<p> 18年 第 5期 18, 8 5 !“ !“ !“ !“ 研 究 報(bào) 告 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 M en - m y co - 93- 63 胞 外 分 泌 蛋 白 對 黃 瓜 白 粉 病 的 誘 導(dǎo) 抗 性 初 報(bào) 郭 景 紅 1 ， 甄 丹 妹 1 ， 韓 興 1 ， 耿 紹 陽 1 ， 李 亞 寧 1 ， 劉 大 群 1， 2 （ 1. 河 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 植 物 保 護(hù) 學(xué) 院 /河 北 省 農(nóng) 作 物 病 蟲 害 生 物 防 治 工 程 技 術(shù) 研 究 中 心 /國 家 北 方 山 區(qū) 農(nóng) 業(yè) 工 程 研 究 中 心 ， 河 北 保 定 071001； 2. 中 國 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 研 究 生 院 ， 北 京 100081） 摘 要 ： 為 了 明 確 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 M en - m y co - 93- 63胞 外 分 泌 蛋 白 是 否 可 誘 導(dǎo) 對 黃 瓜 白 粉 病 的 抗 病 性 ， 通 過 硫 酸 銨 沉 淀 的 方 法 ， 從 M en - m y co - 93- 63的 發(fā) 酵 液 中 分 離 出 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 ， 經(jīng) - PA G 電 泳 檢 測 ， 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 相 對 分 子 量 在 15 60 k 范 圍 內(nèi) 。 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 8種 供 試 植 物 病 原 菌 均 未 表 現(xiàn) 出 抑 制 作 用 。 但 能 誘 導(dǎo) 煙 草 的 過 敏 反 應(yīng) ， 處 理 12 h 后 ， 處 理 部 位 出 現(xiàn) 水 漬 狀 ， 24h 后 出 現(xiàn) 壞 死 斑 。 室 內(nèi) 盆 栽 試 驗(yàn) 表 明 ， 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 可 以 誘 導(dǎo) 黃 瓜 對 白 粉 病 的 抗 性 ， 誘 抗 效 果 為 54. 49% 。 關(guān) 鍵 詞 ： 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 M en - m y co - 93- 63； 誘 導(dǎo) 抗 病 性 ； 過 敏 反 應(yīng) ； 防 效 中 圖 分 類 號 ： 436.421.12 文 獻(xiàn) 標(biāo) 識 碼 ： A 文 章 編 號 ： 1672-6820（ 2018） 05-0005-05 收 稿 日 期 ： 2017-10-30； 修 回 日 期 ： 2018-02-22 基 金 項(xiàng) 目 ： 國 家 重 點(diǎn) 研 發(fā) 計(jì) 劃 （ 2017Y F 0200900） ； 河 北 省 現(xiàn) 代 農(nóng) 業(yè) 產(chǎn) 業(yè) 技 術(shù) 體 系 中 藥 材 創(chuàng) 新 團(tuán) 隊(duì) 項(xiàng) 目 （ HB T 2013040203） 作 者 簡 介 ： 郭 景 紅 ， 碩 士 研 究 生 ， 研 究 方 向 為 植 物 病 害 生 物 防 治 。 - m ai l ： gu o j i n gh o n g199275 163.co m 通 訊 作 者 ： 李 亞 寧 ， 教 授 ， 博 導(dǎo) ， 研 究 方 向 為 植 物 病 害 生 物 防 治 。 - m ai l ： y an i n g22 163.co m 劉 大 群 ， 教 授 ， 博 導(dǎo) ， 研 究 方 向 植 物 病 理 學(xué) 研 究 。 - m ai l ： l i u daq u n caas .cn 。 S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s - -9 - w w Gu o i n gh o n g 1 ,Z h en an m ei 1 ,Han Xi n g 1 ,Gen g h ao y an g 1 ,Li Y an i n g 1 ,Li u aq u n 1, 2 （ 1. o l l ege o fPl an t Pr o t ect i o n ,A gr i cu l t u r al Un i v er s i t y o fHebei /Bi o l o gi cal o n t r o l en t er o f r o p i s eas es an d n s ect Pes t s o fHebei Pr o v i n ce/ at i o n al n gi n eer i n g es ear ch en t er f o r A gr i cu l t u r e i n o r t h er n M o u n t ai n o u s A r eas ,Bao di n g Hebei 071001, h i n a. 2. Gr adu at e ch o o l o f h i n es e A cadem y o fA gr i cu l t u r al ci en ces ,Bei j i n g 100081, h i n a） : T o ex p l o r e i n du ced r es i s t an ce o fS t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s M en -m y co -93-63,ex t r acel l u l ar s ecr et ar y p r o t ei n s w er e i s o l at ed f r o m n o n -o r gan i s m f er m en t at i o n s u p er n at an t u s i n g am m o n i u m s u l f at e p r eci p i t at i o n an d t h en s u bj ect ed t o -PA G el ect r o p h o r es i s w i t h m o l ecu l ar w ei gh t s o f15-60 k . T h e r es u l t s s h o w ed t h at t h e p r o t ei n h ad n o i n h i bi t i v e ef f ect o n 8 p l an t p at h o gen s w h i l e co u l d i n du ce h y p er s en s i t i v e r eact i o n i n t o bacco l eav es w i t h w at er y l es i o n s an d n ecr o t i c s p o t ap p ear i n g 12 h an d 24 h af t er t r eat m en t . n do o r p o t t es t s s h o w ed t h e p r o t ei n co u l d i n du ce cu cu m ber r es i s t an ce t o p o w der y m i l dew w i t h co n t r o l l i n g ef f i ci en cy o f54.49% . w :S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s M en -m y co -93-63;i n du cedr es i s t an ce;h y p er s en s i t i v e r eact i o n ;co n t r o l l i n g ef f ect 5 · · 1 8 年 第 5 期 1 8 , 8 5 白 粉 病 是 由 子 囊 菌 門 （ As c o m y c o t a ） 白 粉 菌 目 （ r y s i p h a l e s ） 真 菌 侵 染 引 起 的 一 種 病 害 1 。 白 粉 菌 為 專 性 活 體 寄 生 菌 ， 且 小 種 分 化 眾 多 ， 寄 主 廣 泛 ， 可 以 侵 染 超 過 1 500個(gè) 屬 的 植 物 2 。 其 中 ， 由 白 粉 菌 引 起 的 瓜 類 白 粉 病 為 害 尤 為 嚴(yán) 重 。 目 前 ， 瓜 類 白 粉 病 的 防 治 主 要 靠 化 學(xué) 藥 劑 的 使 用 ， 長 期 使 用 化 學(xué) 藥 劑 容 易 導(dǎo) 致 抗 藥 性 和 環(huán) 境 污 染 問 題 的 產(chǎn) 生 。 因 此 ， 研 究 生 物 農(nóng) 藥 ， 利 用 蛋 白 類 激 發(fā) 子 誘 導(dǎo) 植 物 抗 病 性 控 制 植 物 病 害 成 為 當(dāng) 前 研 究 的 熱 點(diǎn) 2 。 蛋 白 質(zhì) 類 激 發(fā) 子 主 要 分 為 3類 ， 分 別 是 過 敏 蛋 白 、 隱 地 蛋 白 、 激 活 蛋 白 等 。 其 中 ， 前 兩 者 都 是 通 過 引 起 植 物 產(chǎn) 生 過 敏 性 壞 死 反 應(yīng) ， 進(jìn) 而 使 植 物 產(chǎn) 生 防 衛(wèi) 反 應(yīng) 4 。 激 活 蛋 白 則 是 通 過 激 活 植 物 體 內(nèi) 分 子 免 疫 系 統(tǒng) 和 一 系 列 代 謝 調(diào) 控 系 統(tǒng) ， 使 植 物 產(chǎn) 生 抗 病 性 和 防 衛(wèi) 反 應(yīng) 5 。 目 前 ， 許 多 研 究 已 從 毀 滅 炭 疽 菌 （ Co l l e t o t r i c h u m d e s t r u c t i v u m ） 5 、 極 細(xì) 鏈 格 孢 （ A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a ） 7 、 大 麗 輪 枝 菌 8 等 病 原 微 生 物 的 代 謝 物 中 尋 找 到 蛋 白 激 發(fā) 子 ， 誘 導(dǎo) 多 種 植 物 產(chǎn) 生 誘 導(dǎo) 抗 病 性 ， 并 表 現(xiàn) 出 良 好 抗 病 效 果 。 在 研 究 生 防 菌 對 植 物 的 誘 導(dǎo) 系 統(tǒng) 抗 病 性 作 方 面 ， 張 振 華 9 用 多 粘 芽 孢 桿 菌 Q -21誘 導(dǎo) 黃 瓜 對 炭 疽 病 的 抗 病 性 ， 趙 玉 華 等 1 0 發(fā) 現(xiàn) ， 樟 樹 內(nèi) 生 枯 草 芽 孢 桿 菌 B 05誘 導(dǎo) 煙 草 對 TMV系 統(tǒng) 抗 性 ， 王 璐 瑤 等 1 1 發(fā) 現(xiàn) ， 解 淀 粉 芽 孢 桿 菌 生 防 菌 株 B1619能 夠 誘 導(dǎo) 番 茄 植 株 產(chǎn) 生 系 統(tǒng) 抗 病 性 。 但 大 部 分 研 究 未 對 菌 株 及 其 代 謝 物 中 發(fā) 揮 抗 病 作 用 的 物 質(zhì) 進(jìn) 行 深 入 研 究 ， 以 獲 得 更 加 高 效 和 廣 泛 應(yīng) 用 于 生 產(chǎn) 的 生 物 農(nóng) 藥 。 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） Me n - m y c o -93-63是 從 馬 鈴 薯 瘡 痂 病 自 然 衰 退 土 壤 中 分 離 到 的 一 株 對 多 種 植 物 病 原 菌 具 有 抑 制 作 用 的 拮 抗 鏈 霉 菌 。 前 期 研 究 表 明 ， 該 菌 株 的 發(fā) 酵 液 對 黃 瓜 白 粉 病 的 保 護(hù) 效 果 達(dá) 88.64%， 噴 施 其 發(fā) 酵 液 后 黃 瓜 葉 片 內(nèi) 的 PO 、 AT、 PAL和 PPO 酶 的 活 性 在 一 定 時(shí) 間 內(nèi) 有 明 顯 上 升 的 趨 勢 1 2 。 本 試 驗(yàn) 采 用 硫 酸 銨 分 級 沉 淀 的 方 法 獲 得 了 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 溶 液 ， 驗(yàn) 證 了 其 具 有 誘 導(dǎo) 抗 病 的 生 物 活 性 ， 為 進(jìn) 一 步 挖 掘 生 防 鏈 霉 菌 中 蛋 白 類 激 發(fā) 子 提 供 了 有 力 依 據(jù) ， 為 獲 得 防 治 黃 瓜 白 粉 病 的 新 型 生 物 農(nóng) 藥 提 供 了 參 考 。 1 材 料 與 方 法 1 1 供 試 材 料 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） Me n - m y c o -93-63菌 株 ， 由 河 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 植 物 保 護(hù) 學(xué) 院 植 物 病 害 生 物 防 治 實(shí) 驗(yàn) 室 保 存 ； 本 生 煙 由 河 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 生 命 科 學(xué) 學(xué) 院 提 供 ； 黃 瓜 白 粉 菌 由 河 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 三 園 實(shí) 踐 園 提 供 ； 黃 瓜 品 種 為 香 農(nóng) 4號 。 供 試 培 養(yǎng) 基 為 P A培 養(yǎng) 基 和 發(fā) 酵 培 養(yǎng) 基 1 2 （ 葡 萄 糖 2.4%， 可 溶 性 淀 粉 0.8%， 花 生 餅 粉 1.5%， 玉 米 漿 0.8%， 氯 化 鈉 0.4%， 碳 酸 鈣 0.3%， 磷 酸 二 氫 鉀 0.02%） 。 1 發(fā) 酵 培 養(yǎng) 參 考 張 艷 等 1 3 方 法 制 備 Me n -m y c o -93-63發(fā) 酵 液 。 1 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 的 提 取 將 發(fā) 酵 液 4 ， 12 000 r /m i n 離 心 20 m i n ， 取 上 清 液 ， 0.22 m 濾 膜 過 濾 去 除 菌 體 。 加 硫 酸 銨 飽 和 溶 液 ， 使 上 清 液 中 硫 酸 銨 的 飽 和 度 達(dá) 到 30%， 4 靜 置 4 h ， 再 次 離 心 （ 4 ， 10 000 r /m i n ， 15 m i n ） ， 取 上 清 液 加 硫 酸 銨 粉 末 ， 使 上 清 液 中 的 飽 和 度 達(dá) 到 80%， 4 過 夜 ， 離 心 （ 4 ， 10 000 r /m i n ， 15 m i n ） ， 取 沉 淀 溶 于 適 量 PB 緩 沖 液 （ 20 m m o l /L， p H 7.8） ， 用 相 同 的 緩 沖 液 4 透 析 48 h ， 期 間 更 換 4次 緩 沖 液 ， 離 心 （ 4 ， 8 000 r /m i n ， 15 m i n ） ， 取 上 清 液 ， 在 冷 凍 干 燥 機(jī) 中 -50 冷 凍 干 燥 成 粉 末 ， 得 到 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 即 胞 外 分 泌 蛋 白 ， 將 其 在 -20 保 存 備 用 。 1 4 蛋 白 含 量 測 定 采 用 生 工 改 良 型 Br a d f o r d 法 蛋 白 濃 度 測 定 試 劑 盒 測 定 蛋 白 濃 度 。 1 5 抑 菌 作 用 測 定 采 用 牛 津 杯 法 測 定 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 Me n -m y c o -93- 63菌 株 對 8種 供 試 病 原 菌 是 否 具 有 抑 菌 活 性 。 供 試 病 原 菌 有 棉 花 黃 萎 病 菌 （ V e r t i c i l l i u m d a h l i a e ） 、 小 麥 赤 霉 病 菌 （ F u s a r i u m g r a m i n e a r u m ） 、 蘋 果 斑 點(diǎn) 落 葉 病 菌 （ A l t e r n a r i a b r a s s i c a e ） 、 梨 黑 斑 病 菌 （ A l t e r n a r i a a l - t e r n a t e ） 、 小 麥 根 腐 病 菌 （ Bi p o l a r i s s o r o k i n i a n a ） 、 蘋 果 輪 紋 病 菌 （ Bo t r y o s p h a e r i a b e r e n g e r i a n a ） 、 小 麥 紋 枯 病 菌 （ R h i z o c t o n i a c e r e a l i s ） 、 玉 米 大 斑 病 菌 （ E x s e r o h i l u m t u r c i c u m ） 。 取 100 L病 原 菌 孢 子 懸 浮 液 均 勻 涂 布 于 P A培 養(yǎng) 基 平 板 上 ， 將 滅 菌 的 牛 津 杯 輕 輕 置 于 其 6 · · 18年 第 5期 18, 8 5 1 M 66 45 35 27 20 14. 4 9. 5 6. 5 4. 1 M .蛋 白 標(biāo) 準(zhǔn) 分 子 量 1.蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 組 分 圖 1 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） - -9 - 菌 株 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 組 分 - 上 ， 向 牛 津 杯 內(nèi) 加 入 100 L 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 溶 液 ， 對 照 的 牛 津 杯 中 加 入 P B 緩 沖 液 。 培 養(yǎng) 3 d 后 ， 觀 察 是 否 出 現(xiàn) 抑 菌 圈 。 1 分 子 量 測 定 與 對 煙 葉 過 敏 性 測 定 M e n - m y c o - 93- 63蛋 白 粗 提 液 的 分 子 量 測 定 參 照 郭 堯 君 1 4 的 電 泳 方 法 。 另 選 取 具 有 5 7片 長 勢 良 好 的 健 康 煙 草 為 材 料 ， 用 1m L 不 帶 針 頭 的 注 射 器 ， 將 50 L 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 溶 液 從 煙 草 葉 子 背 面 注 射 進(jìn) 葉 片 中 ， 蛋 白 緩 沖 液 作 對 照 。 每 個(gè) 處 理 重 復(fù) 3次 。 分 別 于 處 理 后 12、 24 h 觀 察 是 否 有 過 敏 反 應(yīng) 的 壞 死 斑 形 成 ， 確 定 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 是 否 具 有 活 性 8 。 1 蛋 白 粗 提 物 溶 液 對 黃 瓜 白 粉 病 誘 導(dǎo) 抗 性 的 測 定 當(dāng) 黃 瓜 幼 苗 3葉 1心 時(shí) ， 將 幼 苗 隨 機(jī) 分 成 6組 ， 用 20 g / m L 的 蛋 白 粗 提 物 溶 液 進(jìn) 行 噴 霧 處 理 ， 葉 面 掛 滿 霧 滴 即 可 。 以 20 m m o L / L P B 緩 沖 液 為 對 照 ， 每 個(gè) 處 理 設(shè) 3個(gè) 重 復(fù) 。 噴 霧 處 理 后 24 h ， 噴 霧 接 種 濃 度 約 為 1× 10 7 c f u / m L 白 粉 菌 孢 子 懸 浮 液 。 處 理 14 d 后 ， 統(tǒng) 計(jì) 發(fā) 病 情 況 ， 計(jì) 算 病 情 指 數(shù) 和 防 治 效 果 。 病 情 分 級 標(biāo) 準(zhǔn) 參 照 a a y f 等 1 5的 方 法 ， 根 據(jù) 病 斑 占 葉 面 積 的 比 例 將 病 情 分 為 0、 1、 2、 3、 4級 。 0級 ： 無 病 斑 ， 葉 片 完 全 健 康 ； 1級 ： 病 斑 面 積 占 整 個(gè) 葉 面 積 的 10%及 其 以 下 ； 2級 ： 病 斑 面 積 占 整 個(gè) 葉 面 積 的 11% 25% ； 3級 ： 病 斑 面 積 占 整 個(gè) 葉 面 積 的 26% 50% ； 4 級 ： 病 斑 面 積 占 整 個(gè) 葉 面 積 的 50%以 上 。 病 情 指 數(shù) 和 防 效 計(jì) 算 ： 病 情 指 數(shù) = （ 各 級 病 葉 數(shù) × 相 對 級 數(shù) 值 ） /（ 調(diào) 查 總 葉 數(shù) × 4） × 100 防 效 （ % ） = 100% - （ 處 理 組 平 均 病 情 指 數(shù) /空 白 組 平 均 病 情 指 數(shù) ） × 100 結(jié) 果 與 分 析 1 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 的 提 取 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） M e n - m y c o - 93- 63菌 株 無 菌 體 發(fā) 酵 液 上 清 液 經(jīng) 硫 酸 銨 分 級 沉 淀 提 取 獲 得 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 ， 經(jīng) - P AG 電 泳 檢 測 ， 與 標(biāo) 準(zhǔn) 蛋 白 M a r k e r 對 比 ， 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 分 子 量 在 15 60 k 范 圍 內(nèi) （ 圖 1） 。 - - 9 - 菌 株 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 8種 病 原 菌 的 抑 菌 活 性 提 取 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） M e n - m y c o - 93- 63菌 株 的 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 經(jīng) 冷 凍 干 燥 濃 縮 后 ， 以 2 m g / m L 的 濃 度 對 8種 供 試 病 原 菌 進(jìn) 行 抑 菌 測 定 。 測 定 結(jié) 果 發(fā) 現(xiàn) ， 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 8種 供 試 病 原 菌 均 無 抑 制 作 用 （ 圖 2） 。 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 煙 草 的 生 物 活 性 鑒 定 提 取 的 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 經(jīng) 冷 凍 干 燥 濃 縮 后 ， 以 2 m g / m L 的 濃 度 對 健 康 煙 草 葉 片 進(jìn) 行 處 理 ， 煙 草 葉 片 出 現(xiàn) 明 顯 的 過 敏 性 壞 死 斑 （ 圖 3） ， 推 測 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 溶 液 中 含 有 具 有 誘 導(dǎo) 抗 病 生 物 活 性 的 蛋 白 激 發(fā) 子 ， 可 以 進(jìn) 一 步 對 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 進(jìn) 行 誘 導(dǎo) 抗 病 的 活 性 驗(yàn) 證 和 分 離 純 化 ， 以 獲 得 單 一 的 蛋 白 激 發(fā) 子 。 4 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 誘 導(dǎo) 黃 瓜 對 白 粉 病 的 效 果 處 理 14 d 后 ， 統(tǒng) 計(jì) 調(diào) 查 結(jié) 果 發(fā) 現(xiàn) ， 對 照 組 和 處 理 組 的 病 情 指 數(shù) 分 別 為 58.34和 26.55， 其 對 黃 瓜 白 粉 病 的 防 效 為 54.49% ， 表 明 提 取 的 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 黃 瓜 白 粉 病 具 有 誘 抗 保 護(hù) 作 用 ， 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 具 有 誘 導(dǎo) 抗 病 活 性 。 7 · · 1 8 年 第 5 期 1 8 , 8 5 1.蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 引 起 的 壞 死 斑 2.蛋 白 緩 沖 液 圖 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） - -9 - 菌 株 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 煙 草 葉 片 過 敏 性 反 應(yīng) 小 麥 赤 霉 病 菌 小 麥 根 腐 病 菌 小 麥 紋 枯 病 菌 梨 黑 斑 病 菌 蘋 果 斑 點(diǎn) 落 葉 病 菌 蘋 果 輪 紋 病 菌 玉 米 大 斑 病 菌 棉 花 黃 萎 病 菌 圖 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） - -9 - 菌 株 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 8 種 植 物 病 原 菌 的 平 板 抑 菌 效 果 前 期 研 究 表 明 ， 該 菌 株 的 發(fā) 酵 液 對 黃 瓜 白 粉 病 的 保 護(hù) 效 果 達(dá) 88.64% ， 高 于 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 黃 瓜 白 粉 病 的 誘 抗 效 果 ， 分 析 其 原 因 可 能 是 由 于 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 中 目 的 蛋 白 的 濃 度 偏 低 ， 或 者 發(fā) 酵 液 中 抗 生 素 等 其 他 組 分 也 具 有 誘 導(dǎo) 植 物 抗 病 性 的 作 用 。 結(jié) 論 與 討 論 蛋 白 源 激 發(fā) 子 在 植 物 的 誘 導(dǎo) 抗 病 方 面 表 現(xiàn) 出 良 好 的 效 果 。 但 目 前 發(fā) 現(xiàn) 的 蛋 白 源 激 發(fā) 子 大 部 分 是 從 病 原 微 生 物 中 提 取 獲 得 的 ， 對 植 物 具 有 促 生 作 用 的 生 防 菌 中 獲 得 的 蛋 白 源 激 發(fā) 子 很 少 。 王 顥 潛 1 6從 側(cè) 短 芽 孢 桿 菌 A 60中 分 離 得 到 的 蛋 白 激 發(fā) 子 P e B L 1能 夠 誘 導(dǎo) 煙 草 對 病 毒 和 細(xì) 菌 性 病 害 的 抗 性 ， 王 寧 波 1 6 從 解 淀 粉 芽 孢 桿 菌 6中 分 離 得 到 蛋 白 激 發(fā) 子 P e B A 1能 夠 誘 導(dǎo) 煙 草 對 灰 霉 病 菌 和 花 葉 病 毒 的 抗 性 ， 張 麗 娜 等 1 8 發(fā) 現(xiàn) 從 絳 紅 褐 鏈 霉 菌 中 提 取 的 抗 菌 蛋 白 A M P 能 夠 提 高 雜 交 竹 葉 片 中 O 、 P P O 和 P A L 等 抗 性 酶 的 活 性 ， 降 低 雜 交 竹 梢 枯 病 的 病 情 指 數(shù) 。 因 此 ， 生 防 菌 種 中 也 存 在 蛋 白 激 發(fā) 子 。 前 期 的 研 究 發(fā) 現(xiàn) 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 M e n - m y c o - 93- 63發(fā) 酵 液 及 其 制 劑 對 本 研 究 的 8種 供 試 病 原 菌 均 具 有 良 好 的 抑 制 作 用 1 9 ， 而 本 研 究 從 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 M e n - m y c o - 93- 63中 提 取 獲 得 了 胞 外 分 泌 蛋 白 的 粗 品 即 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 這 些 供 試 植 物 病 原 菌 均 無 抑 制 作 用 。 通 過 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 可 以 引 起 煙 草 的 過 敏 性 壞 死 反 應(yīng) ， 用 以 檢 測 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 黃 瓜 白 粉 病 的 保 護(hù) 作 用 ， 驗(yàn) 證 了 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 具 有 誘 導(dǎo) 抗 病 的 生 物 活 性 。 因 此 ， 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 M e n - m y c o - 93- 63 發(fā) 酵 液 中 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 可 能 通 過 誘 導(dǎo) 抗 病 性 的 方 式 對 植 物 起 作 用 ， 而 不 是 直 接 的 抑 菌 作 用 。 本 研 究 中 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 對 黃 瓜 白 粉 病 的 誘 抗 效 果 較 低 （ 54.49% ） ， 是 否 與 該 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 中 起 作 用 的 蛋 白 濃 度 偏 低 所 致 ， 需 要 對 其 蛋 白 質(zhì) 粗 提 物 進(jìn) 行 進(jìn) 一 步 的 分 離 純 化 。 8 · · 1 8 年 第 5 期 1 8 , 8 5 （ 上 接 第 3 9 頁 ） 2 馮 明 祥 ， 姜 瑞 德 ， 王 佩 圣 ， 等 . 桃 園 梨 小 食 心 蟲 發(fā) 生 規(guī) 律 研 究 . 中 國 果 樹 ， 2002 （ 4） ： 30-31. 3 周 洪 旭 ， 董 立 忠 ， 隋 忠 梅 ， 等 . 蘋 小 卷 葉 蛾 和 桃 潛 葉 蛾 在 桃 園 中 的 發(fā) 生 規(guī) 律 . 萊 陽 農(nóng) 學(xué) 院 學(xué) 報(bào) ， 2005， 22 （ 3） ： 181-183. 4 鹿 金 秋 ， 王 振 營 ， 何 康 來 ， 等 . 桃 蛀 螟 研 究 的 歷 史 ， 現(xiàn) 狀 與 展 望 . 植 物 保 護(hù) ， 2010， 36（ 2） ： 31-38. 5 馬 愛 紅 ， 李 文 林 ， 路 子 云 ， 等 . 桃 樹 梨 小 食 心 蟲 發(fā) 生 危 害 及 綜 合 防 治 . 河 北 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) ， 2016， 20（ 4） ： 27-29. 6 Bi l a p a t e G G. Li f e t a b l e f o r t h e c a s t o r c a p s u l e b o r e r ， D i - c h o c r o c i s p u n c t i f e r a l i s o n d i f f e r e n t h o s t s . Pr o c e e d - i n g s ： An i m a l c i e n c e s ， 1978， 87（ 9） ： 217-220. 7 李 知 行 ， 楊 有 乾 . 桃 樹 病 蟲 害 防 治 M . 北 京 ： 金 盾 出 版 社 ， 2001. 8 畢 樹 元 ， 張 日 新 ， 劉 德 來 ， 等 . 梨 小 食 心 蟲 的 綜 合 防 治 . 河 北 果 樹 ， 2007 （ 3） ： 42-43. 9 趙 衛(wèi) 東 ， 孫 殿 相 . 桃 潛 葉 蛾 田 間 藥 劑 防 治 效 果 . 河 北 果 樹 ， 1997（ 1） . 10 田 寶 良 ， 馬 春 森 ， 孔 德 倉 ， 等 . 不 同 果 園 中 主 要 食 心 蟲 種 群 監(jiān) 測 與 防 控 技 術(shù) . 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報(bào) ， 2012， 39 （ 1） ： 7-12 . 11 王 桂 春 ， 程 航 ， 韓 秀 君 ， 等 . 梨 小 食 心 蟲 成 蟲 發(fā) 生 規(guī) 律 的 氣 象 因 子 分 析 . 干 旱 氣 象 ， 2016， 34（ 2） ： 356-361. 12 司 海 平 . 農(nóng) 作 物 種 質(zhì) 資 源 調(diào) 查 信 息 系 統(tǒng) 研 究 . 北 京 ： 中 國 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 ， 2011. 13 霍 佳 楠 . 天 津 濱 海 地 區(qū) 耐 鹽 楊 樹 新 品 種 引 種 選 育 研 究 . 天 津 ： 天 津 理 工 大 學(xué) ， 2011. 參 考 文 獻(xiàn) 1 Fe r n á n d e z - Or t u o ， Pé r e z - Ga r c í a A， L ó p e z - u i z F， e t a l . Oc c u r r e n c e a n d d i s t r i b u t i o n o f r e s i s t a n c e t o Qo f u n g i - c i d e s i n p o p u l a t i o n s o f Po d o s p h a e r a f u s c a ， i n s o u t h c e n - t r a l p a i n . u r o p e a n o u r n a l o f Pl a n t Pa t h o l o g y ， 2006， 115（ 2） ： 215-222 . 2 Ki s s L . A r e v i e w o f f u n g a l a n t a g o n i s t s o f p o w d e r y m i l d e w s a n d t h e i r p o t e n t i a l a s b i o c o n t r o l a g e n t s . Pe s t Ma n a g e - m e n t c i e n c e ， 2003， 59（ 4） ： 475-483. 3 谷 醫(yī) 林 . 瓜 類 白 粉 病 生 防 菌 L 1的 鑒 定 和 誘 導(dǎo) 抗 病 性 研 究 及 生 物 安 全 性 評 價(jià) . 鄭 州 ： 河 南 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) ， 2013. 4 田 華 ， 朱 艷 梅 ， 董 瑜 ， 等 . 毀 滅 炭 疽 菌 C o l l e t o t r i c h u m d e s t r u c t i v u m 誘 抗 蛋 白 對 煙 草 抗 病 性 的 誘 導(dǎo) . 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報(bào) ， 2017， 44（ 1） ： 67-74. 5 邱 德 文 ， 楊 秀 芬 . 蛋 白 質(zhì) 農(nóng) 藥 研 究 與 產(chǎn) 業(yè) 化 進(jìn) 展 . 中 國 農(nóng) 業(yè) 科 技 導(dǎo) 報(bào) ， 2006（ 6） ： 1-4. 6 田 華 ， 陳 光 勇 ， 董 瑜 ， 等 . 毀 滅 炭 疽 菌 誘 抗 蛋 白 的 分 離 純 化 及 對 煙 草 抗 病 促 生 作 用 . 中 國 煙 草 科 學(xué) ， 2016 （ 4） ： 68-73. 7 李 杰 ， 邱 德 文 ， 楊 秀 芬 ， 等 . 極 細(xì) 鏈 格 孢 菌 66k a 激 活 蛋 白 的 純 化 及 誘 導(dǎo) 煙 草 抗 TMV 的 功 能 . 河 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) ， 2008（ 6） ： 51-54. 8 王 炳 楠 ， 楊 秀 芬 ， 曾 洪 梅 ， 等 . 大 麗 輪 枝 菌 分 泌 蛋 白 激 發(fā) 子 的 分 離 純 化 及 生 物 功 能 研 究 . 生 物 技 術(shù) 通 報(bào) ， 2011（ 11） ： 166-171. 9 張 振 華 . 生 防 多 粘 芽 孢 桿 菌 Q - 21的 定 殖 與 誘 導(dǎo) 植 物 系 統(tǒng) 抗 性 研 究 . 南 京 ： 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) ， 2011. 10 趙 玉 華 ， 周 蕊 ， 李 俊 州 ， 等 . 內(nèi) 生 細(xì) 菌 B 05對 煙 草 誘 導(dǎo) 抗 性 的 信 號 轉(zhuǎn) 導(dǎo) 途 徑 研 究 . 植 物 病 理 學(xué) 報(bào) ， 2014, 44（ 5） ： 527-535. 11 王 璐 瑤 ， 蔣 盼 盼 ， 甘 穎 ， 等 . 解 淀 粉 芽 胞 桿 菌 B1619 誘 導(dǎo) 番 茄 防 御 酶 活 性 提 高 和 抗 病 相 關(guān) 基 因 的 表 達(dá) 上 調(diào) . 中 國 生 物 防 治 學(xué) 報(bào) ， 2017， 33（ 2） ： 234-240. 12 郭 敬 華 . 玫 瑰 黃 鏈 霉 菌 Me n - m y c o - 93- 63發(fā) 酵 液 防 治 黃 瓜 白 粉 病 的 效 果 及 作 用 機(jī) 理 初 探 . 保 定 ： 河 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) ， 2007. 13 張 艷 . 生 防 菌 株 Me n - m y c o - 93- 63發(fā) 酵 工 藝 優(yōu) 化 研 究 . 保 定</p>