姚思揚 ，趙春莉 ，劉子平 ，等 紅顏草莓組培快繁體系優(yōu)化 福建農(nóng)業(yè)學報 ，（）： ， ， ， ，（）：紅顏草莓組培快繁體系優(yōu)化姚思揚 ，趙春莉，劉子平 ，劉翰升（吉林農(nóng)業(yè)大學 ，吉林長春）收稿日期 ：初稿 ；修改稿作者簡介 ：姚思揚 （），女 ，碩士研究生 ，主要從事觀賞植物資源引種馴化及繁殖技術(shù)研究 （：）通訊作者 ：趙春莉 （），女 ，博士 ，副教授 ，主要從事觀賞植物資源引種馴化及繁殖技術(shù)研究 （：）基金項目 ：吉林省重點科技攻關(guān)項目 （）摘要 ：為進一步優(yōu)化紅顏草莓組培快繁體系 ，以紅顏草莓匍匐莖尖為外植體 ，篩選最佳滅菌時間 ，并通過正交試驗設(shè)計 ，研究培養(yǎng)基及植物生長調(diào)節(jié)劑對不定芽誘導 、增殖 、生根的影響 。結(jié)果顯示 ：最佳滅菌處理為酒精消毒 ， 消毒 ，成活率可達。對芽誘導的影響作用為基本培養(yǎng)基，篩選出最佳不定芽誘導培養(yǎng)基為···，誘導率 。增殖階段 種植物生長調(diào)節(jié)劑對試管苗的影響力為 ，最佳增殖培養(yǎng)基為···，增殖系數(shù)。生根培養(yǎng)階段 ，對生根指數(shù)的影響力為基本培養(yǎng)基蔗糖 ，最佳生根培養(yǎng)基為 蔗糖 ··，生根指數(shù)為。最佳移栽基質(zhì)為草炭土珍珠巖 ，成活率為。本試驗采用的植物生長調(diào)節(jié)劑種類及濃度進一步提高了紅顏草莓組培誘導率和增殖率 ，獲得了良好的生根指數(shù)和移栽成活率 ，進一步優(yōu)化了紅顏草莓的快繁體系 。關(guān)鍵詞 ：草莓 ；莖尖 ；增殖 ；玻璃化 ；生根指數(shù)中圖分類號 ：文獻標識碼 ： 文章編號 ：（） ， ， ， （ ， ，）： ， ， · · · · ·· ， ， · · ， ， ：×； ； 草莓 （× ）是薔薇科草莓屬多年生草本植物 ，易栽培管理 ，適應性強 。紅顏草莓 （× ）由日本靜岡縣農(nóng)業(yè)試驗場雜交育成 ，其父本為幸香 ，母福建農(nóng)業(yè)學報 （）：， ： ：本為章姬。紅顏長勢強 ，株形挺立 ，休眠期短 ；果實個大 ，產(chǎn)量高 ，香甜可口 ，硬度大 ，便于運輸儲藏 ，是品質(zhì)優(yōu)良的草莓品種。近幾年在我國各地推廣栽培 ，具有廣闊的市場前景 。草莓的傳統(tǒng)繁殖方式為匍匐莖繁殖和分株繁殖 ，繁殖速度慢 ，長期的營養(yǎng)繁殖也會導致植株體內(nèi)各種病毒積累 、植株矮化 、果實畸形 、病蟲害加劇 ，從而使品種退化 ，產(chǎn)量降低。組織培養(yǎng)效率高 ，增殖系數(shù)大 ，不受季節(jié) 、天氣限制 ，可保留植株的優(yōu)良性狀 ，減少病毒感染 ，是草莓大量生產(chǎn)繁殖的有效途徑。近幾年 ，以草莓 葉 片、莖尖、花藥為外植體進行組織培養(yǎng)的研究已有報道 ，但紅顏草莓的快繁體系還不夠完善 ，如初代培養(yǎng)階段 ，基礎(chǔ)培養(yǎng)基的篩選鮮有研究 ；繼代培養(yǎng)階段 ，選擇的植物生長調(diào)節(jié)劑及濃度不夠理想 ，增殖系數(shù)不高 ，難以突破倍增殖；生根培養(yǎng)階段 ，對 生 根 率 、生 根 長 度 、生 根 條 數(shù) 的 研究均已有研究 ，但缺乏將各參數(shù)進行擬合 、直觀全面表達生根狀態(tài)的研究 。并且大多數(shù)研究在培養(yǎng)基的篩選上采用傳統(tǒng)方法逐一嘗試 ，費時費力 ，篩選不夠全面 。因此 ，紅顏草莓快繁體系還有待完善 。本試驗以紅顏草莓匍匐莖尖為外植體 ，采用正交試驗設(shè)計 ，研究不同基本培養(yǎng)基 、植物生長調(diào)節(jié)劑對紅顏草莓組培體系的影響 ，以提高紅顏草莓組培的增殖率及成活率 ，完善紅顏草莓組培快繁體系 ，為組培生產(chǎn)育苗提供理論參考 。 材料與方法 試驗材料試驗材料為栽種于吉林農(nóng)業(yè)大學溫室的當年生紅顏草莓幼嫩匍匐莖尖 。外植體于月中旬采摘 ，用低溫保溫箱帶回組培實驗室 。 試驗方法 外植體滅菌處理將采摘回的莖尖用洗潔精洗凈表層泥土 ，用流水沖洗。放入超凈工作臺的濾紙上吸干表面水分 ，放入滅菌后的燒杯中 ，加入酒精分別處理、，用無菌水沖洗次 。再用升汞分別消毒、，期間不斷震蕩 ，用無菌水沖洗次 。用滅菌后的鑷子與刀片 ，剝?nèi)デo尖外苞葉 ，留取內(nèi)部莖尖備用 。每種處理個外植體 。后 ，觀察成活率 。 初代誘導培養(yǎng)采用因素水平（）進行試驗 ，探究基礎(chǔ)培養(yǎng)基 （、）、不同植物生長調(diào)節(jié)劑及其質(zhì)量濃度 （ 、·； 、·；、·）對草莓不定芽誘導的影響 。將處理好的莖尖接種到培養(yǎng)基內(nèi) ，每個處理接種個外植體 ，重復次 。培養(yǎng)后 ，觀察外植體誘導情況 ，統(tǒng)計數(shù)據(jù) 。誘導率 （萌發(fā)出芽的莖尖 接種的莖尖數(shù) ）×。 繼代增殖培養(yǎng)以為基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ，采用因素水平（）進行試驗 。設(shè)置以下因素水平 ：，、·；，、·；，、·。將誘導的不定芽接種到培養(yǎng)基內(nèi) ，每個處理個芽 ，重復次 ，后 ，觀察統(tǒng)計數(shù)據(jù) 。增殖系數(shù)后不定芽總數(shù) 接種的不定芽數(shù) 。 生根培養(yǎng)采用因素水平（）進行試驗 。探究培養(yǎng)基內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì) 、蔗糖 、生長調(diào)節(jié)劑對草莓生根的影響 。設(shè)置以下因素水平 ：基本培養(yǎng)基 ，、；蔗 糖 質(zhì) 量 濃 度 ，·、·、·；質(zhì)量濃度 ，·、·、·。挑選長勢一致 ，生長健壯的試管苗 ，轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基內(nèi) ，每個處理個芽 ，次重復 ，后 ，觀察記錄生根情況 。生根率后生根苗總數(shù) 接種苗總數(shù)×，平均生根數(shù)生根總條數(shù) 生根苗總數(shù) ，平均根長生根總長度 生根苗總數(shù) ，生根指數(shù)生根率×平均生根數(shù)×平均根長。 煉苗與移栽將長勢健壯 、長出條以上不定根的生根苗放到溫室中煉苗 ，將瓶口敞開，讓試管苗適應溫室環(huán)境 。將試管苗取出 ，洗凈根部培養(yǎng)基 ，栽入營養(yǎng)缽中 ，噴灑多菌靈溶液滅菌消毒 。保持溫室內(nèi)濕度一定 ，通風良好 ，溫度控制在。營養(yǎng)缽內(nèi)設(shè)置種基質(zhì) ：（）營養(yǎng)土 ；（）營養(yǎng)土珍珠巖（）；（）草炭土 ；（）草炭土珍珠巖（）。每個處理盆 ，重復次 ，后統(tǒng)計成活率 。成活率后成活苗數(shù) 栽培苗數(shù)×。 培養(yǎng)條件試驗中培養(yǎng)基若無特殊說明 ，均加蔗糖·，瓊脂粉·，調(diào)至。將培養(yǎng)瓶放置在培養(yǎng)室內(nèi) ，每天光照時間為，溫 度 設(shè) 置 為 （±），光 照 強 度 。 數(shù)據(jù)處理試驗 采 用 軟 件 進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 。第期 姚思揚等 ：紅顏草莓組培快繁體系優(yōu)化 結(jié)果與分析 滅菌處理從表可知 ，在消毒過程中 ，用酒精處理的紅顏草莓成活率高于處理。酒精消毒時間不變的條件下 ，使用的最佳消毒時間為。消毒時間過短 ，植株滋生菌類 ，污染率高 。消毒時間過長 ，會破壞莖尖的生長點及內(nèi)部組織 ，使外植體死亡 。試驗結(jié)果表明最佳的消毒 處 理 為 用酒 精 消 毒后 ，用消毒，成活率為。表 滅菌處理結(jié)果 處理酒精滅菌時間 滅菌時間 成活率 初代誘導接種后 ，在生長點處有綠色芽點生成 ，后芽點萌發(fā)出嫩芽 。由表極差值可知 ，不同因素對不定芽誘導率的影響 ：基本培養(yǎng)基?；九囵B(yǎng)基在芽誘導中起主要作用 ，對誘導率有極顯著影響 （表）。種培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于鹽離子的種類和濃度不同 ，結(jié)果表明培養(yǎng)基更適于草莓莖尖的誘導分化 ，誘導效果一般 ，培養(yǎng)基的誘導效果較差 。對誘導率的影響顯著 ，同一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基中 ，誘導率隨質(zhì)量濃度的增加而增加 。和對誘導率影響較小 ，但也對芽的誘導起一定的促進作用 。結(jié)果表明培養(yǎng)基處理的誘導率顯著高于和處理 ，處理（ · · ·）和處理（ · · ·）誘導率沒有顯著差異 ，處理是誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基 ，誘導率可達。表 初代培養(yǎng)正交試驗結(jié)果 處理基礎(chǔ)培養(yǎng)基（·）（·）（·）誘導率 （）（）（）（）± （）（）（）± （）（）（）± （） ± ± ± （） ± ± ± 注 ：不同小寫字母表示在 水平差異顯著 。表 、同 。表 草莓莖尖不定芽誘導的方差分析 因素 型平方和 自由度 均方 基本培養(yǎng)基 誤差 增殖培養(yǎng)由表、結(jié)果可知 ，不同植物生長調(diào)節(jié)劑對紅顏草莓不定芽增殖的影響 ：。對增殖系數(shù)有極顯著影響 ，在增殖過程中起主要作用 ，增殖系數(shù)隨質(zhì)量濃度增加而增加 。對增殖效果也有顯著影響 ，可促進不定芽增殖和生長 ；的影響不顯著 ，但也有一定的促進作用 。接種后 ，不定芽出現(xiàn)增殖現(xiàn)象 ，逐 漸 形 成 叢 生 芽 。在質(zhì) 量 濃 度 為·時 ，增殖系數(shù)低 ，叢生芽長勢弱 （圖）；質(zhì)量濃度為·時 ，增殖系數(shù)高 ，叢生芽生長健壯 （圖）；質(zhì)量濃度為·時 ，增值系數(shù)高 ，但芽長勢一般 ，并且出現(xiàn)玻璃化苗 （圖），玻璃化苗葉片呈浸水狀 ，失綠嚴重 ，苗脆弱易斷 ，無法正常生長 。由此可知可促進不定芽的增殖 ，但濃度不宜過高 。綜合分析結(jié)果 表 明 ，增 殖 培 養(yǎng) 基 處 理（· · 福建農(nóng)業(yè)學報 第卷·）增殖系數(shù)為，顯著高于其 他 處理 ，與處 理（ ···）沒有顯著差異 ，但處理叢生芽長勢一般 ，出現(xiàn)玻璃化苗 。表 繼代增殖正交試驗結(jié)果 處理（·）（·）（·）增殖系數(shù) 長勢 （）（）（） （±） （）（） （±） （）（） （±） （） （±） （±） （±） （） （±） （±） （±） 注 ：為芽長勢弱 ，為芽長勢一般 ，為芽長勢健壯 ，為苗有玻璃化 。表 草莓叢生芽增殖的方差分析 因素 型平方和 自由度 均方 誤差 圖 增殖差的繼代苗 （處理 ） （ ）圖 增殖好的繼代苗 （處理 ） （ ）圖 玻璃化苗 生根培養(yǎng)生根階段統(tǒng)計了生根率 、平均生根長度 、平均生根數(shù)多項數(shù)據(jù) ，并計算生根指數(shù)作為綜合指標進一步分析 。通過表極差值可知 ，種因素對生根指數(shù)影響 ：基本培養(yǎng)基蔗糖 。由表可知 ，培養(yǎng)基與對生根效果影響顯著 ，蔗糖濃度對生根效果的影響不顯著 。培養(yǎng)基個水平的區(qū)別在于大量元素濃度不同 ，其中的值最大 ，次之 ，最小 ，可知更適于草莓生根 。在的個水平中 ，值最大 ，可知質(zhì)量濃度為·時生根效果最佳 ，在基本培養(yǎng)基一定的情況下 ，生根指數(shù)隨質(zhì)量濃度的升高而升高 。最終 ，可篩選出最佳生根培養(yǎng)基為處理：蔗糖··，生根率為，平均生根數(shù)為，平均根長為，生根指數(shù)為（圖、）。第期 姚思揚等 ：紅顏草莓組培快繁體系優(yōu)化表 生根階段正交試驗結(jié)果 處理 基本培養(yǎng)基蔗糖 （·）（·）生根率平均生根數(shù)根平均根長生根指數(shù) （）（）（）± ± ± ± （）（）± ± ± ± （）（）± ± ± ± （） ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± （） ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 注 ：為生根指數(shù)的極差值 。表 草莓生根指數(shù)的方差分析 因素 型平方和 自由度 均方 培養(yǎng)基 蔗糖 誤差 圖 生根苗 圖 生根苗 煉苗與移栽后統(tǒng)計成活情況 （表），草炭土與營養(yǎng)土的紅顏草莓成活率有顯著差異 ?；|(zhì)只有營養(yǎng)土時 ，成活率僅，加入珍珠巖后 ，成活率明顯提高 ?；|(zhì)只為草炭土時 ，成活率良好 ，加入珍珠巖后 ，成活率可達。說明草炭土更適于草莓試管苗移栽 ，珍珠巖有良好的保水性和透氣性 ，與草炭土配合使用 ，適用于紅顏草莓的移栽 （圖）。福建農(nóng)業(yè)學報 第卷表 不同基質(zhì)對草莓成活率的影響 處理 基質(zhì)成活率 營養(yǎng)土 ± 營養(yǎng)土 珍珠巖 ± 草炭土 ± 草炭土 珍珠巖 ±圖 移栽苗 討論關(guān)于草莓莖尖的消毒方法 ，有研究用酒精消毒，消毒，再用處理。還有研究將草莓莖尖放入消毒液和預滅菌，用流水沖洗后 ，再用酒精與，兩滴吐溫滅菌 。本試驗采用酒精消毒，消毒，成活率可達，同樣取得了很好的滅菌效果 。在一定程度上節(jié)省了試驗成本和時間 。在初代培養(yǎng)階段 ，紅顏草莓最佳誘導培養(yǎng)基為 ：···，誘導率。張黎鳳等利用·和· 對草莓莖尖進行誘導 ，最佳誘導率為；田芳等采用·和· 對草莓莖尖進行誘導 ，誘導率為，二者誘導率均沒有本次試驗高 ，其原因可能是本試驗采用的濃度更高 ，配以適宜濃度的和，更好地滿足紅顏草莓誘導培養(yǎng)的需求 。莖尖是頂端分生組織 ，分裂能力極強 ，且生長點病毒較少，易萌發(fā) ，誘導周期短 ，是組培試驗中被廣泛應用的外植體 。而草莓葉片，其生理學特征對組培誘導有較大影響 ，如葉片的發(fā)育程度 、長勢等因素，以葉片作為外植體對葉片的成熟度 、長勢 、分裂能力要求較高 ，要先誘導愈傷組織 ，才可誘導出不定芽 ，誘導周期較長 。陳英等對草莓繼代培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn) ，在增殖培養(yǎng)基中添加與，得到的最佳增殖系數(shù)為；翟婷婷等添加與于草莓增殖培養(yǎng) ，最佳增殖系數(shù)為。本試驗的最佳增殖培養(yǎng)基為 ：···，增殖系數(shù)，明顯高于紅顏草莓已有研究報道的增殖率 。植物生長調(diào)節(jié)劑的種類及濃度對植物分化 、增殖有至關(guān)重要的 影 響 。李 會 珍 等采用不同濃度的、進行草莓增殖試驗 ，的增殖效果最顯著 。本試驗也證實了是對增殖影響力最大的植物生長調(diào)節(jié)劑 。李曉亮等在試驗中發(fā)現(xiàn)低質(zhì)量濃度（·）增殖效果 好 ， 苗 的 長 勢 良 好 。 高 濃 度（·）對不定芽的增殖效果不佳 ，會產(chǎn)生愈傷組織 ，并有玻璃化現(xiàn)象 。本次試驗同樣在濃度為·時增殖系數(shù)最高 ，芽長勢最佳 ，但濃度為·時 ，就有玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生 ，可能因草莓品種不同 ，植物生長調(diào)節(jié)劑組合比例不同因而結(jié)果不一致 。但都證實對增殖有良好效果 ，且濃度過高會產(chǎn)生玻璃化苗 ，不利于植物生長 。本試驗中選擇的種植物生長調(diào)節(jié)劑濃度都比較低 ，其中在過去的草莓組培試驗中并不常用 ，但本研究發(fā)現(xiàn)其對草莓增殖具有顯著影響 ，種植物生長調(diào)節(jié)劑合適配比的增殖效果明顯增強 。本試 驗 中 ，紅 顏 草 莓 最 佳 生 根 培 養(yǎng) 基 為 ：蔗糖··，生根指數(shù)為。在草莓組培的相關(guān)研究中 ，生根階段統(tǒng)計的數(shù)據(jù)大多為根長 、生根數(shù) 、生根率 ，再將各數(shù)據(jù)分別分析 ，這種分析方法不夠直觀 。本次試驗以生根指數(shù)作為綜合指標 ，可直觀地看出各個處理的生根情況 。郭靖等研究了、培養(yǎng)基對草莓的生根效果 ，結(jié)果顯示種培養(yǎng)基都有很好的生根效果 ，其中根的長勢最佳 ，與本試驗研究結(jié)果一致 。但郭靖等研究發(fā)現(xiàn)蔗糖濃度對生根影響 力 很 大 ，蔗 糖 濃 度 為·時 ，生根效果最佳 ，而本試驗中蔗糖濃度第期 姚思揚等 ：紅顏草莓組培快繁體系優(yōu)化對生根沒有顯著影響 ，可能是由于添加了，具體有待進一步分析 。前人研究中 ，在草莓生根階段加入活性炭 ，得到較好的生根效果 。本次試驗沒有用活性炭 ，也有很好的生根效果 ，最佳生根培養(yǎng)基的生根率可達?；钚蕴拷o植物創(chuàng)造了類似土壤的暗環(huán)境 ，產(chǎn)生對生長調(diào)節(jié)劑及其他有機物吸附和釋放的作用。適量的活性炭可促進植物生長生根 ，過量可能會吸附培養(yǎng)基內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì) ，對植物生長不利 。故活性炭在組培的應用上要根據(jù)植物品種 、生長環(huán)境嚴格掌控用量 。在煉苗移栽階段 ，本試驗紅顏草莓的最佳栽培基質(zhì) 為 珍 珠 巖草 炭 土，成 活 率 為。草莓常用的栽培基質(zhì)有珍珠巖 、蛭石 、河沙 、珍珠巖 、營養(yǎng)土 、草炭土等 。梁鳳龍用草炭蛭石珍珠巖為基質(zhì) ，試管苗的成活率為。本次試驗只用兩種栽培基質(zhì)混合 ，得到了較好的試驗結(jié)果 ，在一定程度上簡化了試驗步驟 ，節(jié)約了試驗成本 。參考文獻 ：方博云 ，費鳴毅 ，朱小富 ，等草莓新品種紅頰 上海蔬菜 ，（）：李會珍 ，徐東進 ，陳登金 ，等不同植物生長調(diào)節(jié)劑對脫毒紅頰草莓組培快繁的影響 江蘇農(nóng)業(yè)科學 ，（）：郭月玲 ，解振強 ，王永平我國草莓組織培養(yǎng)生產(chǎn)研究現(xiàn)狀及前景 浙江農(nóng)業(yè)科學 ，（）：張黎鳳 ，錢雯婕 ，魏紅英 ，等紅顏草莓莖尖組培快繁技術(shù)研究 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技 ，（）：朱海生 ，李永平 ，林琿 ，等草莓品種的親緣關(guān)系及其不同繼代次數(shù)的葉片組培苗的 分析 核農(nóng)學報 ，（）：馬崇堅 ，廖佩穎草莓葉柄和葉片的組織培養(yǎng)安徽農(nóng)業(yè)科學 ，（）：何歡樂 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