基于ITS序列的中國櫻桃、歐洲甜櫻桃和毛櫻桃種內(nèi)遺傳多樣性及種間關(guān)系分析.pdf
<p>園藝學(xué)報， 2018， 45 (1)： 126 138. Acta Horticulturae Sinica 126 doi： 10.16420/j.issn.0513-353x.2017-0317； http： /www. ahs. ac. cn 收稿日期 ： 2017 08 03； 修回日期 ： 2017 12 28 基金項目 ： 國家自然科學(xué)基金項目（ 31672114） * 通信作者 Author for correspondence（ E-mail： wangxrsicau.edu.cn） 基于 ITS 序列的中國櫻桃、歐洲甜櫻桃和毛櫻桃種內(nèi)遺傳多樣性及種間關(guān)系分析 王 浩1，黃智林1，陳 濤2，張 靜2，王 燕2，陳 清1，湯浩茹1,2，王小蓉1,2,*（1四川農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，成都 611130；2四川農(nóng)業(yè)大學(xué)果蔬研究所，成都 611130） 摘 要： 對中國櫻桃 Cerasus pseudocerasus（ Lindl.） G. D on（地方種質(zhì) 35 份，野生資源 35 份） ，歐洲甜櫻桃 C. avium（ L.） Moench（ 18 份）和毛櫻桃 C. tomentosa（ Thunb.） Wall.（ 7 份）共 95 份材料的核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ ITS， internal transcribed spacer）序列進行了測定和分析，以期從 ITS 的 DNA序列變異角度揭示種內(nèi)遺傳多樣性及種間遺傳關(guān)系。結(jié)果表明： （ 1） 96 條 ITS 序列比對后長度為 712 bp，G + C 含量為 58.1%，檢測到 71 個變異位點（ 9.97%） ，共定義了 37 個單倍型；中國櫻桃、歐洲甜櫻桃和毛櫻桃的單倍型多樣性和核酸多樣性分別為 0.840 和 0.00466、 0.928 和 0.00396、 0.905 和 0.00564，中國櫻桃中栽培種質(zhì)遺傳多樣性明顯低于其野生資源； （ 2）種間遺傳關(guān)系顯示，中國櫻桃與歐洲甜櫻桃之間的遺傳距離較近（ 0.019） ，而與毛櫻桃遺傳距離較遠（ 0.048） ； （ 3）鄰接聚類和單倍型網(wǎng)絡(luò)分析顯示 3 個種分別聚為 3 個分支，種間具有較大的遺傳分化。同時，選擇 3 個種的代表單倍型進行其 ITS 序列的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析， 3 個種之間 ITS1 區(qū)、 ITS2 區(qū)的二級結(jié)構(gòu)差異較大，最小自由能差異顯著，進一步揭示了 3 個種間的遺傳關(guān)系較遠。綜合分析認(rèn)為， 3 個櫻桃種內(nèi)均具有較高的遺傳多樣性，種間具有較大的遺傳分化，遺傳關(guān)系較遠，其中毛櫻桃與中國櫻桃和歐洲甜櫻桃的遺傳關(guān)系均較遠。 關(guān)鍵詞： 中國櫻桃；歐洲甜櫻桃；毛櫻桃； ITS 序列；單倍型；遺傳多樣性；種間關(guān)系 中圖分類號： S 662.5 文獻標(biāo)志碼： A 文章編號： 0513-353X（ 2018） 01-0126-13 Genetic Diversity and Relationship Analysis Among Cerasus pseudocerasus，C. avium， and C. tomentosa Based on Internal Transcribed Spacer（ ITS）Sequences WANG Hao1， HUANG Zhilin1， CHEN Tao2， ZHANG Jing2， WANG Yan2， CHEN Qing1， TANG Haoru1,2，and WANG Xiaorong1,2,*（1College of Horticulture， Sichuan Agricultural University， Chengdu 611130， China；2Institute of Pomology and Olericulture， Sichuan Agricultural University， Chengdu 611130， China） Abstract： In this study， we sampled a total of 95 samples， including 35 landraces and 35 wild individuals of Chinese cherry from 6 populations across 35 counties of 8 provinces in China， 18 cultivars of European sweet cherry from 10 countries in the world， as well as 7 semi-wild Nanking cherry resources 王 浩，黃智林，陳 濤，張 靜，王 燕，陳 清，湯浩茹，王小蓉 . 基于 ITS 序列的中國櫻桃、歐洲甜櫻桃和毛櫻桃種內(nèi)遺傳多樣性及種間關(guān)系分析 . 園藝學(xué)報， 2018， 45 (1)： 126 138. 127 from 7 counties of 5 provinces in China. Based on internal transcribed spacer（ ITS） sequences， we tried to study the genetic diversity within species and interspecific relationship among them. The final ITS dataset contained 712 aligned nucleotides， with 58.1% of G + C content， of which 71（ 9.97%） were variable sites. The ITS sequences defined 37 haplotypes. The haplotype diversity（ Hd） and nucleic acid diversity（ ）of C. pseudocerasus， C. avium， and C. tomentosa were（ 0.840， 0.00466） ， （ 0.928， 0.00396） and（ 0.905，0.00564） ， respectively. Within C. pseudocerasus， the genetic diversity of germplasm（ Hd= 0.726， = 0.00224） was significantly lower than that of wild resource（ Hd= 0.914， = 0.00681） . Interspecific genetic relationship analysis showed close relationship（ 0.019） between Chinese cherry and sweet cherry， while they revealed further relationship with Nanking cherry. Both Neighbor-Joining reconstruction and haplotype network showed three distinct branches with obvious genetic differentiation among the three species. In addition， there were significant differences in the secondary structure of the ITS1 and ITS2 regions and t-detection of the minimum free energy. Based on above results， there were high genetic diversity and obvious genetic differentiation among three cherry cultivated species. Close relationship was detected between Chinese cherry and European sweet cherry， while far distance between Nanking cherry with them. Keywords： Cerasus pseudocerasus； C. avium； C. tomentosa； ITS sequence； haplotype； genetic diversity； interspecific relationship 中國櫻桃 Cerasus pseudocerasus（ Lindl.） G. Do n、歐洲甜櫻桃 C. avium（ L.） Moench和毛櫻桃 C. tomentosa（ Thunb.） Wall.隸屬薔薇科（ Rosaceae）李亞科（ Prunoideae）櫻屬（ Cerasus Mill.）（俞德浚， 1986） 。中國櫻桃和毛櫻桃起源于中國，其中中國櫻桃在中國已有近 3 000 年的栽培歷史（俞德浚， 1979；劉長江和劉美洲， 1993） ；歐洲甜櫻桃的野生祖先 Mazzard被認(rèn)為起源于亞洲西部和歐洲東南部（ Harlan， 1971； Mariette et al.， 1997； Hanelt et al.， 2001） ， 4 000 5 000 年前開始栽培馴化（ Janick， 2005； Meyer & Purugganan， 2013） ，現(xiàn)在世界各地廣泛栽培。在這 3 個櫻桃栽培種中，中國櫻桃果實甜酸適度，風(fēng)味濃郁，可溶性固形物含量 11.0% 34.0%，多數(shù)超過 20%，但果實較小，不耐儲運（黃曉姣 等， 2013；陳 濤 等， 2016） ；而毛櫻桃主要是野生和半野生分布（游泳 等， 1991） ；歐洲甜櫻桃果實較大（ 4.0 15.0 g） ，較耐儲運（蔡宇良 等， 2005；呂秀蘭 等， 2005；賈?；? 等， 2007） ，在生產(chǎn)上很受歡迎（韓禮星 等， 2008） 。研究資源遺傳多樣性和遺傳關(guān)系對于櫻桃良種選育和產(chǎn)業(yè)發(fā)展意義重大，培育優(yōu)缺點互補的品種是育種學(xué)家們進一步努力的方向。 對栽培櫻桃遺傳多樣性與種間遺傳關(guān)系的研究已有報道，如 RAPD（ Cai et al.， 2007） 、 ISSR（ Li et al.， 2009；宋常美 等， 2011； Najafzadeh et al.， 2014） 、 RFLP（曹東偉 等， 2007）和 SRAP（路娟 等， 2009； Abedian et al.， 2012）等分子標(biāo)記或 DNA 序列（ China Plant BOL Group， 2011； Bai et al.， 2014； Chen et al.， 2015）有較多應(yīng)用。但這些研究只涉及到櫻屬中某單一種或種內(nèi)某一類群的遺傳多樣性，使用的標(biāo)記類型較單一，所揭示的多態(tài)性位點有限，且不同分子標(biāo)記的適用性也不盡相同。目前基于 ITS 序列對于中國櫻桃、歐洲甜櫻桃及毛櫻桃 3 個種全面系統(tǒng)的遺傳多樣性及遺傳關(guān)系還未見報道。 本研究中選擇具代表性的中國櫻桃、 歐洲甜櫻桃和毛櫻桃進行 ITS 序列測定和分析， 以期從 ITS的 DNA 序列變異角度揭示種內(nèi)的遺傳多樣性及 3 個種間的遺傳關(guān)系，探討其在櫻屬種間關(guān)系研究中的應(yīng)用價值，為櫻桃資源的有效保護、核心種質(zhì)構(gòu)建和育種利用以及 ITS 在櫻屬植物資源鑒定利用提供參考依據(jù)。 Wang Hao， Huang Zhilin， Chen Tao， Zhang Jing， Wang Yan， Chen Qing， Tang Haoru， Wang Xiaorong. Genetic diversity and relationship analysis among Cerasus pseudocerasus， C. avium， and C. tomentosa based on internal transcribed spacer（ ITS） sequences. 128 Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (1)： 126 138. 1 材料與方法 1.1 材料 2009 2015 年，在對中國櫻桃資源全面調(diào)查、收集和評價基礎(chǔ)上，選取中國櫻桃栽培品種（種質(zhì)） 35 份 8 省， 35 個縣（市）和野生種質(zhì) 35 份 6 個群體， 35 個個體、歐洲甜櫻桃 18 個品種（來自 10 個國家，均采自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所） 、毛櫻桃 7 份 5 省， 7 個縣（地區(qū)） ，半野生栽培，共 95 份材料（表 1） ，采集幼嫩葉片，變色硅膠干燥后密封袋封存?zhèn)溆谩? 1.2 基因組 DNA 提取、 PCR 擴增及測序 采用改良 CTAB 法（ Chen et al.， 2013）提取基因組 DNA。選取 ITS 通用引物 ITS5（ 5-GGAAGTAAAAGCGTAACAAGG-3）和 ITS4（ 5-TCCTCCGCTATATGATATGC-3） （ Vijayan et al.， 2009） 進行目的片段 PCR 擴增。 采用 25 L 反應(yīng)體系， 包括 10× PCR Buffer10 mmol · L-1Tris-HCl（ pH 8.0） 、 50 mmol · L-1KCl、 1.5 mmol · L-1EDTA4.0 L、 MgCl2（ 25 mmol · L-1） 2.4 L， dNTP mix（ 10 mmol · L-1） 2.8 L，正、反引物各 3.5 pmol · L-1， 1.5 U Taq DNA 聚合酶（北京天根）以及 30 50 ng DNA 模板。擴增反應(yīng)程序為 94 預(yù)變性 4 min， 94 變性 45 s， 53復(fù)性 90 s， 72 延伸70 s，共 32 個循環(huán)，最后 72 延伸 10 min。擴增產(chǎn)物經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測合格后送至深圳華大基因公司進行雙向測序，比對后的序列提交至 GenBank 并獲得登錄號（ KY749248-KY749337） 。 1.3 數(shù)據(jù)處理和分析 采用 Lasergene 7.0 軟件包的 SeqMan 對正反向序列進行拼接（ Burland， 2000） ，參照 Chromas序列峰圖對誤讀位點進行人工校正。對拼接好的序列采用 MEGA 6.0（ Lewis et al.， 2013）進行比對，統(tǒng)計序列長度、堿基組成；采用 Kimura 2-parameter 模型計算單倍型之間的遺傳距離，構(gòu)建 NJ（ Neighbor-Joining）系統(tǒng)發(fā)育樹，同時以自展法（ bootstrap）進行檢驗， 1 000 次重復(fù)。種間遺傳分化系數(shù)（ Fst）利用 Arlequin 3.0 軟件包（ Excoffier et al.， 2005）進行計算，并進行 1 000 次隨機抽樣的顯著性檢驗。利用 DnaSP 5.1（ Librado， 2009）軟件計算單倍型個數(shù)（ H） 、單倍型多樣性（ Hd） 、核苷酸多樣性（ ）等遺傳多樣性指標(biāo)。 采用 Network 4.2.0.1（ Forster et al.， 2004）的 Median-joining（ MJ）算法（ Bandelt et al.， 1999）對單倍型數(shù)據(jù)進行網(wǎng)狀支系分析并作圖， 并用溯祖理論來推測分析單倍型間的親緣關(guān)系。 利用 Vienna RNA server（ Hofacker， 2003）網(wǎng)絡(luò)工具對 ITS 單倍型進行二級結(jié)構(gòu)預(yù)測，改善和提高系統(tǒng)發(fā)育分析的可靠性（ Caetano-Anollés， 2002） 。 2 結(jié)果與分析 2.1 ITS 序列特征及遺傳多樣性分析 中國櫻桃 ITS 序列長度范圍為 702 703 bp，歐洲甜櫻桃為 704 705 bp，毛櫻桃為 709 bp（表1） 。所有擴增序列比對后長度為 712 bp，共檢測到 71 個變異位點（表 2） ，占總位點的 9.97%， ITS1區(qū)存在 40 個， 5.8S 區(qū) 3 個， ITS2 區(qū) 28 個，其中 54 個為簡約信息位點；含插入 /缺失 10 處，長度變異較小（表 1） 。 3 個櫻桃種 ITS 區(qū)域的 G + C 含量在 57.86% 59.77%之間，其中毛櫻桃（ 59.77%）最高，中國櫻桃（ 57.86%）最低（表 3） 。 王 浩，黃智林，陳 濤，張 靜，王 燕，陳 清，湯浩茹，王小蓉 . 基于 ITS 序列的中國櫻桃、歐洲甜櫻桃和毛櫻桃種內(nèi)遺傳多樣性及種間關(guān)系分析 . 園藝學(xué)報， 2018， 45 (1)： 126 138. 129 表 1 供試材料、來源及其遺傳特性 Table 1 Sampling location used in this study and genetic characteristics 櫻桃 Cerasus 來源 Origin 采樣地 Location 品種 /編號 Cultivar/Code 單倍型 Haplotype 序列長度 /bp Length 中國櫻桃（栽培）C. pseudocerasus （ Landrace） 四川 Sichuan 雅安 Yaan 名山 Mingshan 滎經(jīng) Yingjing 石棉 Shimian 漢源 Hanyuan 丹棱 Danleng 西昌 Xichang 蒲江 Pujiang 簡陽 Jianyang 峨眉 Emei 青川 Qingchuan 北川 Beichuan 雅安紅櫻桃 Yaan Hongyingtao M64 YJ65 S138 HY153 Mei85 X101， D104， X109 紫櫻桃 Ziyingtao 白花櫻桃 Baihua Yingtao EM130 QX541 BT517，白櫻桃 BaiYingtao H1 H2 H1 H3 H2 H2 H2， H4， H5 H1 H3 H2 H2 H1， H2 702 702 702 703 702 702 702 702 703 702 702 702 重慶 Chongqing 涪陵 Fuling 巴南 Banan F2559 黑珍珠 Heizhenzhu H1 H1 702 702 陜西 Shaanxi 商南 Shangnan 漢中 Hanzhong 佛坪 Foping 西鄉(xiāng) Xixiang SX410 HZ301 小籽紅櫻桃 Xiaozi Hongyingtao 西鄉(xiāng)紅櫻桃 Xixiang Hongyingtao H2 H1 H6 H6 702 702 702 702 安徽 Anhui 太和 Taihe 米兒紅 Mierhong H2 702 貴州 Guizhou 貴陽 Guiyang 畢節(jié) Bijie 大葉紅櫻桃 Daye Hongyingtao 瑪瑙紅 Ma'naohong H7 H8 702 703 河南 Henan 洛陽 Luoyang 鄭州 Zhengzhou 鄭州 Zhengzhou 洛陽古櫻 Luoyang Guying 燥櫻桃 Zaoyingtao 笨櫻桃 Benyingtao H2 H1 H2 702 702 702 甘肅 Gansu 天水 Tianshui 天水 Tianshui 大平葉 1 Dapingye 1 大平葉 2 Dapingye 2 H1 H2 702 702 山東 Shandong 臨朐 Linqu 五蓮 Wulian 諸城 Zhucheng 安丘 Anqiu 昌邑 Changyi 昌樂 Changle 小紅櫻 Xiaohongying 紅櫻桃 Hongyingtao 黃櫻桃 Huangyingtao 紅櫻桃 Hongyingtao 櫻珠 Yingzhu 紅櫻桃 Hongyingtao H2 H1 H1 H8 H2 H2 702 702 702 703 702 702 中國櫻桃（野生） C. pseudocerasus （ Wild） 四川 Sichuan 西昌 Xichang, 青川 Qingchuan 石棉 Shimian 雅安 Yaan 北川 Beichuan 西昌群體 Xichang（ 5） 青川群體 Qingchuan（ 5） 石棉群體 Shimian（ 5） 雅安群體 Yaan（ 5） 北川群體 Beichuan（ 11） H9， H10 H1， H2， H8， H12 H1， H2， H13， H14 H1， H8， H15， H16， H17 H1， H2， H8， H15， H18， H19， H20， H21 702 703 702 703 702 703 702 703 702 703 貴州 Guizhou 貴陽 Guiyang 貴陽群體 Guiyang（ 4） H2， H7， H11 702 703 歐洲甜櫻桃 C. avium 美國 USA * 濱庫 Bing 美早 Tieton H22 H22 704 704 加拿大 Canada * 先鋒 Van 拉賓斯 Lanpins 斯坦勒 Stella H24 H24 H25 704 704 704 烏克蘭 Ukraine * 維卡 Vega 早大果 KpynHonnoAHa H29 H26 705 705 德國 Germany * 斯卡奈德斯 Scheiders 雷佶娜 Regina H30 H25 705 704 歐洲 Europe * 那翁 Napoleon 馬扎德 Mazzard H32 H22 705 704 日本 Japan * 佐藤錦 Satonishiki 豐錦 Yutakanihiki H25 H27 704 704 捷克 Czech * 柯迪亞 Kordia H22 705 法國 France * 勃蘭特 BID.Burlat H28 704 意大利 Italy * 莫莉 Bigarreau Moreau H31 704 匈牙利 Hungary * Mnchebergi korai H31 704 蘇聯(lián) Soviet Union * 大紫 Black Tartarian H23 704 Wang Hao， Huang Zhilin， Chen Tao， Zhang Jing， Wang Yan， Chen Qing， Tang Haoru， Wang Xiaorong. Genetic diversity and relationship analysis among Cerasus pseudocerasus， C. avium， and C. tomentosa based on internal transcribed spacer（ ITS） sequences. 130 Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (1)： 126 138. 續(xù)表 1 櫻桃 Cerasus 來源 Origin 采樣地 Location 品種 /編號 Cultivar/Code 單倍型 Haplotype 序列長度 /bp Length毛櫻桃 河南 Henan 鄭州 Zhengzhou 鄭州毛櫻桃 Zhengzhou Maoyingtao H34 709 C. tomentosa 新疆 Xinjiang 大西溝 Daxigou 新疆毛櫻桃 Xinjiang Maoyingtao H35 709 甘肅 Gansu 定西 Dingxi 天水 Tianshui 平?jīng)?Pingliang 定西毛櫻桃 Dingxi Maoyingtao 天水毛櫻桃 Tianshui Maoyingtao 平?jīng)雒珯烟?Pingliang Maoyingtao H37 H33 H37 709 709 709 山東 Shandong 昌邑 Changyi 山東毛櫻桃 Shandong Maoyingtao H34 709 四川 Sichuan 瀘定 Luding 瀘定毛櫻桃 Luding Maoyingtao H36 709 注： * 是指采集于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所。括號內(nèi)數(shù)字表示樣品數(shù)量。 Note： * Represents samples collected from Zhengzhou Fruit Research Institute， Chinese Academy of Agricultural Science（ CAAS） . The numbers in bracket represent the number of samples. 表 2 櫻桃 37 個單倍型的 ITS 序列差異位點 Table 2 Variable sites of the aligned ITS sequences in the 37 haplotypes in three cherry species 單倍型 Haplo- type 變異位點 Polymorpmorphic site ITS1 61 62 67 69 79 81 88 95 96 97 99 100 104 128 130 134 135 136 137 142 144 148 149 151 157 159 163 185 189 203 208 225 230 233 245 H1 C C A T C C T T C T G A A G G T C G T T C A A A T T T T T C T G C G C H2 . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H3 . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . C . . . . . . . H4 . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H5 . . . . G . . . . . . . . . . G . . . . . . . C . . . C . . . A A . . H6 . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H7 . . . . G . . . . . . . . . . G . A . . . . . C . . . C . . . . A . . H8 . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H9 . . . . G . . . . . . . . . . G . . . . . . . C . . . C . . . A A . . H10 . . . . G . . . . . . . . . . G . . . . . . . C . . . C . . . A A . . H11 . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . C . . . C . . . . . . . H12 . . . . G . . . . . . . . . . . T . . . . . . . . . . . . . . . . . . H13 . . . . G . . . . . . . . . . . T . . . . . . . . . . . . . . . . . . H14 . . . . G . . . . . . . . . . G . . . . . . . C . . . C . . . A A . . H15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H16 . . . . . . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H17 . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H18 . . T . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . C . . . . . . H19 . . . . G . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H20 . . . . G . . . . . . . . . . . T . . . . . . . . . . . . . . . . . . H21 A G . . G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H22 . . . . G G . . . . . . . A . G . A . . . . . C . . . C . T . . . . . H23 . . . C G G G . . . . . . A . G . . . . . . . C . . . C . T . . . . . H24 . . . . G G . . . . . . . A . G . A . . . . . C . . . C . T . . . A . H25 . . . . G G . . . . . . . A . G . A . . . . . C . . . C . T . . . . . H26 . . . . G G G . . . . . . A . G . . . . . . . C . . . C . T . . . . . H27 . . . . G G G . . . . . . A . G . A . . . . . C . . . C . T . . . . . H28 . . . . G G G . . . . . . A . G . . . . . . . C . . . C . T . . . . G H29 . . . C G G . . . . . . . A . G . A . . . . . C . . . C . T . . . . . H30 . . . C G G . . . . . . . A . G . A . . . . . C . . . C . T . . . . . H31 . . . C G G . . . . . . . A . G . A . . . . . C . . . C . T . . . . . H32 . . . . G G . . . . . . . A . G . A . . . . . C . . . C . T . . . . . H33 . . . . G . C C . G C T T . . G . . C C . G G C A C G C . T C . . . . H34 . . . . G . C C . G C T T . T G . . C C . G G C A C G C . T C . . . . H35 . . . . G . C C . G C T T . T G . . . C . G G C A C G C . T C . . . . H36 . . . . G . C C T G C C T . . G . . . C G G G C A C G C . T C . . . . H37 . . . . G . C C . G C T T . T G . . C C . G G C A C G C . T C . . . . 單倍型 Haplo- 變異位點 Polymorpmorphic site ITS1 5.8S ITS2 type 246 247 251 253 254 280 293 342 436 447 448 455 463 475 478 498 501 502 503 509 525 535 538 540 541 554 579 592 605 607 615 623 626 637 641 642H1 G C C G C C C T A C A A C G T A C T C C A C C A C A G G C G T G T T A T H2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . T . H4 T T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A H5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . H6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . T . . . . . . . . . . . . . . . . . H7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 王 浩，黃智林，陳 濤，張 靜，王 燕，陳 清，湯浩茹，王小蓉 . 基于 ITS 序列的中國櫻桃、歐洲甜櫻桃和毛櫻桃種內(nèi)遺傳多樣性及種間關(guān)系分析 . 園藝學(xué)報， 2018， 45 (1)： 126 138. 131 續(xù)表 2 單倍型 Haplo- type 變異位點 Polymorpmorphic site ITS1 5.8S ITS2 246 247 251 253 254 280 293 342 436 447 448 455 463 475 478 498 501 502 503 509 525 535 538 540 541 554 579 592 605 607 615 623 626 637 641 642H8 T T . . . . . .</p>
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