葡萄傷流液中內生菌分離鑒定與抗病功能分析.pdf

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葡萄傷流液中內生菌分離鑒定與抗病功能分析.pdf

<p>園藝學報， 2018， 45 (11)： 2106 2120. Acta Horticulturae Sinica   2106                                                 doi： 10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0125； http： /www. ahs. ac. cn 收稿日期： 2018 07 08；修回日期： 2018 10 30 基金項目：中央高校基本科研業(yè)務費項目（ KYZ201736）；國家現代農業(yè)產業(yè)技術體系建設專項資金項目（ CARS-29-yc-1）；國家自然科學基金面上項目（ 31672131）；江蘇省自然科學基金青年基金項目（ BK20140708）；江蘇省農業(yè)科技自主創(chuàng)新項目 CX（ 18） 2008 * 通信作者  Author for correspondence（ E-mail： jiahaifengnjau.edu.cn， fanggg njau.edu.cn）  葡萄傷流液中內生菌分離鑒定與抗病功能分析  鄭  婷，張培安，張克坤，糾松濤，朱旭東，宋長年，賈海鋒*，房經貴*（南京農業(yè)大學園藝學院，江蘇省果樹品種改良與種苗繁育工程中心，南京  210095）  摘  要：為探究葡萄樹液中內生菌的種類，對白羅莎里奧葡萄傷流液中的內生菌進行分離純化，得到 4 株普遍存在的有益菌株，根據形態(tài)特征、生理生化特性及 16S rDNA 序列同源性對其進行鑒定，并針對葡萄灰霉病病原菌進行抑菌測試。結果表明， 4 種內生菌分別為粘紅酵母菌、隱球菌、水拉恩式菌、變形斑沙雷菌；平板抑菌試驗顯示，隱球菌、水拉恩式菌、變形斑沙雷菌均對灰霉病菌有一定的拮抗作用。對葡萄果粒的病菌侵染試驗表明，隱球菌、水拉恩式菌、變形斑沙雷菌均能使果粒失水速率降低、灰霉病病斑縮小，抗菌物質類黃酮、總酚以及 SOD、 CAT、 POD、 PPO 活性升高，灰霉病抗病相關基因VvHSF 和 VvDR 下調， VvPR17、 VvDW、 VvChi 和 VvWRKY 上調，且上調程度與抗病能力呈正相關，進一步表明了隱球菌、水拉恩式菌、變形斑沙雷菌對灰霉病菌有一定的抑制作用，在葡萄灰霉病防治中具有良好的應用潛力。  關鍵詞：葡萄；傷流液；內生菌；鑒定；抗?。换颐共【? 中圖分類號： S 663.1        文獻標志碼： A         文章編號： 0513-353X（ 2018） 11-2106-15 Isolation and Identification of Endophytes from Grape Bleeding Sap and Their Disease Resistance Function Analysis  ZHENG Ting， ZHANG Peian， ZHANG Kekun， JIU Songtao， ZHU Xudong， SONG Changnian，JIA Haifeng*， and FANG Jinggui*（ College of Horticulture， Nanjing Agricultural University， Fruit Crop Variety Improvement and Seedling Propagation Engineering Center of Jiangsu Province， Nanjing 210095， China）  Abstract： In order to explore the roles of grape endophytes played in grey mould resistance， four universal endophyte strains（ Rhodotorula mucilaginosa， Cryptococcus， Rahnella aquatilis and Serratia proteamaculans） were closely related， but far from Rhodotorula mucilaginosa and Cryptococcus） were isolated and purified from grape bleeding sap. Morphological observation， physiological characterization and 16S rDNA sequence analysis suggested Rahnella aquatilis and Serratia proteamaculans were closely related， but far from Rhodotorula mucilaginosa and Cryptococcus. In vitro antibacterial effects of the isolated endophytes were tested via plate co-cultivation and grape berry co-infection of both grey mould and the individual endophyte. The results indicated strong inhibition of grey moulds growth by Cryptococcus， Rahnella aquatilis and Serratia proteamaculans. In addition， berries co-infected with Botrytis cinera and the endophyte showed reduced rate of water loss， increased anti-disease metabolites  鄭   婷，張培安，張克坤，糾松濤，朱旭東，宋長年，賈海鋒，房經貴 . 葡萄傷流液中內生菌分離鑒定與抗病功能分析 . 園藝學報， 2018， 45 (11)： 2106 2120.                                                                                 2107 （ flavonoids and total phenols） and the increment activities of SOD， CAT， POD， and PPO， together with the increased expression of disease resistant genes VvPR17， VvDW， VvChi and VvWRKY. These shed lights on the pathways endophytes participating in Botrytis cinera resistance. These results are of practical interest for improving grapevine resistance to grey mould. Keywords： grape； bleeding sap； endophyte； identification； disease resistance； Botrytis cinera 由灰葡萄孢（ Botrytis cinerea）侵染引起的葡萄采后灰霉病常造成很大經濟損失（陳宇飛  等，2006； Latorre et al.， 2015）。傳統(tǒng)的農業(yè)和化學防治措施對生態(tài)環(huán)境和人體安全存在一定隱患（石延霞  等， 2014），隨著生態(tài)農業(yè)的發(fā)展，生物防治成為病害防治的研究熱點（周登博  等， 2017；Rahman et al.， 2018），開發(fā)新型生物農藥成為當前發(fā)展趨勢（ Thandavelu et al.， 2003）。目前已有數種微生物被證實對葡萄灰霉病菌具有拮抗作用，如枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis（ Rotolo et al.， 2017）、綠色木霉 Trichoderma viride（康萍芝  等， 2007）、粉紅粘帚霉 Gliocladium roseum（孟祥東  等， 2015）、假絲酵母 Candida guilliermondii（ Zahavi et al.， 2000）、季也蒙畢赤氏酵母 Pichia guilliermondii（ Saligkarias et al.， 2002）、羅倫隱球酵母 Ctyptocccus laurentii（ Yu et al.， 2008）等，其抑菌率達20% 80%。傳統(tǒng)的生物防治僅僅依賴于外源微生物，這導致外源微生物本身和次級代謝產物的安全性無法保證，因此篩選出植物自身內生菌進行生物防治顯得尤為重要（周泠璇和劉婭， 2016）。  內生菌是生活在植物體內而不會引起植物產生明顯病害病癥的一類真菌或細菌（ Hartley et al.，2015； Wani et al.， 2015）。內生菌來源廣，種類多，其合成物大多具有抗菌、生物防治等活性（劉慧芹  等， 2014； Nair & Padmavathy， 2014； Azad & Kaminskyj， 2016； Yang et al.， 2016；王春偉  等，2018）。葡萄上關于內生菌的研究多數是圍繞根、莖、葉片、果梗、果肉和果皮等展開的（ Chambers et al.， 2010； Yang et al.， 2016），本研究中以葡萄休眠期樹液為材料，分離其傷流液中普遍存在的內生菌，通過抑菌測試尋找對灰霉病菌具有拮抗作用的內生菌，為開發(fā)葡萄天然生物抑菌劑提供科學依據。  1  材料與方法  1.1  試材與內生菌分離純化  試材為江蘇省句容市陳武鎮(zhèn)江蘇省農博園（ 119.2E， 32.0S）內 5 年生白羅莎里奧葡萄樹液流動期的樹液（即傷流液）。 2017 年 3 月中旬（樹液流動期），選擇健壯枝條，在其頂端剝離韌皮部5 cm 左右，露出木質部，用乙醇和無菌水沖洗，用脫脂棉包裹韌皮部頂端，使用經高溫滅菌的 50 mL開口離心管收集傷流液 15 mL，然后在無菌條件下用不結合蛋白質的 0.22 µm 微濾膜過濾。  采用平板分離法，參考李太元和許廣波（ 2015）的方法制作 PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）用于培養(yǎng)真菌和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細菌，取 200 µL 傷流液均勻涂板，以涂蒸餾水作為對照，置于 28 恒溫培養(yǎng)箱中。培養(yǎng) 2 4 d 后挑取平板上的單菌落分別接種于 PDA 培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，歷時 3 4 代經反復純化得到較純的菌株。  1.2  內生菌鑒定  1.2.1  形態(tài)學與生理生化鑒定使用 Leica TL 3000 Ergo 體視顯微鏡通過 NA 0.73 分辨率觀察內生菌的外觀形態(tài)，使用 Leica Zheng Ting， Zhang Peian， Zhang Kekun， Jiu Songtao， Zhu Xudong， Song Changnian， Jia Haifeng， Fang Jinggui. Isolation and identification of endophytes from grape bleeding sap and its disease resistance function analysis. 2108                                                                    Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (11)： 2106 2120. DM4 B 正置顯微鏡 10× 目鏡、 40× 物鏡觀察內生菌的細胞形態(tài)， 20× 物鏡通過結晶紫（初染）碘液（酶染）酒精（脫色）蕃紅（復染）鑒定內生菌的革蘭氏屬性，對其形態(tài)學特征加以描述。  參考李太元和許廣波（ 2015）的方法對內生菌進行碳源（葡萄糖、木糖、麥芽糖、山梨醇、甘露醇、棉子糖、側金盞花醇）利用測定，并對 pH 值、硝酸鹽還原、氨基酸、 H2S 產氣等相關生理生化指標進行測定。  1.2.2  分子生物學鑒定參考丁延芹等（ 2014）報道的總 DNA 提取方法。模板采用挑取菌落制成的菌液，真菌鑒定 28S rDNA，引物為 ITS 1（ TCCGTAGGTGAACCTGCGC）和 ITS 4（ TCCGTAGGTGAACCTGCGC）；細菌鑒定 16S rDNA，引物為 27 F（ AGAGTTTGATCCTGGCTCAG）和 1492 R（ TACGGCTACCTTGTA CGACTT）。擴增采用 25 µL 反應體系（ 2 µL 模板菌液、 12.5 µL mix、 1 µL Primer 1、 1 µL Primer 2、8.5 µL ddH2O），反應過程： 94 預變性 5 min， 94 變性 30 s， 55 退火 30 s， 72 延伸 90 s， 35個循環(huán)后 72  10 min。 PCR 產物采用 AXYGEN AP-GX-50G AxyPrep DNA 凝膠回收試劑盒回收，與 pMD19-T Vector 載體連接，轉化 Trans 5 的感受態(tài)細胞。按照下列組分配制連接反應液： pMD19-T Vector 0.5 µL，回收產物 5 µL， Solution I 4.5 µL。反應條件： 16 連接過夜。用含 100 mg · L-1氨芐霉素的 LB 選擇培養(yǎng)基篩選陽性菌落，提取重組子質粒的 DNA，經通用引物 PCR 驗證送上海生工測序。測序結果用 NCBI BLAST 軟件進行序列分析，搜索相似性最高的序列，并利用 MEGA 7 軟件制作系統(tǒng)發(fā)育樹，鑒定出內生菌。  1.3  內生菌對灰霉病菌抗性鑒定  1.3.1  與灰霉病菌的平板檢測灰霉病菌來自本實驗室保存，使用時將斜面菌種轉接至 PDA 平板， 28 培養(yǎng)，待產孢子后挑取菌塊至無菌水中，用雙層紗布過濾獲得分生孢子懸浮液并稀釋為 105分生孢子  · mL-1的孢子懸浮液。  每組 4 個處理：分別吸取內生菌 100 µL 涂于 PDA 培養(yǎng)基平板上，在平板中央接種灰霉病菌菌塊 3 mm × 3 mm（即內生菌病原菌）；吸取灰霉病病原菌菌液 100 µL 凃板，中央接種內生菌菌液50 µL（即病原菌內生菌）；另外分別凃板內生菌和灰霉病病原菌菌液作為對照。每個處理 3 組重復。觀察平板的生長狀況，使用 0.1 mm 游標卡尺測定抑菌圈大小。  1.3.2  與灰霉病菌互作的離體驗證培養(yǎng)內生菌的懸浮液以及灰霉病菌的孢子懸浮液，利用血球計數板計算濃度，將孢子含量控制在 108 · mL-1左右。  參考申順善等（ 2016）的方法在果實成熟期取長勢良好且大小、成熟度基本一致的陽光玫瑰果粒，分為 5 組，每組 20 個，先用自來水沖洗 30 min，再用 75%乙醇進行表面消毒，用無菌水沖洗 3 次備用。使用滅菌解剖針在果粒表面均勻刺傷 3 個小孔，用注射器分別注射無菌水和 4 種純化內生菌菌液 100 µL，然后再將每個處理分為兩組，一組 10 個果粒不處理，一組 10 個果粒待果面水分吸收后均勻噴灑灰霉病菌分生孢子懸浮液，置于 28 恒溫箱進行保濕培養(yǎng)。觀察果面染菌情況，記錄病菌圈大小及顏色，用血球計數板統(tǒng)計孢子數，每日稱量果粒質量，計算果粒失水速率：（原果粒質量稱量質量） /原果粒質量。切取病斑附近 1 cm 內果肉用液氮速凍，保存于 80 冰箱備用。  參考曹建康等（ 2007）的方法測定果肉樣品類黃酮、總酚含量和 SOD、 POD、 CAT、 PPO 等相關酶活性：采用氮藍四唑（ NBT）法測定超氧化物歧化酶（ SOD）活性，紫外吸收法測定過氧化氫酶（ CAT）活性，愈創(chuàng)木酚法測定過氧化物酶（ POD）活性，鄰苯二酚比色法測定多酚氧化酶（ PPO）活性；采用 NaNO2-Al(NO3)3比色法測定類黃酮含量， Folin-Ciocalteu 比色法測定總酚含量。  鄭   婷，張培安，張克坤，糾松濤，朱旭東，宋長年，賈海鋒，房經貴 . 葡萄傷流液中內生菌分離鑒定與抗病功能分析 . 園藝學報， 2018， 45 (11)： 2106 2120.                                                                                 2109 利用改良 CTAB 法分別從離體侵染 4 d 后的葡萄果粒中提取總 RNA（初雪鵬  等， 2014）。取完整性良好的總 RNA 經 RNase-Free DNase處理（ TaKaRa， Japan），通過 Smart SpecTMPlus 微量分光光度計（ Bio-Rad， California， USA）獲得 OD230 和 OD260 以評估 RNA 樣品的質量和濃度。使用 PrimeScriptTMRT 試劑盒（ TaKaRa， Tokyo， Japan），按照公司產品說明書操作合成 cDNA。使用Primer 5 軟件（ http： /www.premierbiosoft.com/）設計的用于 qRT-PCR 的引物（表 1），選定 VvActin作內部對照基因，檢測抗病相關基因的相對表達水平。  表 1  本研究所采用的引物序列  Table 1  Sequence of the primers used in this study 基因  Gene 上游引物（ 5 3）  Forward primer 下游引物（ 5 3）  Reverse primer NCBI 登錄號  NCBI accession number VvWRKY GGAAAGGAAACCCTCTCCAG TCAGCCTTCCTCTTCCTTGA JF500755 VvRP17 ACACACATTTGGCAGTGGAA CCCATTTCTAAGGCTGTTGC JQ248075 VvHSF CGGCTGTGGACGATCTTATT CTCCTTTGCGGAAGTAGTCG GU393313 VvDW AATCCTGGATGATGGGTTCA GGCTTTCGTGGTTATGGATG LOC100266400 VvDR CGGATTCTCCATTCCAAGAA CAAACCGTGAAACGGAAACT XM_002265958.3 VvChi CCCTCAATGCCCATTCCAAG AGTCCACCGGTTCCATGAAT XM_002266547.4VvActin TGAGCAAGGAAATTACTGCC TCATCGTATTCACCCTTGGA LOC100246825 采用 Microsoft Excel 2016 軟件處理數據和制圖，利用 SPSS 軟件進行方差分析，用鄧肯氏新復極差法檢驗顯著性， P  No.3水拉恩式菌  > No.2 隱球菌。  對葡萄果粒先行接種內生菌，再接種灰霉病病原菌，由圖 3 可知，內生菌 No.1 菌株與無菌水對照處理后染菌的情況類似，病原孢子及腐爛面積持續(xù)擴增，證實 No.1 菌株抑制灰霉病菌的效果不明顯；內生菌 No.2、 No.3、 No.4 菌株有不同程度的抑菌能力，病原孢子不產生或者產生較慢，且較對照果肉腐爛的范圍較較小。  表 4  內生菌 No.1、 No.2、 No.3 和 No.4 對葡萄灰霉病菌生長抑制作用的抑菌圈大小  Table 4  Inhibition zone of No.1， No.2， No.3 and No.4 endophytes to grape Botrytis cinera                cm 互作關系  Interaction No.1 No.2 No.3 No.4 內生菌病原菌  Endophyte Pathogen 0 （ 0.85 ± 0.03） ×（ 1.35 ± 0.04）  （ 2.34 ± 0.15）  × （ 2.48 ± 0.08）（ 2.86 ± 0.06） ×（ 3.74 ± 0.05）病原菌內生菌  Pathogen Endophyte 0 （ 4.24 ± 0.12） ×（ 1.95 ± 0.06）  （ 6.23 ± 0.07）  × （ 4.44 ± 0.10）（ 9.12 ± 0.11） ×（ 8.54 ± 0.11）Zheng Ting， Zhang Peian， Zhang Kekun， Jiu Songtao， Zhu Xudong， Song Changnian， Jia Haifeng， Fang Jinggui. Isolation and identification of endophytes from grape bleeding sap and its disease resistance function analysis. 2112                                                                    Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (11)： 2106 2120. 圖 2  內生菌 No.1、 No.2、 No.3 和 No.4（ No.）對葡萄灰霉病菌（ Bc）的平板抑菌驗證   Fig. 2  Plate bacteriostatic test on grape Botrytis cinera（ Bc） of No.1， No.2， No.3 and No.4（ No.） endophytes 圖 3  內生菌 No.1、 No.2、 No.3 和 No.4 對葡萄灰霉病菌的防治效果圖  Fig. 3  The control efficiency of No.1， No.2， No.3 and No.4 endophytes against grape Botrytis cinera in vitro 鄭   婷，張培安，張克坤，糾松濤，朱旭東，宋長年，賈海鋒，房經貴 . 葡萄傷流液中內生菌分離鑒定與抗病功能分析 . 園藝學報， 2018， 45 (11)： 2106 2120.                                                                                 2113 從病原菌孢子數量（表 5）來看， 3 種內生菌菌株的抑菌效果表現為 No.2 > No.4 > No.3，其中No.2 基本沒有病原菌孢子的產生，但腐爛面積較 No.3、 No.4 處理后大，褐變現象明顯。對接種病原菌的果粒染菌圈進行統(tǒng)計，無菌水對照的染菌范圍最大，可達 0.85 cm，接種 4 d 后 No.4 處理最小，為 0.45 cm。  表 5  病菌接種后染菌圈直徑和病原菌孢子數  Table 5  Inhibition zone and pathogen spores number on grape surface 處理  Treatment 直徑 /cm Diameter 4 d 時孢子數  Pathogen spores number at 4 d1 d 2 d 3 d 4 d 水 Water（對照 Control）  0.15 ± 0.01 a 0.20 ± 0.03 a 0.67 ± 0.04 a 0.85 ± 0.05 a （ 1.08 ± 0.07） × 108 a No.1 0.15 ± 0.01 a 0.20 ± 0.01 a 0.58 ± 0.04 b 0.78 ± 0.03 b （ 8.40 ± 0.53） × 107 b No.2 0.10 ± 0.03 b 0.15 ± 0.02 b 0.44 ± 0.04 c 0.65 ± 0.04 c （ 8.00 ± 0.21） × 105c No.3 0.15 ± 0.02 a 0.18 ± 0.01 a 0.43 ± 0.03 c 0.53 ± 0.03 d （ 2.10 ± 0.53） × 107d No.4 0.15 ± 0.02 a 0.18 ± 0.01 a 0.38 ± 0.03 d 0.45 ± 0.04 e （ 1.60 ± 0.40） × 106d 2.5  內生菌處理的葡萄果粒接種灰霉病菌后的生理特征變化  4 種內生菌處理過的葡萄果粒在接種病原菌后失水速率表現為 No.1 > 對照  > No.2 > No.3 > No.4 處理，且各處理的離體失水速率均呈線性變化（圖 4）。其中， No.1 處理的失水速率最快，處理后 4 d 高達 42.3%，其次為清水對照（ 38.5%）， No.3 與 No.4 處理的失水速率較為接近，處理后4 d 分別為 15.8%和 14.2%。  圖 4  內生菌 No.1、 No.2、 No.3 和 No.4 處理葡萄果粒接種灰霉病菌后失水速率  Fig. 4  Rate of water loss of berries treated with No.1， No.2， No.3 and No.4 endophytes respectively after Botrytis cinera inoculation 葡萄果粒類黃酮和總酚含量在灰霉病病原菌侵染后呈上升趨勢，且上升的速率和幅度與平板檢測的抗病性一致，同樣表現為 No.4 > No.3 > No.2 > No.1  對照，接種 4 d 時 No.4 處理總酚含量最高（ 4.41 mg · g-1），類黃酮含量為 7.20 mg · g-1，整體來看， 4 種內生菌處理在接種后 2 4 d 的上升速率明顯高于 0 2 d（圖 5）。  Zheng Ting， Zhang Peian， Zhang Kekun， Jiu Songtao， Zhu Xudong， Song Changnian， Jia Haifeng， Fang Jinggui. Isolation and identification of endophytes from grape bleeding sap and its disease resistance function analysis. 2114                                                                    Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (11)： 2106 2120. 圖 5  內生菌處理的葡萄果粒接種灰霉病菌后類黃酮物質和總酚含量  Fig. 5  Total polyphenolics and flavonoid content of berries treated with No.1， No.2， No.3 and No.4  endophytes respectively after Botrytis cinera inoculation 從圖 6 可以看出，陽光玫瑰葡萄果粒中 4 種防御酶系在接種病原菌后的變化與其抗病性呈現明顯的相關性， 4 種酶基本都在接種病原菌后 2 d 開始迅速升高，其中 No.2、 No.3、 No.4 內生菌處理在接種后 1 4 d， 4 種防御酶呈現不斷上升的趨勢， CAT 和 PPO 在 3 4 d 上升較為緩慢。從上升幅度來看 No.4 > No.3 > No.2 處理，與平板檢測的抗病性一致； No.1 菌株處理酶活的變化與清水對照基本一致，其中 SOD、 POD、 PPO 活性在病原菌接種后基本無變化或有小幅上升， CAT 活性在接種后呈下降趨勢，且清水對照的下降幅度大于 No.1 處理。  圖 6  內生菌（ No.1、 No.2、 No.3 和 No.4）處理葡萄果粒接種灰霉病后 SOD、 POD、 CAT 和 PPO 的活性  Fig. 6  SOD， POD， CAT and PPO activities of berries treated with No.1， No.2， No.3 and No.4 endophytes  respectively after Botrytis cinera inoculation 鄭   婷，張培安，張克坤，糾松濤，朱旭東，宋長年，賈海鋒，房經貴 . 葡萄傷流液中內生菌分離鑒定與抗病功能分析 . 園藝學報， 2018， 45 (11)： 2106 2120.                                                                                 2115 2.6  內生菌的葡萄果粒接種灰霉病菌后相關基因表達量變化  選取葡萄抗病相關基因 VvWRKY、 VvPR17、 VvDW、 VvChi、 VvHSF 和 VvDR 進行定量檢測，整體來看， No.1 處理中各抗病基因表達量普遍偏低，說明粘紅酵母菌未使葡萄表現出抗病能力，與對照相比， No.2、 No.3、 No.4 處理發(fā)現葡萄 VvPR17、 VvDW、 VvChi 表達量上調，且上調程度與抗病能力呈正相關； VvWRKY 為類黃酮合成的關鍵基因，其在對照中表達量極低，在 4 種內生菌作用的條件下表達量急劇上升，其中 No.2 表達量最高， No.3 和 No.4 表達量相近； VvHSF 和 VvDR 為應激反應的響應基因，病菌侵染后表達量呈大幅下降趨勢（圖 7）。  圖 7  內生菌（ No.1、 No.2、 No.3 和 No.4）處理葡萄果粒接種灰霉病菌后抗病基因的表達  Fig. 7  Disease resistance genes expression of berries treated with No.1， No.2， No.3 and No.4 endophytes respectively after Botrytis cinera inoculation 3  討論  葡萄內生菌菌群豐富（ Pinto et al.， 2014）， Martín 等（ 2013）從榆樹木質部汁液中分離到內生菌，前人已對內生菌的抗病機制進行了廣泛和深入的研究（ Gonzálezteuber， 2016）。水拉恩式菌和變形斑沙雷菌菌種相近，常見于土壤中，對楊樹促生以及楊樹潰瘍病（宋芳旭  等， 2017）、灰霉病，小麥全蝕病以及葡萄相關病害（ Habbadi et al.， 2017）有一定的防治作用，另外其具有良好的保水</p>

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