 不 同 單純依靠熱處理并不能有效脫除病毒 而 熱 處 理與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合比常規(guī)脫毒效果更好 目 前 該 技 術(shù) 在 生 產(chǎn) 上 普 遍 使 用 王 際 軒 24 將 生 長 旺 盛 的 草 莓 盆 栽 苗 于 38 40 溫 度 下 熱 處 理 42d 選 取 熱 處理后大小合適的莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng) 脫 毒 率 能 達(dá) 到 7 0 左 右 何 歡 樂 46 在 草 莓 莖 尖 培 養(yǎng) 脫 毒 效 果 研究中采用改良熱處理莖尖培養(yǎng)法 先 將 草 莓 匍 匐 莖 于 40 水 浴 處 理 4 h 后 剝 取 0 5 0 6mm 左 右 的 莖 尖 進(jìn) 行 培 養(yǎng) 獲 得 47 37 莖 尖 成 活 率 劉 健 21 在 試 驗(yàn) 中 設(shè) 計(jì) 40 和 42 兩 個(gè) 溫 度 梯 度 處 理 后 的 莖 尖 脫 毒 率 均 可 達(dá) 到 100 但 鑒 于 時(shí) 間 長 短 對(duì) 莖 尖 有 影 響 力 一 般 采 用 40 處 理 4h 為 宜 李 志 強(qiáng) 25 等 以 草 莓 品 種 紅 顏 章 姬 為 試 材 篩 選出莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基配方為 M S 6 BA 0 5 mg L NAA 0 02mg L 并 建 立 其 組 培 快 繁 體 系 顧 地 周 26 采 用 均 勻 設(shè) 計(jì) 法 將 已 感 染 了 斑 駁 病毒和皺縮病毒的草莓試管苗在試管內(nèi)誘導(dǎo)匍匐莖 再 將 帶 有 匍 匐 莖 的 試 管 苗 直 接 進(jìn) 行 56 高 溫 處 理 后 切 取 1 mm 的 莖 尖 在 LS 6 BA 1 00 mg L GA31 90 mg L KT 1 00 mg L 培 養(yǎng) 基 進(jìn) 行 培 養(yǎng) 通過病毒檢測和栽培觀察可知 脫 毒 率 高 達(dá) 100 2 5 超 低 溫 脫 毒 超低溫脫毒是一種新型高效脫毒技術(shù) 較 傳 統(tǒng) 脫 毒 法 而 言 其 脫 毒 效 率 更 高 且 對(duì) 莖 尖 大 小 無 要 求 超低溫冷凍療法是兼植物種質(zhì)資源保護(hù)與脫毒 雙 重 作 用 的 一 種 脫 毒 方 法 其 作 用 原 理 是 27 利 用 莖尖分生組織細(xì)胞與分化細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的差異進(jìn)行脫 毒 由于莖尖分生組織細(xì)胞體積較小 液 泡 小 和 較 大 核 質(zhì) 體 積 比 等 特 點(diǎn) 脫 水 更 容 易 在 液 氮 環(huán) 境 中 不 易 被 凍 死 而莖尖分化細(xì)胞體積較大 含 有 較 大 的 液 泡 和 較 小 的 核 質(zhì) 比 脫 水 處 理 較 難 在 超 低 溫 環(huán) 境 下 易 被 凍 死 此 外 莖尖分生組織病毒含量少 而 分 化 組 織 往 往 是 病 毒 富 集 區(qū) 因 此 當(dāng) 液 氮 處 理 分 生 組 織 后 受傷死亡的細(xì)胞大部分都是分化細(xì)胞 而 保 留 下 來 的 不 含 病 毒 分 生 組 織 可 通 過 組 織 培 養(yǎng) 獲 得 無 8 6 果 樹 資 源 學(xué) 報(bào) 2020 1 4 病 毒 植 株 27 Br i s o n 等 1997 首 次 運(yùn) 用 超 低 溫 脫 毒 法 脫 除 李 痘 包 病 毒 Plu m p o x v i r u s PPV 獲 得 李 無 病 毒 植 株 此 后 超低溫冷凍療法開始普遍應(yīng) 用 于 植 物 脫 毒 目 前 超 低 溫 脫 毒 技 術(shù) 已 經(jīng) 在 百 合 28 甘 薯 29 馬 鈴 薯 30 黃 瓜 31 葡 萄 29 柑 橘 32 33 香 蕉 31 櫻 桃 34 獼 猴 桃 35 等 植 物 脫 除 病 毒 上 廣 泛 應(yīng) 用 對(duì) 于 草 莓 研 究 報(bào) 到 較 少 羅 婭 37 優(yōu) 化 超 低 溫 脫 除 體 系 草 莓 的 莖 尖 存 活 率 為 69 多 種 草 莓 病 毒 被 脫 除 脫 除 率 高 達(dá) 100 盛 宏 亞 38 以 攜 帶 草 莓 斑 駁 病 毒 SM o V 紅 顏 為 供 試 材 料 建 立 預(yù) 防 紅 顏 草 莓 的 莖 尖 玻 璃 化 超 低 溫 脫 毒 體 系 利 用 RT PCR 技 術(shù) 檢 測 草 莓 斑 駁 病 毒 的 脫 毒 效 果 脫 毒 率 為 100 陳 曦 39 以 福 莓 1 號(hào) 為 試 材 利用莖尖超低溫冷凍脫毒技術(shù)將外植體低溫鍛 煉 2 周 后 莖 尖 在 預(yù) 培 養(yǎng) 基 上 暗 培 養(yǎng) 3 d 1 2 濃 度 PVS2 溶 液 及 全 濃 度 PVS2 溶 液 冰 上 冷 處 理 2 次 液 氮 冷 凍 1 h 后 在 39 的水浴中快速化凍 2mi n 卸 載 后 莖 尖 先 暗 培 養(yǎng) 3 d 后 轉(zhuǎn) 入 正 常 光 照 培 養(yǎng) 再 生 培 養(yǎng) 成 活 率 約 30 病 毒 脫 除 率 為 100 3 草莓無病毒苗鑒定與繁殖 3 1 草莓病毒病檢測方法 采用上述脫毒技術(shù)獲得的草莓苗并不一定能夠 完 全 脫 毒 因此需要對(duì)脫毒后的草莓苗進(jìn)行病毒檢 測 無病毒苗的鑒定主要有生物學(xué)鑒定 血 清 學(xué) 檢 測 法 電 鏡 檢 測 法 等 47 目 前 分 子 PCR 技 術(shù) 也 被 廣 泛 應(yīng) 用 到 草 莓 病 毒 檢 測 中 40 生 物 學(xué) 鑒 定 法 又 稱 指 示 植 物 檢 測 法 是最早應(yīng)用于植物病毒檢測的 方 法 目 前 仍 被 廣 泛 應(yīng) 用 47 該 檢 測 方 法 可 以 直 接 觀 察 到 檢 測 結(jié) 果 無 需 特 定 儀 器 設(shè) 備 操 作 簡 單 易 掌 握 不 過 檢 測 時(shí) 間 耗 時(shí) 長 受外界環(huán)境因素影響大 容 易 出現(xiàn)檢測結(jié)果的假陽性 降 低 其 檢 測 的 靈 敏 度 48 血 清 學(xué) 病 毒 檢 測 法 應(yīng) 用 較 早 該 方 法 利 用 抗 原 與 抗體的特異性反應(yīng) 來 鑒 定 植 物 是 否 攜 帶 病 毒 49 常 見 的 血 清 學(xué) 檢 測 方 法 有 沉 淀 反 應(yīng) 凝 聚 反 應(yīng) VBA 酶 聯(lián) 免 疫 的 吸 附 法 ELISA 免 疫 熒 光 技 術(shù) IFA 斑 點(diǎn) 免 疫 測 定 法 DIBA 以 及 免 疫 膠 體 金 技 術(shù) GICT 49 等 這 些 方 法 具 有 較 高 的 檢 測 靈 敏 性 能 夠 快 速 的 檢 測 到 草 莓 病 毒 操作也相對(duì)簡易 方 便 但由于其檢測時(shí)常依賴血清的品質(zhì) 可 被 鑒 定 的 病 毒 種 類 受 到 限 制 目前僅有少部分果樹病毒 的 抗 血 清 可 被 利 用 草 莓 病 毒 檢 測 中 只 有 草 莓 輕 型 黃 斑 病 毒 和 草 莓 皺 縮 病 毒 抗 血 清 制 備 成 功 50 電 子 顯 微 鏡 技 術(shù) 在 生 物 學(xué) 細(xì) 胞 學(xué) 病毒學(xué)等多個(gè)生命 科 學(xué) 領(lǐng) 域 發(fā) 揮 重 要 作 用 不 僅 能 夠 直 觀 準(zhǔn) 確 的 觀 察 到 植 物 表 面 特 征 還 可 以 對(duì) 病 毒 機(jī) 理 進(jìn) 行 深 入 的 內(nèi) 在 挖 掘 由 于 設(shè) 備 價(jià) 格 昂 貴 對(duì) 實(shí) 驗(yàn) 人 員 操 作 技 術(shù) 要 求 高 并 沒 有 廣 泛 應(yīng) 用 到 植 物 檢 測 實(shí) 際 工 作 中 但電子顯微技術(shù)作為輔助檢測技術(shù) 在 分 子 生 物 學(xué) 領(lǐng) 域 發(fā) 揮 著 不 可 磨 滅 的 作 用 41 分 子 生 物 學(xué) 檢 測 法 以 核 酸 分 子 雜 交 為 基 礎(chǔ) 成 為 當(dāng) 前 病 毒 檢 測 最 主 要 方 法 因其檢測時(shí)靈敏度高 特 異 性 強(qiáng) 不 受 季 節(jié) 外 界 環(huán) 境 影 響 采樣后可隨時(shí)進(jìn)行大批量檢測 發(fā)揮著血清學(xué)檢測法及傳統(tǒng)病毒檢測法無法比擬的 優(yōu) 勢 目 前 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) RT PCR 檢 測 法 以 RNA 分子轉(zhuǎn)錄為基礎(chǔ)的 NASBA 檢 測 法 核酸雜交技術(shù)和基因芯片技術(shù)等是分子生物學(xué)檢測 的 常 用 手 段 3 3 2 草莓脫毒苗繁育技術(shù) 草莓脫毒苗較傳統(tǒng)繁殖方式有較大優(yōu)勢 其 在 植 物 學(xué) 性 狀 果 實(shí) 品 質(zhì) 豐產(chǎn)性等各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于普 通 繁 殖 苗 大 量 研 究 表 明 栽 培 無 病 毒 的 草 莓 苗 能 夠 提 高 草 莓 的 質(zhì) 量 草莓果實(shí)著色正常 果 形 整 齊 畸 形 果 率 降 低 19 這 些 都 為 草 莓 優(yōu) 質(zhì) 商 品 化 生 產(chǎn) 提 供 有 力 保 障 在現(xiàn)代化草莓種苗擴(kuò)繁基地 脫 毒 苗 的 組 織 培 養(yǎng) 為 種 苗 生 產(chǎn) 發(fā) 揮 關(guān) 鍵 性 作 用 52 在 脫毒快繁過程中不僅要提高組培苗的增殖率和成活 率 還 要 求 對(duì) 培 養(yǎng) 基 濃 度 培養(yǎng)容器種類及凝固劑種 類 等 進(jìn) 行 優(yōu) 化 篩 選 在 保 證 種 苗 生 產(chǎn) 質(zhì) 量 的 基 礎(chǔ) 上 達(dá) 到 降 低 生 產(chǎn) 成 本 找 到 節(jié) 能 環(huán) 保 高 效 的 繁 育 技 術(shù) 張 恒 42 等 用 蛭 石 IBA 溶 液 作 為 草 莓 大 苗 沙 盤 生 根 培 養(yǎng) 基 利用保鮮膜對(duì)沙盤進(jìn)行保濕 可 保 障 草莓繼代培養(yǎng)的大苗在沙盤里生根 將 該 技 術(shù) 應(yīng) 用 于 草 莓 脫 毒 苗 的 擴(kuò) 繁 可 節(jié) 約 大 量 成 本 謝 文 申 43 以 脫 毒 野 薄 荷 試 管 苗 為 外 植 體 用 30 g L 食 用 白 糖 代 替 蔗 糖 用 涼 開 水 代 替 蒸 餾 水 配 置 淺 層 液 體 培 養(yǎng) 基 比普通固體培養(yǎng)基節(jié)約成本 57 44 張 春 芬 44 為降低草莓脫毒組培苗的生產(chǎn)成本 用 白 砂 糖 替 換 蔗 糖 卡 拉 膠 替 換 瓊 脂 粉 總 成 本 降 為 原 來 的 32 5 采 用 帶 塑 料 瓶 蓋 的 玻 璃 瓶 可 大 大 節(jié) 省 勞 動(dòng) 力 提 高 生 產(chǎn) 效 率 另 外 隨 著 生 物 技 術(shù) 發(fā) 展 脫 毒草莓苗的培育更傾向于集生物工程 病 毒 學(xué) 檢 測 和快繁農(nóng)藝技術(shù)為一體的栽培模式 應(yīng) 將 這 一 高 新 技 術(shù) 系 統(tǒng) 化 高 效 化 實(shí)用化的應(yīng)用到草莓生產(chǎn)中 4 展 望 近 年 來 隨著綠色生態(tài)種植農(nóng)業(yè)的蓬勃發(fā)展 草 莓 種 植 面 積 逐 年 增 加 由 于 其 生 長 周 期 短 采 摘 方 9 6 霍 辰 思 等 草 莓 病 毒 病 脫毒技術(shù)及病毒檢測研究進(jìn)展 便 草莓生態(tài)園自助采摘模式已成為深受市場青睞 的 一 項(xiàng) 新 型 產(chǎn) 業(yè) 脫毒草莓苗在生產(chǎn)上的應(yīng)用 極 大 提 高 了 種 植 者 積 極 性 而草莓病毒病嚴(yán)重制約草 莓 高 產(chǎn) 優(yōu) 質(zhì) 進(jìn) 程 重 茬 種 植 造 成 草 莓 品 種 單 一 種 性 退 化 為了滿足市場上草莓周年供應(yīng) 建 立 完 善 的 種 苗 繁 育 體 系 標(biāo) 準(zhǔn) 化 草 莓 病 毒 檢 測 中 心 40 從 源 頭 上 管 控 草 莓 病 毒 引進(jìn)脫毒成功的草莓品種尤為 重 要 由于草莓病毒病多為復(fù)合型病毒感染 單 一 應(yīng)用傳統(tǒng)的脫毒方法并不能達(dá)到良好的脫毒效果 生 產(chǎn) 上 應(yīng) 該 采 取 多 種 脫 毒 方 法 混 合 使 用 隨 著 基 因 工 程 的 發(fā) 展 生物技術(shù)的廣泛應(yīng)用為草莓脫毒及無 病 毒 苗 鑒 定 開 辟 了 新 的 途 徑 目 前 草 莓 脫 毒 苗 繁 育 體 系 雖 然 有 了 一 定 的 發(fā) 展 但 是 組 培 快 繁 技 術(shù) 成 本 高 操 作 環(huán) 節(jié) 嚴(yán) 謹(jǐn) 難 度 大 資 源 浪 費(fèi) 嚴(yán) 重 需 進(jìn) 一 步 探 索 符 合 生 產(chǎn) 實(shí) 際 節(jié) 能 環(huán) 保 高 效 的 繁 育 體 系 促 進(jìn) 草 莓 業(yè) 健 康 發(fā) 展 參 考 文 獻(xiàn) 1 張 玉 星 果 樹 栽 培 學(xué) 各 論 M 北 京 中國農(nóng)業(yè)出版社 2005 2 蘇 代 發(fā) 童 江 云 楊 俊 譽(yù) 等 草莓病毒病及其研究進(jìn)展 J 云 南 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 自 然 科 學(xué) 版 2019 41 6 1221 1237 3 陳 宗 玲 律 寶 春 徐 全 明 等 草莓病毒及其檢測技術(shù)研究 進(jìn) 展 J 種 子 世 界 2016 3 17 19 4 譚 永 軍 王 際 軒 魏 永 祥 等 草莓脫病毒及無病毒苗繁育 J 上 海 蔬 菜 2016 3 7 2 7 4 5 陳 懷 勐 高 麗 路 河 等 紅顏草莓莖尖組培脫毒苗技 術(shù) 研 究 J 北 京 農(nóng) 業(yè) 2011 3 3 4 6 高 慧 卿 樊 蘭 瑛 王 秀 紅 等 莖尖培養(yǎng)及熱處理技術(shù)在百 合脫毒中的應(yīng)用研究 J 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自 然 科 學(xué) 版 2010 30 6 529 532 7 St eng er D C M u l l i n R H M o r r i s T J Ch ar act er i z at i o n anddet ect i o n o ft h e s t r aw ber r y necr o t i c s h o cki s o l at e o f t o baccos t r eakv i r u s J Ph y t o p at h o l o g y 1987 7 7 9 1330 1337 8 周 厚 成 何 水 濤 草莓病毒病研究進(jìn)展 J 果 樹 學(xué) 報(bào) 2003 20 5 421 426 9 周 厚 成 草 莓 鑲 脈 病 毒 SVBV CP 基因的克隆及草莓遺 傳轉(zhuǎn)化體系的建立 D 楊 凌 西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士論 文 2005 10 賈 壽 山 陳 莉 郭 春 麗 等 草莓病毒病概述 C 草 莓 研 究 進(jìn) 展 2015 394 400 11 肖 敏 草 莓 鑲 脈 病 毒 PCR 檢測體系優(yōu)化及草莓病毒 脫 除 方 法 研 究 D 沈 陽 沈 陽 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 2005 12 張 志 恒 王 強(qiáng) 草莓安全生產(chǎn)技術(shù)手冊(cè) M 北 京 中 國 農(nóng) 業(yè) 出 版 社 2008 13 湯 玲 賀 歡 孔 芬 等 草莓組織培養(yǎng)研究綜述 J 甘肅甘農(nóng)業(yè)科技肅農(nóng)業(yè)科技 2017 9 4 68 7 1 14 M o r elG M Pr o du ci ngv i r u s f r ee cy mbi di u ms J A mer i can Or ch i dSo ci et y Bu l l et i n 1960 29 495 497 15 金 美 芳 曹 智 蔡 俊 杰 等 花草莓的組織培養(yǎng)與快繁 技 術(shù) 研 究 J 廣 西 植 物 2017 37 11 1395 1405 16 高 山 林 草莓改良熱處理分生組織脫毒技術(shù)及脫毒苗應(yīng) 用 J 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 1999 3 63 64 17 高 遐 虹 李 梅 提高草莓莖尖組織培養(yǎng)脫毒效率研究 J 中 國 果 樹 1994 14 2 5 6 18 何 歡 樂 陽 靜 蔡 潤 等 草莓莖尖培養(yǎng)脫毒效果研 究 J 北 方 園 藝 2005 5 7 9 81 19 肖 君 澤 黃 益 姜 放 軍 等 草莓病毒病及其脫毒與檢 測技術(shù)研究進(jìn)展 J 江 西 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報(bào) 2010 22 8 88 90 20 廖 俊 杰 洪 建 原 鄧 明 等 草莓熱處理脫病毒的研究 J 北 方 果 樹 1991 4 7 11 21 劉 健 劉 向 蕾 胡 繁 榮 等 草莓熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng) 脫 毒 效 果 的 研 究 J 浙 江 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2009 6 1088 1090 22 秦 梅 張 燕 徐 美 恩 等 甘薯莖尖脫毒及組培快繁 技 術(shù) J 安 徽 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2014 32 24 25 44 23 張 婧 穎 馬鈴薯脫毒方法與多重 RT PCR 病 毒 檢 測 技 術(shù) 的 研 究 D 吉 林 吉 林 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 2016 24 王 際 軒 草莓的病毒病及無病毒苗繁殖 J 北 方 果 樹 2011 2 44 47 25 李 志 強(qiáng) 王 晶 丁 國 亮 等 草莓熱處理結(jié)合莖尖脫毒 技 術(shù) 研 究 J 北 方 園 藝 2012 5 125 127 26 顧 地 周 朱 俊 義 馮 穎 等 草莓試管內(nèi)誘導(dǎo)匍匐莖和 高溫處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒技術(shù)研究 J 西 北 農(nóng) 林 科 技 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 自 然 科 學(xué) 版 2010 38 11 89 94 27 邱 靜 湯 浩 茹 曹 會(huì) 娟 等 園藝植物莖尖冷凍療法脫 毒 的 技 術(shù) 研 究 J 植 物 生 理 學(xué) 報(bào) 2014 50 1 1 6 28 靳 慧 潔 東方百合病毒檢測與莖尖超低溫脫毒研究 D 福 建 福 建 農(nóng) 林 大 學(xué) 2009 29 WangQ M aw as s iM l iP et al El i mi nat i o n o fg r ap e v i ne v i r u s A GVA by cr y o p r es er v at i o n o fi n v i t r o g r o w n s h o o t t i p s o fV it i s v i nif er aL J Pl ant Sci 2003 165 321 327 30 白 建 明 陳 曉 玲 盧 新 雄 等 超低溫保存法去除馬鈴薯 X 病毒和馬鈴薯紡錘塊莖類病毒 J 分 子 植 物 育 種 2010 8 3 605 611 31 H el l i o t B Pani s B et al Cr y o p r es er v at i o n f o r t h e el i m i nat i o n o fcu cu mber mo s ai c andbanana s t r eakv i r u s es f r o m banana M u s a s p p J Pl ant Cel lRep o r t s 2002 20 12 1117 1122 32 王 子 成 鄧 秀 新 玻璃化法超低溫保存柑橘莖尖及植株 再 生 J 園 藝 學(xué) 報(bào) 2001 28 4 301 306 33 丁 芳 柑橘黃龍病菌及與其混合發(fā)病的分子特性及超 低 溫 研 究 D 武 漢 華 中 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 2006 0 7 果 樹 資 源 學(xué) 報(bào) 2020 1 4 34 Ni i noT Tas h i r oK Su z u k iM et a