黃瓜花葉病毒在甜瓜種子中的帶毒檢測及脫毒方法研究.pdf
<p>西 北 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報，（）： 網(wǎng)絡(luò)出版日期 ： ：網(wǎng)絡(luò)出版地址 ：黃瓜花葉病毒在甜瓜種子中的帶毒檢測及脫毒方法研究收稿日期 ： 修回日期 ：基金項(xiàng)目 ：農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金 （）；國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃（）。第一作者 ：韓劍 ，男 ，副教授 ，研究方向?yàn)檗r(nóng)業(yè)微生物生物技術(shù) 。：通信作者 ：羅明 ，女 ，碩士生導(dǎo)師 ，教授 ，研究方向?yàn)橹参锊《緳z測及防治 。：韓劍，肖力，羅明，潘亞南，寧軒（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，烏魯木齊；新疆自治區(qū)高校農(nóng)林有害生物監(jiān)測與安全防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊）摘要為明確甜瓜種子攜帶黃瓜花葉病毒 （ ，）狀況 ，以個品種甜瓜種子為材料 ，采用實(shí)時熒光定量 技術(shù)檢測甜瓜種子 、胚芽中 帶毒率和帶毒量 。結(jié)果表明 ，供試種子 、種胚帶毒率分別為 和 ，帶毒量分別為××拷貝 粒和 ××拷貝 粒 ；種苗傳毒率為 ，不同品種之間存在差異 。種子的帶毒率高而傳毒率低 ，表明主要存在于甜瓜種子的種皮上 。試驗(yàn)比較了 種處理方法對帶 甜瓜種子的脫毒效果 。干熱 （）、濕熱 （沸水 ）、溫湯 （）、干熱 濕熱 （干熱 沸水 ）、干熱 （干熱 ）處理甜瓜種子 ，均能降低種子帶毒量 。干熱 、濕熱 、干熱濕熱和干熱 處理后種子脫毒率可達(dá) 以上 ，顯著優(yōu)于溫湯處理 （），并能促進(jìn)種子發(fā)芽 。干熱 處理甜瓜種子后的種苗中未檢出病毒 ，對 的脫除效果最佳 。關(guān)鍵詞甜瓜 ；黃瓜花葉病毒 ； ；傳毒率 ；脫毒中圖分類號 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 文章編號（）中國甜瓜種植面積和總產(chǎn)量居世界首位 。新疆是甜瓜 （厚皮甜瓜 ）的優(yōu)勢產(chǎn)區(qū) ，其味甜色美 ，品質(zhì)獨(dú)特 ，素有 “瓜中之王 ”的美稱 ，是享譽(yù)國內(nèi)外的名優(yōu)特產(chǎn) 。病毒病是當(dāng)前新疆甜瓜生產(chǎn)中的首要病害 ，發(fā)生普遍 、流行嚴(yán)重 ，造成甜瓜含糖量降低 ，品質(zhì)低劣 ，經(jīng)濟(jì)效益下降 ，很大程度上制約了甜瓜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展 。國內(nèi)外報道危害瓜類作物的病毒已達(dá)種之多，其中在中國危害嚴(yán)重的主要有小西葫蘆黃 花 葉 病 毒 （ ，）、西瓜花葉病毒 （ ，）、甜瓜壞死斑點(diǎn)病毒 （ ，）、番 木 瓜 環(huán) 斑 病 毒（ ，）、南瓜花葉病毒（ ，）等。年潘亞南等對新疆吐魯番 、鄯善 、昌吉哈密瓜產(chǎn)區(qū)病毒病 進(jìn) 行 檢 測 ，檢 出、和，其 中是 優(yōu) 勢 毒 原 ，檢 出 率 最 高。李繼洋等運(yùn)用多重技術(shù)檢測新疆南 、北疆個地區(qū) （市 ）哈密瓜主栽區(qū)的病毒病發(fā)生及分布 ，發(fā)現(xiàn)、 種病毒發(fā)生普遍 。古勤生發(fā)現(xiàn) ，現(xiàn)在中國北方地區(qū)葫蘆科作物病毒病樣本中的檢出率僅次于和，是危害葫蘆科作物的主要病毒之一 。黃瓜花葉病毒 （）寄主廣泛 ，能侵染科 、屬 、 種以上的單 、雙子葉植物 ，是目前世界范圍內(nèi)發(fā)生最普遍 、分布最廣 、危害最嚴(yán)重的植物病毒之一 。是典型的種傳病毒。攜帶病毒的種子不僅形成帶毒幼苗作為病毒病害發(fā)生的初侵染源 ，再經(jīng)昆蟲媒介的二次傳播形成發(fā)病中心 ，引發(fā)病毒病大面積爆發(fā) 。新疆是全國最大的西瓜和甜瓜制種基地 ，承擔(dān)著多家大型跨國種業(yè)公司制種任務(wù) ，帶毒種子隨種子調(diào)運(yùn)和種質(zhì)資源交流遠(yuǎn)距離傳播擴(kuò)散 ，對病毒病的發(fā)生 、傳播影響極大 。因此 ，加強(qiáng)種子檢測 、采取有效的種子脫毒處理措施 ，從源頭杜絕病原是控制種傳病毒病發(fā)生蔓延和安全防控的重要舉措 ，具有事半功倍的成效 。采用干熱處理 、溫湯浸種 、輻射 、化學(xué)藥劑等種子處理技術(shù)具有鈍化 、脫除種子攜帶病毒的作用 ，是一種減輕病毒病害的經(jīng)濟(jì)有效的措施 。日本和韓國采用種子脫毒處理技術(shù)在有效控制瓜類檢疫性種傳病毒黃瓜綠斑駁花葉病毒（ ，）方面取得了良好的效果 。張竹青試驗(yàn)比較了種辣椒種子處理方式對、煙草花葉病毒 （ ，）的 防 治 效 果 。任琛榮等應(yīng)用多重技術(shù)檢測籽用西葫蘆種子的、及帶毒情況及熱處理的脫毒效果 ，針對不同病毒 、不同種子采取的脫毒方法不同 ，脫毒效果各異 。對新疆甜瓜種子的帶毒及有效脫除病毒的研究尚未見報道 。本研究采用實(shí)時熒光定量技術(shù)檢測甜瓜種子中的帶毒率 ，比較不同種子處理方法對種子攜帶的脫除效果 ，明確脫除種子攜帶的有效措施 ，為甜瓜病毒病害的安全 、高效防控提供科學(xué)基礎(chǔ)和技術(shù)支持 。 材料與方法 材 料 供試甜瓜種子春瀟號 優(yōu)密號 欣豐密 樓蘭號 春秋號 均采自新疆維吾爾自治區(qū)葡萄瓜果研究所甜瓜試驗(yàn)地 ，春秋號 采自五家渠團(tuán)病毒病發(fā)生病田 。將采集的不同品種甜瓜內(nèi)的種子剖出 ，自然陰干后 ，保存于冰箱中 ，冷藏期個月 。 試劑總提取試劑 、第鏈合成試劑盒 、普通瓊脂糖凝膠回收試劑盒 （ ）、質(zhì)粒小提試劑盒 （ ）、氨芐青霉素 、等購于北京天根生化科技有限公司 。連接試劑盒與感受態(tài)細(xì)胞購于北京全式金生物科技有限公司 。限制性內(nèi)切酶為公司產(chǎn)品 。 購于公司 。 方 法 的 定量檢測體系利用已建立和優(yōu)化的 檢測體系 。正向引物序列 （）：，反向引物序列 （），目標(biāo)片段。反應(yīng)體系 （）： （×）；引物各（）；模板；補(bǔ)足至。反 應(yīng) 條 件 為 ：預(yù) 熱；預(yù)變性；變性，退火，延伸，共個循環(huán) 。 定量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立以構(gòu)建的基因陽性克隆質(zhì)粒 （質(zhì)粒質(zhì)量濃度測定為，相應(yīng)的拷貝數(shù)為×拷貝 ）的×梯度稀釋液 （）為模板進(jìn)行 實(shí)時熒光定量反應(yīng)擴(kuò)增 ，觀察其溶解曲線 。根據(jù)質(zhì)?？截悢?shù)的對數(shù)和循環(huán)數(shù) （值 ）之間的動力學(xué)曲線 ，得到定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 。對建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線做重復(fù)性檢測 。以基因陽性克隆質(zhì)粒的稀釋液為模板 ，進(jìn)行次重復(fù)性試驗(yàn)擴(kuò)增 ，根據(jù)值的變異系數(shù)來檢驗(yàn)所建立體系的重復(fù)性和穩(wěn)定性 。 甜瓜種子 、胚芽和種苗的帶毒檢測甜瓜種子 、胚芽和種苗總的提取和的合成 ：種子 ，各品種均取粒種子 ，無菌水浸泡過夜后帶種皮提取總。胚芽 ，取待測甜瓜品種各粒浸泡后 ，置于滅菌培養(yǎng)皿中 （皿底鋪有濾紙保濕 ，催芽 ，待胚芽長出時 ，取胚芽提取總。種苗 ，將甜瓜種子催芽后播種于裝有高溫滅菌土壤的花盆中 ，培養(yǎng)于防蟲溫室中 。幼苗生長至片真葉時 ，取葉片提取總。每個品種測定株幼苗 。采用試劑盒提取總。同時提取已檢測感染和健康的甜瓜葉片總分別作為陽性和陰性對照 。利用 第鏈合成試劑盒對提取的總進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得。帶毒率和帶毒量檢測 ：以提取的甜瓜種子反轉(zhuǎn)錄為模板 ，利用所建立的 實(shí)時熒光定量檢測體系對甜瓜種子帶毒情況進(jìn)行檢測 ，同時設(shè)置感病和健康甜瓜葉片樣品分別為陽性和陰性對照 ，以超純?nèi)ルx子水為空白對照 。統(tǒng)計帶毒率 ：帶毒率（檢出病毒種子數(shù) 抽檢種子總數(shù) ）×將檢出陽性樣品的均值代入標(biāo)準(zhǔn)方程 ，計算種子帶毒量 。 甜瓜種子脫毒處理對檢測出攜帶··期 韓劍等 ：黃瓜花葉病毒在甜瓜種子中的帶毒檢測及脫毒方法研究的種子 ，分別通過以下種方法進(jìn)行處理 （各處理粒種子 ），重復(fù)次 。（）干熱處理 ：在條件下 ，熱風(fēng)處理甜瓜種子；（）濕熱處理 ：將待脫毒處理的甜瓜種子放在沸水 （）中 （沸水體積大約為種子體積的倍 ），快速振蕩使其在沸水中冷卻 ；（）溫湯處理 ：用的溫水浸種；（）干熱濕熱處理 ：先將甜瓜種子在條件下熱風(fēng)處理，之后將種子浸于倍于種子體積的沸水中 ，快速振蕩使其冷卻 ；（）干熱處理 ：在條件下 ，熱風(fēng)處理種子，之后用的溶液浸種。 種子及種苗脫毒效果檢測種子脫毒檢測 ：不同處理種子總的提取及的合成方法同 “”。采用 實(shí)時熒光定量檢測體系對處理種子進(jìn)行帶毒量檢測 ，計算脫毒率 。以未經(jīng)熱處理及室溫滅菌水浸泡的種子為對照 。脫毒率（處理后的帶毒量 處理前種子帶毒量 ）×。種子幼苗脫毒檢測 ：對干熱處理和干熱處理后的種子幼苗進(jìn)行脫毒效果檢測 。將干熱處理和干熱處理后的種子先進(jìn)行催芽 ，待出芽后分別播種于塑料育苗缽中 ，育苗基質(zhì)為滅菌土 ，人工氣候箱中常規(guī)培養(yǎng) 。幼苗生長至葉心時檢測葉片帶毒量 ，方法同 “”。 脫毒處理種子發(fā)芽試驗(yàn)處理后種子先用流水洗凈 ，然后冷水浸泡，將種子取出放入培養(yǎng)皿中發(fā)芽 ，培養(yǎng)皿墊一層濾紙 ，加適量滅菌水 ，加蓋放在恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)芽 ，發(fā) 芽 溫 度 為，第天統(tǒng)計發(fā)芽數(shù) ，計算發(fā)芽勢 ，第天統(tǒng)計發(fā)芽數(shù) ，計算發(fā)芽率 ，發(fā)芽的標(biāo)準(zhǔn)為種子露白 。不作處理的種子用冷水浸泡作為對照 。 數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 和 軟件分析 ，比較各處理間的差異顯著性 。 結(jié)果與分析 定量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立以陽性重組質(zhì)粒不同質(zhì)量濃度所對應(yīng)的拷貝數(shù)的對數(shù)值為橫坐標(biāo) ，循環(huán)數(shù) （值 ）為縱坐標(biāo)構(gòu)建 實(shí)時熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線 （圖）。由圖可以看出 ，陽性質(zhì)粒模板不同質(zhì)量濃度對應(yīng)的拷貝數(shù)的值與値之間具有良好的線性關(guān)系 ，得到標(biāo)準(zhǔn)曲 線 方 程 （ ），可用于對供試樣品病毒含量的定量分析 。圖 定量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線 表 實(shí)時熒光定量 對樣品的重復(fù)性檢測 病毒同一模板 次重復(fù)的 值 珚± ± 對建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線做重復(fù)性檢測 （表），對基因陽性克隆質(zhì)粒同一稀釋液模板的次擴(kuò)增值誤差不到個循環(huán) ，值變異系數(shù)（）為。結(jié) 果 表 明 ，本 研 究 所 建 立 的實(shí)時熒光定量檢測體系的重復(fù)性較好 ，能夠保證不同樣品間檢測結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性 。 對甜瓜種子 、胚芽和種苗中帶毒檢測對供試甜瓜種子 、胚芽和種苗中帶毒狀況進(jìn)行定量檢測 ，結(jié)果見表。不同品種的甜瓜種子 、胚芽和種苗中帶毒率 、帶毒量差異較大 。種子帶毒率為，帶毒量為××拷貝 粒 。其中 優(yōu)密號 樓 蘭號 和 欣 豐 密 帶 毒 率 均 高 達(dá)，春瀟號 帶毒率相對較低 ，但帶毒量最·· 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報 卷高 。胚芽 帶 毒 率 為，帶 毒 量 為××拷貝 粒 。優(yōu)密號 胚芽帶毒率和帶毒量均為最高 ，欣豐密 則為最低 。種苗帶毒率，帶毒量×拷貝 粒 ，春秋號 種苗帶毒率和帶毒量均為最高 ，而 優(yōu)密號 種苗中未檢出陽性株 。檢測結(jié)果表明 ，在甜瓜種子 、胚芽和種苗中的帶毒率和帶毒量差異顯著 。種子的帶毒率 （均值）和帶毒量 （均值×拷貝 粒 ）均 為 最 高 ，其 次 是 胚 芽 ，帶 毒 率 （均 值）和帶毒量 （均值×拷貝 粒 ）顯著減少 ；種苗為最低 ，其帶毒率 （傳毒率 ）為（均值 ），帶毒量為×拷貝 粒 （均值 ）。表 實(shí)時熒光定量 對甜瓜種子 、胚芽和種苗中 病毒的檢測結(jié)果 ， 品種檢測樣品檢測數(shù) 陽性樣品數(shù) 值均值 帶毒量 （拷貝 粒 ） 帶 （傳 ）毒率 春瀟 號 種子 × 胚芽 × 種苗 × 樓蘭 號 種子 × 胚芽 × 種苗 × 優(yōu)密 號 種子 × 胚芽 × 種苗 欣豐密 種子 × 胚芽 × 種苗 × 春秋 號 種子 × 胚芽 × 種苗 × 總樣品數(shù) 種子 × 胚芽 × 種苗 × 注 ：同列不同字母表示經(jīng) 檢驗(yàn)在 水平差異顯著 ，下同 。： ， 對甜瓜種子中的脫除效果分別采用干熱 、濕熱 、溫湯 、干熱濕熱及干熱處理帶毒量較高的 春瀟號 甜瓜種子 。由表可見 ，各處理方法均能在一 定 程 度 上 降 低 種 子 帶 毒 量 ，脫 毒 率 為，不同處理的脫毒效果差異較大 。干 熱 、濕 熱 、干 熱濕 熱 和 干 熱處理甜瓜種子的效果較好 ，脫毒率均達(dá)到了以上 ，顯著優(yōu)于溫湯處理 （），干熱處理可達(dá)，脫毒效果最佳 。溫湯處理的脫毒效果最差 ，脫毒率僅為。干熱和干熱處理后的種子脫毒率均可達(dá)以上 （表）。進(jìn)一步檢測其種子處理后對種苗的脫毒率 ，結(jié)果見表，未經(jīng)處理的種苗帶毒率為，但干熱處理其幼苗傳毒率可達(dá)，帶毒量×鮮質(zhì)量 ，而種子經(jīng)干熱處理后 ，其幼苗中檢測不出病毒 ，可完全脫除病毒 。 脫毒處理對種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢的影響對脫毒處理后的甜瓜種子 ，測定其發(fā)芽率和發(fā)芽勢的變化 ，結(jié)果如圖所示 。除溫湯處理外 ，其他處理的種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢均高于對照組 ，對種子發(fā)芽有一定的促進(jìn)作用 。干熱濕熱和干熱處理能明顯提高種子的發(fā)芽··期 韓劍等 ：黃瓜花葉病毒在甜瓜種子中的帶毒檢測及脫毒方法研究率 ，對種子的發(fā)芽勢影響不大 。溫湯處理對種子發(fā)芽有一定的抑制作用 ，降低了種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢 。表 不同處理對甜瓜種子中 脫毒效果的影響 處理方法均值 種子帶毒量 （拷貝 粒 ） 種子脫毒率 干熱處理 ± ×± ±濕熱處理 ± ×± ±溫湯處理 ± ×± ±干熱 濕熱處理 ± ×± ±干熱 處理 ± ×± ±對照 ± ×± ±注 ：數(shù)據(jù)為 次重復(fù)試驗(yàn)的 “平均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差 ”。： “±”表 不同處理對種苗中 病毒脫除效果的影響 處理方法總樣品數(shù) 陽性樣品數(shù) 種苗帶 （傳 ）毒率 種苗帶毒量 （拷貝 鮮質(zhì)量 ） 種苗脫毒率 干熱 × 干熱 對照 圖上不同字母表示差異顯著 （） （）圖 不同處理種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢 討 論 甜瓜種子中的帶毒率和傳毒率本研究采用 技術(shù)對甜瓜種子的攜帶情況進(jìn)行定量檢測 ，結(jié)果表明 ，供試甜瓜種子均能檢出，其帶毒率 （均值）和帶毒量 （均值×拷貝 粒 ）均較高 ，不同品種有一定差異 。攜帶病毒的種子能否形成感染病毒的幼苗造成病毒在田間傳播的初侵染源受多種因素的影響 。研究認(rèn)為 ，種子傳播病毒不僅受病毒本身 、帶毒量 、帶毒部位的影響 ，還與作物品種 、感病時間 、環(huán)境條件以及病毒植物互作有關(guān)。等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn) ，侵染辣椒后檢測辣椒種子表皮帶毒率為，而生長試驗(yàn)檢測傳毒率平均為，種子表皮帶毒率比種子傳毒率高很多 ，主要以種皮帶毒為主 。·· 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報 卷研究表明 ，大多數(shù)病毒在種皮或胚乳帶毒通常不能通過種子傳毒 ，只有病毒在母株幼苗期和授粉前侵染進(jìn)入種胚 ，產(chǎn)生的帶毒種子才具有種傳特性，因此將種胚與種皮分開后進(jìn)行檢測 ，方能獲得準(zhǔn)確的種傳率 。本研究通過檢測甜瓜整粒種子 、發(fā)芽種子的胚芽和種苗的帶毒狀況 ，發(fā)現(xiàn)胚芽的帶毒率 （均值）、帶毒量 （×拷貝 粒 ）都遠(yuǎn)低于種子 ，表明主要存在于甜瓜種子的種皮上 。供試的甜瓜種苗傳毒率為（均值），其胚芽帶毒率 、帶毒量與種苗傳毒率具有一定的相關(guān)性 。但也有例外 ，如優(yōu) 密號 的 胚 芽 帶 毒 率 （）、帶 毒 量（×拷貝 粒 ）均為最高 ，但在種苗中卻并未檢出帶毒病株 。據(jù)報道 ，黑眼豇豆花葉病毒唯有當(dāng)其侵染寄主胚軸組織時 ，才能導(dǎo)致種子傳毒。同一病毒在植物的不同品種中的傳毒情況也不同 ，能通過野生黃瓜種子傳毒 ，卻不能通過栽培品種的黃瓜種子傳毒，可見病毒的侵染 、存在部位與種傳率的關(guān)系較為復(fù)雜 。在本研究中 ，主要是通過甜瓜種子的胚芽 、胚軸或其他部位傳毒 ，可否通過甜瓜種皮傳毒 ，優(yōu)密號 是否能種傳等均需經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)證實(shí) 。不少研究表明 ，大多數(shù)種傳病毒的傳毒率不高 。本研究測定的個品種的甜瓜種子對的平均傳毒率為，不同品種種子的傳毒率存在差異 。任琛榮等檢測籽用西葫蘆種子幼苗的傳毒率 ，個品種種子的的平均傳毒率為，綠豐號 （）最高 ，而 粒豐號 最低 （），遠(yuǎn)高于甜瓜種子的傳毒率 。這種差異可能是由于感染寄主時期不同從而引起種子感染病毒的程度和部位的不同 ，也可能與毒株的株系不同有關(guān) 。此外 ，有試驗(yàn)發(fā)現(xiàn) ，感染黃瓜種子收獲后個月檢測種傳率為，但種子保存?zhèn)€月后種傳率降低到。本研究中的甜瓜種子保存已近，可能也會影響其傳毒率改變 。研究結(jié)果均說明不同寄主對同種病毒的傳毒率不同 ，同一病毒的不同分離物對同種寄主傳毒率也會改變 。 甜瓜種子中的脫毒方法及效果評價種子處理方式主要包括溫湯浸種 、微波處理 、干熱空氣處理和化學(xué)藥劑處理等。等利用熱空氣處理 、干熱處理 、磷酸鈉處理帶有辣椒花葉病毒 （ ，）的辣椒種子 ，處理并貯存?zhèn)€月后 ，可有效滅活種子中的病毒 ，但嚴(yán)重影響種子萌發(fā) 。用熱空氣處理 （處理或處理）番茄種子 ，消除其攜帶的柏平縷瓜花葉病毒 （ ，），能基本滅活病毒 ，而在鈍化病毒的同時 ，也影響到了種子萌發(fā)。因此 ，在種子脫毒處理中 ，如何確定鈍化病毒的技術(shù)指標(biāo) ，做到既能最大限度地鈍化病毒 ，又不降低種子的發(fā)芽活力是一個關(guān)鍵問題 。目前 ，常用的種子脫毒效果的檢測方法主要有種植幼苗癥狀觀察 、再對顯癥幼苗結(jié)合檢測驗(yàn)證等 ，較費(fèi)時耗力 ，還容易受季節(jié) 、培養(yǎng)條件的限制 ，也還不能排除一些帶毒種子不形成顯癥幼苗的假陰性現(xiàn)象 ，存在穩(wěn)定性差 、只能定性檢測及靈敏度有限等缺點(diǎn) ，不能對處理后的種子中的病毒進(jìn)行精確定量 ，因此 ，無法精準(zhǔn)確定鈍化病毒的技術(shù)指標(biāo) 。本研究采用種方法對甜瓜種子進(jìn)行脫毒處理 ，利用 實(shí) 時 熒 光 定 量檢測技術(shù)對處理后的甜瓜種子中病毒進(jìn)行定量檢測 。結(jié)果表明 ，各種處理方法均能在一 定 程 度 上 降 低 種 子 帶 毒 量 ，脫 毒 率 為，不同處理的脫毒效果有較大差異 。干熱 、干熱濕熱和干熱處理都可達(dá)到以上的脫毒率 ，且都能明顯提高種子的發(fā)芽率 ，對發(fā)芽勢影響不大 。其中干熱處理效果最佳 。溫湯處理不僅脫毒效果較差 ，還對種子發(fā)芽有一定的抑制作用 。任琛榮通過相對定量法測定了不同溫度條件下濕熱和干熱處理對西葫蘆種子攜帶病毒的鈍化效果 ，試驗(yàn)結(jié)果表明濕熱處理、干熱處理?xiàng)l件下脫除效果最好 （），但種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢降低 。本試驗(yàn)脫毒效果最佳的干熱處理?xiàng)l件 （，）與任琛榮不同 ，其結(jié)果各異 ?？梢?，針對不同種的葫蘆科種子攜帶相同種類病毒的試驗(yàn)處理?xiàng)l件存在較大差異 ，其最佳脫除處理?xiàng)l件均需經(jīng)過嚴(yán)格的試驗(yàn)才能確定 。降低種傳病毒危害的關(guān)鍵是減低種苗的傳毒率 ，以減少病毒初侵染源 。本研究發(fā)現(xiàn) ，干熱處理后的甜瓜種子幼苗傳毒率可達(dá)，而干熱處理的種子幼苗中檢測不出病毒 ，表明該方法能更有效去除種胚內(nèi)的病毒 ，降低幼苗傳毒率 ，具有最佳的脫毒效果 。參考文獻(xiàn)：林石明 ，廖富榮 ，陳青 ，等 葫蘆科作物種傳病毒及其檢疫··期 韓劍等 ：黃瓜花葉病毒在甜瓜種子中的帶毒檢測及脫毒方法研究重要性 植物檢疫 ，（）： ， ， ， ，（）：古勤生 葫蘆科作物主要病毒病防治研究進(jìn)展 中國西瓜甜瓜 ，（）： ，（）：潘 亞 南 ，韓劍 ，吳 海 波 ，等 新疆哈密瓜病毒的 檢測和分子鑒定園藝學(xué)報，（）： ， ， ， ，（）：李繼洋 ，楊渡 ，韓盛 ，等 基于多重 技術(shù)檢測新疆甜瓜主栽 區(qū) 種病毒病及其分布 西 北 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報 ，（）： ， ， ， ，（）：彭斌 ，汪麗剛 ，古勤生 甜瓜種子中種傳病毒的 檢測 中國瓜菜 ，（）： ， ， ，（）：張竹青 辣椒病毒病研究 長沙 ：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) ， ： ，任琛榮 ，周登攀 ，都業(yè)娟 ，等 多重 檢測籽用西葫蘆種子帶毒及熱處理脫毒效果 植物保護(hù) ，（）： ， ， ， ，（）：李莉 ，王錫鋒 ，郝宏京 ，等 甘蔗花葉病毒在玉米種子中的分布及其與種子傳毒的關(guān)系 植物病理學(xué)報 ，（）： ， ， ， ，（）： ， ，（）：楊洪一 ，張娜娜 ，郭世輝 ，等 植物病毒種傳機(jī)制研究進(jìn)展黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，（）： ， ， ， ，（）： ， ，（）：裘維蕃 植物病毒學(xué) 北京 ：科學(xué)出版社 ， ： ， ， ： ，（）： ，（）： ， ，（）： ， ， ， ，（）：·· 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報 卷 </p>
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