應(yīng) 用 技 術(shù) 田 山 君 等 卷 丹 百 合 脫 毒 與 快 繁 技 術(shù) 研 究 20 滕 飛 劉 勇 王 琰 等 底 部 滲 灌 下 容 器 類 型 及 規(guī) 格 對(duì) 油 松 根 系 結(jié) 構(gòu) 的 影 響 J 浙 江 農(nóng) 林 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2017 34 3 449 458 21 魯 敏 姜 鳳 岐 宋 軒 容 器 苗 質(zhì) 量 評(píng) 定 指 標(biāo) 的 研 究 J 應(yīng) 用 生 態(tài) 學(xué) 報(bào) 2002 6 763 765 22 鄭 琰 燚 任 少 秋 高 飛 等 不 同 醋 糟 基 質(zhì) 配 比 對(duì) 南 方 紅 豆 杉 幼 苗 生 長(zhǎng) 的 影 響 J 中 南 林 業(yè) 科 技 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2018 38 11 17 21 28 23 向 光 鋒 顏 立 紅 田 曉 明 等 不 同 基 質(zhì) 對(duì) 厚 果 雞 血 藤 種 子 萌 發(fā) 及 容 器 苗 生 長(zhǎng) 的 影 響 J 西 北 林 學(xué) 院 學(xué) 報(bào) 2018 33 1 141 145 24 龐 圣 江 馬 躍 張 培 等 基 質(zhì) 配 比 和 緩 釋 肥 用 量 對(duì) 望 天 樹(shù) 容 器 苗 的 生 長(zhǎng) 效 應(yīng) J 西 北 林 學(xué) 院 學(xué) 報(bào) 2018 33 6 66 71 收 稿 日 期 2019 11 24 基 金 項(xiàng) 目 貴 州 省 科 技 計(jì) 劃 項(xiàng) 目 食 用 百 合 脫 毒 快 繁 及 產(chǎn) 業(yè) 化 關(guān) 鍵 技 術(shù) 研 究 黔 科 合 支 撐 2017 2527 作 者 簡(jiǎn) 介 田 山 君 1986 女 副 教 授 研 究 方 向 作 物 高 產(chǎn) 栽 培 技 術(shù) 與 措 施 通 訊 作 者 張 萬(wàn) 萍 1970 女 博 士 教 授 碩 士 生 導(dǎo) 師 主 要 從 事 蔬 菜 栽 培 及 育 種 方 面 的 教 學(xué) 與 科 研 工 作 E mail 1226190368 qq com 卷 丹 百 合 脫 毒 與 快 繁 技 術(shù) 研 究 田 山 君 1 裴 蕓 1 牛 力 立 2 田 洪 梅 3 吳 家 麗 2 張 萬(wàn) 萍 1 1 貴 州 大 學(xué) 農(nóng) 學(xué) 院 貴 陽(yáng) 550025 2 安 順 市 農(nóng) 科 院 貴 州 安 順 561000 3 平 塘 縣 經(jīng) 濟(jì) 作 物 推 廣 站 貴 州 平 塘 558300 StudyonVirus removalandRapidPropagationTechniqueof L i l i u m l a n c i f o l i u m Thunb T I A N S h a n j u n 1 P E I Y u n 1 N I U L i l i 2 T I A N H o n g m e i 3 W U J i a l i 2 Z H A N G W a n p i n g 1 摘 要 以 貴 州 銅 仁 地 區(qū) 卷 丹 百 合 為 材 料 研 究 不 同 激 素 組 配 對(duì) 卷 丹 百 合 不 同 外 植 體 擴(kuò) 繁 以 及 不 同 脫 毒 方 法 對(duì) 卷 丹 百 合 脫 毒 效 果 的 影 響 以 建 立 最 佳 的 卷 丹 百 合 脫 毒 和 組 培 快 繁 技 術(shù) 結(jié) 果 表 明 外 植 體 用 75 的 乙 醇 浸 泡 30s 后 再 用 10 次 氯 酸 鈉 消 毒 20min 達(dá) 到 40 的 最 低 污 染 率 內(nèi) 層 鱗 片 和 莖 芽 是 卷 丹 百 合 組 培 快 繁 外 植 體 的 最 佳 選 擇 26 和 45 交 替 熱 處 理 1 個(gè) 月 后 剝 取 0 3 0 8mm 莖 尖 的 脫 毒 效 果 最 好 達(dá) 到 最 低 30 的 污 染 率 和 最 高 70 的 成 活 率 最 適 初 代 誘 導(dǎo) 培 養(yǎng) 基 是 MS 6 BA2 0mg L 1 NAA1 0 mg L 1 誘 導(dǎo) 率 最 高 達(dá) 86 67 最 適 增 殖 培 養(yǎng) 基 為 MS 6 BA0 1mg L 1 NAA0 5 mg L 1 增 值 率 增 殖 倍 數(shù) 均 最 高 達(dá) 80 4 88 最 適 生 根 結(jié) 鱗 莖 培 養(yǎng) 基 為 MS NAA1 0mg L 1 IBA0 5mg L 1 生 根 率 達(dá) 100 關(guān) 鍵 詞 卷 丹 百 合 外 植 體 植 物 激 素 脫 毒 快 繁 DOI 編 碼 10 16590 j cnki 1001 4705 2020 05 157 中 圖 分 類 號(hào) S644 1 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 A 文 章 編 號(hào) 1001 4705 2020 05 0157 06 百 合 是 百 合 科 百 合 屬 多 年 生 球 根 草 本 植 物 的 總 稱 食 用 百 合 肉 質(zhì) 鱗 片 含 有 豐 富 的 淀 粉 蛋 白 質(zhì) 果 膠 等 營(yíng) 養(yǎng) 物 質(zhì) 及 鈣 磷 鐵 等 營(yíng) 養(yǎng) 元 素 因 為 具 有 極 高 的 營(yíng) 養(yǎng) 價(jià) 值 成 為 國(guó) 內(nèi) 外 消 費(fèi) 者 喜 好 的 蔬 菜 食 品 具 有 非 常 廣 闊 的 栽 培 和 市 場(chǎng) 前 景 1 3 貴 州 銅 仁 畢 節(jié) 等 地 長(zhǎng) 期 采 用 鱗 莖 鱗 片 等 營(yíng) 養(yǎng) 體 進(jìn) 行 無(wú) 性 繁 殖 不 僅 繁 殖 系 數(shù) 低 病 毒 積 累 嚴(yán) 重 而 且 種 球 退 化 現(xiàn) 象 明 顯 影 響 了 食 用 百 合 的 品 質(zhì) 和 產(chǎn) 量 在 很 大 程 度 上 制 約 了 百 合 產(chǎn) 業(yè) 的 發(fā) 展 國(guó) 內(nèi) 對(duì) 百 合 組 織 培 養(yǎng) 技 術(shù) 的 研 究 較 多 但 多 集 中 在 外 植 體 的 選 擇 培 養(yǎng) 基 中 植 物 激 素 配 比 4 6 等 方 面 對(duì) 百 合 快 速 擴(kuò) 繁 過(guò) 程 進(jìn) 行 全 方 位 的 研 究 較 少 本 研 究 以 貴 州 銅 仁 地 區(qū) 主 栽 的 卷 丹 百 合 為 材 料 研 究 卷 丹 百 合 組 織 培 養(yǎng) 的 最 佳 消 毒 方 法 最 適 外 植 體 及 最 適 培 養(yǎng) 基 配 方 以 期 為 食 用 百 合 的 規(guī) 模 化 繁 殖 及 開(kāi) 發(fā) 利 用 提 供 一 定 的 參 考 1 材 料 與 方 法 1 1 試 驗(yàn) 材 料 試 驗(yàn) 所 用 百 合 于 2017 年 4 5 月 采 自 貴 州 銅 仁 思 南 縣 為 當(dāng) 地 主 栽 品 種 MS 為 基 本 培 養(yǎng) 基 其 他 試 劑 NAA 6 BA IBA 等 為 分 析 純 AR 均 購(gòu) 自 北 京 鼎 國(guó) 生 物 技 術(shù) 有 限 公 司 1 2 試 驗(yàn) 方 法 1 2 1 外 植 體 選 取 選 取 生 長(zhǎng) 健 壯 無(wú) 病 害 的 鱗 莖 經(jīng) 熱 處 理 和 催 芽 處 7 5 1 種 子 Seed 第39 卷 第5 期 2020 年5 月 Vol 39 No 5 May 2020 理 后 剝 離 出 莖 尖 莖 段 葉 片 鱗 片 清 洗 消 毒 后 晾 干 留 取 核 心 部 分 鱗 片 置 于 光 照 培 養(yǎng) 箱 內(nèi) 以 26 和 45 交 替 處 理 1 個(gè) 月 以 下 簡(jiǎn) 稱 熱 處 理 即 白 天 45 夜 間 26 光 照 強(qiáng) 度 設(shè) 定 為 1500lx 1 2 2 外 植 體 消 毒 待 莖 尖 伸 長(zhǎng) 2 3cm 時(shí) 將 催 芽 培 養(yǎng) 后 的 百 合 鱗 莖 球 剝 去 外 層 鱗 片 先 用 75 的 乙 醇 浸 泡 30s 再 用 5 10 15 3 個(gè) 濃 度 的 次 氯 酸 鈉 溶 液 分 別 處 理 10 min 20min 用 無(wú) 菌 水 沖 洗 3 5 遍 吸 去 表 面 水 分 剝 去 百 合 鱗 莖 軸 的 鱗 片 直 至 不 帶 葉 原 基 的 莖 尖 生 長(zhǎng) 點(diǎn) 接 種 于 MS 培 養(yǎng) 基 上 進(jìn) 行 培 養(yǎng) 每 個(gè) 處 理 接 10 瓶 每 瓶 接 1 個(gè) 10d 后 統(tǒng) 計(jì) 污 染 率 及 成 活 率 污 染 率 外 植 體 中 染 菌 的 數(shù) 量 接 種 的 外 植 體 總 數(shù) 100 成 活 率 1 死 亡 的 外 植 體 數(shù) 量 愈 傷 失 敗 的 外 植 體 數(shù) 量 接 種 的 外 植 體 總 數(shù) 100 1 2 3 培 養(yǎng) 基 的 配 制 及 種 類 基 本 培 養(yǎng) 基 為 MS 附 加 瓊 脂 粉 4 5g L 1 蔗 糖 30g L 1 pH 為 5 85 在 不 同 的 階 段 誘 導(dǎo) 增 殖 生 根 壯 苗 加 入 不 同 配 比 的 植 物 激 素 激 素 濃 度 設(shè) 計(jì) 按 照 文 獻(xiàn) 7 8 的 方 法 進(jìn) 行 分 化 增 殖 階 段 及 生 根 結(jié) 鱗 莖 階 段 的 激 素 配 比 見(jiàn) 表 1 表 1 不 同 培 養(yǎng) 基 種 不 同 激 素 配 比 培 養(yǎng) 基 類 型 培 養(yǎng) 基 編 號(hào) 不 同 種 類 及 不 同 濃 度 的 激 素 配 比 mg L 1 6 BA NAA IBA 誘 導(dǎo) 分 化 及 增 殖 培 養(yǎng) 1 0 1 0 1 2 0 1 0 5 3 0 1 1 0 4 0 5 0 1 5 0 5 0 5 6 0 5 1 0 7 1 0 0 1 8 1 0 0 5 9 1 0 1 0 10 1 5 0 1 11 1 5 0 5 12 1 5 1 0 13 2 0 0 1 14 2 0 0 5 15 2 0 1 0 生 根 結(jié) 鱗 莖 培 養(yǎng) 16 0 0 0 1 17 0 0 0 2 18 0 0 0 5 19 0 5 0 1 20 0 5 0 2 21 0 5 0 5 22 1 0 0 1 23 1 0 0 2 24 1 0 0 5 1 2 4 脫 毒 及 誘 導(dǎo) 培 養(yǎng) 1 不 同 外 植 體 篩 選 試 驗(yàn) 將 已 催 芽 的 鱗 莖 的 莖 芽 莖 段 葉 片 和 鱗 片 分 離 鱗 片 的 1 2 層 為 外 層 3 4 層 為 中 層 5 層 以 內(nèi) 為 內(nèi) 層 流 水 沖 洗 1h 后 先 用 75 乙 醇 消 毒 30s 再 用 10 次 氯 酸 鈉 溶 液 消 毒 20min 然 后 用 無(wú) 菌 水 沖 洗 3 5 次 用 無(wú) 菌 濾 紙 將 表 面 水 分 吸 干 接 種 到 啟 動(dòng) 培 養(yǎng) 基 MS 6 BA2 0mg L 1 NAA1 0mg L 1 上 每 種 外 植 體 接 種 10 瓶 每 瓶 1 株 置 于 培 養(yǎng) 室 進(jìn) 行 培 養(yǎng) 溫 度 26 光 強(qiáng) 2000lx 光 照 時(shí) 間 12h d 1 培 養(yǎng) 2 周 后 觀 察 污 染 情 況 培 養(yǎng) 1 月 后 觀 察 外 植 體 的 成 活 及 分 化 情 況 2 不 同 脫 毒 方 法 比 較 試 驗(yàn) 設(shè) 熱 處 理 后 分 別 剝 取 0 2 0 8mm 莖 尖 1 3 mm 莖 芽 鱗 片 4 個(gè) 不 同 的 脫 毒 方 法 并 以 不 經(jīng) 熱 處 理 直 接 剝 取 的 莖 尖 作 為 對(duì) 照 均 接 種 到 啟 動(dòng) 培 養(yǎng) 基 上 離 體 培 養(yǎng) 成 活 后 的 組 織 單 個(gè) 觀 察 培 養(yǎng) 繁 殖 成 無(wú) 性 系 并 分 留 樣 品 寄 到 云 南 省 農(nóng) 科 院 生 物 技 術(shù) 與 種 質(zhì) 資 源 研 究 所 檢 測(cè) 脫 毒 情 況 3 不 同 激 素 配 比 對(duì) 莖 尖 誘 導(dǎo) 的 影 響 試 驗(yàn) 取 消 毒 好 的 莖 芽 剖 取 0 2 0 8mm 大 小 的 莖 尖 接 種 于 誘 導(dǎo) 培 養(yǎng) 基 1 15 號(hào) 上 進(jìn) 行 誘 導(dǎo) 培 養(yǎng) 每 種 培 養(yǎng) 基 接 種 15 瓶 每 瓶 1 個(gè) 莖 尖 培 養(yǎng) 溫 度 均 為 23 28 光 培 養(yǎng) 的 光 照 強(qiáng) 度 為 2000 3000lx 光 照 時(shí) 間 為 12h d 1 每 周 進(jìn) 行 觀 察 30d 以 后 統(tǒng) 計(jì) 鱗 片 分 化 數(shù) 與 不 定 芽 生 長(zhǎng) 數(shù) 計(jì) 算 誘 導(dǎo) 率 誘 導(dǎo) 率 分 化 的 外 植 體 數(shù) 接 種 的 外 植 體 總 數(shù) 100 1 2 5 繼 代 增 殖 培 養(yǎng) 將 誘 導(dǎo) 分 化 后 得 到 的 芽 愈 傷 組 織 等 分 成 單 株 或 小 塊 分 別 轉(zhuǎn) 接 到 增 殖 培 養(yǎng) 基 1 15 號(hào) 上 每 個(gè) 培 養(yǎng) 基 接 10 瓶 每 瓶 接 5 株 置 于 培 養(yǎng) 室 溫 度 26 光 強(qiáng) 2000lx 光 照 時(shí) 間 12h d 1 經(jīng) 增 殖 生 成 的 叢 生 芽 不 定 芽 再 將 其 分 割 繼 續(xù) 反 復(fù) 培 養(yǎng) 增 殖 壯 苗 每 周 觀 察 記 錄 有 效 芽 數(shù) 芽 高 大 于 0 5cm 等 增 殖 生 長(zhǎng) 情 況 增 殖 率 有 效 芽 數(shù) 10 瓶 5 株 100 1 2 6 生 根 結(jié) 鱗 莖 培 養(yǎng) 將 繼 代 培 養(yǎng) 得 到 的 無(wú) 根 苗 和 叢 芽 分 割 成 單 株 轉(zhuǎn) 接 到 生 根 結(jié) 鱗 莖 培 養(yǎng) 基 16 24 號(hào) 上 每 個(gè) 培 養(yǎng) 基 處 理 接 10 瓶 每 瓶 接 5 株 苗 置 于 培 養(yǎng) 室 溫 度 26 光 強(qiáng) 2000lx 光 照 時(shí) 間 12h d 1 每 周 觀 察 記 錄 30d 后 隨 機(jī) 抽 取 2 瓶 統(tǒng) 計(jì) 小 鱗 莖 增 殖 數(shù) 及 新 根 發(fā) 生 條 數(shù) 8 5 1 應(yīng) 用 技 術(shù) 田 山 君 等 卷 丹 百 合 脫 毒 與 快 繁 技 術(shù) 研 究 生 根 率 生 根 愈 傷 組 織 塊 數(shù) 接 種 愈 傷 組 織 總 數(shù) 100 1 3 數(shù) 據(jù) 分 析 采 用 Excel 軟 件 結(jié) 合 DPS15 10 軟 件 進(jìn) 行 方 差 分 析 分 析 方 法 按 Duncan 新 復(fù) 極 差 法 進(jìn) 行 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 不 同 處 理 對(duì) 卷 丹 百 合 外 植 體 滅 菌 效 果 的 影 響 不 同 處 理 對(duì) 卷 丹 百 合 外 植 體 的 表 面 滅 菌 效 果 影 響 如 表 2 所 示 次 氯 酸 鈉 濃 度 越 高 處 理 時(shí) 間 越 長(zhǎng) 外 植 體 的 污 染 率 越 低 但 隨 著 次 氯 酸 鈉 濃 度 的 升 高 處 理 時(shí) 間 的 延 長(zhǎng) 外 植 體 的 成 活 率 則 出 現(xiàn) 下 降 以 10 濃 度 的 次 氯 酸 鈉 處 理 20 min 后 的 外 植 體 成 活 率 最 高 60 污 染 率 最 低 40 表 2 不 同 處 理 對(duì) 卷 丹 百 合 外 植 體 滅 菌 效 果 的 影 響 處 理 編 號(hào) 次 氯 酸 鈉 濃 度 處 理 時(shí) 間 min 污 染 率 成 活 率 1 5 10 80 20 2 5 20 60 40 3 10 10 50 50 4 10 20 40 60 5 15 10 50 20 6 15 20 40 20 2 2 不 同 部 位 外 植 體 對(duì) 擴(kuò) 繁 效 果 的 影 響 不 同 部 位 外 植 體 的 成 活 及 分 化 情 況 見(jiàn) 表 3 百 合 不 同 部 位 的 外 植 體 分 化 效 果 差 異 顯 著 在 污 染 率 方 面 外 層 鱗 片 中 層 鱗 片 葉 片 莖 段 莖 芽 內(nèi) 層 鱗 片 且 差 異 均 達(dá) 到 極 顯 著 水 平 在 成 活 率 方 面 內(nèi) 層 鱗 片 莖 芽 莖 段 葉 片 中 層 鱗 片 外 層 鱗 片 且 差 異 均 達(dá) 到 極 顯 著 水 平 在 不 定 芽 分 化 數(shù) 方 面 外 層 鱗 片 莖 芽 中 層 內(nèi) 層 鱗 片 莖 段 葉 片 差 異 均 達(dá) 顯 著 水 平 需 要 注 意 的 是 以 莖 芽 外 層 鱗 片 為 外 植 體 的 不 定 芽 分 化 數(shù) 最 高 在 5 0 5 5 之 間 其 次 是 中 層 內(nèi) 層 鱗 片 不 定 芽 分 化 數(shù) 為 4 67 與 莖 芽 外 層 鱗 片 的 不 定 芽 分 化 數(shù) 差 異 顯 著 但 未 達(dá) 極 顯 著 水 平 卷 丹 百 合 的 莖 芽 圖 版 a 葉 片 圖 版 b 鱗 片 圖 版 c 和 莖 段 圖 版 d 作 為 外 植 體 均 可 以 成 活 但 中 外 層 鱗 片 污 染 率 高 成 活 率 也 低 莖 段 和 葉 片 不 定 芽 分 化 數(shù) 低 內(nèi) 層 鱗 片 和 莖 芽 由 于 有 鱗 片 和 葉 片 包 裹 不 易 被 污 染 滅 菌 效 果 較 好 且 成 活 率 和 不 定 芽 分 化 數(shù) 較 高 可 作 為 卷 丹 百 合 組 培 快 繁 外 植 體 的 最 佳 選 擇 但 作 為 外 植 體 莖 芽 數(shù) 量 相 對(duì) 鱗 片 較 少 如 果 種 球 不 多 需 大 量 擴(kuò) 繁 時(shí) 內(nèi) 層 鱗 片 則 是 卷 丹 百 合 組 培 快 繁 外 植 體 的 最 佳 選 擇 成 活 率 可 達(dá) 70 不 定 芽 分 化 數(shù) 為 4 67 表 3 不 同 外 植 體 滅 菌 處 理 效 果 處 理 編 號(hào) 外 植 體 污 染 率 成 活 率 不 定 芽 分 化 數(shù) 1 莖 芽 50 2Dd 50 5Bb 5 00 0 23Aa 2 莖 段 60 4Cc 40 2Cc 3 33 0 37Bc 3 葉 片 60 2Cc 40 2Cc 1 67 0 34Cd 4 外 層 鱗 片 80 3Aa 20 4De 5 5 0 28Aa 5 中 層 鱗 片 70 1Bb 30 4Cc 4 67 0 33Ab 6 內(nèi) 層 鱗 片 30 5Ee 70 5Aa 4 67 0 33Ab 注 表 中 大 寫(xiě) 字 母 表 示 差 異 達(dá) 極 顯 著 水 平 小 寫(xiě) 字 母 表 示 差 異 達(dá) 顯 著 水 平 下 同 2 3 不 同 脫 毒 方 法 比 較 試 驗(yàn) 隨 機(jī) 抽 提 各 處 理 樣 品 負(fù) 染 色 制 片 利 用 JEM100 CX 透 射 電 子 顯 微 鏡 檢 測(cè) 脫 毒 效 果 見(jiàn) 表 4 結(jié) 果 表 明 A 方 法 熱 處 理 結(jié) 合 莖 尖 脫 毒 的 效 果 最 好 即 經(jīng) 26 和 45 交 替 熱 處 理 1 個(gè) 月 后 剝 取 0 2 0 8mm 莖 尖 2 個(gè) 檢 測(cè) 的 樣 品 中 2 號(hào) 樣 品 未 觀 測(cè) 到 病 毒 顆 粒 1 號(hào) 樣 品 在 5 萬(wàn) 倍 下 平 均 每 視 野 1 5 個(gè) 病 毒 粒 體 脫 毒 率 為 50 其 次 是 D 方 法 莖 尖 脫 毒 雖 然 沒(méi) 完 全 脫 掉 病 毒 存 在 的 病 毒 粒 體 較 少 7 號(hào) 樣 品 在 5 萬(wàn) 倍 下 平 均 每 視 野 少 于 1 個(gè) 病 毒 粒 體 8 號(hào) 樣 品 在 5 萬(wàn) 倍 下 平 均 每 視 野 1 5 個(gè) 病 毒 粒 體 而 只 經(jīng) 熱 處 理 剝 取 的 較 大 莖 芽 和 鱗 片 誘 導(dǎo) 的 試 管 苗 病 毒 粒 相 對(duì) 較 多 檢 測(cè) 報(bào) 告 顯 示 2 號(hào) 樣 品 已 經(jīng) 脫 毒 可 以 用 于 生 產(chǎn) 擴(kuò) 繁 如 急 需 擴(kuò) 繁 7 號(hào) 樣 品 也 可 用 表 4 不 同 脫 毒 處 理 方 法 病 毒 檢 測(cè) 結(jié) 果 脫 毒 方 法 樣 品 編 號(hào) 電 子 顯 微 鏡 觀 察 結(jié) 果 A 1 號(hào) SV d 60nm A 2 號(hào) B 3 號(hào) SV d 30nm B 4 號(hào) SV d 40nm LV C 5 號(hào) SV d 30nm C 6 號(hào) SV d 30nm SV d 60nm D 7 號(hào) SV d 30nm D 8 號(hào) SV d 30nm 注 表 示5 萬(wàn) 倍 下 平 均 每 視 野 未 觀 察 到 病 毒 粒 體 表 示5 萬(wàn) 倍 下 平 均 每 視 野 少 于1 個(gè) 病 毒 粒 體 表 示5 萬(wàn) 倍 下 平 均 每 視 野1 5 個(gè) 病 毒 粒 體 表 示5 萬(wàn) 倍 下 平 均 每 視 野6 10 個(gè) 病 毒 粒 體 表 示5 萬(wàn) 倍 下 平 均 每 視 野11 15 個(gè) 病 毒 粒 體 SV 表 示 球 形 病 毒 LV 表 示 線 形 病 毒 d 表 示 直 徑 2 4 不 同 激 素 配 比 對(duì) 莖 尖 誘 導(dǎo) 分 化 及 增 殖 的 影 響 通 過(guò) 觀 察 發(fā) 現(xiàn) 2 周 左 右 部 分 莖 尖 開(kāi) 始 膨 大 成 愈 傷 組 織 4 周 后 部 分 組 織 開(kāi) 始 分 化 成 不 定 芽 8 周 后 百 合 莖 尖 長(zhǎng) 成 苗 不 同 激 素 配 比 對(duì) 卷 丹 百 合 莖 尖 誘 導(dǎo) 分 化 的 影 響 如 表 5 所 示 不 同 濃 度 的 6 BA NAA 配 比 對(duì) 9 5 1 種 子 Seed 第39 卷 第5 期 2020 年5 月 Vol 39 No 5 May 2020 表 5 不 同 處 理 間 誘 導(dǎo) 率 增 殖 率 及 增 殖 倍 數(shù) 的 差 異 培 養(yǎng) 基 編 號(hào) 誘 導(dǎo) 率 平 均 分 化 葉 片 數(shù) 片 萌 動(dòng) 時(shí) 間 d 增 殖 率 增 殖 倍 數(shù) 1 73 33 4 86BCbc 2 90 10 50 5 75CDd 4 25 0 10Aa 2 60 00 3 78DEde 2 89 11 80 4 67Aa 4 88 0 46Aa 3 60 00 4 91DEde 2 44 11 60 3 82BCc 1 00 0 13Ee 4 66 67 2 73CDcd 2 70 12 60 3 85BCc 2 33 0 16Dc 5 66 67 3 63CDcd 2 80 13 70 4 71ABb 3 17 0 27Bb 6 66 67 2 13CDcd 2 00 13 50 5 01CDd 2 20 0 15Dc 7 73 33 5 13BCbc 2 55 11 40 4 24De 1 50 0 27Ed 8 66 67 4 10CDcd 1 60 14 60 5 12BCc 2 67 0 43CDc 9 53 33 5 00Ee 1 88 11 40 4 55De 1 00 0 13Ee 10 86 67 4 12Aa 2 14 12 20 3 89Ef 3 50 0 18Bb 11 80 00 4 55ABab 2 38 15 50 2 40CDd 2 40 0 26Dc 12 66 67 1 98CDcd 2 40 15 0Fg 1 00 0 05Ee 13 80 00 1 89ABab 2 83 11 60 5 86BCc 3 00 0 14BCb 14 86 67 3 98Aa 3 92 10 50 4 35CDd 1 60 0 26Ede 15 86 67 5 24Aa 6 31 10 50 4 28CDd 1 00 0 10Ee 表 6 不 同 激 素 組 合 對(duì) 外 植 體 莖 尖 誘 導(dǎo) 率 增 殖 率 及 增 殖 倍 數(shù) 的 影 響 項(xiàng) 目 水 平 莖 尖 誘 導(dǎo) 率 增 殖 率 增 殖 倍 數(shù) 處 理 6 BA 濃 度 A 0 1 mg L 1 64 44 7 70Bc 63 33 25 27Aa 3 38 2 08Aa 0 5 mg L 1 66 67 6 25ABbc 60 00 10 00Aa 2 57 0 53Aa 1 0 mg L 1 64 44 10 18Bc 53 33 11 55ABa 1 72 0 86Aa 1 5 mg L 1 77 78 5 18ABab 46 67 15 17Bb 2 30 1 25Aa 2 0 mg L 1 84 45 3 85Aa 23 33 5 77ABa 1 86 1 03Aa NAA 濃 度 B 0 1 mg L 1 76 00 7 60Aa 46 00 16 73Aab 2 92 1 06Aa 0 5 mg L 1 72 00 10 95Aa 62 00 13 04Aa 2 94 1 22Aa 1 0 mg L 1 66 67 12 47Aa 40 00 23 45Ab 1 24 0 54Ab 變 異 來(lái) 源 A 247 47 756 67 1 30 B 109 60 646 67 4 76 注 方 差 分 析 中 影 響 水 平 以 均 方 表 示 表 示 在0 05 水 平 上 顯 著 下 同 莖 尖 誘 導(dǎo) 率 增 殖 率 和 增 殖 倍 數(shù) 的 影 響 達(dá) 到 顯 著 水 平 誘 導(dǎo) 率 最 高 的 培 養(yǎng) 基 是 10 號(hào) 11 號(hào) 13 號(hào) 14 號(hào) 和 15 號(hào) 誘 導(dǎo) 率 在 80 00 86 67 之 間 平 均 分 化 葉 片 數(shù) 在 2 14 6 31 之 間 萌 動(dòng) 時(shí) 間 10 15 d 增 殖 率 最 高 的 培 養(yǎng) 基 是 2 號(hào) 增 殖 率 達(dá) 80 增 殖 倍 數(shù) 最 高 的 培 養(yǎng) 基 是 1 號(hào) 2 號(hào) 增 殖 倍 數(shù) 分 別 為 4 25 倍 4 88 倍 方 差 分 析 結(jié) 果 表 6 表 明 激 素 濃 度 對(duì) 莖 尖 誘 導(dǎo) 率 增 殖 率 和 增 殖 倍 數(shù) 分 別 有 著 顯 著 影 響 p 0 05 其 中 6 BA 濃 度 顯 著 影 響 莖 尖 誘 導(dǎo) 率 NAA 濃 度 顯 著 影 響 增 殖 倍 數(shù) 2 種 激 素 濃 度 均 顯 著 影 響 增 殖 率 又 以 6 BA 濃 度 影 響 均 方 值 為 756 67 最 大 NAA 濃 度 影 響 均 方 值 為 646 67 次 之 由 表 6 還 可 知 培 養(yǎng) 基 中 6 BA 濃 度 較 高 時(shí) 有 利 于 提 高 莖 尖 誘 導(dǎo) 率 在 6 BA 濃 度 為 2 0mg L 1 時(shí) 莖 尖 誘 導(dǎo) 率 最 高 84 45 較 低 濃 度 的 6 BA 有 利 于 提 高 增 殖 率 在 6 BA 濃 度 為 0 1mg L 1 時(shí) 的 增 殖 率 最 高 63 33 而 6 BA 濃 度 對(duì) 增 殖 倍 數(shù) 無(wú) 影 響 培 養(yǎng) 基 中 NAA 濃 度 較 低 時(shí) 有 利 于 提 高 增 殖 率 和 增 殖 倍 數(shù) 在 NAA 濃 度 為 0 5mg L 1 時(shí) 增 殖 率 和 增 殖 倍 數(shù) 最 高 分 別 為 62 和 2 94 倍 而 NAA 濃 度 對(duì) 莖 尖 誘 導(dǎo) 率 無(wú) 影 響 綜 合 表 5 和 表 6 的 結(jié) 果 認(rèn) 為 卷 丹 百 合 的 最 適 誘 導(dǎo) 培 養(yǎng) 基 為 15 號(hào) 培 養(yǎng) 基 MS 6 BA2 0mg L 1 NAA1 0mg L 1 此 條 件 下 的 誘 導(dǎo) 率 達(dá) 86 67 接 種 10d 后 能 夠 萌 動(dòng) 8 周 后 的 平 均 分 化 葉 片 數(shù) 為 6 31 片 最 適 增 殖 培 養(yǎng) 基 為 2 號(hào) 培 養(yǎng) 基 MS 6 BA0 1 mg L 1 NAA0 5mg L 1 此 條 件 下 的 增 殖 率 增 殖 倍 數(shù) 分 別 達(dá) 80 4 88 倍 2 5 不 同 激 素 配 比 對(duì) 卷 丹 百 合 試 管 苗 生 根 結(jié) 鱗 莖 的 影 響 不 同 激 素 配 比 對(duì) 卷 丹 百 合 試 管 苗 生 根 結(jié) 鱗 莖 的 影 響 如 表 7 所 示 不 同 濃 度 的 NAA IBA 配 比 對(duì) 生 根 數(shù) 小 鱗 莖 增 殖 倍 數(shù) 的 影 響 達(dá) 到 顯 著 水 平 卷 丹 百 合 在 9 種 激 素 配 比 條 件 下 都 能 生 根 生 根 率 都 在 70 以 上 其 中 23 號(hào) 培 養(yǎng) 基 中 的 試 管 苗 生 根 數(shù) 最 多 為 12 條 22 號(hào) 23 號(hào) 培 養(yǎng) 基 中 的 試 管 苗 小 鱗 莖 增 殖 倍 數(shù) 為 最 高 增 殖 倍 數(shù) 在 6 0 6 2 之 間 表 7 不 同 處 理 間 生 根 數(shù) 及 小 鱗 莖 增 殖 倍 數(shù) 的 差 異 培 養(yǎng) 基 號(hào) 生 根 率 生 根 數(shù) 條 小 鱗 莖 增 殖 倍 數(shù) 16 100 2 2 0 2De 1 5 0 1Dd 17 70 2 0 0 1De 1 4 0 1Dd 18 70 2 4 0 1Dde 1 8 0 1CDcd 19 80 3 0 0 3Dd 1 5 0 1Dd 20 100 3 1 0 3Dd 2 1 0 2Cc 21 100 6 3 0 3Cc 4 2 0 1Bb 22 80 5 8 0 3Cc 6 2 0 4Aa 23 100 12 0 0 6Aa 6 0 0 3Aa 24 100 10 3 1 0Bb 4 2 0 2Bb 0 6 1 應(yīng) 用 技 術(shù) 田 山 君 等 卷 丹 百 合 脫 毒 與 快 繁 技 術(shù) 研 究 圖 版 方 差 分 析 結(jié) 果 表 8 表 明 NAA 濃 度 對(duì) 卷 丹 百 合 試 管 苗 的 生 根 數(shù) 小 鱗 莖 增 殖 倍 數(shù) 的 影 響 達(dá) 到 顯 著 水 平 p 0 05 而 IBA 濃 度 對(duì) 生 根 結(jié) 鱗 莖 影 響 不 顯 著 培 養(yǎng) 基 中 NAA 濃 度 越 高 越 有 利 于 卷 丹 百 合 生 根 結(jié) 鱗 莖 當(dāng) 培 養(yǎng) 基 中 NAA 濃 度 為 1 0mg L 1 時(shí) 試 管 苗 生 根 數(shù) 達(dá) 到 9 4 條 小 鱗 莖 增 殖 倍 數(shù) 為 5 5 倍 表 8 不 同 激 素 組 合 對(duì) 試 管 苗 生 根 數(shù) 小 鱗 莖 增 殖 倍 數(shù) 的 影 響 項(xiàng) 目 水 平 生 根 數(shù) 條 小 鱗 莖 增 殖 倍 數(shù) 處 理 NAA 濃 度 B 0 1 mg L 1 2 2 0 2Ab 1 6 0 2Ab 0 5 mg L 1 4 1 1 9Ab 2 6 1 4Ab 1 0 mg L 1 9 4 3 2Aa 5 5 1 1Aa IBA 濃 度 C 0 1 mg L 1 3 7 1 9Aa 3 1 2 7Aa 0 5 mg L 1 5 7 5 5Aa 3 2 2 5Aa 1 0 mg L 1 6 3 3 9Aa 3 4 1 4Aa 變 異 來(lái) 源 B 41 1 12 2 C 5 9 0 1 綜 合 表 7 和 表 8 的 結(jié) 果 來(lái) 看 卷 丹 百 合 最 佳 的 生 根 結(jié) 鱗 莖 培 養(yǎng) 基 是 23 號(hào) MS NAA1 0mg L 1 IBA0 5 mg L 1 小 鱗 莖 的 增 殖 倍 數(shù) 為 6 倍 見(jiàn) 圖 版 e 圖 版 f 生 根 率 達(dá) 100 見(jiàn) 圖 版 g 平 均 根 條 數(shù) 可 達(dá) 12 條 3 討 論 與 結(jié) 論 3 1 討 論 3 1 1 卷 丹 百 合 的 脫 毒 食 用 百 合 卷 丹 由 于 需 求 量 增 加 長(zhǎng) 期 使 用 無(wú) 性 繁 殖 導(dǎo) 致 病 毒 感 染 嚴(yán) 重 交 替 熱 處 理 可 使 百 合 病 毒 受 到 抑 制 或 鈍 化 生 長(zhǎng) 點(diǎn) 快 速 伸 長(zhǎng) 拉 大 病 毒 到 達(dá) 莖 尖 的 距 離 且 外 植 體 不 易 受 到 傷 害 既 方 便 了 顯 微 操 作 又 提 高 了 成 活 率 因 此 常 溫 和 高 溫 交 替 熱 處 理 結(jié) 合 莖 尖 脫 毒 是 有 效 的 脫 毒 方 法 9 10 莖 尖 大 小 決 定 了 無(wú) 病 毒 率 莖 尖 越 小 無(wú) 病 毒 率 越 高 但 卻 存 在 成 活 率 較 低 生 長(zhǎng) 緩 慢 等 弊 端 降 低 了 擴(kuò) 繁 的 效 率 今 后 的 研 究 中 要 探 討 既 能 有 效 脫 除 病 毒 又 有 較 高 的 成 活 率 和 繁 殖 效 率 的 方 法 可 以 采 用 不 同 的 外 植 體 誘 導(dǎo) 成 再 生 小 鱗 莖 后 再 進(jìn) 行 莖 尖 脫 毒 這 樣 可 以 加 大 脫 毒 苗 的 成 活 率 及 繁 殖 系 數(shù) 3 1 2 卷 丹 百 合 外 植 體 的 選 擇 百 合 組 織 培 養(yǎng) 過(guò) 程 可 以 選 擇 鱗 片 葉 片 莖 尖 莖 段 或 花 器 官 材 料 的 部 位 選 擇 外 植 體 關(guān) 鍵 要 看 其 取 材 1 6 1 種 子 Seed 第39 卷 第5 期 2020 年5 月 Vol 39 No 5 May 2020 的 方 便 性 材 料 數(shù) 量 材 料 部 位 生 理 狀 態(tài) 發(fā) 育 階 段 及 取 材 時(shí) 間 是 否 有 利 于 在 初 代 培 養(yǎng) 中 愈 傷 組 織 或 不 定 芽 的 誘 導(dǎo) 外 植 體 的 選 擇 是 初 代 培 養(yǎng) 的 關(guān) 鍵 因 素 11 13 通 常 說(shuō) 來(lái) 鱗 片 就 其 方 便 性 及 數(shù) 量 是 優(yōu) 于 其 它 外 植 體 的 14 16 本 試 驗(yàn) 中 卷 丹 百 合 的 莖 芽 莖 段 葉 片 和 鱗 片 作 為 外 植 體 均 可 以 成 活 但 外 層 鱗 片 污 染 率 高 而 內(nèi) 層 鱗 片 和 莖 芽 由 于 有 鱗 片 和 葉 片 包 裹 不 易 被 污 染 滅 菌 效 果 較 好 且 成 活 率 和 不 定 芽 分 化 數(shù) 較 高 可 作 為 卷 丹 百 合 組 培 快 繁 外 植 體 選 擇 但 作 為 外 植 體 鱗 片 相 對(duì) 莖 芽 數(shù) 量 較 多 且 容 易 誘 導(dǎo) 成 功 分 化 不 定 芽 系 數(shù) 較 高 因 此 在 種 球 不 多 需 大 量 擴(kuò) 繁 時(shí) 內(nèi) 層 鱗 片 則 是 卷 丹 百 合 組 培 快 繁 外 植 體 的 最 佳 選 擇 非 常 符 合 工 廠 化 生 產(chǎn) 的 需 要 3 1 3 植 物 激 素 對(duì) 卷 丹 百 合 誘 導(dǎo) 增 殖 及 生 根 結(jié) 鱗 莖 的 影 響 6 BA 與 NAA 的 濃 度 水 平 是 百 合 不 定 芽 能 否 產(chǎn) 生 和 增 殖 的 主 要 因 素 不 同 品 種 的 百 合 在 增 殖 時(shí) 對(duì) 激 素 濃 度 的 要 求 有 較 大 差 異 17 19 因 此 在 組 織 培 養(yǎng) 的 過(guò) 程 中 要 根 據(jù) 不 同 的 品 種 進(jìn) 行 激 素 濃 度 的 配 比 本 研 究 中 不 加 6 BA 只 加 NAA 和 IBA 配 比 的 生 根 培 養(yǎng) 基 MS NAA1 0mg L 1 IBA0 5mg L 1 也 適 合 卷 丹 百 合 試 管 苗 的 增 殖 和 繼 代 培 養(yǎng) 在 生 根 的 同 時(shí) 能 結(jié) 出 小 鱗 莖 且 小 鱗 莖 增 殖 系 數(shù) 較 高 生 根 率 可 達(dá) 100 小 鱗 莖 的 增 殖 倍 數(shù) 為 6 倍 可 以 同 時(shí) 作 為 增 殖 和 生 根 培 養(yǎng) 的 最 優(yōu) 培 養(yǎng) 基 3 2 結(jié) 論 在 卷 丹 百 合 的 組 培 快 繁 過(guò) 程 中 宜 選 擇 內(nèi) 層 鱗 片 為 外 植 體 外 植 體 用 75 的 乙 醇 浸 泡 30 s 后 再 用 10 次 氯 酸 鈉 消 毒 20min 以 26 和 45 交 替 熱 處 理 1 個(gè) 月 后 剝 取 0 3 0 8mm 莖 尖 的 脫 毒 效 果 較 好 最 適 誘 導(dǎo) 培 養(yǎng) 基 為 MS 6 BA2 0mg L 1 NAA1 0 mg L 1 最 適 增 殖 培 養(yǎng) 基 為 MS 6 BA0 1mg L 1 NAA0 5mg L 1 最 適 生 根 結(jié) 鱗 莖 培 養(yǎng) 基 為 MS NAA1 0mg L 1 IBA0 5mg L 1 參 考 文 獻(xiàn) 1 趙 銀 彥 李 正 錄 蔡 林 海 中 國(guó) 食 用 百 合 生 產(chǎn) 現(xiàn) 狀 與 發(fā) 展 思 路 J 甘 肅 科 技 2018 34 08 1 2 52 2 齊 心 程 英 魁 張 悅 多 倍 體 食 用 百 合 研 究 進(jìn) 展 J 吉 林 蔬 菜 2015 10 32 33 3 夏 金 英 葉 發(fā) 寶 食 用 百 合 產(chǎn) 業(yè) 發(fā) 展 的 思 考 與 建 議 J 內(nèi) 蒙 古 農(nóng) 業(yè) 科 技 2013 02 23 4 張 偉 賈 桂 霞 LA 百 合 品 種 Eyeliner 組 培 繁 殖 技 術(shù) 研 究 J 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2010 06 32 34 5 杜 帥 李 丹 杜 喜 春 等 綠 花 百 合 組 培 快 繁 技 術(shù) 研 究 J 現(xiàn) 代 園 藝 2014 08 12 13 6 裴 懷 弟 林 玉 紅 李 淑 潔 等 蘭 州 百 合 組 培 小 鱗 莖 誘 導(dǎo) 技 術(shù) 研 究 J 甘 肅 農(nóng) 業(yè) 科 技 2019 07 29 32 7 張 彥 妮 李 文 英 激 素 和 光 照 條 件 對(duì) 百 合 普 瑞 頭 鱗 片 和 葉 片 的 誘 導(dǎo) 培 養(yǎng) J 江 蘇 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2012 40 05 32 33 8 崔 瑞 峰 張 麗 霞 韓 曉 紅 不 同 激 素 配 比 對(duì) 百 合 鱗 片 愈 傷 組 織 誘 導(dǎo) 的 影 響 J 黑 龍 江 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2014 09 8 9 9 趙 霞