園藝學(xué)報(bào) 2020 47 4 741 748 Acta Horticulturae Sinica doi 10 16420 j issn 0513 353x 2019 0630 http www ahs ac cn 741 收稿日期 2019 12 23 修回日期 2020 03 03 基金項(xiàng)目 國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目 2017YFD0201102 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目 CAAS ASTIP IVFCAAS 農(nóng)業(yè)部園藝作 物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目 通信作者 Author for correspondence E mail libaoju xiexuewen 番茄匍柄霉葉斑病拮抗細(xì)菌的篩選與鑒定 李新宇 1 2 李 磊 1 陳利達(dá) 1 石延霞 1 柴阿麗 1 謝學(xué)文 1 李寶聚 1 1 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所 北京 100081 2 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院 沈陽 110866 摘 要 應(yīng)用平板對峙法從連作多年的番茄根際土樣中篩選得到對番茄匍柄霉葉斑病具有較強(qiáng)拮抗 活性的細(xì)菌菌株 ZF161 該菌株對番茄匍柄霉的平板抑制率達(dá)到 70 51 離體葉片試驗(yàn)顯示 菌株 ZF161 對番茄匍柄霉葉斑病防治效果達(dá)到 69 83 通過菌落形態(tài)觀察 生理生化特性 Biolog 測定和多基因系 統(tǒng)發(fā)育樹綜合分析 鑒定菌株 ZF161 為枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis 番茄盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明 菌株 ZF161 對番茄匍柄霉葉斑病的防治效果達(dá)到 63 27 進(jìn)一步平板對峙抑菌譜試驗(yàn)結(jié)果顯示 菌株 ZF161 對其他 7 種病原真菌也具有較好的抑制效果 上述結(jié)果說明 菌株 ZF161 對番茄匍柄霉葉斑病具有良好 的防治效果 且對多種病原真菌也具有抑制作用 具有開發(fā)應(yīng)用的潛力 關(guān)鍵詞 番茄 拮抗細(xì)菌 枯草芽孢桿菌 番茄匍柄霉葉斑病 防治效果 中圖分類號 S 641 2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 0513 353X 2020 04 0741 08 Screening and Identification of Antagonistic Bacteria Against Gray Leaf Spot of Tomato Caused by Stemphylium solani LI Xinyu 1 2 LI Lei 1 CHEN Lida 1 SHI Yanxia 1 CHAI Ali 1 XIE Xuewen 1 and LI Baoju 1 1 Institute of Vegetables and Flowers Chinese Academy of Agricultural Sciences Beijing 100081 China 2 Plant Protection College Shenyang Agricultural University Shenyang 110866 China Abstract Gray leaf spot is one of major diseases on tomato At present chemical control was the only way against the disease So it has a significant meaning to screen and use biocontrol bacteria to deal with the disease A bacterial strain named ZF161 isolated from rhizosphere soil of tomato in a continuous cropping system exhibited a high antagonistic effect on gray leaf spot of tomato caused by Stemphylium solani Weber The plate bioassay showed that the inhibition rate on S solani was 70 51 The control effect of ZF161 against tomato gray leaf spot of inoculated tomato detached leaf was 69 83 The strain was identified as Bacillus subtilis based on morphological biochemical and physiological analysis The pot experiment result revealed that the control effect of ZF161 against tomato gray leaf spot was 63 27 The antifungal activity of strain ZF161 was tested by plate confrontation method The result showed that strain ZF161 exhibited a broad spectrum against seven pathogenic fungi Overall B subtilis ZF161 is a beneficial bacteria in biocontrol of plant disease Keywords tomato antagonistic bacteria Bacillus subtilis gray leaf spot of tomato control effect Li Xinyu Li Lei Chen Lida Shi Yanxia Chai Ali Xie Xuewen Li Baoju Screening and identification of antagonistic bacteria against gray leaf spot of tomato caused by Stemphylium solani 742 Acta Horticulturae Sinica 2020 47 4 741 748 番茄匍柄霉葉斑病主要為害番茄的葉片 莖蔓和果實(shí) 全生育期均可發(fā)病 從局部發(fā)病到全株 感染只需要 2 3 d 防治難度較大 李戌清 等 2015 番茄匍柄霉葉斑病由茄匍柄霉 Stemphylium solani Wallr 和番茄匍柄霉 Stemphylium lycopersici Enjoji Yamamoto 引起 其中茄匍柄霉是主 要病原菌 李寶聚 等 2009 近幾年 芽孢桿菌 Bacillus sp 制劑得到了廣泛的應(yīng)用 大量實(shí)踐證明芽孢桿菌容易從植株 根際土壤 根系和葉片等部位分離 并且能產(chǎn)生耐熱 耐旱 抗紫外線和有機(jī)溶劑的芽孢 可迅速 在植株及根系定殖和擴(kuò)繁 謝學(xué)文 等 2016 石玉瑩 等 2017 申順善 等 2019 目前已有大 量報(bào)道關(guān)于應(yīng)用芽孢桿菌進(jìn)行植物病害的防治 王偉等 2010 篩選到 1 株對番茄灰霉病菌具有較 強(qiáng)拮抗效果的貝萊斯芽孢桿菌 B velezensis Chen 等 2014 篩選到 1 株對核盤菌具有拮抗效果 的枯草芽孢桿菌 B subtilis Mohammad 等 2018 發(fā)現(xiàn) 1 株對疫霉菌具有拮抗效果的枯草芽孢 桿菌 B subtilis 本研究中從番茄根際土壤中分離并篩選出 1 株對番茄匍柄霉葉斑病有明顯拮抗活性的生防芽孢 桿菌 對其拮抗效果進(jìn)行了初步研究 以期為番茄匍柄霉葉斑病的生物防治及生物藥劑的開發(fā)提供 理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù) 1 材料與方法 1 1 供試材料 供試番茄品種為 齊達(dá)利 購于先正達(dá)生物科技 中國 有限公司 病原真菌包括茄匍柄霉 S solani 多主棒孢菌 Corynespora cassiicola 葫蘆科刺盤孢菌 Colletotrichum orbiculare 辣椒疫霉菌 Phytophthora capsici 灰葡萄孢菌 Botrytis cinerea 茄病鐮孢菌 Fusarium solani 立枯絲核菌 Rhizoctonia solani 和茄鏈格孢 Alternaria solani 等 均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉 研究所保存 供試培養(yǎng)基 PDA 培養(yǎng)基 馬鈴薯 200 g L 1 葡萄糖 20 g L 1 瓊脂 18 g L 1 PD 培養(yǎng)基 馬鈴薯 200 g L 1 葡萄糖 20 g L 1 LB 固體培養(yǎng)基 胰蛋白胨 10 g L 1 酵母提取物 5 g L 1 NaCl 10 g L 1 瓊脂 18 g L 1 LB 液體培養(yǎng)基 胰蛋白胨 10 g L 1 酵母提取物 5 g L 1 NaCl 10 g L 1 脫脂牛奶培養(yǎng)基 蛋白胨 10 g L 1 牛肉粉 3 g L 1 NaCl 5 g L 1 pH 7 0 脫脂 牛奶 100 mL L 1 對照藥劑為 50 異菌脲 陜西皇牌作物科技有限公司 可濕性粉劑 1 2 拮抗細(xì)菌的分離 純化與篩選 從山東壽光 北京大興 天津武清等多年連續(xù)種植番茄的大棚采集根際土樣共 14 份 使用無 菌樣品袋帶回實(shí)驗(yàn)室及時(shí)保存處理 拮抗細(xì)菌的分離步驟 稱取 10 g 土樣 放入盛有 90 mL 無菌水的錐形瓶中 置于 28 180 r min 1 的搖床上振蕩 30 min 使之充分懸浮 80 水浴處理 15 min 后梯度稀釋至 10 3 10 4 分別 吸取 100 L 滴加到 LB 固體平板的中央 用涂布器涂勻后正向靜置 2 h 使溶液充分滲進(jìn)平板中 每個(gè)梯度重復(fù) 3 次 平板倒置于 28 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2 d 挑取形態(tài)不同的細(xì)菌菌落通過平板劃 線法純化后進(jìn)行編號保存 采用平板對峙法 郭芳芳 等 2014 將直徑 5 mm 的茄匍柄霉菌菌餅接種于 PDA 平板 直徑 90 mm 中央 培養(yǎng) 24 h 后 在距離培養(yǎng)皿中心 30 mm 處以十字交叉法均勻打 4 個(gè)孔 注入拮抗細(xì) 菌發(fā)酵液 以接種無菌 LB 培養(yǎng)基作為對照 每個(gè)處理 3 次重復(fù) 將培養(yǎng)皿倒置于 28 培養(yǎng)箱內(nèi) 李新宇 李 磊 陳利達(dá) 石延霞 柴阿麗 謝學(xué)文 李寶聚 番茄匍柄霉葉斑病拮抗細(xì)菌的篩選與鑒定 園藝學(xué)報(bào) 2020 47 4 741 748 743 培養(yǎng) 當(dāng)對照菌落菌絲即將布滿整個(gè)平板時(shí) 測量菌落的直徑 抑制率 對照菌落直徑 處理菌落直徑 對照菌落直徑 菌餅直徑 100 在 LB 平板上活化菌株 ZF161 后 挑取單菌落接種于裝有 200 mL 液體培養(yǎng)基的 250 mL 三角瓶 中 28 180 r min 1 振蕩培養(yǎng) 36 h 此時(shí)菌懸液含菌量約為 10 8 cfu mL 1 匍柄霉菌在 PDA 培 養(yǎng)基上培養(yǎng) 3 d 在菌落邊緣用打孔器取 6 mm 的菌餅 接種于裝有 200 mL PD 培養(yǎng)基的 250 mL 三 角瓶中 28 140 r min 1 培養(yǎng)振蕩 7 d 后 將菌體打碎備用 參考楊利敏 2015 方法 選取大小 形狀相近的番茄葉片 用 75 乙醇表面消毒 再用無菌 水沖洗 3 次 晾干后采用噴霧法接芽孢發(fā)酵液 10 8 cfu mL 1 以及對照藥劑 3 g L 1 然后接匍 柄霉菌懸液 28 相對濕度 95 100 黑暗條件下保濕培養(yǎng)直至對照充分發(fā)病 按 農(nóng)藥田間 藥效實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所生測室 1993 調(diào)查葉片發(fā)病情況 設(shè) 3 次重復(fù) 每個(gè)重復(fù) 5 個(gè)葉片 番茄匍柄霉葉斑病病情按病斑面積占葉片面積比例分級 0 級 0 1 級 1 5 3 級 6 10 5 級 11 25 7 級 26 50 9 級 50 以上 病情指數(shù) 各級值 各級病葉數(shù) 調(diào)查總?cè)~數(shù) 最高級值 100 防治效果 對照組病情指數(shù) 處理組病情指數(shù) 對照組病情指數(shù) 100 1 3 拮抗細(xì)菌 ZF161 的鑒定 參考伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊 Buchanan Gibbons 1994 和 常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊 東秀珠 和蔡妙英 2001 進(jìn)行 ZF161 的形態(tài)特征及生理生化特性分析 使用 BIOLOG GENIII 試劑盒 按照試劑盒說明書操作 測定菌株 ZF161 唯一碳源利用 采用 DNA 提取試劑盒 天根生化科技 北京 有限公司 提取菌株 ZF161 的總 DNA 利用細(xì)菌 16S rDNA 通用引物 27F 1492R Weisburg et al 1990 和針對目標(biāo)基因設(shè)計(jì)引物 gyrB F R atpD F R 和 rpoA F R 表 1 對菌株 ZF161 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增 反應(yīng)體系 50 L 2 Rapid Taq Master Mix 南 京諾唯贊生物科技有限公司 25 L 上游引物和下游引物各 0 5 L 10 mol L 1 DNA 模板 0 2 L 60 ng mL 1 ddH 2 O 補(bǔ)足剩余體積 PCR 擴(kuò)增程序均為 95 10 min 95 30 s 58 30 s 72 45 s 34 個(gè)循環(huán) 72 8 min PCR 產(chǎn)物直接測序 北京博邁德基因技術(shù)有限公司 參 與比較分析的序列均來源于 GenBank 用 MEGA 6 0 Sequence Matrix Seaview4 按順序連接 比 對不同菌株的 16S rDNA gyrB atpD rpoA 基因 采用最大似然法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹 分析其親緣 關(guān)系 表 1 本研究中所用引物 Table 1 Primers used in this research 引物與序列 5 3 Sequence 目標(biāo)基因 Target gene PCR 產(chǎn)物大小 bp PCR product 27F AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 1492R ACGGCTACCTTGTTACGACTT 16S rDNA 1 466 gyrB F GCAGCAAAACAGTTATGATGAA gyrB R AGTCTTCTCCGATACCTGTGC gyrB 1 448 rpoA F TCAGCGACGATGCCAAA rpoA R TCTTTGCGAAGTCCGAGTC rpoA 898 atpD F ACAAGTTTGTCTTCCTCGCC atpD R TGAGGTCGCTCTTCATTTAGG atpD 1 053 1 4 菌株 ZF161 對番茄匍柄霉葉斑病的盆栽防治 盆栽番茄長至 5 片真葉時(shí)噴施菌株 ZF161 發(fā)酵液 以噴霧 50 異菌脲可濕性粉劑和清水為對照 Li Xinyu Li Lei Chen Lida Shi Yanxia Chai Ali Xie Xuewen Li Baoju Screening and identification of antagonistic bacteria against gray leaf spot of tomato caused by Stemphylium solani 744 Acta Horticulturae Sinica 2020 47 4 741 748 待葉片表面晾干后采用葉面噴霧的方式接種匍柄霉菌菌懸液 然后放入相對濕度 95 溫度 26 28 玻璃棚中保濕培養(yǎng) 48 h 之后轉(zhuǎn)入正常育苗溫室培養(yǎng) 每處理 20 株番茄 3 次重復(fù) 接種后 10 d 清水對照充分發(fā)病時(shí)調(diào)查防治效果 1 5 菌株 ZF161 抗真菌譜的測定 采用平板對峙法測定菌株 ZF161 對 7 種病原真菌的抑菌活性 方法參照 1 2 2 結(jié)果與分析 2 1 拮抗細(xì)菌的分離 純化和篩選 從采集土樣中共分離出細(xì)菌 82 株 通過平板對峙培養(yǎng) 獲得 7 株對茄匍柄霉菌平板抑菌率大 于 50 的菌株 其中菌株 ZF161 的抑菌效果最好 抑菌率為 75 64 表 2 表 2 篩選獲得的 7 株拮抗細(xì)菌對茄匍柄霉菌的抑制效果 Table 2 Inhibition activity of acquired antagonistic bacterial strain against Stemphylium solani 處理 Treatment 菌落直徑 mm Colony diameter 抑菌率 Inhibition rate IVF19 23 0 0 4 de 70 51 0 93 ab IVF43 31 7 0 5 b 59 40 1 60 d A 5 31 0 2 3 b 60 26 5 67 d ZF161 19 0 1 1 e 75 64 2 60 a 18051709 2 1 28 7 1 7 bc 43 16 4 27 cd 18051709 2 2 24 7 0 5 cd 68 38 1 25 bc 18051709 2 3 27 7 0 9 bcd 64 53 2 73 bcd 空白培養(yǎng)基 Control 78 0 0 4 a 注 同列數(shù)字后小寫英文字母不同表示 Duncan s 新復(fù)極差法分析差異顯著 P 0 05 下同 Note Different letters in the same column indicate significant difference P 0 05 The same below 應(yīng)用離體葉片法檢測發(fā)現(xiàn) 拮抗菌株 ZF161 對番茄匍柄霉葉斑病的防效達(dá)到 69 83 對照藥劑 50 異菌脲可濕性粉劑的防效為 72 34 二者無顯著差異 表 3 表 3 拮抗菌株 ZF161 對番茄匍柄霉葉斑病的預(yù)防結(jié)果 Table 3 Control efficacy of strain ZF161 to gray leaf spot 處理 Treatment 病情指數(shù) Disease index 防效 Control efficacy IVF19 33 33 cd 64 79 4 96 abc IVF43 43 70 bcd 53 41 3 68 abc A 5 42 22 bcd 55 03 12 11 abc ZF161 28 15 cd 69 83 5 96 ab 18051709 2 1 48 15 bc 48 67 3 85 bc 18051709 2 2 35 56 bcd 61 55 14 75 abc 18051709 2 3 54 81 b 42 22 16 99 c 50 異菌脲可濕性粉劑 Iprodione 25 93 d 72 34 3 02 a 清水對照 Control 94 07 a 2 2 菌株 ZF161 的鑒定結(jié)果 ZF161 菌體為桿狀 革蘭氏陽性 在 LB 固體培養(yǎng)基上菌落呈乳白色 菌落周邊不規(guī)則 表面 有褶皺 李新宇 李 磊 陳利達(dá) 石延霞 柴阿麗 謝學(xué)文 李寶聚 番茄匍柄霉葉斑病拮抗細(xì)菌的篩選與鑒定 園藝學(xué)報(bào) 2020 47 4 741 748 745 生理生化反應(yīng)特征表明 菌株 ZF161 的耐鹽性為 4 在含 10 鹽培養(yǎng)基上不能生長 厭氧生 長 接觸酶 硝酸還原反應(yīng) 水解淀粉 V P 反應(yīng) 水解酪蛋白 H 2 S 產(chǎn)生 氧化酶反應(yīng)等均為陽 性 與枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis 168 的生理生化反應(yīng)特點(diǎn)相同 Biolog 測定結(jié)果表明 菌株 ZF161 能利用蔗糖 乳糖 D 果糖 D 木糖 D 葡萄糖 D 甘露醇 D 葡糖二酸等 19 種碳源 不能利用 D 海藻糖 D 纖維二糖 D 松二糖 水蘇糖 葡聚糖等 61 種碳源 初步鑒定菌株 ZF161 屬于芽孢桿菌屬細(xì)菌 構(gòu)建 ZF161 的多基因系統(tǒng)發(fā)育樹 發(fā)現(xiàn)該菌株與枯草芽孢桿菌模式菌株聚在一簇 因此確定菌 株 ZF161 為枯草芽孢桿菌 圖 1 圖 1 基于多基因序列構(gòu)建的菌株 ZF161 系統(tǒng)發(fā)育樹 括號內(nèi)顯示了核苷酸序列數(shù)據(jù)的 GenBank 登錄號 T 代表模式菌株 Fig 1 Phylogenetic tree based on the multigene sequences of strain ZF161 The GenBank accession numbers for nucleotide sequence data are shown in the brackets T means type strain 2 3 菌株 ZF161 對番茄匍柄霉葉斑病的防治效果 接種 5 d 后 清水對照開始發(fā)病 ZF161 處理無病斑出現(xiàn) 10 d 后對照病情指數(shù)達(dá)到 45 44 番 茄幼苗發(fā)病 葉片干枯 部分植株整株干枯 ZF161 處理輕微發(fā)病 拮抗菌株 ZF161 對番茄匍柄霉 葉斑病的防效為 63 27 對照藥劑 50 異菌脲可濕性粉劑 3 g L 1 的防效為 83 47 表 4 表 4 枯草芽孢桿菌 ZF161 盆栽預(yù)防結(jié)果 Table 4 Control efficacy of strain ZF161 to gray leaf spot 處理 Treatment 病情指數(shù) Disease index 防治效果 Control efficacy ZF161 16 93 b 63 27 3 32 b 50 異菌脲可濕性粉劑 Iprodione 7 31 c 83 47 5 49 a 清水對照 Control 45 44 a Li Xinyu Li Lei Chen Lida Shi Yanxia Chai Ali Xie Xuewen Li Baoju Screening and identification of antagonistic bacteria against gray leaf spot of tomato caused by Stemphylium solani 746 Acta Horticulturae Sinica 2020 47 4 741 748 2 4 菌株 ZF161 抗真菌譜的測定 抑菌譜測定結(jié)果表明 菌株 ZF161 的抑菌譜較廣 對 7 種引起蔬菜葉部 根部病害的病原真菌 均具有較好的抑制效果 其中對黃瓜棒孢葉斑病 多主棒孢菌 Corynespora cassiicola 的抑制效果 最高 達(dá)到了 62 00 對白菜莖基腐病 立枯絲核菌 Rhizoctonia solani 的抑制效果最低 為 47 24 對其他病原菌的抑制率在 50 60 之間 表 5 表 5 菌株 ZF161 對植物病原真菌的抑制作用 Table 5 Inhibitory effect of strain ZF161 on plant pathogenic fungi 病原菌 Pathogenic fungi 菌落直徑 mm Colony diameter 抑菌率 Inhibition rate 對照 Control 處理 Treatment 葫蘆科刺盤孢菌 Colletotrichum orbiculare 79 7 0 9 39 8 0 2 50 00 0 26 d 茄病鐮孢菌 Fusarium solani 80 2 0 5 37 7 0 5 53 01 0 76 c 立枯絲核菌 Rhizoctonia solani 81 3 0 2 43 8 1 0 47 24 1 26 e 灰葡萄孢菌 Botrytis cinerea 79 8 0 9 35 8 0 2 55 11 0 24 b 茄鏈格孢菌 Alternaria solani 79 7 0 5 37 8 0 2 52 51 0 50 c 辣椒疫霉菌 Phytophthora capsici 80 7 0 9 40 0 0 5 50 41 0 92 e 多主棒孢菌 Corynespora cassiicola 79 8 0 4 30 3 0 2 62 00 0 27 a 3 討論 植物體內(nèi) 植物根際土壤 水樣內(nèi)存在大量對病原菌具有拮抗作用的有益微生物 Kloepper 1992 芽孢桿菌是公認(rèn)的抗逆性強(qiáng) 抗菌譜廣泛的有益微生物 其中枯草芽孢桿菌是近些年生防菌 研究最多的 應(yīng)用于各種作物的病害防治 汪雪靜等 2011 從土壤中分離得到兩株枯草芽孢桿菌 對草莓根腐病菌拮抗活性很高 其抑菌圈直徑均在 15 mm 以上 衛(wèi)甜等 2016 從不同生境篩選得 到 3 株枯草芽孢桿菌對黃瓜綠斑駁花葉病毒的防效在 40 以上 也有不少關(guān)于番茄病害的研究 胡 朋等 2008 從根際土壤中篩選得到 1 株對番茄灰霉病發(fā)病率的抑制率達(dá) 83 的枯草芽孢桿菌 張 斌等 2015 從番茄根際土壤中分離得到 1 株枯草芽孢桿菌 其對番茄枯萎病和青枯病的防效均在 60 以上 16S rDNA 序列分析已廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的鑒定和系統(tǒng)分類研究中 解淀粉芽孢桿菌與枯草芽孢 桿菌親緣關(guān)系很近 序列間相似度也很高 16S rDNA 基因序列分析并不能精準(zhǔn)鑒定 Christensen et al 1998 謝學(xué)文等 2016 通過 16S rDNA 與 gyrB 序列分析 對 1 株甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌進(jìn)行 準(zhǔn)確鑒定 趙昱榕等 2019 通過 16S rDNA rpoD pgk 及 gyrB 聯(lián)合序列分析 對 1 株貝萊斯芽 孢桿菌進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定 本研究中獲得 1 株對番茄匍柄霉葉斑病具有較高防治效果的芽孢桿菌 ZF161 通過 16S rDNA gyrB rpoA 以及 atpD 四基因聯(lián)合建樹 準(zhǔn)確地將其鑒定為枯草芽孢桿菌 番茄匍柄霉葉斑病的防治藥劑較少 目前僅有 45 乙霉 苯菌靈登記用于該病害防治 李長松 等 2012 發(fā)現(xiàn)吡唑醚菌酯與喹啉銅復(fù)配對番茄匍柄霉葉斑病具有較高的防效 化學(xué)防治藥劑種類 單一 長時(shí)間連續(xù)使用容易導(dǎo)致抗藥性提高 本研究中通過盆栽試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌 ZF161 對番 茄匍柄霉葉斑病的防治效果達(dá)到 63 27 雖然低于化學(xué)藥劑 但是利用有益微生物防治植物病害可 以減少化學(xué)農(nóng)藥的使用量 不僅降低了病原菌抗藥性風(fēng)險(xiǎn) 也避免了作物和土壤中農(nóng)藥殘留量的增 加對人類健康的威脅 此外 生防菌較化學(xué)藥劑防治譜更廣 林福呈和李德葆 2003 劉雪 等 2006 沙月霞 等 2019 本研究中 ZF161 對匍柄霉菌之外的 7 種病原真菌也表現(xiàn)出較好的拮抗效果 一 次施用可以兼防多種病害 因此 枯草芽孢桿菌 ZF161 可以應(yīng)用于番茄匍柄霉葉斑病的防治 在蔬 李新宇 李 磊 陳利達(dá) 石延霞 柴阿麗 謝學(xué)文 李寶聚 番茄匍柄霉葉斑病拮抗細(xì)菌的篩選與鑒定 園藝學(xué)報(bào) 2020 47 4 741 748 747 菜病害預(yù)防領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景 其作用機(jī)理及發(fā)酵工藝還有待深入研究 References Buchanan R E Gibbons N E 1994 Bergeys manual of systematic bacteriology 9th ed Baltimore Williams and Wilkins Company Chen Ya fei Gao Xiao ning Chen Yong xuan Qin Hu qiang Huang Li li Han Qing mei 2014 Inhibitory efficacy of endophytic Bacillus subtilis EDR4 against Sclerotinia sclerotiorum on rapeseed Biol Control 78 67 76 Christensen H Nordentoft S Olsen J E 1998 Phylogenetic relationships of Salmonella based on rRNA sequence International 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jie Chai A li Gao Wei 2009 Occurrence and control of tomato gray leaf spot China vegetables 17 24 26 61 in Chinese 李寶聚 周艷芳 趙彥杰 柴阿麗 高 葦 2009 李寶聚博士診病手記 十六 番茄灰葉斑病的發(fā)生與防治 中國蔬菜 17 24 26 61 Li Chang song Xu Zuo ting Wang Shao min Qi Jun shan Zhang Bo Zhao Xin lan Chen Bai shun Li Lin 2012 Antibacterial activity and control of pyraclostrobin against Gray leaf spot of tomato Shandong Agriculture Sciences 44 5 103 105 119 in Chinese 李長松 徐作珽 王紹敏 齊軍山 張 博 趙新蘭 陳百順 李 林 2012 吡唑醚菌酯等對番茄灰葉斑病菌的抑菌活性與防治試驗(yàn) 山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 44 5 103 105 119 Li Xu qing Zheng Ji rong L Xiao han Wang Hong 2015 Research progress on tomato grey leaf spot in China China Plant Protection 35 3 24 27 in Chinese 李戌清 鄭積榮 呂曉菡 王 宏 2015 我國番茄灰葉斑病研究進(jìn)展 中國植保導(dǎo)刊 35 3 24 27 Lin Fu cheng Li De bao 2003 Cell lytic of Bacillus subtilis on plant fungal pathogens Acta Phytophylacica Sinica 33 2 174 177 in Chinese 林福呈 李德葆 2003 枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis S9 對植物病原真菌的溶菌作用 植物病理學(xué)報(bào) 33 2 174 177 Liu Xue Mu Chang qing Jiang Xi 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Agricultura Sinica 52 11 1908 1917 in Chinese Li Xinyu Li Lei Chen Lida Shi Yanxia Chai Ali Xie Xuewen Li Baoju Screening and identification of antagonistic bacteria against gray leaf spot of tomato caused by Stemphylium solani 748 Acta Horticulturae Sinica 2020 47 4 741 748 沙月霞 隋書婷 曾慶超 沈瑞清 2019 貝萊斯芽孢桿菌 E69 預(yù)防稻瘟病等多種真菌病害的潛力 中國農(nóng)業(yè)科學(xué) 52 11 1908 1917 Shen Shunshan Zhang Tao Wang Juan Liu Dongping Zhang Shanshan Sun Zhiqiang Piao Fengzhi 2019 Antifungal activity of Paenibacillus polymyxa HK18 8 against pepper anthracnose and its colonization ability Acta Horticulturae Sinica 46 3 499 507 in Chinese 申順善 張 濤 王 娟 劉東平 張珊珊 孫治強(qiáng) 樸鳳植 2019 多粘類芽孢桿菌 HK18 8 對辣椒炭疽病菌的抑制作用及其定殖能 力 園藝學(xué)報(bào) 46