<p>馬鈴薯早疫病拮抗菌的篩選及其代謝產(chǎn)物 的抑菌活性 楊繼業(yè) 1，2楊 帆 1，2，3崔冠慧 1，2孫勁沖 1，2王雅娜 1，2劉洪偉 1，2程輝彩 1，2張麗萍 1，2* （ 1 河北省科學(xué)院生物研究所，河北石家莊 050081； 2 河北省主要農(nóng)作物病害微生物控制工程技術(shù)研究中心， 河北石家莊 050081； 3 河北工業(yè)大學(xué)，天津300130） 摘 要：以馬鈴薯早疫病病原菌茄鏈格孢菌（Alternaria solani）為指示菌，通過(guò)平板對(duì)峙法，篩選出菌株及其發(fā)酵濾液對(duì)馬 鈴薯早疫病病原菌均具有較強(qiáng)拮抗作用的生防菌株BAF-6；通過(guò)形態(tài)特征、生理生化特性鑒定以及16S rDNA序列分析，該 菌株為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株發(fā)酵濾液經(jīng)6080 熱處理，抑菌活性均在95%以上；紫外線照 射8 h或在pH值為210的酸堿環(huán)境下，發(fā)酵濾液的抑菌活性穩(wěn)定；經(jīng)蛋白酶處理后抑菌活性仍達(dá)50%以上。 關(guān)鍵詞：馬鈴薯；早疫??；拮抗菌；篩選；鑒定；抑菌活性 土壤養(yǎng)分不足，有機(jī)質(zhì)含量下降，導(dǎo)致植株衰弱， 土傳病害增加，如馬鈴薯早疫病病原菌茄鏈格孢菌 （Alternaria solani） ，更易侵染衰弱植株的葉片、 莖稈以及塊莖，危害嚴(yán)重，是馬鈴薯的主要病害之 一（郭潤(rùn)婷 等，2016）。 目前國(guó)內(nèi)外對(duì)馬鈴薯早疫病的防治主要通過(guò)化 學(xué)防治，常用藥劑如丙森鋅、代森錳鋅、霜脲錳鋅 等，化學(xué)農(nóng)藥雖然方便、快速，但長(zhǎng)期使用易造成 生態(tài)環(huán)境污染嚴(yán)重，菌株抗藥性增加，同時(shí)農(nóng)產(chǎn)品 農(nóng)藥殘留危害人類(lèi)健康，因此亟須尋找環(huán)境友好型 楊繼業(yè)，女，碩士，主要從事微生物菌肥研究，E-mail：695819348 qq.com &nbsp; *通訊作者（Corresponding author）：張麗萍，女，研究員，主要從事生 物防治及微生物菌肥研究，E-mail：wsw4879163.com 收稿日期：2017-12-21；接受日期：2018-03-20 基金項(xiàng)目：河北省科學(xué)院科技計(jì)劃項(xiàng)目（17310） 自我國(guó)啟動(dòng)馬鈴薯主糧化戰(zhàn)略，馬鈴薯栽培 面積隨之增加，成為僅次于水稻、小麥、玉米的 第四大糧食作物。與此同時(shí)，馬鈴薯倒茬困難、 連作障礙等問(wèn)題日益嚴(yán)重（原霽虹，2015） ，使得 the control effect on Fusarium wilt by the method of seedling inoculationThe results showed that S1，S4 and S6 &nbsp;treatments could significantly promote watermelon growthTheir indexes of plant height，stem diameter，fresh &nbsp;weight above ground，root-crown ratio，strong seedling index，etcwere all higher than that of the contrast &nbsp;Biological agents had certain control effects on Fusarium wilt of watermelonCompared with the respective &nbsp;contrast，the disease index of Zaojia 8424 decreased 76.2-92.8，that of Xinong No.8 decreased 37.0-54.6 &nbsp;Besides，the disease control effect of these 2 varieties was all outstanding as S6Further studies found that &nbsp;Bacillus subtilis could significantly inhibit mycelial growth and spore germination of Fusarium oxysporum f. sp. &nbsp;niveum race1Inhibition rate of mycelial growth reached 67.75% and the conidia germination number was only &nbsp;24.4% of the contrastThe successive control on pathogenic bacteria could reach 49.3%In summary，S6 has the &nbsp;best combination effect on watermelon growth promotion and control of watermelon Fusarium wiltAnd its strain &nbsp;has significant inhibitory effect on growth and spore germination of Fusarium oxysporum f. sp. niveum Key words：Watermelon；Biological agent；Fusarium wilt；Growth and development &nbsp;62 &nbsp; 新優(yōu)品種 栽培管理 本期視點(diǎn) 產(chǎn)業(yè)市場(chǎng) 病蟲(chóng)防控 &nbsp;62 &nbsp; 研究論文 中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES 2018（5）：62 - 66 生物防治的方法（Wharton et al.，2007；漆文選， 2017） 。王愛(ài)軍等（2013）篩選出2株萎縮芽孢桿 &nbsp;菌，對(duì)馬鈴薯黑痣病、干腐病病原菌具有較強(qiáng)抑制 作用。姚彥坡（2015）篩選出2株木霉菌株HNA14 和HNA12，對(duì)馬鈴薯晚疫病和辣椒疫病具有較好 的防病效果。 目前芽孢桿菌對(duì)馬鈴薯早疫病的防治研究較 少，因芽孢抗逆性強(qiáng)，具有耐高溫、紫外線，易儲(chǔ) 存等優(yōu)點(diǎn)，本試驗(yàn)以馬鈴薯早疫病病原菌茄鏈格孢 菌作為指示菌，從河北省科學(xué)院生物研究所微生物 實(shí)驗(yàn)室保存的生防菌株中篩選對(duì)馬鈴薯早疫病具有 較強(qiáng)抑制效果的芽孢桿菌，對(duì)菌株進(jìn)行生理生化及 16S rDNA鑒定，同時(shí)對(duì)菌株代謝產(chǎn)物性質(zhì)進(jìn)行研 究，以期得到代謝產(chǎn)物抑菌活性穩(wěn)定的芽孢桿菌， 為進(jìn)一步研制馬鈴薯早疫病新型生防制劑奠定前期 基礎(chǔ)。 1 材料與方法 1.1 試驗(yàn)材料 供試病原菌為馬鈴薯早疫病病原菌茄鏈格孢 菌，由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院朱杰華教授提 供。供試生防菌株為河北省科學(xué)院生物研究所微生 物研究室保藏的600多株生防菌株。 供試培養(yǎng)基：PB培養(yǎng)基、NB培養(yǎng)基、PDA培 養(yǎng)基，配制方法參照細(xì)菌鑒定手冊(cè)（布坎南和吉本 斯，1984；東秀珠和蔡妙英，2001）。 1.2 拮抗菌篩選 1.2.1 拮抗菌初篩 取活化好的直徑為8 mm的 茄鏈格孢菌菌餅，點(diǎn)種于PDA培養(yǎng)基（直徑90 &nbsp;mm）中央，26 培養(yǎng)2 d，在菌塊四周點(diǎn)種生防菌 株，培養(yǎng)4 d后觀察菌株抑菌效果。 1.2.2 拮抗菌復(fù)篩 將初篩所得拮抗菌經(jīng)二級(jí)搖床 培養(yǎng)后，發(fā)酵液12 000 r·min -1 離心10 min去除菌 體，經(jīng)0.22 m無(wú)菌濾膜過(guò)濾得到無(wú)菌濾液。吸 取30 mL茄鏈格孢菌懸浮液（1×10 6 &nbsp;cfu·mL -1 ）于 300 mL融化的PDA培養(yǎng)基中，混勻后倒入培養(yǎng)皿 中，待培養(yǎng)基凝固后，打孔并點(diǎn)入100 L上述無(wú) 菌濾液，34 d后觀察抑菌效果。 1.3 菌株鑒定 1.3.1 形態(tài)特征及生理生化特性 在PB平板上接 種菌株，32 培養(yǎng)24 h后觀察菌株菌落形態(tài)，復(fù) 紅染色后于顯微鏡鏡檢。菌株生理生化特性參照伯 杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)（布坎南和吉本斯，1984）和常 見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè) （東秀珠和蔡妙英，2001） 進(jìn)行鑒定。 1.3.2 基因組提取及16S rDNA序列擴(kuò)增與分 析 采用生工生物工程（上海）股份有限公 司DNA提取試劑盒提取菌株的基因組DNA， 選用16S rDNA基因通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 27F：5&#39;-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3&#39;，1492R： 5&#39;-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3&#39;。PCR反 應(yīng) 體 系為50 L：DNA模板2.5 L，上下游引物各2 &nbsp;L，2×Mix 25 L，ddH 2 O 18.5 L。PCR反應(yīng)程序： 94 5 min；95 30 s，55 40 s，72 90 s，30 個(gè)循環(huán)；72 10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠 電泳檢測(cè)，并于生工生物工程（上海）股份有限公 司進(jìn)行測(cè)序，將所得序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中序列 進(jìn)行Blast分析比對(duì)，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。 1.4 代謝產(chǎn)物的抑菌活性 1.4.1 熱穩(wěn)定性 將菌株BAF-6的發(fā)酵液經(jīng)0.22 &nbsp;m無(wú)菌過(guò)濾器進(jìn)行除菌，得到發(fā)酵濾液，分別在 60、70、80、90、100、121 下熱處理30 min，冷 卻至室溫后，采用打孔法在含有茄鏈格孢菌的平板 上打孔，并于孔中分別點(diǎn)入100 L各處理的發(fā)酵 濾液，34 d后測(cè)量各處理抑菌圈的大小，以未經(jīng) 熱處理的發(fā)酵濾液為對(duì)照，以對(duì)照抑菌圈大小為活 性100%，計(jì)算各處理的相對(duì)抑菌活性（楊艷紅 等， 2017），每個(gè)處理3次重復(fù)。 1.4.2 蛋白酶穩(wěn)定性 分別用質(zhì)量濃度50 mg·L -1 胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K于37 處理菌株 BAF-6發(fā)酵濾液2 h（胡忠亮 等，2017），以未經(jīng) 蛋白酶處理的發(fā)酵濾液為對(duì)照，采用1.4.1中的方 法測(cè)定并計(jì)算各處理的相對(duì)抑菌活性，每個(gè)處理3 次重復(fù)。 1.4.3 紫外穩(wěn)定性 將菌株BAF-6的發(fā)酵濾液放 置在紫外燈下（20 W）20 cm處，分別照射2、4、 6、8 h，以未經(jīng)紫外燈照射的發(fā)酵濾液為對(duì)照，采 用1.4.1中的方法測(cè)定并計(jì)算各處理的相對(duì)抑菌活 性，每個(gè)處理3次重復(fù)。 1.4.4 酸堿穩(wěn)定性 用1 mol·L -1 鹽酸和1 mol·L -1 氫氧化鈉溶液分別將菌株BAF-6的發(fā)酵濾液pH值 調(diào)節(jié)為2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12，靜 &nbsp;63 &nbsp; 新優(yōu)品種 栽培管理 本期視點(diǎn) 產(chǎn)業(yè)市場(chǎng) 病蟲(chóng)防控 &nbsp;63 &nbsp; 研究論文 中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES 置12 h后，調(diào)節(jié)pH至中性，以未經(jīng)處理的發(fā)酵濾 液為對(duì)照，采用1.4.1中的方法測(cè)定并計(jì)算各處理 的相對(duì)抑菌活性，每個(gè)處理3次重復(fù)。 1.5 數(shù)據(jù)處理 采用MEGA 5.0軟件對(duì)所篩菌株進(jìn)行系統(tǒng)發(fā) 育樹(shù)的構(gòu)建，采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)差異顯著性 分析，并用Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)性分析及柱形圖的 &nbsp;制作。 2 結(jié)果與分析 2.1 拮抗菌篩選結(jié)果 通過(guò)平板對(duì)峙法篩選出對(duì)茄鏈格孢菌有較強(qiáng)抑 制作用的菌株11株，通過(guò)測(cè)定菌株無(wú)菌濾液的抑 菌活性，菌株BAF-6抑菌圈直徑較大，為2.4 cm（圖 1、2） ，說(shuō)明菌株及菌株發(fā)酵濾液均對(duì)病原菌抑制 作用較強(qiáng)。Bacillus subtilis strain H1-7 KR061433.1Bacillus tequilensis strain 10b NR 104919.1Bacillus subtilis strain JCM 1465 NR 113265.1Bacillus subtilis subsp. inaquosorum strain BGSC 3A28 NR 104873.1Bacillus amyloliquefaciens strain Md1-43 MF581449.1BAF-6Bacillus sonorensis strain AF302118Virgibacillus proomii strain 2M HQ992819.1Bacillus alkalidiazotrophicus strain MS 6 EU143680.1Bacillus arsenicus partial AJ606700.1 99 100 99 100 56 65 34 0.005 圖 4 菌株 BAF-6的 16S rDNA的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù) 圖 3 菌株 BAF-6菌體形態(tài) 圖 1 拮抗菌初篩 圖 2 拮抗菌復(fù)篩 BAF-6 BAF-6 菌株形態(tài)觀察及生理生化特性鑒定（表1） ，初步 鑒定該菌株屬于芽孢桿菌屬（Bacillus）。 2.2.3 菌株BAF-6的分子鑒定 將菌株BAF-6的 16S rDNA序列和NCBI網(wǎng)站中與其基因序列同源性 較高的菌株進(jìn)行比對(duì)，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖4） ， 結(jié)合菌株的形態(tài)特征、生理生化鑒定結(jié)果以及16S &nbsp;rDNA分子鑒定結(jié)果，將菌株BAF-6鑒定為解淀粉 芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）。 2.3 菌株 BAF-6的代謝產(chǎn)物性質(zhì) 2.3.1 熱穩(wěn)定性 從圖5可以看出，6080 熱處 理菌株BAF-6的發(fā)酵濾液后，濾液對(duì)茄鏈格孢菌 的相對(duì)抑菌活性均與對(duì)照無(wú)顯著差異，抑菌活性均 在95%以上。90121 處理下，發(fā)酵濾液的相對(duì) 2.2 菌種鑒定 2.2.1 菌株BAF-6的形態(tài)特征 菌株BAF-6菌落 呈白色，不透明，近圓形，邊緣不規(guī)則，菌體桿狀， 菌體長(zhǎng)約1.8 m，寬約0.6 m（圖3），產(chǎn)生橢圓 形芽孢，芽孢中生。 2.2.2 菌株BAF-6的生理生化特性 通過(guò)2.2.1中 表 1 菌株 BAF-6的生理生化鑒定結(jié)果 測(cè)定項(xiàng)目 BAF-6 測(cè)定項(xiàng)目 BAF-6 革蘭氏染色 + 吲哚試驗(yàn) - 厭氧生長(zhǎng) + 酪素分解試驗(yàn) - 甲基紅試驗(yàn) + 檸檬酸鹽利用 + V-P反應(yīng) + 4 條件下生長(zhǎng) + 酪氨酸水解 - 50 條件下生長(zhǎng) + 淀粉水解 + pH=5條件下生長(zhǎng) + 明膠液化 + pH=9條件下生長(zhǎng) + 接觸酶反應(yīng) + 注：表中陽(yáng)性反應(yīng)用“+”表示，陰性反應(yīng)用“-”表示。 &nbsp;64 &nbsp; 新優(yōu)品種 栽培管理 本期視點(diǎn) 產(chǎn)業(yè)市場(chǎng) 病蟲(chóng)防控 &nbsp;64 &nbsp; 研究論文 中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES 抑菌活性顯著降低，但100 處理下發(fā)酵液的相對(duì) 抑菌活性仍在85%以上，121下的相對(duì)抑菌活性 在50%以上，說(shuō)明菌株發(fā)酵濾液具有較高的熱穩(wěn) 定性。 2.3.2 蛋白酶穩(wěn)定性 從圖6可以看出，采用蛋白 酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶處理菌株BAF-6發(fā)酵 濾液后，濾液對(duì)茄鏈格孢菌的相對(duì)抑菌活性均顯著 降低，但仍在50%以上，說(shuō)明菌株具有抑菌活性 的物質(zhì)可能不是蛋白質(zhì)，也可能是蛋白質(zhì)但不包含 芳香族、脂族氨基酸的羧基肽鍵，不含賴(lài)氨酸、精 氨酸及疏水殘基肽鍵。 2.3.3 紫外穩(wěn)定性 從圖7可以看出，經(jīng)紫外線照 射后，菌株BAF-6發(fā)酵濾液對(duì)病原菌的相對(duì)抑菌 活性均無(wú)顯著變化。說(shuō)明菌株發(fā)酵濾液抑菌活性不 因紫外照射而降低，適合于田間應(yīng)用。 2.3.4 酸堿穩(wěn)定性 從圖8可以看出，菌株BAF-6 發(fā)酵濾液在pH值為29時(shí)的相對(duì)抑菌活性與對(duì) 照均無(wú)顯著差異，當(dāng)pH值為10時(shí)，菌株的相對(duì) 抑菌活性仍為80%以上，說(shuō)明菌株發(fā)酵濾液具有 較高的酸堿穩(wěn)定性。 圖 5 菌株 BAF-6發(fā)酵濾液的熱穩(wěn)定性 120 100 80 60 40 20 0 相對(duì)抑菌活性 溫度 CK 60 70 80 90 100 121 a a a ab b c d 圖 8 菌株 BAF-6發(fā)酵濾液的酸堿穩(wěn)定性 120 100 80 60 40 20 0 相對(duì)抑菌活性 pH值 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 CK aaaaa a aaa b c d 圖 7 菌株 BAF-6發(fā)酵濾液的紫外穩(wěn)定性 120 100 80 60 40 20 0 相對(duì)抑菌活性 時(shí)間h CK 2 4 6 8 a aa a a 圖 6 菌株 BAF-6發(fā)酵濾液的蛋白酶穩(wěn)定性 120 100 80 60 40 20 0 相對(duì)抑菌活性 時(shí)間h CK 蛋白酶K 胃蛋白酶 胰蛋白酶 c a b b 3 結(jié)論與討論 利用對(duì)病原菌具有拮抗作用的細(xì)菌等有益微生 物及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行生物防治是防治農(nóng)作物病害的 有效方法與技術(shù)（邱德文，2010） ，既響應(yīng)農(nóng)藥減 施及化肥零增長(zhǎng)的政策，同時(shí)有益于環(huán)境、生態(tài)和 人類(lèi)健康。尋找高效生防菌資源，是生物防治途徑 中最重要的環(huán)節(jié)。 目前防治馬鈴薯早疫病的生物菌劑主要為放線 菌、木霉菌，芽孢桿菌的應(yīng)用很少。芽孢桿菌可產(chǎn) 生耐熱抗逆的芽孢，生存能力強(qiáng)，同時(shí)是土壤和植 物微生態(tài)區(qū)系優(yōu)勢(shì)種群，有利于在環(huán)境中存活、定 殖和繁殖，因此具備較好的生防特性及開(kāi)發(fā)前景（齊 愛(ài)勇 等，2011） 。本試驗(yàn)以馬鈴薯早疫病病原菌茄 鏈格孢菌為指示菌，通過(guò)平板對(duì)峙法篩選到1株對(duì) 其具有較強(qiáng)抑制效果的菌株BAF-6，經(jīng)鑒定該菌株 為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）。 解淀粉芽孢桿菌是植物病害防治中一大類(lèi) 芽孢桿菌類(lèi)群，在生長(zhǎng)過(guò)程中可產(chǎn)生肽類(lèi)、聚酮 類(lèi)、脂肽類(lèi)等具有抗菌活性的代謝產(chǎn)物（Chen &nbsp;et al.，2009）。薛鵬琦等（2011）從解淀粉芽孢桿 菌YBWC43菌株中提取出可抑制油菜菌核病菌的 &nbsp;65 &nbsp; 新優(yōu)品種 栽培管理 本期視點(diǎn) 產(chǎn)業(yè)市場(chǎng) 病蟲(chóng)防控 &nbsp;65 &nbsp; 研究論文 中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES 桿菌霉素D和芬枯草菌素。本試驗(yàn)對(duì)BAF-6菌株 發(fā)酵濾液性質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果表明菌株BAF-6發(fā) 酵濾液具有較高的熱穩(wěn)定性，且經(jīng)蛋白酶K、胰蛋 白酶、胃蛋白酶處理后，發(fā)酵濾液的相對(duì)抑菌活 性仍在50%以上，說(shuō)明抑菌活性物質(zhì)可能有一部 分并不是蛋白質(zhì)，需要進(jìn)一步對(duì)有效抑菌物質(zhì)進(jìn)行 分離純化；菌株BAF-6發(fā)酵濾液對(duì)紫外線照射具 有較強(qiáng)的抗性，在后期菌株田間應(yīng)用過(guò)程中，發(fā)酵 濾液中的活性物質(zhì)可以有效保留；發(fā)酵濾液在pH 值210時(shí)，相對(duì)抑菌活性仍在80%以上，說(shuō)明 菌株發(fā)酵濾液具有較高的酸堿穩(wěn)定性。可見(jiàn)菌株 BAF-6具有開(kāi)發(fā)成馬鈴薯早疫病新型生防制劑的 &nbsp;潛力。 參考文獻(xiàn) 布坎南，吉本斯1984伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)中國(guó)科學(xué)院微生物 研究所伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)翻譯組譯8版北京：科學(xué)出 &nbsp;版社 東秀珠，蔡妙英2001常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)北京：科學(xué)出 &nbsp;版社 郭潤(rùn)婷，王惟萍，謝學(xué)文，李寶聚2016馬鈴薯早疫病的診斷與 防治中國(guó)蔬菜，（11）：80-82 胡忠亮，鄭催云，田興一，李警保，韓正敏，樊奔2017解淀粉 芽孢桿菌HZM9菌株發(fā)酵液的抑菌譜及穩(wěn)定性測(cè)定南京林 業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，3（41）：65-70 齊愛(ài)勇，趙緒生，劉大群2011芽孢桿菌生物防治植物病害研究 現(xiàn)狀中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，27（12）：277-280 漆文選2017高寒山區(qū)馬鈴薯種薯主要病蟲(chóng)害調(diào)查與防治方法 中國(guó)蔬菜，（9）：93-98 邱德文2010我國(guó)植物病害生物防治的現(xiàn)狀及發(fā)展策略植物保 護(hù)，36（4）：15-18 王愛(ài)軍，柴兆祥，李金花，郭慶剛，王蒂2013馬鈴薯干腐病菌 和黑痣病菌拮抗芽胞桿菌的篩選及鑒定中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)， 29（4）：586-594 薛鵬琦，劉芳，喬俊卿，伍輝軍，馮致科，高學(xué)文2011油菜菌 核病生防芽孢桿菌的分離鑒定及其脂肽化合物分析植物保 護(hù)學(xué)報(bào)，38（2）：127-132 楊艷紅，余瑛，胡永強(qiáng)，余溪，李青青2017解淀粉芽孢桿菌 AF1發(fā)酵液的抗菌活性與抗菌機(jī)理生物技術(shù)通報(bào)，33（9） ： 233-230 姚彥坡2015防治馬鈴薯晚疫病和辣椒疫病木霉菌的篩選及生防 機(jī)制研究博士論文北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 原霽虹2015馬鈴薯連作障礙的研究進(jìn)展中國(guó)馬鈴薯，29（1）： 46-50 Chen X H，Koumoutsi A，Scholz R，Borriss R，Schneider K，Vater &nbsp;J，Süssmuth R，Piel J，Borriss R2009Genome analysis of &nbsp;Bacillus amyloliquefaciens FZB42 reveals its potential for biocontrol &nbsp;of plant pathogensJournal of Biotechnology，140（1）：27-37 Wharton P S，Kirk W W，Berry D，Tumbalam P2007Seed &nbsp;treatment application-timing options for control of Fusarium decay &nbsp;and sprout rot of cut seedpiecesAmerican Journal of Potato &nbsp;Reseach，84（3）：237-244 Screening of Antagonistic Bacteria Against Potato Early Blight and Antibacterial &nbsp;Activity of Its Metabolites YANG Ji-ye &nbsp;1，2 ，YANG Fan 1，2，3 ，CUI Guan-hui &nbsp;1，2 ，SUN Jin-chong &nbsp;1，2 ，WANG Ya-na 1，2 ，LIU Hong- wei 1，2 ，CHENG Hui-cai &nbsp;1，2 ，ZHANG Li-ping 1，2* （ 1 Institute of Biology，Hebei Academy of Science，Shijiazhuang 050081，Hebei，China； 2 Main Crop Disease Microbial &nbsp;Control Engineering Technology Research Center of Hebei Province，Shijiazhuang 050081，Hebei，China； 3 Hebei &nbsp;University of Technology，Tianjin 300130，China） Abstract：Taking Alternaria solani as a target，this study screened the biocontrol strain BAF-6 with &nbsp;strong antagonism against pathogenic bacteria of potato early blight by plate confrontation method. The strain was &nbsp;identified as Bacillus amyloliquefaciens through morphological，physiological and biochemical tests and 16S &nbsp;rDNA sequence analysis. The extracellular metabolites of the strain after 60-80 heat treatment，its antibacterial &nbsp;activity &nbsp;was over 95%. Under UV irradiation for 8 hours，or when the pH value was 2-10，its antibacterial &nbsp;properties were still stable. After protease treatment the strain antibacterial activity was still over 50%. Key words：Potato；Early blight；Antagonistic bacteria；Screening；Identification；Antibacterial activity &nbsp;66 &nbsp; 新優(yōu)品種 栽培管理 本期視點(diǎn) 產(chǎn)業(yè)市場(chǎng) 病蟲(chóng)防控 &nbsp;66 &nbsp; 研究論文 中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES</p>