園藝學(xué)報， 2018， 45 (7)： 1296 1304. Acta Horticulturae Sinica 1296 doi： 10.16420/j.issn.0513-353x.2017-0828； http： /www. ahs. ac. cn 收稿日期 ： 2018 03 04； 修回日期 ： 2018 06 15 基金項目 ： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（ 2017101） ；河北農(nóng)業(yè)大學(xué)教改項目（ 2015JM04） ；河北省教育廳課題生物技術(shù)品牌特色專業(yè)建設(shè)研究項目（ 2012GJJG054） ；教育部、河北省教育廳生物技術(shù)專業(yè)綜合改革試點項目（ 201202） * 通信作者 Author for correspondence（ E-mail： zhangdongcumt163.com； Tel： 0312-7528273） 解淀粉芽胞桿菌防治番茄果實灰霉病及其抑菌物質(zhì)分析 王亞杰，高 宇，陳曉萌，劉夢靈，張冬冬*（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定 071000） 摘 要： 通過對峙培養(yǎng)法篩選對灰葡萄孢菌有顯著拮抗性的產(chǎn)芽胞細菌，利用番茄果實檢測拮抗菌及其發(fā)酵上清液對灰霉病的防治效果， 采用 ESI-MS 檢測拮抗菌發(fā)酵上清液粗提取物中主要抑菌物質(zhì)并利用 PCR 檢測合成抑菌物質(zhì)的相關(guān)基因，通過菌體菌落形態(tài)觀察、生理生化試驗、 16S rDNA 及 gyrB 分析對拮抗細菌進行種屬鑒定。結(jié)果表明，分離篩選的拮抗菌 fqhm-13 及其發(fā)酵上清液對番茄果實灰霉病防治效果分別達到 69.0%和 78.1%。 fqhm-13 發(fā)酵上清液粗提取物中主要抑菌物質(zhì)為脂肽抗生素 C14 C16 的surfactin A 和 C15 C17 的 iturin A。 fqhm-13 基因組中含有脂肽抗生素合成基因 ituC、 ituD、 fenD 和 srfAB。fqhm-13 菌株為解淀粉芽胞桿菌（ Bacillus amyloliquefaciens） 。該研究為利用芽胞桿菌及其代謝產(chǎn)物防治番茄果實灰霉病奠定了材料基礎(chǔ)。 關(guān)鍵詞： 番茄；果實；灰霉?。换移咸焰呔?；解淀粉芽胞桿菌；脂肽抗生素 中圖分類號： S 641.2； S 436.412.1 文獻標志碼： A 文章編號： 0513-353X（ 2018） 07-1296-09 Biocontrol Ability of Bacillus amyloliquefaciens Against Gray Mold on Tomato Fruit WANG Yajie， GAO Yu， CHEN Xiaomeng， LIU Mengling， and ZHANG Dongdong*（ College of Life Science， Agricultural University of Hebei， Baoding， Hebei 071000， China） Abstract： Gray mold caused by Botrytis cinerea has been found to be the main fungal disease of tomato fruit. The dual culture method was used to screen for Bacillus strains with significant antagonistic activity to B. cinerea. Further testing of control efficiency was completed by spraying the antagonistic bacterium and its fermentation supernatant on tomato fruits. ESI-MS was utilized to detect main antifungal substances in the antagonistic bacteriums fermentation supernatant crude extract. Further analysis using PCR allowed for the detection of genes related to antimicrobial substances synthesis. The species of the antagonist bacterium was identified through its colony and cell morphology， physiological and biochemical tests， and 16S rDNA and gyrB analysis. The control effect of the screened antagonist fqhm-13 and its fermentation supernatant on gray mold of tomato fruit was identified to be 69.0% and 78.1%，respectively. The main antimicrobial substances in the qhm-13 fermentation supernatant crude extract include lipopeptide antibiotics of C14 C16 surfactin A and C15 C17 iturin A. PCR detection showed 王亞杰，高 宇，陳曉萌，劉夢靈，張冬冬 . 解淀粉芽胞桿菌防治番茄果實灰霉病及其抑菌物質(zhì)分析 . 園藝學(xué)報， 2018， 45 (7)： 1296 1304. 1297 that the genome of fqhm-13 contained genes related to antibiotic synthesis， such as ituC， ituD， fenD and srfAB. Through species identification techniques， strain fqhm-13 was identified as Bacillus amyloliquefaciens. This study laid the foundation for the use of B. amyloliquefaciens and its metabolites to prevent and control gray mold on tomato fruit. Keywords： tomato； fruit； gray mold； Botrytis cinerea； Bacillus amyloliquefaciens； lipopeptide antibiotics 番茄（ Solanum lycopersicum）灰霉病是由半知菌亞門灰葡萄孢菌（ Botrytis cinerea Pers.）引起的真菌病害（ Ahmed et al.， 2017） ，在中國絕大多數(shù)番茄種植區(qū)均有發(fā)生，給番茄生產(chǎn)造成巨大損失，以花期和果實膨大期最為嚴重（ Xie et al.， 2017） 。 Gong 等（ 2017）報道，粉紅粘帚霉（ Clonostachys rosea）能夠抑制灰葡萄孢菌的增殖并有效防治番茄灰霉病的發(fā)生，增加 3吲哚乙酸、水楊酸和 NO的水平，促進苯丙氨酸解氨酶和多酚氧化酶的合成。羅倫隱球酵母（ Cryptococcus laurentii）能夠誘導(dǎo)番茄的防衛(wèi)反應(yīng)，并增強過氧化物酶、苯丙氨酸脫氨酶、 1,3葡聚糖酶和超氧化物歧化酶的活性（ Zhang et al.， 2013） 。從健康番茄植株根際土壤中分離篩選的假單胞菌（ Pseudomonas sp.）WXCDD51 對番茄灰霉病的防治效果達 66.23%，對番茄種子萌發(fā)及幼苗生長均具有促進作用（石玉瑩 等， 2017） 。綠針假單胞菌（ Pseudomonas choloeaphtis） HL5-4 對番茄苗期灰霉病的防治效果為62.88%，且在番茄果實和葉片保持一定的定殖密度（申順善 等， 2016） 。 芽胞桿菌（ Bacillus spp.）在自然界中廣泛分布，為非致病菌和植物內(nèi)生細菌，通過多種機制發(fā)揮抑制植物病害的作用。芽胞桿菌能夠形成抗逆耐熱的芽胞，賦予它長期生存能力且容易開發(fā)利用（ Sun et al.， 2013） ；其分泌產(chǎn)生多種次生代謝產(chǎn)物而具有顯著的抗病促生作用。因此，它是理想的生防菌篩選對象（ Falardeau et al.， 2013） 。脂肽抗生素具有廣譜抗真菌活性，是芽胞桿菌發(fā)揮生防作用的主要因素（ Velho et al.， 2011； Yang et al.， 2015） 。脂肽抗生素根據(jù)其碳原子數(shù)以及氨基酸種類不同分為 3 大家族：表面活性素（ surfactins） 、豐革素（ fengycins）和伊枯草菌素（ iturins） 。枯草芽胞桿菌（ B. subtilis） B-FS06 發(fā)酵無菌上清液能抑制黃曲霉的生長和孢子萌發(fā)，其主要抑菌物質(zhì)為表面活性素和 bacillomycin D（ Zhang et al.， 2008） 。枯草芽胞桿菌 YB-05 對小麥全蝕病的防治效果優(yōu)于化學(xué)試劑，主要抑菌物質(zhì)為伊枯草菌素 A 和表面活性素（ Yang et al.， 2015） 。 本研究從番茄果實中分離篩選對灰霉病菌有顯著拮抗活性的內(nèi)生芽胞桿菌，檢測拮抗菌及其發(fā)酵上清液對番茄灰霉病的防治效果，利用質(zhì)譜檢測拮抗菌發(fā)酵上清液粗提取物中的主要抑菌物質(zhì)，為番茄灰霉病的生物防治及采摘后番茄果實的儲存奠定基礎(chǔ)。 1 材料與方法 1.1 番茄材料及產(chǎn)芽胞細菌的分離 紅熟期千禧櫻桃番茄果實從河北農(nóng)業(yè)大學(xué)校園超市購買，番茄灰霉病病原菌，即灰葡萄孢菌保存于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)制藥工程實驗室，分離自保定市滿城區(qū)番茄大棚感染灰霉病的番茄果實。 將健康的番茄果實依次用 5% H2O2表面消毒 3 min， 75%酒精處理 30 60 s，無菌水沖洗 3 次，然后在無菌研缽中碾碎，放入裝有玻璃珠和 50 mL 蒸餾水的滅菌三角瓶中，搖床振蕩 1 h， 80 水浴加熱 15 min，進行系列梯度稀釋后涂板分離單菌落。 Wang Yajie， Gao Yu， Chen Xiaomeng， Liu Mengling， Zhang Dongdong. Biocontrol ability of Bacillus amyloliquefaciens against gray mold on tomato fruit. 1298 Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (7)： 1296 1304. 1.2 拮抗灰葡萄孢菌的產(chǎn)芽胞細菌篩選及其對番茄果實灰霉病的防治檢測 采用對峙培養(yǎng)法進行拮抗灰葡萄孢菌的產(chǎn)芽胞細菌的篩選。挑取活化的灰葡萄孢菌菌片接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂（ PDA）培養(yǎng)基平板中央，在距離菌片 3 cm 處接種分離的產(chǎn)芽胞細菌，每個平板接種 4 株（圖 1） ， 27 培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng) 5 d，觀察抑菌帶生成情況（ Zhang et al.， 2017a） 。 將拮抗菌接種到營養(yǎng)瓊脂（ NA）斜面上， 37 恒溫培養(yǎng)過夜，挑取活化的菌苔轉(zhuǎn)接到 50 mL營養(yǎng)肉湯（ NB）培養(yǎng)基中， 37 搖床 220 r · min-1振蕩培養(yǎng)過夜。將發(fā)酵液按照 10%接種量轉(zhuǎn)接到基礎(chǔ)培養(yǎng)基（蛋白胨 1%，葡萄糖 1%， NaH2PO4· 2H2O 0.2%， Na2HPO4· 2H2O 0.4%， MgSO4· 7H2O 0.05%， pH 7.0 7.2） ， 37 搖床 220 r · min-1振蕩培養(yǎng) 48 h（ Zhang et al.， 2017b） 。分別回收菌體和上清液，將菌體用無菌水懸浮，制成活菌含量為 1 × 108cfu · mL-1的菌懸液；將上清液采用 0.22 m微孔濾膜過濾，回收濾液。選取健康番茄果實進行表面消毒，用滅菌針在果實表面均勻扎 4 個小孔，分別放入菌懸液和上清液中放置 10 s 后在超凈工作臺內(nèi)晾干。用滅菌針將少量灰葡萄孢菌絲接入番茄小孔中，將只接種灰葡萄孢菌的處理作為病原菌對照，將只扎孔的處理作為空白對照。每個處理5 個平行，每個平行 5 個番茄果實，分別用塑料盒密封， 28 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 5 d。試驗共重復(fù) 3 次。根據(jù)番茄果實灰霉病的分級標準 （ Lima et al.， 2013） 記錄番茄果實的病級。 病情指數(shù) = 100 × （各級發(fā)病果實數(shù)量 × 相對級數(shù)值） /（調(diào)查總數(shù) × 最高級數(shù)值） 。防病效果（ %） = 100 ×（對照區(qū)病情指數(shù)處理區(qū)病情指數(shù)） /對照區(qū)病情指數(shù)。 用 SPSS 17.0 軟件的 ANOVA 程序進行方差分析，差異顯著性比較使用 Duncans 新復(fù)極差法。 1.3 拮抗菌發(fā)酵上清液的粗提取及質(zhì)譜檢測 將在基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng) 48 h 的拮抗菌發(fā)酵上清液用 6 mol · L-1鹽酸調(diào)節(jié)至 pH 2.0 并于 4 保存過夜， 8 000 r · min-1離心 20 min 去除上清，沉淀用 pH 2.0 鹽酸溶液沖洗 2 遍，用甲醇萃取 2 遍。萃取液用 0.22 m 疏水微孔濾膜過濾，化合物分子量利用安捷倫 6410 質(zhì)譜儀進行測定，電離方式采用電噴霧離子源，噴霧電壓為 4.5 kV，毛細管溫度為 300 ，檢測方式為負離子（ Waseem et al.， 2009） 。 1.4 拮抗菌抑菌物質(zhì)合成相關(guān)基因的檢測 以 CTAB 法提取的拮抗菌基因組 DNA 為模板進行脂肽抗生素合成基因 ituC、 ituD、 srfAB 和 fenD的 PCR 檢測，引物分別采用 ITUCF1/ITUCR3、 ituD2F/ituD2R、 110F/110R 和 FNDF1/FNDR1（ Joshi & Gardener， 2006） 。基因序列與 GenBank 數(shù)據(jù)進行比對分析。 1.5 拮抗菌種屬鑒定 參考 伯杰氏細菌鑒定手冊 的方法進行菌落、 菌體形態(tài)觀察和生理生化指標檢測 （ Buchanan & Gibbons， 1994） 。利用通用引物 27F/1495R（ Robertson et al.， 2001）和 UP-1S/UP-2Sr（ Yamamoto & Harayama， 1995）分別擴增拮抗菌 16S rDNA 和 gyrB 序列。 PCR 產(chǎn)物測序結(jié)果在 NCBI 數(shù)據(jù)庫中用BLAST 進行分析，與模式菌株序列進行同源性比較，用 MEGA5.0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。 2 結(jié)果與分析 2.1 拮抗灰葡萄孢菌的芽胞桿菌的篩選 從番茄果實中共分離獲得產(chǎn)芽胞細菌 186 株。經(jīng)對峙培養(yǎng)檢測，有 68 株呈現(xiàn)對灰葡萄孢菌的王亞杰，高 宇，陳曉萌，劉夢靈，張冬冬 . 解淀粉芽胞桿菌防治番茄果實灰霉病及其抑菌物質(zhì)分析 . 園藝學(xué)報， 2018， 45 (7)： 1296 1304. 1299 拮抗活性，占分離菌株的 36.56%。選擇 10 株對灰葡萄孢菌抑菌活性最強的菌株，利用其發(fā)酵上清液進行灰葡萄孢菌拮抗活性檢測，最終篩選出 1 株拮抗活性最強的菌株，命名為 fqhm-13（圖 1） 。 圖 1 拮抗菌 fqhm-13 對灰葡萄孢菌的拮抗作用 Fig. 1 The antagonism of antagonist fqhm-13 against Botrytis cinerea 2.2 拮抗菌對番茄果實灰霉病的防治效果 在接種灰霉病菌灰葡萄孢菌 5 d 后對各處理進行病情指數(shù)和防治效果調(diào)查（表 1） ，只接種病原菌的對照處理發(fā)病嚴重，病情指數(shù)為 79.3。拮抗菌 fqhm-13 及其發(fā)酵上清液處理發(fā)病顯著低于病原菌處理，病情指數(shù)分別為 24.6 和 17.4，防治效果為 69.0%和 78.1%；發(fā)酵上清液處理防治效果優(yōu)于拮抗菌處理。 表 1 拮抗菌 fqhm-13 及其發(fā)酵上清液對番茄果實灰霉病的防治效果 Table 1 The control effects of antagonist fqhm-13 and its fermentation supernatant against tomato fruit gray mold disease 處理 Treatment 病情指數(shù) Disease index 防治效果 /% Control efficiency 病原菌 Pathogenic fungi 79.3 ± 5.7 a 拮抗菌 Antagonistic bacteria 24.6 ± 2.1 b 69.0 發(fā)酵上清液 Fermentation supernatant 17.4 ± 1.9 c 78.1 注：表中數(shù)值為平均值 ± 標準差。不同字母表示處理間存在顯著差異（ P < 0.05） 。 Note： The data were average ± SD. Different letters indicate significant difference at 0.05 level. 2.3 拮抗菌發(fā)酵上清液粗提取物質(zhì)譜檢測 將拮抗菌 fqhm-13 發(fā)酵上清液粗提取物利用 ESI-MS 進行分析，分別發(fā)現(xiàn) m/z 值為 1 020.6591、1 034.6719、 1 048.6887、 1 077.5125、 1 091.5284 和 1 105.5442 的化合物（圖 2） 。其中 1 020.6591、1 034.6719 和 1 048.6887 之間分子量相差 14，恰好為 1 個 CH2，表明 3 種化合物為同系物，與報道的脂肽抗生素表面活性素（ surfactin）家族的相對分子量一致，為 C14 C16 的 surfactin A。m/z 為 1 077.5125、 1 091.5284 和 1 105.5442 的化合物之間分子量也相差 14，與報道的脂肽抗生素伊枯草菌素（ iturin）家族的相對分子量一致，為 C15 C17 的 iturin A。 Wang Yajie， Gao Yu， Chen Xiaomeng， Liu Mengling， Zhang Dongdong. Biocontrol ability of Bacillus amyloliquefaciens against gray mold on tomato fruit. 1300 Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (7)： 1296 1304. 圖 3 瓊脂糖凝膠電泳檢測拮抗菌 fqhm-13 合成脂肽 抗生素基因 PCR產(chǎn)物 Fig. 3 Agarose gel-electrophoresis detection of PCR products for lipopeptide antibiotic biosynthesis genes from antagonist fqhm-13 圖 2 拮抗菌 fqhm-13 發(fā)酵上清液的粗提取物 ESI-MS 檢測圖譜 A 圖方框部分放大為 B 圖。 Fig. 2 ESI-MS analysis of antagonist fqhm-13 fermentation supernatant crude extract The frame section of figure A is figure B. 2.4 拮抗菌合成脂肽類抗生素基因檢測 用 PCR 方法檢測了拮抗菌 fqhm-13 合成脂肽類抗生素的 ituC、 ituD、 fenD 和 srfAB 基因，結(jié)果如圖 3 所示。 將測序結(jié)果在 NCBI 上分別進行 BLAST 同源性分析，比對結(jié)果表明， srfAB 編碼 surfactin合成酶亞基 2， ituC 編碼 iturin A 合成酶 C， ituD編碼丙二酸單酰輔酶 A ?；D(zhuǎn)移酶， fenD 編碼fengycin 合成酶。其中 ituC 和 ituD 合成 iturin A，srfAB 合成 surfactin， fenD 合成 fengycin。 2.5 拮抗菌種屬鑒定 在 NA 培養(yǎng)基上，拮抗菌 fqhm-13 培養(yǎng)初期菌落乳白色，圓形，表面濕潤粘稠；培養(yǎng)后期表面干燥有皺褶，中央凹陷，呈火山口狀。菌體呈桿狀，常成串出現(xiàn)，可形成橢圓形的中生芽胞，革蘭氏染色呈陽性。 王亞杰，高 宇，陳曉萌，劉夢靈，張冬冬 . 解淀粉芽胞桿菌防治番茄果實灰霉病及其抑菌物質(zhì)分析 . 園藝學(xué)報， 2018， 45 (7)： 1296 1304. 1301 生理生化指標檢測如表 2 所示。接觸酶試驗、 3酮基乳糖、膿青素、丙二酸利用、酒石酸鹽利用、甲基紅和苯丙氨酸脫氨酶試驗結(jié)果均為陰性。 V-P 試驗、硝酸鹽及亞硝酸鹽還原試驗、淀粉水解試驗、吲哚試驗、檸檬酸鹽試驗、脲酶試驗、硫化氫試驗、糖醇發(fā)酵（葡萄糖、乳糖、甘露糖）試驗和產(chǎn)氨試驗結(jié)果均為陽性。 將拮抗菌 fqhm-13 菌體形態(tài)、菌落特征及生理生化試驗與伯杰氏細菌鑒定手冊進行對照，初步鑒定其為芽胞桿菌屬（ Bacillus spp.） 。 表 2 拮抗菌 fqhm-13 生理生化試驗結(jié)果 Table 2 Results of physiological and biochemical experiments of antagonist fqhm-13 項目 Item 試驗結(jié)果 Result 項目 Item 試驗結(jié)果 Result 接觸酶試驗 Catalase test 甘露糖酵解 Mannose fermentation + 硝酸鹽還原試驗 Nitrate reduction test + 3酮基乳糖 3-keto lactose 亞硝酸鹽還原試驗 Nitrite reduction test + 膿青素 Pyocyanine 淀粉水解試驗 Starch hydrolysis test + 吲哚試驗 Indole test + V-P 試驗 V-P test + 產(chǎn)氨試驗 Ammonia production test + 檸檬酸鹽試驗 Citrate test + 丙二酸利用 Malonate utilization 脲酶試驗 Urease test + 酒石酸鹽利用 Tartrate utilization 硫化氫 Hydrogen sulfide + 甲基紅 Methyl red 葡萄糖酵解 Glucose fermentation + 苯丙氨酸脫氨酶試驗 Phenylalanine deaminase test 乳糖酵解 Lactose fermentation + 注： + 為陽性， 為陰性。 Note： + means positive， means negative. 將 fqhm-13 菌株的 16S rDNA 和 gyrB 序列與 GenBank 序列進行比較， 獲得相近的芽胞桿菌屬標準菌株的 16S rDNA 和 gyrB 序列，得到 fqhm-13 及相關(guān)菌株的進化距離并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖 4，圖 5） 。 根據(jù) 16S rDNA 和 gyrB 序列相似性分析，確定 fqhm-13 為解淀粉芽胞桿菌（ Bacillus amyloliquefaciens） 。 圖 4 基于 16S rDNA 序列的拮抗菌 fqhm-13 及相關(guān)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹 Fig. 4 Neighbor-joining tree showing relationship between fqhm-13 and related strains based on the 16S rDNA sequence Wang Yajie， Gao Yu， Chen Xiaomeng， Liu Mengling， Zhang Dongdong. Biocontrol ability of Bacillus amyloliquefaciens against gray mold on tomato fruit. 1302 Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (7)： 1296 1304. 圖 5 基于 gyrB 序列的拮抗菌 fqhm-13 及相關(guān)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹 Fig. 5 Neighbor-joining tree showing relationship between antagonist fqhm-13 and related strains based on the gyrB sequence 3 討論 已經(jīng)分離獲得多種芽胞桿菌菌株，對不同植物的多種病害呈現(xiàn)顯著的拮抗作用，這些菌株大多來源于植物的根際土壤、根系表面及植株體內(nèi)（張霞 等， 2007；王偉 等， 2010； Liu et al.， 2011；Wang et al.， 2016） 。 B. pumilus SQR-N43 能夠誘導(dǎo)立枯絲核菌（ Rhizoctonia solani） Q1 菌絲發(fā)生變形， 細胞質(zhì)液泡膨大和細胞質(zhì)泄露。 盆栽試驗表明， SQR-N43 能夠降低土壤中 R. solani 的數(shù)量 （ Huang et al.， 2012） 。 B. licheniformis N1 制劑顯著降低番茄植株及花朵的灰霉病的發(fā)生，效果優(yōu)于化學(xué)試劑，并且具有促生活性（ Lee et al.， 2006） 。在本研究中， B. amyloliquefaciens fqhm-13 能夠抑制灰葡萄孢菌在番茄果實的增殖，減輕番茄果實灰霉病的發(fā)生，便于制備芽胞菌劑進行應(yīng)用，但其抗病機理尚需進一步研究。 通過分泌次生代謝產(chǎn)物抑制或者殺滅植物病原菌，是芽胞桿菌防控植物病害最直接的體現(xiàn)（ Touré et al.， 2004） ，產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)是其防病促生的主要機制（ Leclère et al.， 2005） 。芽胞桿菌產(chǎn)生的脂肽抗生素具有廣譜抗菌活性，對植物體內(nèi)、體表及土壤中有害微生物有廣泛而顯著的抑制效果。此外，脂肽類物質(zhì)在自然條件下易分解，對環(huán)境友好（ Baysal et al.， 2013； Hamdache et al.， 2013） 。 Surfactin 具有一定程度的抗細菌作用，本身沒有抗真菌活性，但對其他脂肽特別是 iturin 的抗真菌活性有顯著增強效果（ Pérez-García et al.， 2011） 。 Surfactin 還能促進生防菌在植物根部有效定殖并形成生物膜，保護植物根部免受病原菌侵染（ Bais et al.， 2004） 。 C13 C15 surfactin A 和羊毛硫抗生素 subtilosin 是枯草芽胞桿菌 fmbR 產(chǎn)生的主要抗菌物質(zhì)（別小妹 等， 2006） 。 伊枯草菌素有強溶血活性，但和表面活性素不同的是對于植物病原真菌有強抑制作用，對大多數(shù)的致病酵母和霉菌有強烈的拮抗作用，但無抗細菌和抗病毒活性（ Stein， 2005） 。從番茄中分離的內(nèi)生細菌 B. subtilis B47 分泌產(chǎn)生的 iturin A2能顯著抑制玉米小斑病菌的生長，經(jīng)部分純化后，田間防效達 64.2%，優(yōu)于百菌清（ Ye et al.， 2012） 。 Caldeira 等（ 2011）利用 LC-MS 和抗菌活性檢測相結(jié)合的方法快速鑒定了 B. amyloliquefaciens CCMI 1051 合成的伊枯草菌素，而不需要進行提純，顯示了較高的效率和應(yīng)用前景。 本試驗中，利用 B. amyloliquefaciens fqhm-13 發(fā)酵上清液防治番茄果實灰霉病，效果優(yōu)于菌體，其活性成分為脂肽抗生素。直接利用芽胞桿菌的代謝產(chǎn)物進行生物防治的報道較少。本研究為直接王亞杰，高 宇，陳曉萌，劉夢靈，張冬冬 . 解淀粉芽胞桿菌防治番茄果實灰霉病及其抑菌物質(zhì)分析 . 園藝學(xué)報， 2018， 45 (7)： 1296 1304. 1303 利用脂肽抗生素防治番茄果實灰霉病提供了參考。抑菌物質(zhì)的產(chǎn)生受多種因素影響，這往往導(dǎo)致實驗室條件下和實際應(yīng)用中的效果不一致，直接利用抑菌物質(zhì)可以減少干擾。利用 fqhm-13 發(fā)酵上清液的 surfactin A 和 iturin A 為防治番茄果實灰霉病及采摘后番茄的儲存提供了良好的應(yīng)用前景。 References Ahmed F A， Sipes B S， Alvarez A M. 2017. 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