第 38 卷 第 2 期 2 020 年 4 月 石 河 子 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 自 然 科 學(xué) 版 J o u r n a l o f Shi he z i U ni v e r s i t y N a t ur a l Sc i e nc e V o l 38 N o 2 A pr 2020 收 稿 日 期 2 0 1 9 0 5 2 0 基 金 項(xiàng) 目 兵 團(tuán) 區(qū) 域 創(chuàng) 新 計(jì) 劃 項(xiàng) 目 2 0 1 8 B B 4 0 3 國(guó) 家 自 然 科 學(xué) 基 金 項(xiàng) 目 3 1 5 6 0 5 3 4 農(nóng) 業(yè) 部 西 北 荒 漠 綠 洲 作 物 有 害 生 物 綜 合 治 理 重 點(diǎn) 實(shí) 驗(yàn) 室 開(kāi) 放 基 金 資 助 課 題 K F J J 2 0 1 8 0 1 0 5 作 者 簡(jiǎn) 介 韓 暢 1 9 9 4 女 碩 士 研 究 生 研 究 方 向 為 植 物 病 理 學(xué) 通 信 作 者 都 業(yè) 娟 1 9 7 3 女 副 教 授 碩 士 生 導(dǎo) 師 研 究 方 向 為 植 物 病 理 學(xué) e m a i l d y j a g r s i n a c o m D O I 1 0 1 3 8 8 0 j c n k i 6 5 1 1 7 4 n 2 0 1 9 2 3 0 1 2 文 章 編 號(hào) 1 0 0 7 7 3 8 3 2 0 2 0 0 2 0 1 6 0 0 6 新 疆 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 與 煙 粉 虱 隱 種 的 區(qū) 域 分 布 檢 測(cè) 韓 暢 1 張 興 旺 1 高 國(guó) 龍 1 韓 盛 2 都 業(yè) 娟 1 1 石 河 子 大 學(xué) 農(nóng) 學(xué) 院 新 疆 綠 洲 農(nóng) 業(yè) 病 蟲(chóng) 害 治 理 與 植 保 資 源 利 用 重 點(diǎn) 實(shí) 驗(yàn) 室 新 疆 石 河 子 8 3 2 0 0 3 2 農(nóng) 業(yè) 部 西 北 荒 漠 綠 洲 作 物 有 害 生 物 綜 合 治 理 重 點(diǎn) 實(shí) 驗(yàn) 室 新 疆 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 植 物 保 護(hù) 研 究 所 新 疆 烏 魯 木 齊 8 3 0 0 9 1 摘 要 由 T Y L C V T o m a t o y e l l o w l e a f c u r l v i r u s 引 起 的 番 茄 黃 化 曲 葉 病 危 害 嚴(yán) 重 為 明 確 該 病 毒 在 新 疆 的 發(fā) 生 與 分 布 本 研 究 利 用 T Y L C V 特 異 引 物 對(duì) 采 集 自 新 疆 南 北 和 東 疆 溫 室 及 露 地 的 2 2 9 株 表 現(xiàn) 黃 化 曲 葉 癥 狀 的 番 茄 樣 品 通 過(guò) P C R 檢 測(cè) 其 帶 毒 率 為 進(jìn) 一 步 明 確 T Y L C V 傳 毒 介 體 煙 粉 虱 的 隱 種 類 型 及 帶 毒 情 況 利 用 煙 粉 虱 和 T Y L C V 特 異 引 物 對(duì) 番 茄 上 采 集 的 5 4 3 頭 煙 粉 虱 進(jìn) 行 了 M E D 和 M E A M 1 隱 種 及 帶 毒 率 的 P C R 檢 測(cè) 結(jié) 果 表 明 1 7 0 個(gè) 病 株 檢 測(cè) 到 T Y L C V 病 株 帶 毒 率 為 7 4 2 煙 粉 虱 M E D 隱 種 和 M E A M 1 隱 種 在 新 疆 均 有 分 布 檢 出 率 分 別 為 8 2 7 和 1 7 3 說(shuō) 明 M E D 隱 種 是 新 疆 煙 粉 虱 優(yōu) 勢(shì) 種 群 煙 粉 虱 M E D 隱 種 和 M E A M 1 隱 種 均 可 攜 帶 T Y L C V 帶 毒 率 分 別 為 6 0 8 和 4 3 說(shuō) 明 M E D 隱 種 帶 毒 率 遠(yuǎn) 高 于 M E A M 1 隱 種 的 帶 毒 率 本 研 究 明 確 了 T Y L C V 可 侵 染 新 疆 番 茄 且 在 溫 室 及 露 地 番 茄 上 均 主 要 由 煙 粉 虱 優(yōu) 勢(shì) 種 群 M E D 隱 種 攜 帶 和 傳 播 關(guān) 鍵 詞 T Y L C V 煙 粉 虱 隱 種 檢 測(cè) 中 圖 分 類 號(hào) S 4 3 6 4 1 2 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 A D i s t r i b u t i o n o f t o m a t o y e l l o w l e a f c u r l v i r u s T Y L C V f r o m t o m a t o e s a n d B e m i s i a t a b a c i i n X i n j i a n g H A N C ha ng 1 Z H A N G X i ng w a ng 1 G A O G uo l o n g 1 H A N She ng 2 D U Y e j ua n 1 1 A g r i c u l t u r a l C o l l e g e o f S h i h e z i U n i v e r s i t y K e y L a b o r a t o r y o f O a s i s A g r i c u l t u r a l P e s t M a n a g e m e n t a n d P l a n t P r o t e c t i o n R e s o u r c e s U t i l i z a t i o n X i n j i a n g U y g u r A u t o n o m o u s R e g i o n S h i h e z i X i n j i a n g 8 3 2 0 0 3 C h i n a 2 K e y L a b o r a t o r y o f C o m p r e h e n s i v e C o n t r o l o f H a r m f u l C r o p V e r m i n o f C h i n a N o r t h w e s t e r n O a s i s o f M i n i s t r y o f A g r i c u l t u r e R e s e a r c h I n s t i t u t e o f P l a n t P r o t e c t i o n X i n j i a n g A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s U r u m q i X i n j i a i n g 8 3 0 0 9 1 C h i n a A b s t r a c t T o m a t o y e l l o w l e a f c u r l d i s e a s e T Y L C D c a u s e d b y t o m a t o y e l l o w l e a f c u r l v i r u s T Y L C V h a d c a u s e d s e r i o u s d a m a g e t o t o m a t o p r o d u c t i o n T h i s r e s e a r c h a i m e d t o d e t e r m i n e t h e d i s t r i b u t i o n o f T Y L C V t h e o c c u r r e n c e o f c r y p t i c s p e c i e s o f B e m i s i a t a b a c i a n d t h e p r o p o r t i o n o f B t a b a c i c a r r y i n g T Y L C V i n X i n j i a n g T h e t o t a l o f 2 2 9 t o m a t o p l a n t s w i t h y e l l o w l e a f c u r l s y m p t o m s w h i c h w e r e c o l l e c t e d f r o m g r e e n h o u s e a n d f i e l d s i n d i f f e r e n t r e g i o n s o f X i n j i a n g w e r e d e t e c t e d b y P C R u s i n g s p e c i f i c p r i m e r s t h e t o t a l o f 5 4 3 B t a b a c i f r o m s a m e a r e a s w e r e d e t e c t e d b y P C R t o d e t e r m i n e M E D a n d M E A M 1 o f B t a b a c i a n d t h e p r o p o r t i o n o f t h e i r c a r r y i n g T Y L C V T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t T Y L C V w a s d e t e c t e d f r o m 1 7 0 t o m a t o p l a n t s t h e i n c i d e n c e o f T Y L C V w a s 7 4 2 T o d e t e r m i n e M E D a n d M E A M 1 o f B t a b a c i a n d t h e p r o p o r t i o n o f t h e i r c a r r y i n g T Y L C V M E D a n d M E A M 1 w a s 8 2 7 a n d 1 7 3 r e s p e c t i v e l y i n d i c a t i n g t h a t b o t h M E D a n d M E A M 1 o c c u r r e d i n X i n j i a n g a n d M E D w a s d o m i n a n t p o p u l a t i o n T Y L C V c a n b e c a r r i e d b y M E D a n d M E A M 1 t h e p r o p o r t i o n o f T Y L C V c a r r i e d b y M E D a n d M E A M 1 w a s 6 0 8 a n d 4 3 r e s p e c t i v e l y i n d i c a t i n g t h a t M E D i s m o r e c a p a b l e o f c a r r y i n g T Y L C V t h a n M E A M 1 T h e s t u d y c o n f i r m e d t h a t T Y L C V c o u l d i n f e c t e d t o m a t o i n X i n j i a n g T Y L C V w a s m a i n l y t r a n s m i t e d b y d o m i n a n t p o p u l a t i o n M E D i n g r e e n h o u s e a n d f i e l d s K e y w o r d s t o m a t o y e l l o w l e a f c u r l v i r u s B e m i s i a t a b a c i c r y p t i c s p e c i e s o f B e m i s i a t a b a c i d e t e c t i o n 番 茄 黃 化 曲 葉 病 T o m a t o y e l l o w l e a f c u r l d i s e a s e T Y L C D 是 影 響 番 茄 生 產(chǎn) 的 主 要 病 毒 病 害 該 病 害 可 第 2 期 韓 暢 等 新 疆 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 與 煙 粉 虱 隱 種 的 區(qū) 域 分 布 檢 測(cè) 1 6 1 由 多 種 雙 生 病 毒 G e m i n i v i r u s e s 引 起 1 其 中 尤 以 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 T o m a t o y e l l o w l e a f c u r l v i r u s T Y L C V 發(fā) 生 最 廣 危 害 最 重 T Y L C V 侵 染 番 茄 后 表 現(xiàn) 為 植 株 矮 化 葉 片 上 卷 產(chǎn) 量 降 低 苗 期 感 染 時(shí) 可 造 成 絕 收 T Y L C V 屬 于 雙 生 病 毒 科 G e m i n i v i r i d a e 菜 豆 金 色 花 葉 病 毒 屬 B e g o m o v i r u s 是 由 煙 粉 虱 B e m i s i a t a b a c i 傳 播 的 單 鏈 D N A 病 毒 共 編 碼 6 個(gè) 開(kāi) 放 閱 讀 框 架 O R F 單 個(gè) 基 因 組 D N A A 就 能 侵 染 致 病 2 煙 粉 虱 是 一 個(gè) 全 球 廣 泛 分 布 的 包 含 3 0 多 個(gè) 隱 種 的 物 種 復(fù) 合 體 3 6 遺 傳 結(jié) 構(gòu) 十 分 復(fù) 雜 其 中 入 侵 性 很 強(qiáng) 的 B 型 和 Q 型 煙 粉 虱 分 別 屬 于 M i d d l e E a s t A s i a M i n o r 1 M E A M 1 隱 種 和 M e d i t e r r a n e a n M E D 隱 種 7 目 前 在 許 多 入 侵 地 逐 漸 取 代 本 地 煙 粉 虱 4 王 曉 偉 等 8 研 究 表 明 這 可 能 與 入 侵 型 煙 粉 虱 分 泌 B t 5 6 的 能 力 明 顯 強(qiáng) 于 本 地 煙 粉 虱 有 關(guān) 存 在 于 煙 粉 虱 唾 液 中 的 B t 5 6 蛋 白 不 僅 能 降 低 植 物 的 抵 抗 力 還 能 增 強(qiáng) 煙 粉 虱 的 存 活 和 繁 殖 力 在 過(guò) 去 的 2 0 多 年 里 隨 著 煙 粉 虱 M E A M 1 和 M E D 隱 種 在 世 界 各 地 的 爆 發(fā) T Y L C V 也 在 世 界 不 同 地 區(qū) 擴(kuò) 展 發(fā) 生 并 造 成 番 茄 等 多 種 作 物 的 嚴(yán) 重 損 失 我 國(guó) 2 0 0 6 年 首 次 在 上 海 檢 測(cè) 到 T Y L C V 9 隨 后 幾 年 迅 速 擴(kuò) 展 至 山 東 北 京 新 疆等 地 1 0 1 1 目 前 已 在 全 國(guó) 3 1 個(gè) 省 市 番 茄 等 寄 主 上 發(fā) 生 劉 勇 等 1 2 于 2 0 1 3 2 0 1 7 年 對(duì) 全 國(guó) 采 集 的 6 5 3 3 份 番 茄 病 毒 病 樣 品 進(jìn) 行 檢 測(cè) 結(jié) 果 表 明 T Y L C V 的 檢 出 率 僅 次 于 C M V C u c u m b e r m o s a i c v i r u s T M V T o b a c c o m o s a i c v i r u s 和 T o M V T o m a t o m o s a i c v i r u s 已 給 我 國(guó) 番 茄 生 產(chǎn) 造 成 了 嚴(yán) 重 損 失 新 疆 地 域 廣 闊 天 山 山 脈 橫 貫 中 部 地 理 氣 候 差 異 很 大 通 常 按 地 理 區(qū) 域 分 為 南 疆 北 疆 和 東 疆 20 11 年 底 在 南 疆 喀 什 地 區(qū) 莎 車 縣 發(fā) 現(xiàn) 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 病 1 3 并 迅 速 擴(kuò) 展 至 東 疆 的 吐 魯 番 地 區(qū) 1 4 1 5 對(duì) 新 疆 設(shè) 施 農(nóng) 業(yè) 和 番 茄 產(chǎn) 業(yè) 影 響 較 大 近 年 番 茄 黃 化 曲 葉 病 在 新 疆 不 斷 擴(kuò) 散 是 否 與 傳 播 介 體 煙 粉 虱 的 優(yōu) 勢(shì) 種 群 分 布 動(dòng) 態(tài) 發(fā) 生 變 化 有 關(guān) 本 研 究 通 過(guò) 分 子 檢 測(cè) 明 確 其 在 北 疆 南 疆 昆 玉 市 和 東 疆 鄯 善 縣 的 分 布 并 選 取 上 述 地 點(diǎn) 采 集 煙 粉 虱 進(jìn) 行 隱 種 鑒 定 和 帶 毒 檢 測(cè) 旨 在 明 確 新 疆 番 茄 黃 化 曲 葉 病 的 發(fā) 生 與 煙 粉 虱 優(yōu) 勢(shì) 種 群 的 分 布 及 其 帶 毒 率 的 相 關(guān) 性 從 而 為 其 有 效 防 控 提 供 依 據(jù) 1 材 料 與 方 法 1 1 樣 品 采 集 供 試 番 茄 病 株 20 14 年 1 月 2 01 8 年 11 月 從 溫 室 和 露 地 共 采 集 2 29 份 番 茄 黃 化 曲 葉 病 疑 似 病 株 用 于 T Y L C V 檢 測(cè) 其 中 南 疆 41 份 東 疆 3 8 份 北 疆 15 0 份 表 1 病 株 均 表 現(xiàn) 黃 化 曲 葉 等 癥 狀 置 70 冰 箱 保 存 備 用 供 試 煙 粉 虱 從 上 述 溫 室 和 露 地 番 茄 疑 似 病 株 上 同時(shí) 采集 5 4 3 頭煙 粉虱 用 于隱 種和 帶毒 檢 測(cè) 其中 南 疆 昆 玉 市 1 4 2 頭 東 疆 鄯 善 縣 1 3 5 頭 北 疆 克 拉 瑪 依 市 石 河 子 市 烏 魯 木 齊 市 2 6 6 頭 表 1 表 1 番 茄 及 煙 粉 虱 樣 品 采 集 信 息 采 集 地 點(diǎn) 番 茄 樣 品 數(shù) 量 個(gè) 煙 粉 虱 蟲(chóng) 口 數(shù) 個(gè) 生 境 采 集 時(shí) 間 南 疆 昆 玉 市 4 1 1 4 2 溫 室 2 0 1 8 年 1 1 月 東 疆 鄯 善 縣 3 8 1 3 5 溫 室 2 0 1 4 年 1 月 北 疆 克 拉 瑪 依 市 5 0 1 2 0 溫 室 2 0 1 5 年 7 月 克 拉 瑪 依 市 9 0 5 4 露 地 2 0 1 5 年 7 月 9 日 石 河 子 市 7 7 2 露 地 2 0 1 8 年 7 月 烏 魯 木 齊 市 3 2 0 露 地 2 0 1 8 年 1 0 月 1 2 供 試 菌 株 及 試 劑 盒 E c o l i D H 5 菌 株 用 于 T Y L C V 及 煙 粉 虱 檢 測(cè) 的 陽(yáng) 性 對(duì) 照 質(zhì) 粒 由 石 河 子 大 學(xué) 植 物 病 理 學(xué) 教 研 室 提 供 植 物 D N A 提 取 試 劑 盒 P l a nt D N A I s o l a t i o n R e a g e nt 購(gòu) 自 T A K A R A 寶 生 物 工 程 大 連 有 限 公 司 單 頭 煙 粉 D N A 提 取 試 劑 盒 D N e a s y B l o o d P C R 擴(kuò) 增 T a q P C R M a s t e r M i x 試 劑 盒 D N A 純 化 回 收 U ni v e r s a l D N A P ur i f i c a t i o n K i t 試 劑 盒 購(gòu) 自 T I A N G E N 生 化 科 技 有 限 公 司 1 3 用 于 T Y C L V 和 煙 粉 虱 檢 測(cè) 的 引 物 特 異 性 引 物 T Y L C V F T Y L C V R 1 6 用 于 T Y L C V 的 檢 測(cè) 通 用 引 物 C 1 J 2 1 95 T L 2 N 2 819 1 7 及 Q F Q R B F B R 1 8 分 別 用 于 煙 粉 虱 及 M E D 和 M E A M 1 隱 種 的 檢 測(cè) 表 2 表 2 用 于 檢 測(cè) T Y C L V 和 煙 粉 虱 的 引 物 引 物 引 物 序 列 5 3 長(zhǎng) 度 b p T Y L C V F A C G C A T G C C T C T A A T C C A G T G T A 5 4 0 T Y L C V R C C A A T A A G G C G T A A G C G T G T A G A C C 1 J 2 1 9 5 T T G A T T T T T T G G T C A T C C A G A A G T 8 4 0 L 2 N 3 0 1 4 T C C A A T G C A C T A A T C T G C C A T A T T A Q F C T T G G T A A C T C T T C T G T A G A T G T G T G T T 3 0 0 Q R C C T T C C C G C A G A A G A A A T T T T G T T C B F C T A G G G T T T A T T G T T T G A G G T C A T C A T A T A T T C 4 8 0 B R A A T A T C G A C G A G G C A T T C C C C C T 1 4 番 茄 病 株 T Y L C V 的 P C R 檢 測(cè) 提 取 番 茄 植 物 總 D N A 參 照 T A K A R A 公 司 的 P l a nt D N A I s o l a t i o n R e a g e n t 試 劑 盒 說(shuō) 明 利 用 T Y L C V 的 特 異 性 引 物 T Y L C V F 和 T Y L C V R 進(jìn) 行 P C R 擴(kuò) 增 以 實(shí) 驗(yàn) 室 保 存 的 含 T Y L C V 基 因 組 的 質(zhì) 1 6 2 石 河 子 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 自 然 科 學(xué) 版 第 3 8 卷 粒 為 陽(yáng) 性 對(duì) 照 對(duì) 供 試 番 茄 病 株 進(jìn) 行 T Y L C V 帶 毒 檢 測(cè) P C R 反 應(yīng) 體 系 總 體 積 為 25 L 為 12 5 L 2 P C R M i x 1 L D N A 模 板 1 0 m o l L 上 下 游 引 物 各 1 L 加 d dH 2 O 補(bǔ) 足 2 5 L 反 應(yīng) 程 序 為 94 預(yù) 變 性 3 m i n 94 變 性 30 s 5 0 退 火 30 s 72 延 伸 1 3 m i n 循 環(huán) 5 次 94 變 性 3 0 s 5 5 退 火 30 s 72 延 伸 1 3 m i n 循 環(huán) 3 0 次 72 延 伸 10 m i n 4 終 止 反 應(yīng) 反 應(yīng) 產(chǎn) 物 經(jīng) 1 瓊 脂 糖 凝 膠 電 泳 后 在 紫 外 燈 下 觀 察 結(jié) 果 1 5 煙 粉 虱 M E D 隱 種 和 M E A M 1 隱 種 的 P C R 檢 測(cè) 提 取 單 頭 煙 粉 虱 總 D N A 參 考 Q I A G E N 公 司 的 D N e a s y B l o o d 確 定 為 煙 粉 虱 的 樣 品 再 分 別 利 用 M E D 隱 種 的 特 異 性 引 物 Q F 和 Q R M E A M 1 隱 種 的 特 異 引 物 B F 和 B R 進(jìn) 行 擴(kuò) 增 以 實(shí) 驗(yàn) 室 保 存 的 質(zhì) 粒 為 陽(yáng) 性 對(duì) 照 對(duì) 煙 粉 虱 隱 種 進(jìn) 行 檢 測(cè) P C R 反 應(yīng) 體 系 同 1 4 利 用 煙 粉 虱 通 用 引 物 進(jìn) 行 P C R 擴(kuò) 增 反 應(yīng) 程 序 為 9 4 預(yù) 變 性 3 m i n 9 4 變 性 30 s 5 2 退 火 30 s 72 延 伸 1 m i n 35 個(gè) 循 環(huán) 72 延 伸 1 0 m i n 4 終 止 反 應(yīng) 利 用 隱 種 特 異 引 物 進(jìn) 行 P C R 擴(kuò) 增 的 反 應(yīng) 程 序 是 9 4 預(yù) 變 性 3 m i n 9 4 變 性 3 0 s 64 退 火 1 m i n 72 延 伸 1 m i n 3 0 個(gè) 循 環(huán) 7 2 延 伸 10 m i n 4 終 止 反 應(yīng) 反 應(yīng) 產(chǎn) 物 經(jīng) 1 瓊 脂 糖 凝 膠 電 泳 后 在 紫 外 燈 下 觀 察 結(jié) 果 并 回 收 純 化 目 標(biāo) 條 帶 1 6 煙 粉 虱 攜 帶 T Y L C V 的 P C R 檢 測(cè) 對(duì) 上 述 檢 測(cè) 為 不 同 隱 種 的 煙 粉 虱 再 利 用 T Y L C V 的 特 異 性 引 物 T Y L C V F 和 T Y L C V R 分 別 進(jìn) 行 帶 毒 檢 測(cè) 以 實(shí) 驗(yàn) 室 保 存 的 含 T Y L C V 基 因 組 的 質(zhì) 粒 為 陽(yáng) 性 對(duì) 照 P C R 反 應(yīng) 體 系 及 反 應(yīng) 程 序 同 1 4 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 番 茄 黃 化 曲 葉 病 病 株 癥 狀 新 疆 溫 室 及 露 地 番 茄 上 發(fā) 生 的 黃 化 曲 葉 病 的 癥 狀 主 要 表 現(xiàn) 為 植 株 節(jié) 間 變 短 矮 化 圖 1 A 葉 片 變 小 變 厚 質(zhì) 感 脆 硬 并 向 上 卷 曲 黃 化 部 分 品 種 后 期 葉 脈 呈 紫 色 圖 1 B 苗 期 受 害 則 花 少 或 不 開(kāi) 花 全 株 坐 果 很 少 果 實(shí) 小 而 畸 形 嚴(yán) 重 時(shí) 不 結(jié) 果 圖 1 C D A 苗 期 危 害 狀 B 葉 脈 變 紫 C 溫 室 番 茄 受 害 癥 狀 D T Y L C V 危 害 癥 狀 圖 1 番 茄 黃 化 曲 葉 病 癥 狀 2 2 番 茄 T Y L C V 帶 毒 率 的 分 子 檢 測(cè) 利 用 T Y L C V 的 特 異 性 引 物 T Y L C V F 和 T Y L C V R 對(duì) 采 集 自 新 疆 不 同 區(qū) 域 的 2 29 份 番 茄 樣 品 進(jìn) 行 P C R 擴(kuò) 增 170 份 樣 品 擴(kuò) 增 到 與 陽(yáng) 性 對(duì) 照 一 致 的 54 0 b p 的 目 標(biāo) 片 段 圖 2 表 明 這 些 番 茄 樣 品 受 到 T Y L C V 侵 染 帶 毒 率 達(dá) 7 4 2 M D N A 分 子 量 標(biāo) 準(zhǔn) 1 陽(yáng) 性 性 對(duì) 照 2 陰 性 對(duì) 照 3 2 3 為 番 茄 樣 品 圖 2 T Y L C V F T Y L C V R 引 物 對(duì) 不 同 番 茄 樣 品 的 P C R 檢 測(cè) 溫 室 采 集 的 129 份 樣 品 中 1 07 份 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 82 9 其 中 采 集 自 南 疆 昆 玉 市 溫 室 41 份 樣 品 均 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 10 0 采 集 自 東 疆 鄯 善 縣 溫 室 3 8 份 樣 品 18 份 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 47 4 采 集 自 北 疆 克 拉 瑪 依 市 溫 室 5 0 份 樣 品 中 48 份 帶 毒 帶 毒 率 高 達(dá) 96 表 3 露 地 采 集 的 10 0 份 樣 品 中 63 份 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 63 0 其 中 采 集 自 克 拉 瑪 依 的 9 0 份 樣 品 60 份 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 66 7 采 集 自 烏 魯 木 齊 露 地 的 3 份 樣 品 均 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 100 采 集 自 石 河 子 露 地 的 7 份 番 茄 均 未 檢 測(cè) 到 病 毒 表 3 第 2 期 韓 暢 等 新 疆 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 與 煙 粉 虱 隱 種 的 區(qū) 域 分 布 檢 測(cè) 1 6 3 表 3 新 疆 番 茄 T Y L C V 的 帶 毒 率 檢 測(cè) 采 集 地 點(diǎn) 生 境 樣 品 數(shù) 量 個(gè) 帶 毒 數(shù) 個(gè) 帶 毒 率 南 疆 昆 玉 市 溫 室 4 1 4 1 1 0 0 東 疆 鄯 善 縣 溫 室 3 8 1 8 4 7 4 北 疆 克 拉 瑪 依 市 溫 室 5 0 4 8 9 6 克 拉 瑪 依 市 露 地 9 0 6 0 6 6 7 石 河 子 市 露 地 7 0 0 烏 魯 木 齊 市 露 地 3 3 1 0 0 2 3 煙 粉 虱 隱 種 的 鑒 定 利 用 煙 粉 虱 m t D N A C O I 基 因 片 段 通 用 引 物 C 1 J 2 1 9 5 和 L 2 N 3 0 1 4 對(duì) 采 集 自 新 疆 不 同 區(qū) 域 的 5 43 頭 粉 虱 的 D N A 分 別 進(jìn) 行 P C R 擴(kuò) 增 結(jié) 果 顯 示 5 43 頭 粉 虱 均 擴(kuò) 增 到 與 陽(yáng) 性 對(duì) 照 一 致 的 約 840 b p 的 目 標(biāo) 條 帶 圖 3 表 明 這 些 粉 虱 均 為 煙 粉 虱 B e m i s i a t ab a c i 進(jìn) 一 步 利 用 M E D 隱 種 特 異 性 引 物 Q F 和 Q R M E A M 1 隱 種 的 特 異 引 物 B F 和 B R 分 別 對(duì) 54 3 頭 煙 粉 虱 進(jìn) 行 隱 種 檢 測(cè) 結(jié) 果 顯 示 44 9 頭 可 由 引 物 Q F 和 Q R 擴(kuò) 增 到 約 300 bp 的 目 標(biāo) 條 帶 卻 不 能 由 引 物 B F 和 B R 擴(kuò) 增 到 任 何 目 標(biāo) 條 帶 表 明 44 9 頭 煙 粉 虱 為 M E D 隱 種 占 供 試 煙 粉 虱 的 82 7 9 4 頭 煙 粉 虱 可 由 引 物 B F 和 B R 擴(kuò) 增 到 約 48 0 b p 的 目 標(biāo) 條 帶 不 能 由 引 物 Q F 和 Q R 擴(kuò) 增 到 任 何 目 標(biāo) 條 帶 表 明 這 9 4 頭 煙 粉 虱 為 M E A M 1 隱 種 占 供 試 煙 粉 虱 的 17 3 圖 4 從 煙 粉 虱 來(lái) 源 看 溫 室 采 集 的 39 7 頭 煙 粉 虱 中 37 5 頭 為 M E D 隱 種 占 94 5 22 頭 為 M E A M 1 隱 M D N A 分 子 量 標(biāo) 準(zhǔn) 1 陰 性 對(duì) 照 2 陽(yáng) 性 對(duì) 照 3 8 為 煙 粉 虱 樣 品 圖 3 基 于 m t D N A C O I 基 因 的 煙 粉 虱 檢 測(cè) M D N A 分 子 量 標(biāo) 準(zhǔn) 1 2 為 M E A M 1 和 M E D 隱 種 陽(yáng) 性 對(duì) 照 3 4 為 M E A M 1 和 M E D 隱 種 陰 性 對(duì) 照 5 2 4 為 煙 粉 虱 樣 品 圖 4 煙 粉 虱 M E D 和 M E A M 1 隱 種 的 P C R 檢 測(cè) 種 占 5 5 其 中 南 疆 昆 玉 市 采 集 的 1 4 2 頭 煙 粉 虱 中 141 頭 為 M E D 隱 種 占 99 3 1 頭 為 M E A M 1 隱 種 占 0 7 東 疆 鄯 善 縣 采 集 的 1 35 頭 煙 粉 虱 中 11 6 頭 為 M E D 隱 種 占 8 5 9 19 頭 為 M E A M 1 隱 種 占 14 1 北 疆 克 拉 瑪 依 市 采 集 1 2 0 頭 118 頭 為 M E D 隱 種 占 98 3 2 頭 為 M E A M 1 隱 種 占 1 7 表 4 表 明 新 疆 溫 室 番 茄 上 的 煙 粉 虱 雖 有 M E A M 1 隱 種 發(fā) 生 但 是 主 要 以 M E D 隱 種 為 優(yōu) 勢(shì) 隱 種 露 地 采 集 的 14 6 頭 煙 粉 虱 中 74 頭 為 M E D 隱 種 占 50 7 72 頭 為 M E A M 1 隱 種 占 4 9 3 其 中 克 拉 瑪 依 市 采 集 的 5 4 頭 烏 魯 木 齊 市 采 集 的 20 頭 煙 粉 虱 均 為 M E D 隱 種 石 河 子 市 采 集 的 72 頭 煙 粉 虱 均 為 M E A M 1 隱 種 表 4 表 明 北 疆 露 地 番 茄 上 的 煙 粉 虱 的 優(yōu) 勢(shì) 隱 種 在 不 同 地 區(qū) 之 間 存 在 明 顯 差 異 表 4 新 疆 煙 粉 虱 隱 種 分 布 檢 測(cè) 采 集 地 點(diǎn) 生 境 煙 粉 虱 樣 品 數(shù) 個(gè) M E D M E A M 1 蟲(chóng) 口 數(shù) 個(gè) 檢 出 率 蟲(chóng) 口 數(shù) 檢 出 率 南 疆 昆 玉 市 溫 室 1 4 2 1 4 1 9 9 3 1 0 7 東 疆 鄯 善 縣 溫 室 1 3 5 1 1 6 8 5 9 1 9 1 4 1 北 疆 克 拉 瑪 依 市 溫 室 1 2 0 1 1 8 9 8 3 2 1 7 克 拉 瑪 依 市 露 地 5 4 5 4 1 0 0 0 0 石 河 子 市 露 地 7 2 0 0 7 2 1 0 0 烏 魯 木 齊 市 露 地 2 0 2 0 1 0 0 0 0 2 4 煙 粉 虱 T Y L C V 帶 毒 率 的 分 子 檢 測(cè) 利 用 T Y L C V 特 異 性 引 物 T Y L C V F 和 T Y L C V R 對(duì) 所 有 煙 粉 虱 帶 毒 率 進(jìn) 行 檢 測(cè) 結(jié) 果 顯 示 從 2 個(gè) 隱 種 的 煙 粉 虱 上 均 能 擴(kuò) 增 到 與 陽(yáng) 性 對(duì) 照 一 致 的 54 0 b p 的 目 標(biāo) 片 段 圖 5 表 明 煙 粉 虱 的 2 個(gè) 隱 種 均 能 攜 帶 T Y L C V 對(duì) 不 同 隱 種 的 帶 毒 率 的 統(tǒng) 計(jì) 結(jié) 果 顯 示 44 9 頭 M E D 隱 種 中 273 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 6 0 8 94 頭 M E A M 1 隱 種 中 4 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 4 3 表 明 M E D 隱 種 帶 毒 率 遠(yuǎn) 遠(yuǎn) 高 于 M E A M 1 隱 種 的 帶 毒 率 對(duì) 煙 粉 虱 帶 毒 情 況 的 分 析 結(jié) 果 顯 示 溫 室 采 集 的 375 頭 M E D 隱 種 中 2 3 6 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 62 9 22 頭 M E A M 1 隱 種 中 4 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 18 2 其 中 南 疆 昆 玉 市 采 集 的 141 頭 M E D 隱 種 中 108 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 76 6 M E A M 1 隱 種 1 頭 帶 毒 帶 毒 率 100 東 疆 鄯 善 縣 采 集 的 1 6 4 石 河 子 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 自 然 科 學(xué) 版 第 3 8 卷 M D N A 分 子 量 標(biāo) 準(zhǔn) 1 陰 性 對(duì) 照 2 5 為 M E D 隱 種 煙 粉 虱 6 8 為 M E A M 1 隱 種 煙 粉 圖 5 T Y L C V F T Y L C V R 引 物 對(duì) 煙 粉 虱 的 P C R 檢 測(cè) 11 6 頭 M E D 隱 種 中 80 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 68 9 1 9 頭 M E A M 1 隱 種 中 3 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 15 8 北 疆 克 拉 瑪 依 市 采 集 的 1 1 8 頭 M E D 隱 種 中 4 8 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 40 7 2 頭 M E A M 1 隱 種 未 檢 測(cè) 到 病 毒 結(jié) 果 表 明 溫 室 中 發(fā) 生 的 煙 粉 虱 2 個(gè) 隱 種 都 能 傳 播 T Y L C V 但 主 要 以 M E D 隱 種 傳 播 為 主 露 地 采 集 的 74 頭 M E D 隱 種 煙 粉 虱 中 37 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 50 0 72 頭 M E A M 1 隱 種 均 未 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 0 其 中 北 疆 克 拉 瑪 依 市 54 頭 M E D 隱 種 中 3 1 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 為 57 4 烏 魯 木 齊 市 20 頭 M E D 隱 種 中 6 頭 檢 測(cè) 到 病 毒 帶 毒 率 3 0 0 石 河 子 市 采 集 的 7 2 頭 M E A M 1 隱 種 均 不 帶 毒 表 5 結(jié) 果 表 明