浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) Acta Agriculturae Zhejiangensis， 2018， 30( 10) : 1699 1704 http: / /www zjnyxb cn劉紫英 ， 黃磊 ， 袁斌 ， 等 一株草莓連作自毒障礙主要物質(zhì)苯甲酸降解細(xì)菌的篩選及其降解效果研究 J 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) ，2018， 30( 10) : 1699 1704DOI: 10. 3969/j issn1004-1524. 2018. 10. 13收稿日期 : 2018-01-07基金項(xiàng)目 : 國家自然科學(xué)基金 ( 31660603)作者簡介 : 劉紫英 ( 1979) ， 女 ， 江西萬年人 ， 碩士 ， 副教授 ， 研究方向?yàn)橹参锊±韺W(xué) 。E-mail: yingziliu2008163 com* 通信作者 ， 劉小林 ， E-mail: 13507058860163 com一株草莓連作自毒障礙主要物質(zhì)苯甲酸降解細(xì)菌的篩選及其降解效果研究劉紫英1， 黃 磊2， 袁 斌3， 劉小林3， *， 徐勝光4， 黃 濤3( 1 宜春學(xué)院 化學(xué)與生物工程學(xué)院 ， 江西 宜春 336000; 2 宜春第九中學(xué) ， 江西 宜春 336000; 3 宜春學(xué)院 生命科學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院 ， 江西 宜春 336000; 4 昆明學(xué)院 云南省都市特色農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究中心 ， 云南 昆明 650214)摘 要 : 草莓連作障礙的主要原因是根系產(chǎn)生的自毒作用 ， 苯甲酸是草莓連作障礙的主要自毒物質(zhì)之一 。為減少苯甲酸對(duì)草莓的危害 ， 選用苯甲酸為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基 ， 逐步提高苯甲酸濃度 ， 以期篩選出草莓根際中降解苯甲酸的細(xì)菌 ， 并通過紫外可見分光光度法測定其對(duì)苯甲酸的降解能力 。隨后 ， 對(duì)篩選出的有效降解菌與 3 株草莓根腐病菌進(jìn)行拮抗試驗(yàn) ， 同時(shí)對(duì)其顯微形態(tài)特征和 16S rDNA 基因序列進(jìn)行分析與分子鑒定 。篩選出的菌株 L501 對(duì)苯甲酸的降解率為 87. 5%， 表明其能有效減輕苯甲酸的自毒作用 ， 同時(shí) L501 對(duì)草莓根腐病菌有較強(qiáng)的拮抗作用 。經(jīng)鑒定 ， 菌株 L501 為枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis， 具有解毒抗菌雙重功能 。關(guān)鍵詞 : 草莓 ; 自毒作用 ; 連作障礙 ; 降解細(xì)菌 ; 苯甲酸中圖分類號(hào) : S668. 4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 : A 文章編號(hào) : 1004-1524( 2018) 10-1699-06Study on screening degrading bacteria and its degradation effect on benzoic acid of autotoxiccompounds in strawberry cropping obstacleLIU Ziying1， HUANG Lei2， YUAN Bin3， LIU Xiaolin3， *， XU Shengguang4， HUANG Tao3( 1 College of Chemistry and Bioengineering， Yichun University， Yichun 336000， China; 2 Yichun Ninth MiddleSchool， Yichun 336000， China; 3 College of Life Science and esources Environment， Yichun University， Yichun336000， China; 4 Yunnan Urban Agricultural Engineering and Technological esearch Center， Kunming University，Kunming 650214， China)Abstract: The main reasons of the barrier of strawberry planting were the autotoxic compounds from the soil of straw-berry In order to effectively reduce the harm of the autotoxicity of strawberry， the study was aimed to screen the bac-teria with the capacity of degrading benzoic acid The strains were isolated by using benzoic acid as the sole carbonsource and gradually increasing benzoic acid to screen degrading bacteria of strawberry autotoxic compounds The do-mestication method was adopted by the ultraviolet spectrophotometry Antagonistic effects of the effective degradationstrain on three strawberry root rot strains were determined The bacteria were identified by the microbiology character-istics and the sequence analysis of 16S rDNA gene The degradation rate was 87. 5%， which indicated the stainL501 has high efficiency degradation to benzoic acid Meanwhile， the stain L501 showed strong antagonistic effectsagainst all tested three fungi of strawberry root rot The stain L501 was identified as Bacillus subtilis， which haddouble function of degradation benzoic acid and antagonisticKey words: strawberry; autotoxicity; cropping obstacle; degrading bacteria; benzoic acid當(dāng)前制約我國草莓規(guī)?；a(chǎn)的主要原因之一依然為連作障礙 1， 而連作障礙的主要原因是草莓自毒作用 。草莓自毒引起土壤養(yǎng)分失衡和土壤微生物區(qū)系失調(diào) ， 同時(shí)根系分泌物中積累了大量有毒物質(zhì) 2， 因此研究根系自毒物質(zhì)對(duì)栽培作物產(chǎn)量的影響是當(dāng)今研究的有效途徑 3。草莓根系分泌物中有一些化感物質(zhì)具有自毒作用 4， 而苯甲酸在化感物質(zhì)中含量很高 ， 毒性較強(qiáng) 5。草莓根系自毒物質(zhì)的加速降解或活性降低 ， 會(huì)有助于控制草莓連作障礙的發(fā)生 ， 篩選和開發(fā)微生物修復(fù)劑是解決作物連作障礙的熱點(diǎn) 6。有 研 究 表 明 ， Erwinea herbicola 7、Mi-crobacterium hydrocarbonoxydans 8、Eubacteriumoxidoreducens 9、Ochrobactrum sp 10等菌株可有效降解細(xì)菌 。本研究篩選苯甲酸高效降解菌株 ，同時(shí)檢測其與草莓根腐病原的拮抗性 ， 篩選到解毒抗菌雙重功能的菌株 ; 探討利用細(xì)菌降解草莓自毒物質(zhì)的可行性 ， 為草莓連作障礙的防治提供理論依據(jù) 。1 材料與方法11 供試材料供試草莓的品種為威州草莓 。供篩選降解菌株的土樣 : 于 2016 年 11 月 28日取自江西省宜春市袁州區(qū)宜春學(xué)院正大門前方兩個(gè)草莓種植大棚 ， 其中連作 10 年和 3 年的草莓種植大棚均采取五點(diǎn)取樣法 ， 每點(diǎn)取 3 個(gè)樣品 ， 各取 15 份 10 15 cm 土樣 。F403 尖孢鐮刀菌 Fusarium oxysporum( 序列號(hào) MG515306) 、F405 腐皮鐮孢 Fusarium solani( 序列號(hào) MG515307) 、F407 黃色鐮孢 Fusariumculmorum( 序列號(hào) MG515308) 均為草莓根腐病病原 ， 系宜春學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室保存的菌株 。12 主要試劑和儀器設(shè)備供試苯甲酸分析純 ( 天津永大化學(xué)試劑有限公司出產(chǎn) ) 。Ezup 柱式細(xì)菌基因組 DNA 抽提試劑盒 、2 ×EasyTaq PC SuperMix、Marker 2000 ladder、16S rDNA 擴(kuò)增引物 ( 27F: 5'-ATTCCGGTTGATC-CTGC-3'， 1541: 5'-AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3') 均購自生工生物工程有限公司 。PH100-DB00U-IPL 數(shù)碼顯微鏡 ， 江西鳳凰光學(xué)集團(tuán)有限公司 ; TGL-16G 臺(tái)式高速離心機(jī) ， 上海安亭科學(xué)儀器廠 ; 752N 紫外可見光分光光度計(jì) ， 上海佑科儀器儀表有限公司 ; T100 梯度 PC儀 ， Bio-ad。13 培養(yǎng)基改良無機(jī)鹽培養(yǎng)基 : ( NH4)2SO42 g·L1，Na2HPO41. 3 g·L1， KH2PO42 g·L1， 苯甲酸 100 2 000 mg·L1， NaCl 5 g·L1， 余量為蒸餾水 ; pH為 7. 2。14 降解菌株的富集和分離采用富集培養(yǎng)的馴化方法 ， 將連作 10 年草莓種植大棚地 ( L1、L2、L3、L4、L5) 和連作 3 年草莓種植大棚地 ( 1、2、3、4、5) 隨機(jī)取樣 10g 后接種入苯甲酸作為唯一碳源的基礎(chǔ)無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中 。濃度梯度 : L1 和 1 為 100 mg·L1、L2 和 2 為 200 mg·L1、L3 和 3 為 300 mg·L1、L4 和 4 為 400 mg·L1、L5 和 5 為 500 mg·L1， 兩個(gè)對(duì)照組不接入土樣 。在前期進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選后 ， 設(shè)定 140 r·min1、37 搖床振蕩培養(yǎng)7 d， 然后將平板涂布于固體培養(yǎng)基 ， 培養(yǎng)皿于 37培養(yǎng) 72 h， 然后挑取單個(gè)菌落 ， 進(jìn)行純化培養(yǎng) 。15 降解菌株的篩選與鑒定15. 1 初篩平板涂布之后 ， 觀察固體培養(yǎng)基菌落生長情況 ， 將長勢較好的固體培養(yǎng)基菌落進(jìn)行單菌落挑選實(shí)驗(yàn) ， 每株菌重復(fù) 3 次 ， 將篩選純化培養(yǎng)得到的菌株分別進(jìn)行編號(hào) ( L101、L102、L501、L502、L503; 101、102、103501、502、503) 。15. 2 復(fù)篩將初篩獲得的降解菌株移接到三角瓶液體培養(yǎng) 基 中 ， 培 養(yǎng) 基 含 ( NH4)2SO42 g·L1，Na2HPO41.3 g·L1， KH2PO42 g·L1， 苯甲酸 100 2 000 mg·L1， NaCl 5 g·L1， 余量為蒸餾水 ; 其苯甲酸濃度為 1 000 mg·L1， 接種初篩降解菌 ( 1 ×107cfu·mL1， 加上菌液濃度 ) 量為每瓶 1 mL， 對(duì)·0071· 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 第 30 卷 第 10 期照為 1 mL 無菌水 ， 設(shè)定 140 r·min1、37 搖床振蕩培養(yǎng) 7 d， 觀察其生長情況 ， 檢測苯甲酸殘留量 。16 降解菌菌株對(duì)苯甲酸的降解測定16. 1 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定取苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)液 0、1. 00、2. 00、4. 00、6. 00、8. 00、10. 00 mL， 分別加入到 100 mL 容量瓶中 ，加少量蒸餾水搖勻 ， 然后用蒸餾水定容 ， 以零管作參照對(duì)比 ， 用石英比色杯在波長 230 nm 下分別測定其吸光度 ( D230) ， 以吸光度 ( D230) 為縱坐標(biāo) ， 橫坐標(biāo)為苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)液的濃度 ， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。16. 2 樣品中苯甲酸殘留量的測定在液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng) 7 d 的過程中 ， 期間每隔 24 h， 取出 5 mL 培養(yǎng)液加入到 10 mL 無菌離心管中 ， 8 000 r·min1， 25 ， 離心 8 min 后過濾 ( 0. 22 m) ， 去掉菌體即為待測液 。選用紫外可見分光光度法 ， 用石英比色杯裝待測液在波長230 nm 下測定其吸光度 ( D230) ， 根據(jù)吸光度( D230) 和苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中苯甲酸的殘留含量 。17 降解菌對(duì)草莓根腐病的皿內(nèi)拮抗作用將復(fù)篩獲得效果最好的降解菌在 LB 培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng) 140 r·min1， 48 h 后以 10 000 r·min1速度離心 5 min， 0. 2 m 濾膜過濾得上清液備用 。F403 尖孢鐮刀菌 ( Fusarium oxysporum) 、F405 腐皮鐮孢 ( Fusarium solani) 、和 F407 黃色鐮孢 ( Fusarium culmorum) 接種于 PDA 斜面 ， 28 培養(yǎng) 5 d， 加入無菌水 ， 刮下孢子混勻成孢子懸浮液 ( 1 × 107mL1) 。將懸浮液加入 100 mL 融化冷卻至 45 左右的 PDA 培養(yǎng)基中 ， 搖勻后制成含根腐病原菌的 PDA 平板 。凝固后在含病原菌 PDA 平板中間用無菌打孔器打孔 ， 并取已過濾的降解菌 L501 100 L，28 培養(yǎng) 5 d， 十字交叉法測量抑菌圈直徑 。18 降解菌的鑒定對(duì)最佳降解菌株 L501 進(jìn)行形態(tài)學(xué)和革蘭氏染色的微觀形態(tài)觀察 ， 并測定其 16S rDNA 序列 ，選用通用引物進(jìn)行 PC 擴(kuò)增 ， 由生工生物工程公司進(jìn)行測序分析 。將測序結(jié)果提交 NCBI 網(wǎng)站的GenBank， 采用 BLAST 比對(duì) ， 并用 MEGA6. 0 軟件構(gòu)建菌株系統(tǒng)發(fā)育樹 ， NJ 算法 ， 自展次數(shù)設(shè)定為1 000; 結(jié) 合 常見細(xì)菌鑒定手冊 鑒 定 菌株 L501 11。2 結(jié)果與分析21 降解菌株的篩選及對(duì)苯甲酸的降解率由苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線得吸光度與苯甲酸濃度關(guān)系為 : y = 0. 005x + 0. 006， 2= 0. 999( 圖 1) 。由表 1 可以看出 ， 分離純化出的 67 株菌株中有 9株對(duì)苯甲酸均具有降解能力 ， 分別為 L203、L302、L403、L501、L502、401、402、403、503， 其降解率在 168 h 時(shí)分別為 13. 3%、17. 1%、43. 2%、87. 5%、40. 8%、49. 5%、46. 1%、57. 3%、42. 7%，其中 L501 最高 ， 為 87. 5%。經(jīng)過 7 d 的培養(yǎng) ， 9 株降解菌對(duì)苯甲酸的降解率為 13. 3% 87. 5%， 說明從草莓根部土壤分離篩選出的菌株對(duì)苯甲酸具備有效降解能力 。復(fù)篩結(jié)果表明 ， L501 降解苯甲酸的能力最強(qiáng) ， 因而以 L501 做拮抗實(shí)驗(yàn)和鑒定 。22 降解菌對(duì)草莓根腐病的皿內(nèi)拮抗作用降解菌株 L501 的發(fā)酵液表現(xiàn)拮抗活性 ， 結(jié)果如表 2。其中 ， 對(duì) F405 腐皮鐮孢 Fusarium sola-ni 菌株的生長具有很強(qiáng)的抑制作用 ， 拮抗圈直徑達(dá) 15. 0 mm， 對(duì) F403 尖孢鐮刀菌 Fusarium oxys-porum 拮抗直徑為 14. 5 mm; 降解菌株 L501 對(duì)草莓根腐病菌 F407 黃色鐮孢 Fusarium culmorum 拮抗直徑為 11. 0 mm; 且透明度都很好 。綜上 ， 降解菌株 L501 對(duì)草莓根腐病有較好的抑制作用 。23 降解菌株 L501 的鑒定L501 在 168 h 時(shí)對(duì)苯甲酸的降解率達(dá)到最高 ， 降解率為 87. 5%。形態(tài)學(xué)觀察表明 ， 降解菌菌落為乳白色 ， 近圓形 ， 邊緣光滑濕潤 ， 稍具小齒 ，圖 1 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig1 Standard curve of benzoic acid·1071·劉紫英 ， 等 一株草莓連作自毒障礙主要物質(zhì)苯甲酸降解細(xì)菌的篩選及其降解效果研究表 1 九株降解細(xì)菌對(duì)苯甲酸降解率及苯甲酸的殘留量Table 1 Degradation rate of benzoic acid by 9 strains of degrading bacteria and residual benzoic acid降解菌編號(hào)Number指標(biāo)Score降解時(shí)間 Degrading time/h24 48 72 96 120 144 168L501 殘留量 esidual content/( mg·L1) 375. 9 256. 0 247. 0 206. 5 170. 5 118. 0 62. 5降解率 Degrading rate/% 24. 8 48. 8 50. 6 58. 7 65. 9 76. 4 87. 5L502 殘留量 esidual content/( mg·L1) 382. 1 315. 9 298. 6 295. 8 237. 5 207. 9 160. 9降解率 Degrading rate/% 23. 6 36. 8 40. 3 40. 8 52. 5 58. 4 67. 8403 殘留量 esidual content/( mg·L1) 287. 6 265. 3 190. 7 183. 6 179. 3 175. 2 170. 8降解率 Degrading rate/% 28. 1 33. 7 52. 3 54. 1 55. 2 56. 2 57. 3401 殘留量 esidual content/( mg·L1) 267. 4 249. 8 208. 3 205. 7 203. 6 202. 6 201. 9降解率 Degrading rate/% 33. 2 37. 6 47. 9 48. 6 49. 1 49. 4 49. 5402 殘留量 esidual content/( mg·L1) 281. 9 256. 3 219. 5 218. 9 217. 3 216. 8 215. 6降解率 Degrading rate/% 29. 5 35. 9 45. 1 45. 3 45. 7 45. 8 46. 1L403 殘留量 esidual content/( mg·L1) 297. 2 261. 8 235. 1 230. 6 228. 3 227. 6 227. 3降解率 Degrading rate/% 25. 7 34. 6 41. 2 42. 4 42. 9 43. 1 43. 2503 殘留量 esidual content/( mg·L1) 388. 7 357. 1 303. 8 297. 5 294. 1 287. 9 286. 7降解率 Degrading rate/% 22. 3 28. 6 39. 2 40. 5 41. 2 42. 4 42. 7L302 殘留量 esidual content/( mg·L1) 268. 1 256. 3 253. 9 251. 7 250. 1 249. 4 248. 7降解率 Degrading rate/% 10. 6 14. 7 15. 4 16. 1 16. 6 16. 9 17. 1L203 殘留量 esidual content/( mg·L1) 186. 2 181. 6 179. 5 177. 3 176. 5 174. 8 173. 4降解率 Degrading rate/% 6. 9 9. 2 10. 3 11. 4 11. 8 12. 6 13. 3表 2 L501 對(duì) 3 種草莓根腐病病原菌的拮抗圈直徑Table 2 Diameters of the inhibitory zones of strain L501 against three strawberry root rot降解菌Degrading bacteria草莓根腐病病原菌Pathogenic fungi of strawberry root rot拮抗圈直徑Diameters of the inhibitory zones/mm透明度TransparencyL501L501L501F405 Fusarium solaniF403 Fusarium oxysporumF407 Fusarium culmorum15. 0145110+ + + + + + +齒 ， 表面皺褶 ， 中部隆起 。光學(xué)顯微鏡下可以觀察到菌株為革蘭氏陽性菌 ， 為短桿菌 ; 芽孢中生 ，稍膨大 ( 圖 2) 。分子鑒定菌株 L501 的 16S rDNA 序列長度為 1 456 bp， 提 交 GenBank， 獲 得 序 列 號(hào) 為MG519283， 用 NCBI 網(wǎng)站中 BLAST 程序進(jìn)行 L501圖 2 菌株 L501 顯微特征 ( 1 000 × )Fig 2 Morphological characters of the strain L501( 1 000 × )的序列與其相似性極高的序列比較分析 ， 與降解菌 L501 的 16S rDNA 序列同源性在 99% 以上的菌株均為 Bacillus subtilis， 初步將此菌株歸為芽孢桿菌屬 ， 選 GenBank 中與 L501 菌株相似性較高的 5 個(gè)菌株構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹 ， 結(jié)果如圖 3 所示 。綜上 ， 依據(jù) 16S rDNA 序列相似性分析 ， 結(jié)合菌株L501 形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 ， 對(duì)照 常見細(xì)菌鑒定手冊 ，鑒定菌株 L501 為枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis。3 結(jié)論與討論研究表明 ， 對(duì)草莓連作自毒作用的降解菌多為放線菌 ， 如解靈軍等 12報(bào)道的對(duì)羥基苯甲酸降解菌菌株 B3512 和毛寧等 13報(bào)道的淡紫褐鏈霉菌 、Streptomyces sp。研究顯示 ， 降解菌制成的放線菌制劑能有效減輕草莓連作的自毒作用 。孫敬祖等 14研究表明 ， 放線菌可以定殖在草莓根·2071· 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 第 30 卷 第 10 期圖 3 菌株 L501 的 16S rDNA 序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹Fig3 Phylogenetic tree of the stain L501 based on 16S rDNA sequence表 ， 并在草莓連作障礙修復(fù)中起到防病促生作用 。關(guān)于細(xì)菌對(duì)作物連作自毒作用的降解作用研究也有些報(bào)道 。方艷芬等 15研究表明 ， 對(duì)苯甲酸的降解效果較好的細(xì)菌有假單胞菌 、不動(dòng)桿菌及產(chǎn)堿桿菌屬 。而細(xì)菌作為草莓連作自毒作用的降解菌卻鮮見報(bào)道 。何志剛等 16 17通過研究表明 ， 枯草芽孢桿菌作為花生和番茄自毒物質(zhì)降解菌 ， 對(duì)肉桂酸 、對(duì)羥基苯甲酸 、苯甲酸和水楊酸都有較強(qiáng)的降解力 ， 同時(shí) ， 它具有較強(qiáng)的拮抗能力 ， 對(duì)根腐菌和 Aspergillus flavus 有拮抗作用 ，這是一種有潛力的生物防治菌 。研究顯示 ， 枯草芽孢桿菌是得到國內(nèi)外學(xué)者青睞的一種生防細(xì)菌 ， 并已開發(fā)成相關(guān)生防試劑投放到市場 18?？莶菅挎邨U菌作為生防菌能夠抑制草莓根腐病菌尖孢鐮刀菌和草莓枯萎病菌 19 20。本研究表明 ， 篩選得到一菌株 L501 枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis， 而且其對(duì)草莓根系分泌物中的主要有害化感物質(zhì) 苯甲酸有較強(qiáng)的降解作用 ， 并能夠有效拮抗草莓根腐病菌 。L501 枯草芽孢桿菌系草莓根泌自毒物質(zhì)苯甲酸的降解菌 ， 具有成為草莓根腐病的生防菌潛力 ， 可用于修復(fù)草莓重茬 。本研究僅探索該菌株對(duì)苯甲酸的降解力 ， 而其對(duì)混合酚酸類或其他自毒物質(zhì)的降解能力以及在田間的實(shí)際修復(fù)效果 ， 尚需進(jìn)一步深入研究 。參考文獻(xiàn) ( eferences) : 1 SANDESON M A， SKINNE H， BAKE D J， et alPlant species diversity and management of temperate forageand grazing land ecosystems J Crop Science， 2004， 44( 4) :1132 1144 2 肖蓉 ， 鄧舒 ， 張春芬 ， 等 連作草莓根際土壤特征及修復(fù)技術(shù)研究進(jìn)展 J 中國農(nóng)學(xué)通報(bào) ， 2014， 30( 19) : 81 85XIAO ， DENG S， ZHANG C F， et al eview of character-istics and remediation techniques of rhizosphere soil of continu-ous cropped strawberry J Chinese Agricultural Science Bulle-tin， 2014， 30( 19) : 81 85 ( in Chinese with English ab-stract) 3 甄文超 ， 代麗 ， 胡同樂 ， 等 連作對(duì)草莓生長發(fā)育和根部病害發(fā)生的影響 J 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ， 2004， 27( 5) : 68 71ZHEN W C， DAI L， HU T L， et al Effect of continuouscropping on growth and root diseases of strawberry J Journalof Agricultural University of Hebei， 2004， 27( 5) : 68 71 ( inChinese with English abstract) 4 代麗 ， 趙紅梅 ， 甄文超 草莓再植病害中的化感作用研究 J 科技導(dǎo)報(bào) ， 2006， 24( 6) : 52 54DAI L， ZHAO H M， ZHEN W C Study of allelopathy instrawberry replanting disease J Science Technology e-view， 2006， 24( 6) : 52 54 ( in Chinese with English ab-stract) 5 甄文超 ， 王曉燕 ， 孔俊英 ， 等 草莓根系分泌物和腐解物中酚酸類物質(zhì)的檢測及其化感作用 J 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ，2004， 27( 4) : 74 79ZHEN W C， WANG X Y， KONG J Y， et al Determination ofphenolic acids in root exudates and decomposing products ofstrawberry and their allelopathy J Journal of Agricultural U-niversity of Hebei， 2004， 27( 4) : 74 79 ( in Chinese withEnglish abstract) 6 扈金麗 ， 尹寶重 ， 甄文超 ， 等 防治草莓連作障礙的復(fù)合生防制劑的篩選 J 中國農(nóng)學(xué)通報(bào) ， 2011， 27( 13) : 249 252HU J L， YIN B Z， ZHEN W C， et al Selection of complexbiological control agents to prevent replant diseases on straw-berry J Chinese Agricultural Science Bulletin， 2011， 27( 13) : 249 252 ( in Chinese with English abstract) 7 CHATTEJEE A K， GIBBINS L N Metabolism of phloridzin·3071·劉紫英 ， 等 一株草莓連作自毒障礙主要物質(zhì)苯甲酸降解細(xì)菌的篩選及其降解效果研究by Erwinia herbicola， nature of the degradation products， andthe purification and properties of phloretin hydrolase J Jour-nal of Bacteriology， 1969， 100( 2) : 594 600 8 祁國振 ， 毛志泉 ， 胡秀娜 ， 等 蘋果根際自毒物質(zhì)降解菌的篩選鑒定及降解特性研究 J 微生物學(xué)通報(bào) ， 2016， 43( 2) : 330 342QI G Z， MAO Z Q， HU X N， et al Isolation， identificationand degradation characteristics of applerhizosphere autotoxiciticcompounds-degrading bacteria J Microbiology China，2016， 43( 2) : 330 342 ( in Chinese with English abstract) 9 KUMHOLZ L ， BYANT M P Eubacterium oxidoreducenssp nov requiring H2 or formate to degrade gallate， pyrogal-lol， phloroglucinol and quercetin J Archives of Microbiolo-gy， 1986， 144( 1) : 8 14 10 周圍 ， 張歡歡 ， 曾小波 ， 等 芳香族化合物降解菌 PM8的分離鑒定及降解特性 J 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2012， 51( 9) : 1775 1778ZHOU W， ZHANG H H， ZENG X B， et al Isolation， iden-tification and characteristic of aromatic compounds degradingstrain PM8 Hubei Agricultural Sciences， 2012， 51 ( 9 ) :1775 1778 ( in Chinese with English abstract) 11 東秀珠 ， 蔡妙英 常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊 M 北京 : 科學(xué)出版社 ， 2001 12 解靈軍 ， 尹寶重 ， 高峰 ， 等 草莓根系自毒物質(zhì)降解菌的篩選及降解效果研究 J 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ， 2009， 32( 4) : 76 78XIE L J， YIN B Z， GAO F， et al Screening of the degrada-tion bacterium to strawberry root auto-toxic chemical and theeffect of its degradation J Journal of Agricultural Universityof Hebei， 2009， 32( 4) : 76 78 ( in Chinese with Englishabstract) 13 毛寧 ， 薛泉宏 ， 唐明 2 株放線菌對(duì)土壤中苯甲酸和對(duì)羥基苯甲酸的降解作用 J 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào) ， 2010，38( 5) : 143 148MAO N， XUE Q H， TANG M Biodegradation of benzoicacid and p-hydroxybenzoic acid in the strawberry planting soilby two strains of actinomyces J Journal of Northwest AFUniversity ( Natural Science Edition) ， 2010， 38( 5) : 143 148 ( in Chinese with English abstract) 14 孫敬祖 ， 薛泉宏 ， 唐明 ， 等 放線菌制劑對(duì)連作草莓根區(qū)微生物區(qū)系的影響及其防病促生作用 J 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào) ( 自然科學(xué)版 ) ， 2009， 37( 12) : 153 158SUN J Z， XUE Q H， TANG M， et al Study on the effect ofactinomycetes on microflora of replanted strawberry's root do-main and the bio-control effectiveness J Journal of North-west AF University ( Natural Science Edition) ， 2009， 37( 12) : 153 158 ( in Chinese with English abstract) 15 方艷芬 ， 黃應(yīng)平 ， 蘇靜 ， 等 苯甲酸和苯胺的微生物降解研究 J 環(huán)境科學(xué)與技術(shù) ， 2008， 31( 4) : 68 71FANG Y F， HUANG Y P， SU J， et al Biodegradation ofbenzoic acid and aniline in waste water J EnvironmentalScience Technology， 2008， 31( 4) : 68 71 ( in Chinesewith English abstract) 16 何志剛 ， 汪仁 ， 王秀娟 ， 等 花生自毒物質(zhì)降解菌的篩選及其降解效果初步研究 J 中國農(nóng)學(xué)通報(bào) ， 2014， 30( 21) :224 227HE Z G， WANG ， WANG X J， et al Preliminary study ofscreening of peanut autotoxicity degrading microorganism andthe degradation effect J Chinese Agricultural Science Bulle-tin， 2014， 30( 21) : 224 227 ( in Chinese with English ab-stract) 17 何志剛 ， 婁春榮 ， 王秀娟 ， 等 番茄自毒物質(zhì)降解菌的篩選及其降解效果 J 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2017， 45( 5) : 114 116HE Z G， LOU C ， WANG X J， et al Study of screening oftomato autotoxicity degrading microorganism and the degrada-tion effect J Jiangsu Agricultural Sciences， 2017， 45( 5) :114 116 ( in Chinese) 18 黃曦 ， 許蘭蘭 ， 黃榮韶 ， 等 枯草