日曬高溫覆膜對韭菜生長及根際土壤微生物多樣性的影響.pdf
<p>34(5)670-675 中國生物防治學報 Chinese Journal of Biological Control 2018 年 10 月 收稿日期: 2018-04-26 基金項目:國家重點研發(fā)計劃( 2017YFD0201205) ;河北省財政項目( F17C10008) 作者簡介:宋健,碩士,副研究員, E-mail: sj3250163.com; *通信作者,博士,副研究員, E-mail: lxdu2091163.com。 DOI: 10.16409/j.cnki.2095-039x.2018.05.004 日曬高溫覆膜對韭菜生長及根際土壤微生物多樣性的影響 宋 健,曹偉平,陳 丹,張 曉,杜立新*(河北省農林科學院植物保護研究所 /河北省農業(yè)有害生物綜合防治工程技術研究中心 /農業(yè)部華北北部作物有害生物綜合治理重點實驗室, 保定 071000) 摘要: 為明確日曬高溫覆膜對韭菜生長及根際土壤微生物群落的影響,本研究在河北省韭菜主產區(qū)基于日曬高溫覆膜措施對韭菜遲眼蕈蚊進行田間防治試驗,就覆膜前后土壤的理化性質進行了比較,并采用BiologECO 技術分析了覆膜對土壤微生物群落功能多樣性的影響。結果表明,日曬高溫覆膜技術對韭蛆各齡期幼蟲的防治效果達到 100%,覆膜 12 d 后韭菜株高、莖粗、葉寬、色澤、百株鮮重及根長等生長發(fā)育指標與未覆膜的對照相比均無顯著影響;覆膜后土壤中全磷量顯著增加;根據 BiologECO 培養(yǎng)第 144 h的 AWCD 值計算土壤微生物群落的 ShannonWiener 指數(shù)、 Simpson 指數(shù)、 McIntosh 指數(shù)和豐富度指數(shù)均無顯著變化??梢娙諘窀邷馗材虏诉t眼蕈蚊具有明顯的防治效果,對韭菜生長及韭菜根際土壤微生物多樣性無顯著影響。 關 鍵 詞: 日曬高溫覆膜;韭菜;韭菜遲眼蕈蚊;土壤微生物多樣性 中圖分類號: S476 文獻標識碼: A 文章編號: 1005-9261(2018)05-0670-06 Effect of Solarization High Temperature Film Mulching on Chinese Chive Growth and Soil Microbial Functional Diversity SONG Jian, CAO Weiping, CHEN Dan, ZHANG Xiao, DU Lixin*(Institute of Plant Protection, Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences/IPM Center of Hebei Province/Key Laboratory of Integrated Pest Management on Crops in Northern Region of North China, Ministry of Agriculture, Baoding 071000, China) Abstract: To understand the effects of high temperature with solarization using film mulch on control of Bradysia odoriphaga larvae and soil microbial community in the rhizosphere of Chinese chive, field tests were conducted in Hebei Province. The physicochemical properties of the soil were compared before and after the treatment. Further, Biolog-ECO was used to analyze the functional diversity of soil microbial community changes. The high temperature with solarization using film mulch resulted in 100% control of B. odoriphaga each instar larvae, while it exerted no significant effect on the plant height, stem diameter, leaf width, root length, color and fresh weight of one hundred plant after 12 days of solarization treatment. The total phosphorus content in soil increased significantly after the treatment. Shannon-Wiener index, Simpson index, McIntosh index and richness the index of the soil microbial community were not found to change significantly according to the AWCD value after a 144 h culture using BiologECO. It is evident that solarization using film mulch can afford effective control of B. odoriphaga larvae with no significant effect on growth of Chinese chive and rhizosphere soil microbial diversity. Key words: solarization high temperature film mulching; Chinese chive; Bradysia odoriphaga; soil microbial functional diversity 第 5 期 宋健等:日曬高溫覆膜對韭菜生長及根際土壤微生物多樣性的影響 671 隨著農村產業(yè)結構的調整,韭菜的栽培面積迅速擴大,在蔬菜周年供應中占重要位置。由于韭菜的連茬栽培以及溫棚適宜的環(huán)境條件,導致韭菜遲眼蕈蚊 Bradysia odoriphaga 的發(fā)生和危害逐年加重。韭菜遲眼蕈蚊,俗稱韭蛆,屬雙翅目眼蕈蚊科( Diptera: Sciaridae),是百合科蔬菜的重要害蟲,也是我國特有的害蟲1,主要危害韭菜、大蔥、大蒜等多種百合科蔬菜和其他作物,尤喜食韭菜,嚴重時造成產量損失達 30% 80%,韭蛆個體小、隱蔽性強、防治難度大2,3。 針對韭蛆不耐高溫的特點,史彩華等4研究了一套防控韭蛆的日曬高溫覆膜技術:在 4 月下旬至 9 月中旬,選擇太陽光線強烈的天氣(當天最大光照強度超過 55000 lx)覆膜,選擇透光性好,厚度為 0.100.12 mm 的淺藍色無滴膜,待膜內地表下 5 cm 深處土壤溫度持續(xù)在 40 以上且超過 4 h,對韭蛆的卵、幼蟲、蛹和成蟲的防治效果達到 100%。此項技術為韭蛆防治提供了新的思路,適用于夏季養(yǎng)根期韭蛆的防治。但高溫是否會影響韭菜根系的發(fā)育及植株長勢?是否會影響土壤的理化性質及韭菜根際土壤微生物結構和多樣性等,還不明確。基于此,本試驗在河北省韭菜主產區(qū)肅寧縣韭菜田,采用日曬高溫覆膜技術對韭蛆進行田間防治,在明確其田間防治效果的基礎上,調查了高溫對韭菜根系發(fā)育、韭菜長勢和土壤理化性質的影響,并通過 BiologECO 微孔板碳源利用分析技術對韭菜根際土壤微生物群落功能多樣性分析等研究,為日曬高溫覆膜技術的推廣應用提供科學依據。 1 材料與方法 1.1 樣地及高溫覆膜技術 試驗于 2017 年 6 月初至 7 月底在河北滄州肅寧縣王家佐村進行。供試材料為四季苔韭。 日曬高溫覆膜試驗選擇太陽光線強烈的 6 月進行(當天最大光照強度超過 55000 lx),選擇透光性好、膜上不起水霧,厚度為 0.10 mm 淺藍色無滴膜。覆膜前 2 d 割除韭菜,平鋪于采收后的韭菜田地表,覆膜后四周用土壓蓋嚴實。將土壤測溫計插于地表下 5 cm 深處,測定土壤溫度,測溫計選擇膜的不同位置(中間、四邊)共 5 點,當土壤溫度均升至 40 以上時開始計時,持續(xù) 4 h 后,揭膜,隨機選擇 5 點調查韭蛆存活情況,待地溫恢復后澆水緩苗。設置不覆膜地塊為對照區(qū)。 1.2 韭菜遲眼蕈蚊防治效果及韭菜生長情況 覆膜前,采用隨機 5 點取樣方法,每點連續(xù)調查 10 墩韭菜,記錄韭菜遲眼蕈蚊幼蟲數(shù)量,覆膜后當天,采取上述方法調查幼蟲死亡蟲數(shù),計算防治效果。覆膜后第 12 d,對覆膜地塊和未覆膜地塊,采用上述調查方法,測量單株韭菜株高、莖粗、葉寬、根長、色澤和百株鮮重等生長指標。 1.3 樣品采集及土壤處理 日曬高溫覆膜后第 0、 12、 21 和 34 d 對處理區(qū)和對照區(qū)韭菜根際土壤按照“ S”形路線 5 點法進行采樣,除去土壤表層未分解的凋落物層,采集韭菜根際土 50 g 左右,每樣點采集 10 份,混合密封保存于冰盒中, 3 4 h 內帶回實驗室過 2 mm 篩,分裝至無菌 EP 管中,置于液氮中冷凍 3 4 h,然后轉移至 80 超低溫冰箱保存。 1.4 營養(yǎng)基質化學性狀的測定 土壤 pH 使用雷茲 pHS3B 型酸度計按水土比 5:1 測定;土壤含水量( %)(原土重烘干土重) /烘干土重× 100;土壤中銨態(tài)氮、硝態(tài)氮、全氮和全磷的含量采用土壤連續(xù)流動分析儀 AA3 的分析測定方法進行測定5,6。 1.5 營養(yǎng)基質微生物群落功能多樣性測定 采用 BiologECO 分析微生物群落功能多樣性, BiologECO 含有 31 種碳源,分為氨基酸類、糖類、羧酸類、胺 /氨類、雙親化合物及聚合物 6 類物質。 ECO 接種液制備方法:將土樣放在 25 條件下活化24 h,取 5 g(當量干重)土樣于 100 mL 三角瓶中,加入 45 mL 滅菌的 NaCl 溶液( 0.9 mol/L,下同),將三角瓶置于漩渦振蕩器上以 200 r/min 振蕩 30 min,取一定量上清液并采用 NaCl 溶液稀釋至 1000 倍,制備出接種液并移至儲液槽。使用 8 孔道排槍向 ECO 板培養(yǎng)基孔中加 150 L 接種液, 每個樣品 3 次重復。接種好的微孔板放入 25 恒溫培養(yǎng)箱中。 分別于 4、 24、 48、 72、 96、 120、 144 和 168 h 使用 ELx S08Biolog微孔板讀數(shù)儀自動測定吸光度,測定波長分別為 590 nm(顏色濁度)和 750 nm(濁度)。采用培養(yǎng)第672 中 國 生 物 防 治 學 報 第 34 卷 144 h 的數(shù)據計算細菌群落平均每孔吸光度、 Biolog 豐富度指數(shù)和代謝多樣性指數(shù),進行代謝相似性分析。試驗過程中使用的移液管、 V 型槽容器等耗材來源于美國 Biolog 公司。 1.6 數(shù)據統(tǒng)計與分析 土壤微生物群落利用碳源的整體能力用 BiologECO 微平板板孔平均顏色變化率( AWCD)表示7,AWCD 反映了土壤微生物利用單一碳源的能力,是土壤微生物活性及群落功能多樣性的重要指標。土壤微生物群落功能多樣性分析采用 ShannonWiener 指數(shù)、 Simpson 指數(shù)、豐富度指數(shù)和 McIntosh 指數(shù)表征8,9。ShannonWiener 指數(shù)較高代表微生物種類多且分布均勻。 樣品微生物群落種數(shù)越多, 各種個體分配越均勻,Simpson 指數(shù)越高,表示群落多樣性越好。 McIntosh 指數(shù)反映了碳源利用種類數(shù)的不同,以此區(qū)分不同碳源的利用程度。豐富度指數(shù)表示被利用的碳源數(shù)。 AWCD ( C R) /n; ShannonWiener 指數(shù)( H): H ( Pi× lnPi); Simpson 優(yōu)勢度指數(shù)( D)( Simpson 指數(shù)的變形): D 1 Pi2;豐富度指數(shù)( S) 被利用碳源的總數(shù)目10; McIntosh 指數(shù)( U): U2ni 。以上公式中, C 為每個碳源孔的兩波段光 密度差值; R 為對照孔的光密度值; n 為培養(yǎng)基碳源種類數(shù),本研究中 n 31, Pi 為有培養(yǎng)基的孔與對照 孔的光密度值差與板總差的比值,即: Pi( C R) /( C R)11; ni為第 i 孔相對吸光值( C R),N 為吸光值總和, S 為顏色有變化的碳源孔的數(shù)目。數(shù)據統(tǒng)計分析應用 Excel 2007、 SPSS 16.0 軟件進行。 2 結果與分析 2.1 日曬高溫覆膜對韭菜遲眼蕈蚊防治效果、韭菜生長及土壤理化性質的影響 日曬高溫覆膜當天,隨機 5 點取樣調查未發(fā)現(xiàn)存活的韭蛆幼蟲,對韭蛆幼蟲的防治效果達到 100%。日曬高溫覆膜 12 d 后,覆膜韭菜長勢良好,韭菜深綠色,日曬高溫覆膜處理后不影響韭菜生長( P 0.05)(表 1)。 表 1 日曬高溫覆膜 12 d 對韭菜生長的影響 Table 1 Effects of solarization high temperature film mulching 12 d on growth of Chinese chive 處理 Treatments 平均株高 Average plant height (cm) 平均莖粗 Average stem diameter (cm) 平均葉寬 Average leaf width(cm) 平均根長 Average root length(cm) 色澤 Color 平均百株鮮重 Average fresh weight one hundred plant (g)覆膜 Film mulching 19.21± 4.49 a 0.28± 0.09 a 0.32± 0.06 a 14.75± 2.79 a 深綠色 2001± 24.93 a CK 20.23± 4.07 a 0.31± 0.09 a 0.32± 0.07 a 15.44± 2.66 a 深綠色 2017± 49.11 a 注:同列數(shù)據后標有不同字母者表示在 0.05 水平上差異顯著。 Note: Different lowercase letters in the same column indicated significant differences at 0.05 level. 采用連續(xù)流動分析儀 AA3 對不同處理方法、不同時期韭菜田土壤的理化性質進行測定,覆膜前后處理區(qū)與對照區(qū)土壤理化性質除全磷外,氨態(tài)氮、硝態(tài)氮、全氮、土壤含水量、 pH 均無顯著變化( P 0.05),只有全磷量在覆膜后呈明顯升高的趨勢,與對照相比差異顯著( P 0.05)(表 2)。 2.2 日曬高溫覆膜對土壤微生物碳源利用的影響 不同處理、不同時期韭菜田土壤 AWCD 的動態(tài)變化圖顯示,韭菜田土壤微生物總體變化趨勢為:隨著培養(yǎng)時間的延長,日曬高溫覆膜處理組和對照組土壤微生物利用碳源的能力均顯示出逐漸增加的趨勢,在培養(yǎng) 144 h 后逐漸趨于平穩(wěn)。 從日曬高溫覆膜后 0、 12、 21 和 34 d 4 個不同時間段采集的土壤樣品 AWCD的動態(tài)變化上看(圖 1),該 4 個時間段之間土壤微生物利用碳源的能力均無明顯差異;同時日曬高溫覆膜處理組和對照之間進行逐一比較,兩組處理間土壤微生物利用碳源的能力均無明顯差異。日曬高溫覆膜處理土壤對土壤微生物群落代謝活性無影響,其對碳源的利用能力無顯著影響( P 0.05)。 2.3 不同處理韭菜地土壤微生物多樣性指數(shù)分析 根據培養(yǎng)第 144 h 的 AWCD 值計算土壤微生物群落的 ShannonWiener 指數(shù)、 Simpson 指數(shù)、 McIntosh指數(shù)和豐富度指數(shù)。 結果顯示, 相同采集時間下, 日曬高溫覆膜處理組與對照組土壤微生物群落的 Simpson第 5 期 宋健等:日曬高溫覆膜對韭菜生長及根際土壤微生物多樣性的影響 673 指數(shù)和豐富度指數(shù)無顯著差異。覆膜后第 21 d,覆膜組 McIntosh 指數(shù)顯著高于對照組,覆膜后第 34 d,覆膜組 McIntosh 指數(shù)與對照組相比,無顯著差異( P 0.05)(表 3)。 表 2 日曬高溫覆膜對土壤理化性質的影響 Table 2 Effects of solarization high temperature film mulching on soil physical and chemical properties 處理 Treatments 時間 Time (d) 含水量 Soil moisture (%) pH 全氮 Total N (mg/Kg)全磷 Total P (mg/Kg)氨態(tài)氮 NH4-N (mg/Kg) 硝態(tài)氮 NO3-N (mg/Kg) 0 10.53± 1.07 ab 7.94± 0.14 a 587.85± 80.05 ab 1311.52± 140.86 b 13.91± 1.50 a 15.00± 2.65 a 12 8.33± 0.84 a 7.85± 0.12 a 583.45± 6.10 a 1060.24± 79.41 b 17.88± 1.45 a 15.34± 3.44 ab 21 10.67± 0.33 b 7.89± 0.05 a 569.90± 86.20 a 981.04± 47.28 b 14.16± 2.20 ab 13.24± 3.26 ab 覆膜 Film mulching 34 3.93± 0.49 ab 7.99± 0.10 a 549.20± 81.38 a 898.24± 46.10 b 14.57± 0.66 a 8.41± 1.50 ab 0 9.87± 0.56 a 7.79± 0.06 a 696.84± 11.52 a 1076.00± 23.30 a 14.25± 3.06 a 15.74± 2.38 a 12 8.13± 0.19 a 7.91± 0.03 a 567.20± 25.31 a 753.92± 56.44 a 15.22± 3.60 a 18.83± 1.67 a 21 8.40± 0.43 a 7.78± 0.06 a 541.87± 14.90 a 671.60± 49.50 a 20.58± 4.12 a 10.10± 0.75 a CK 34 3.67± 0.47 a 8.10± 0.07 a 532.85± 73.61 a 690.27± 75.80 a 15.89± 3.80 a 9.82± 0.95 a 注:不同小寫字母表示在同一采樣時間不同處理條件下差異顯著( P 0.05) 。 Note: The different lowercase letters indicated significant difference between different treatment conditions at the same sampling time (P 0.05). The same below. 00.20.40.60.81.01.24 24 48 72 96 120 144 168時間 Time (h)平均顏色變化率AWCD覆膜 Film mulching 34 dck 34 d覆膜 Film mulching 21 dck 21 d覆膜 Film mulching 12 dck 12 d4 24 48 72 96 120 144 1684 24 48 72 96 120 144 168 4 24 48 72 96 120 144 16800.20.40.60.81.01.200.20.40.60.81.01.200.20.40.60.81.01.2平均顏色變化率AWCD平均顏色變化率AWCD平均顏色變化率AWCD覆膜 Film mulching 0 dck 0 d時間 Time (h)圖 1 日曬高溫覆膜對土壤微生物碳源利用的影響(平均值 ± 標準差) Fig. 1 Effects of solarization high temperature film mulching on utilization of carbon sources by microorganisms (mean± SD) 3 討論 日曬高溫覆膜對韭菜遲眼蕈蚊各齡期幼蟲的防治效果高達 100%,對韭菜的長勢和根系發(fā)育無顯著影響。對韭菜根際表層 0 5 cm 土壤的理化性質進行比較,日曬高溫處理后土壤中的全磷量較對照區(qū)有顯著增加。分析原因,首先日曬高溫覆膜使得土壤中有機質中的磷以可溶性灰分的形式存在,從而有效磷的含 674 中 國 生 物 防 治 學 報 第 34 卷 表 3 日曬高溫覆膜對韭菜田土壤微生物多樣性指數(shù)的影響 Table 3 Effects of solarization high temperature film mulching on soil microbial diversity index 處理 Treatments 時間 Time (d) Shannon-Wiener Simpson McIntosh 豐富度指數(shù) Richness index 0 3.08± 0.07 a 0.95± 0.00 a 4.17± 0.89 ab 23.73± 1.48 ab 12 3.23± 0.01 a 0.96± 0.00 a 4.69± 0.38 ab 26.47± 1.41 ab 21 3.10± 0.05 ab 0.95± 0.00 ab 5.62± 0.18 b 23.67± 1.05 a 覆膜 Film mulching 34 3.08± 0.25 ab 0.95± 0.00 ab 5.87± 0.40 a 23.3333± 1.19 ab 0 3.21± 0.10 a 0.96± 0.01 a 5.38± 0.57 a 25.87± 2.29 a 12 3.07± 0.15 a 0.95± 0.01 a 5.22± 0.86 a 24.17± 2.79 a 21 2.65± 0.49 a 0.90± 0.06 a 4.95± 0.31 a 23.33± 2.19 a CK 34 2.62± 0.35 a 0.91± 0.04 a 5.71± 0.04 a 25.11± 2.67 a 量增加了;其次,高溫造成土壤中難溶性磷酸鹽晶相的改變,使晶態(tài)的磷酸鹽向非晶態(tài)的磷酸鹽轉化,土壤中難溶磷酸鹽轉化成可溶性磷酸鹽, 使得土壤中有效態(tài)的磷素增多, 從而使得土壤中全磷含量明顯提高。 環(huán)境因子中,溫度對土壤微生物的群落結構和活性的影響非常突出。溫度升高可以增加土壤微生物量12,也可以降低土壤微生物量13,也有學者認為,溫度升高并不能改變土壤細菌和真菌的豐富度14。張衛(wèi)健等15對美國大平原地區(qū)土壤微生物群落結構研究中,發(fā)現(xiàn)人工增溫 1.8 后,土壤微生物總量沒有顯著變化,許多研究也得出了相同的結論16,17。但同時發(fā)現(xiàn),微生物群落結構卻發(fā)生了明顯變化,溫度升高明顯提高了土壤微生物中真菌活性,增加了其豐富度,從而增強了土壤微生物對土壤有機碳的利用效率18。很多學者也得出了同樣的的結論:溫度升高增強了真菌的優(yōu)勢,提高了土壤對菌類中一些酶的利用效率, 極大地影響了土壤微生物群落結構13,18,19。 Hayden 等20利用多因子氣候變化草地平臺研究發(fā)現(xiàn),溫度升高對細菌和真菌豐度沒有影響。我們設計的試驗,根據 BiologECO 微孔板培養(yǎng)第 144 h 的 AWCD值計算土壤微生物群落的 ShannonWiener 指數(shù)、 Simpson 指數(shù)和豐富度指數(shù)未發(fā)現(xiàn)顯著差異。結果與上述結論是一致的。日曬高溫覆膜后第 21 d,覆膜組 McIntosh 指數(shù)顯著高于對照組 McIntosh 指數(shù),可能是由于覆膜對土壤異質性的影響和土壤理化性質的變化造成的。但在日曬高溫覆膜后第 34 d,覆膜組 McIntosh指數(shù)與對照組 McIntosh 指數(shù)相比無顯著差異,說明覆膜對碳源利用不會造成持續(xù)影響,只在短期內稍有波動,可見日曬高溫覆膜對土壤中微生物的多樣性不會造成顯著影響。 王海泉等21研究發(fā)現(xiàn),行間覆膜栽培大豆并沒有改變大豆根際土壤微生物三大類群數(shù)量變化,覆膜比不覆膜增加了大豆根際土壤微生物總量,覆膜比不覆膜增加了大豆根際土壤微生物的生物碳含量,提高大豆產量。王素素等22研究表明土壤經 55 和 70 高溫 10、 20 d 處理后土壤中細菌、真菌數(shù)量均減少,其中真菌數(shù)量下降尤為明顯,但對草莓植株生長、根系活力和根系總呼吸速率都具有不同程度促進作用。 本試驗結果表明,高溫覆膜技術對韭菜根際土壤中細菌和真菌的多樣性變化影響不大,但由于植物 土壤 微生物之間存在著復雜的關聯(lián)性,溫度升高的幅度、不同的持續(xù)時間、植物的不同生長時期、土壤條件及不同的環(huán)境條件均可對土壤微生物種群結構和豐度造成一定的影響,同時 BiologECO 只是針對可培養(yǎng)的細菌和真菌進行了初步的研究,后續(xù)我們還將通過高通量測序分析技術對土壤中可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的細菌真菌結構和種類進行全面深入研究。 參 考 文 獻 1 張友軍 , 吳青君 , 王少麗 , 等 . 我國蔬菜重要害蟲研究現(xiàn)狀與展望 J. 植物保護 , 2013, 39(5): 38-45. 2 Li W X, Yang Y T, Xie W, et al. 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