2 0 1 8 , 4 4 （ 3 ） ： 1 8 6 1 8 9 PlantProtection 收 稿 日 期 ：2017 07 31 修 訂 日 期 ：2017 09 27 基 金 項(xiàng) 目 ：湖南省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新資金 湘農(nóng)科科 （ 2017 ） 18 號(hào) * 通信作者 E-mail ： bufanwen 126. com 獼 猴 桃 青 霉 病 病 原 菌 鑒 定 及 中 草 藥 提 取 物 對(duì) 其 抑 菌 效 果 程 小 梅 1 ， 2 ，彭 亞 軍 3 ，楊玉 1 ， 2 ，徐海 1 ， 2 ，羅 賽 男 1 ， 2 ，卜 范 文 1 ， 2* （ 1. 湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所 ，長沙410125 ； 2. 農(nóng)業(yè)部華中地區(qū)果樹科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站 ，長沙410125 ； 3. 湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 ，長沙410125 ） 摘 要為 了 解 決 獼 猴 桃 真 菌 病 害 導(dǎo) 致 的 貯 運(yùn) 難 題 ， 作 者 從 湖 南 、 陜 西 兩 個(gè) 獼 猴 桃 主 產(chǎn) 區(qū) 采 集 的 病 果 中 分 離 獲 得 青 霉 菌 株 Q-1 ， 應(yīng) 用 rDNA-ITS 分 子 標(biāo) 記 、 BLASTn 比 對(duì) ， 結(jié) 合 傳 統(tǒng) 真 菌 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 ， 確 定 該 致 病 菌 為 草 酸 青 霉 Pencilli- umoxalicum 。 利 用 帶 藥 培 養(yǎng) 基 法 篩 選 出 對(duì) 侵 染 獼 猴 桃 的 青 霉 菌 有 最 佳 抑 制 作 用 的 中 草 藥 提 取 物 ， 獼 猴 桃 果 實(shí) 采 后 刺 傷 接 種 Q-1 ， 研 究 中 草 藥 提 取 物 對(duì) 果 實(shí) 病 斑 直 徑 的 影 響 。 結(jié) 果 表 明 ： 川 芎 、 肉 桂 、 高 良 姜 的 乙 醇 提 取 物 對(duì) 青 霉 均 有 較 好 的 抑 制 效 果 ， 菌 絲 生 長 相 對(duì) 抑 制 率 分 別 達(dá) 到 92. 79% 、 77. 67% 、 78. 49% ， 其 中 以 川 芎 的 抑 菌 效 果 最 佳 。 獼 猴 桃 果 實(shí) 在 貯 藏 期 接 種 Q-1 菌 株 后 ， 中 草 藥 提 取 物 處 理 可 顯 著 抑 制 果 實(shí) 病 斑 擴(kuò) 大 。 關(guān) 鍵 詞獼 猴 桃 ；青 霉 ；鑒 定 ；中 草 藥 提 取 物 中 圖 分 類 號(hào) ：S436. 634 文 獻(xiàn) 標(biāo) 識(shí) 碼 ：A DOI ：10. 16688 j. zwbh. 2017282 Identificationofthe p atho g encausin g fruit p enicilliosisonkiwifruitandthe inhibitioneffectofChineseherbextractsonthe p atho g en CHENGXiaomei 1 ， 2 ，PENGYajun 3 ，YANGYu 1 ， 2 ，XUHai 1 ， 2 ，LUOSainan 1 ， 2 ，BUFanwen 1 ， 2 （ 1.HunanHortisulturalResearshInstitute ， HunanAsademyofAgrisulturalSsienses ， Changsha 410125 ， China ； 2.SsientifisObservationandExperimentStationofFruitTreesinCentralChina ， Ministryof Agrisulture ， Changsha 410125 ， China ； 3.InstituteofPlantProtestion ， HunanAsademyof AgrisulturalSsienses ， Changsha 410125 ， China ） Abstract Theaimofthisstudyistosolvethedifficultiesoffungaldiseasesinpostharveststorageandtransitofki- wifruit.Thepathogenofkiwipenicilliosiswasisolatedfromthediseasedkiwifruitcollectedfrommainproduction areasofHunanandShaanxiprovincesandwasnamedQ-1.BasedonrDNA-ITSsequenceanalysis ， BLASTnalign- mentandtraditionalmorphologicalidentification ， thepathogenwasidentifiedasPensilliumoxalisum.TheChi- neseherbextractswiththebestinhibitingeffectstoPensilliumoxalisum werescreenedbydrug-containingPDA plates ， andtheireffectsoncontrollingdiseaseofkiwifruitinoculatedwithP.oxalisum werealsoinvestigated. Theresultsshowedthatethanolextractsofrhizomaligusticumwallichii ， cinnamonandgalangalallhadgoodin- hibitingeffectsonP. oxalisum ， withtheinhibitionratioof92. 79 ， 77. 67 ， and78. 49onmycelialgrowth ， respectively ， amongwhichextractofrhizomaligusticiwallichiihadthebestantifungalactivity.Duringkiwifruit storage ， Chineseherbextractstreatmentsignificantlydecreasedthelesiondiameterofkiwifruitinoculatedwith P. oxalisum. Keywords kiwifruit ；Penisillium ；identification ；Chineseherbextract獼猴桃是一種深受消費(fèi)者喜愛的水果 ，營養(yǎng)極 為豐富 。維生素 C 含量高 ，同時(shí)還含大量的糖 、蛋白 質(zhì) 、 氨基酸等多種有機(jī)物和人體必需的多種礦物質(zhì) 。 獼猴桃果實(shí)青霉病是我國獼猴桃貯藏期的主要病 害 ，在湖南 、陜西等獼猴桃主產(chǎn)區(qū)發(fā)生比較普遍 ，癥 狀為在果面受損傷處呈現(xiàn)青綠色霉層 ，易于識(shí)別 。 44 卷第 3 期 程小梅等 ：獼猴桃青霉病病原菌鑒定及中草藥提取物對(duì)其抑菌效果 病原為多種青霉 ，主要由傷口侵入 ，引起腐爛 。青霉 不僅引起獼猴桃腐爛 ，還危害柑橘 、蘋果 、梨 、哈密瓜 等的葉片和果實(shí) ，引起各種貯藏病害 1 2 。常用于水 果貯藏保鮮的抗真菌作用較強(qiáng)的中草藥成分主要有 丁香 、木香 、大黃 、荊芥 、肉桂 、茵陳蒿 、川芎 、肉豆蔻 、 黃連 、黃芩 、紫草和黃柏等 3 7 。本研究從湖南 、陜西 兩大獼猴桃主產(chǎn)區(qū)采集了青霉危害的樣本 ，對(duì)該病 菌的致病力 、形態(tài)學(xué) 、分子生物學(xué)特性進(jìn)行比較分 析 ，同時(shí)篩選出對(duì)分離菌株有較強(qiáng)抑菌作用的中草 藥提取物 ，以期為獼猴桃貯藏期真菌病害的防治提 供理論依據(jù) 。 1 材 料 與 方 法 1. 1 試 驗(yàn) 材 料 獼猴桃青霉病病果采自湖南永順 、鳳凰 ，陜西眉 縣 、 周至 4 個(gè)獼猴桃主產(chǎn)區(qū)的 5 個(gè)果園 ，每個(gè)果園分 別采集樣品 6 份 ，共計(jì) 30 份 。 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 （ PDA ） ：馬鈴薯 200g 、 葡萄糖 20g 、瓊脂 20g 、蒸餾水 1L 。 試劑及儀器 ： PCR 擴(kuò)增儀為 TaKaRaBioInc. 生 產(chǎn)的 TaKaRaThermalCyclerDiceTP600 ； 核酸電泳儀 為 ADVANCE-BIOCo. ， Ltd 生產(chǎn)的 Mupid ； 蛋白質(zhì)電 泳儀為上海天能生產(chǎn)的 EPS300 ；電泳成像裝置采用 PharmaciaBiotechImageMaster ® VDS ； DNA 測序儀 為 Applied Biosystem 生產(chǎn)的 ABI PRISM TM 3730XLDNASequencer ；循環(huán)測序試劑盒采用 Big- Dye ® TerminatorV3.1CycleSequencingKit ；川 芎 、肉桂 、高良姜原料均購于安徽蜀中醫(yī)藥有限 公司 。 1. 2 方 法 1. 2. 1 病 原 菌 的 分 離 純 化 、 致 病 性 測 定 及 柯 赫 氏 法 則 驗(yàn) 證將發(fā)病的果實(shí)表皮用清水清洗干凈 ，切取 5mm ×5mm 的病組織數(shù)塊 ，用 75% 的乙醇消毒 10s ，隨 后放入 0. 1% 升汞消毒 5min ，取出后用無菌水沖洗 3 次 ，將病組織放入馬鈴薯葡萄糖瓊脂 （ PDA ）平板 中 ，在 28 黑暗培養(yǎng) ，分離純化得到供試菌株 。將 分離純化的菌株在 PDA 平板上 28 培養(yǎng) 3 5d 后 用打孔器打取直徑 4mm 的菌絲塊 。每個(gè)處理選取 健康的獼猴桃果實(shí) 10 個(gè) ，用接種針在果實(shí)腰部將果 實(shí)刺傷后將菌餅有菌絲的一面緊貼于果實(shí)傷口處 ， 菌絲塊表面覆蓋濕棉球 ，放入瓷盤中密封保濕 ，逐日 觀察各處理的發(fā)病情況 。以接種不含菌 PDA 為對(duì) 照 。從接種后發(fā)病的果實(shí)上再次分離 、純化和培養(yǎng) 病原菌 ，并與原菌株進(jìn)行比較 。 1. 2. 2 病 原 菌 的 形 態(tài) 學(xué) 觀 察 將菌株接種到 PDA 平板上于培養(yǎng)箱中 28 避光 培養(yǎng) 2d ， 在顯微鏡下觀察病原菌的分生孢子形態(tài) 。 1. 2. 3 病 原 菌 的 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 從 PDA 平板上用牙簽挑取少量菌體于 50 L 裂解緩沖液 （ TaKaRaLysisBufferforMicroorgan- ismtoDirectPCR ， CodeNo.9164 ）中 ，在 80 下 ， 變性 15min ，變性后離心取上清作為模板 。使用 TaKaRaFungi IdentificationPCRKit （ CodeNo. RR178 ）擴(kuò)增目的片段 。 PCR 反應(yīng)體系為 50 L ，其 中 ， DNA 模板 （ 變性反應(yīng)液 ） 1 L ， PCRPremix25 L ， ITSForwardprimer （ 20 pmol L ） 0.5 L ， ITS Reverseprimer （ 20pmol L ） 0. 5 L ， ddH2O23 L 。 擴(kuò)增程序?yàn)?： 945min ； 9430s ， 5530s ， 72 1min ， 30 個(gè)循環(huán) ； 725min ；擴(kuò)增完畢 ，取 10 L 擴(kuò)增產(chǎn)物用 1.2% 瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測 8 。 PCR 產(chǎn)物送寶生物工程 （大連 ）有限公司測序 。將 所得的序列提交到 GenBank 核酸序列數(shù)據(jù)庫中 ，獲 得登錄號(hào) 。同時(shí)將序列作同源相似性差異分析 ，確 定該菌株的分類地位 ，用 NJ 法 （ neighbor-joining method ）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹 。 1. 2. 4 中 草 藥 提 取 物 對(duì) 青 霉 的 抑 菌 作 用 精選川芎 、高良姜 、肉桂原料切碎后 ，取肉桂粗 粉各 10g 。分別以乙醇為溶劑 ，索氏法提取 3.2h ， 提取液過濾 ，減壓回收乙醇至無醇味 ，熱水分散后 放冷 ，石油醚 （ 60 90 ）脫脂 3 次 ，水液濃縮 ， 80 干燥成干浸膏 ，粉碎成細(xì)粉供試 9 。分別配制 肉桂 、高良姜 、川芎提取液母液 330mg mL 備用 。 取配制好的中草藥提取液母液與 PDA 培養(yǎng)基混合 均勻制成濃度為 8.25mg mL 的帶藥培養(yǎng)基 ，將其 倒入 9cm 培養(yǎng)皿中 ，以相同量的無菌水代替中草藥 母液作為對(duì)照 10 。提取物對(duì)青霉的抑菌效果采用 改良的菌絲生長速率法 11 13 ，即在含藥培養(yǎng)基中央 用直徑為 4mm 的打孔器打孔 ，注入 50 L1.0× 10 6 個(gè) mL 的青霉孢子懸浮液 ，培養(yǎng)箱 28 培養(yǎng) 72h 后觀察試驗(yàn)結(jié)果 。采用十字交叉法測量各菌落直 · 7 8 1 · 2018 徑 ，計(jì)算各處理菌落直徑的平均值和菌絲生長相對(duì) 抑菌率 。 抑菌率 = ck-c ck ×100% ； 公式中 ck 為對(duì)照組菌落的凈生長量 ， c 為中草 藥處理組菌落的凈生長量 。 1. 2. 5 中 草 藥 提 取 物 對(duì) 獼 猴 桃 果 實(shí) 損 傷 接 種 青 霉 的 抑 菌 效 果選取外觀整齊 、 無病蟲害和機(jī)械損傷的獼猴桃用 75% 乙醇消毒 ， 晾干備用 。用接種針在果實(shí)表面穿刺 接種 ， 對(duì)照組只接種 Q-1 病原菌 ，處理組先接種孢子 濃度為 10 6 10 7 個(gè) mL 的青霉孢子懸浮液 50 L ，稍 晾干后接種中草藥提取物處理液 ，同時(shí)設(shè)有空白對(duì) 照 。傷口晾干后將果實(shí)放在包裝盒中 ，外套塑料袋保 濕 ， 于 26 貯藏 。每隔 2d 觀察發(fā)病率和病斑直徑 。持 續(xù)觀察 7d 。每個(gè)處理設(shè) 3 次重復(fù) ， 每重復(fù) 8 個(gè)果實(shí) ， 果 實(shí)損傷接種后病斑直徑測量采用十字交叉法 14 。 2 結(jié) 果 與 分 析 2. 1 獼 猴 桃 青 霉 病 病 原 菌 的 篩 選 分 離 及 致 病 性 測 定 從 30 份樣品中共分離到 6 株具有較強(qiáng)致病性 的青霉 ，健康獼猴桃接種這 6 株青霉后 ，其發(fā)病癥狀 與自然發(fā)病癥狀一致 ，所有對(duì)照均無發(fā)病癥狀 。對(duì) 接種后發(fā)病的組織進(jìn)行再次分離均能得到與原來接 種的菌落特征相同的分離物 15 。后續(xù)試驗(yàn)取菌株 Q-1 進(jìn)行 。 圖 1 Q-1 菌 株 對(duì) 獼 猴 桃 的 致 病 性 Fig. 1 PathogenicityaSSayofQ-1tokiwifruit 2. 2 獼 猴 桃 果 實(shí) 上 分 離 青 霉 的 形 態(tài) 學(xué) 特 征 如圖 2a 所示 ，菌株 Q-1 在 PDA 培養(yǎng)基上的 菌落為暗青色 ，粉粒狀 ，生長速度較快 ，邊緣呈白 色 。從背面觀察培養(yǎng)基 ，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基由淺黃色慢 慢變?yōu)辄S褐色 ，并隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長而逐漸加 深 。分生孢子呈念珠狀串生 ，單孢無色 ，近球形 （圖 2b ） 。 圖 2 獼 猴 桃 果 實(shí) 上 分 離 的 青 霉 Q-1 的 形 態(tài) 特 征 Fig. 2 MorphologyofPenicilliumSp.StrainQ-1fromkiwifruit 2. 3 獼 猴 桃 果 實(shí) 上 分 離 青 霉 的 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 將菌株 Q-1 的 ITS 基因序列提交至 GenBank ， 獲得登錄號(hào) MF669724 。病原菌的瓊脂糖凝膠電 泳結(jié)果見圖 3 。菌株 Q-1 和菌株 L-1 為作者從獼 猴桃感病果實(shí)中分離出的具有代表性的菌株 。將 所得序列作同源相似性分析 ，確定了該菌株的分類 地位 ，構(gòu)建了系統(tǒng)進(jìn)化樹 ，結(jié)果 （圖 4 ）表明 ，菌株 Q-1 與登錄號(hào) KP735935.1 和登錄號(hào) KX674635.1 的同 源性最高 ，綜合比較病原菌的形態(tài)學(xué)特征結(jié)合序列 比對(duì)結(jié)果可以得出 ，菌株 Q-1 為草酸青霉 Penicilli- umoxalicum 16 。 圖 3 病 原 菌 的 PCR 產(chǎn) 物 電 泳 結(jié) 果 Fig. 3 ElectrophoreticreSultSofPCRproductSof ITSgeneinthepathogen · 8 8 1 · 44 卷第 3 期 程小梅等 ：獼猴桃青霉病病原菌鑒定及中草藥提取物對(duì)其抑菌效果 圖 4 Q-1 菌 株 的 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 Fig. 4 PhylogenictreeofQ-1Strain 2. 4 幾 種 中 草 藥 提 取 物 對(duì) 青 霉 的 抑 菌 情 況 表 1 結(jié)果可以看出肉桂 、高良姜和川芎提取物 均對(duì) Q-1 的抑菌效果良好 ，尤其是川芎提取物對(duì) Q- 1 的抑菌率最高 ，達(dá)到了 92. 79% 。 表 1 幾 種 中 草 藥 提 取 物 對(duì) Q-1 的 抑 菌 作 用 1 ） Table1 InhibitioneffectofSeveralChineSeherb extractSonmycelialgrowthofQ-1 中草藥提取物 Chineseherbalmedicine 菌落直徑 cm Colonydiameter 抑菌率 % Inhibitoryrate 肉桂提取物 Cinnamonextract （ 1. 92±0. 06 ） bB （ 77. 67±0. 73 ） bB 高良姜提取物 Galangalextract （ 1. 85±0. 04 ） bB （ 78. 49±0. 47 ） bB 川芎提取物 Rhizomaligusticiwallichiiextract （ 0. 62±0.10 ） cC （ 92. 79±1. 20 ） aA CK （ 8. 60±0 ） aA -1 ）同一列數(shù)據(jù)后標(biāo)示的大寫和小寫字母分別表示 0. 01 和 0. 05 差 異顯著水平 。下同 。 Differentcapitalandlowercaselettersinthesamecolumnindi- catedthesignificantdifferenceat1%and5%levels ， respec- tively. Thesamebelow. 2. 5 中 草 藥 提 取 物 對(duì) 獼 猴 桃 果 實(shí) 采 后 刺 傷 接 種 Q-1 的 病 斑 直 徑 的 影 響獼猴桃果實(shí)接種 Q-1 菌株 4d 后 ，病斑直徑不 斷增加 ，但中草藥提取物處理顯著抑制了果實(shí)病斑 的擴(kuò)大 （圖 5 ） 。綜合比較川芎 、高良姜 、肉桂三種提 取物的處理結(jié)果 ，川芎提取物的抑制效果最突出 ，高 良姜提取物其次 ，最后為肉桂提取物 。 圖 5 中 草 藥 提 取 物 對(duì) 果 實(shí) 采 后 接 種 Q-1 的 病 斑 直 徑 的 影 響 Fig. 5 EffectSofChineSeherbalmedicineextractSonleSion diameteronkiwifruitSinoculatedbyQ-1 3 結(jié) 論 與 討 論 中草藥提取物具有良好的殺菌作用 ，對(duì)人體和 環(huán)境無危害 ，增加了水果食用的安全性 ，用于水果保 鮮有很好的效果 。將中草藥提取物應(yīng)用到食品防腐 的最大優(yōu)點(diǎn)就是腐爛率低 ，很少甚至不影響食品的 原有風(fēng)味 。同化學(xué)合成的防腐劑相比 ，中草藥提取 物不僅無毒 ，對(duì)人體健康也有裨益 。再者 ，中草藥簡 單易得 、取材容易 、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠 ，中草藥提取物替代化 學(xué)合成保鮮劑用于水果貯藏保鮮有著廣闊的發(fā)展前 景 。本研究對(duì)獼猴桃青霉病病原菌進(jìn)行了篩選 、鑒 定 ，應(yīng)用 rDNA-ITS 分子標(biāo)記分析 、 BLASTn 比對(duì) ， 結(jié)合傳統(tǒng)真菌形態(tài)學(xué)鑒定 ，確定致病菌 Q-1 為草酸 青霉 Pencilliumoxalicum 。作者從眾多中草藥提 取物中篩選出川芎 、高良姜 、肉桂三種中草藥提取物 對(duì)獼猴桃青霉病病原菌抑菌效果較好 ，將三種抑菌 效果較好的中草藥提取物用于獼猴桃果實(shí)采后刺傷 接種青霉的防腐 ，發(fā)現(xiàn)對(duì)病斑直徑的擴(kuò)大仍有較好 的抑制作用 。在后續(xù)的試驗(yàn)中作者會(huì)進(jìn)一步驗(yàn)證在 本試驗(yàn)中發(fā)揮抑菌作用的幾種中草藥提取物的主要 抑菌成分 ，力爭將本試驗(yàn)結(jié)果可以直接應(yīng)用于生產(chǎn) 實(shí)踐 、解決獼猴桃貯運(yùn)難題 。 參 考 文 獻(xiàn) 1 閔曉芳 ，鄧伯勛 ，陳麗鋒 ，等 . 柑橘采后致病青霉的鑒定 J . 果 樹學(xué)報(bào) ， 2007 ， 24 （ 5 ） ： 653 656. 2 YUTing ， LIHongye ， ZHENGXiaodong.Synergisticeffectof chitosanandCryptococcuslaurentii oninhibitionofPenicilli- umexpansuminfections J .InternationalJournalofFoodMi- crobiology2007 ， 114 （ 3 ） ： 261 266. 3 曾榮 ， 陳金印 ， 張阿珊 ，等 . 植物提取液對(duì)柑桔采后青霉 、綠霉抑 菌活性的研究 J . 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ， 2010 ， 32 （ 6 ） ： 1142 1145. 4 曾榮 ，張阿珊 ，陳金印 ，等 . 植物源防腐劑在果蔬保鮮中應(yīng)用研 究進(jìn)展 J . 中國食品學(xué)報(bào) ， 2011 ， 7 （ 4 ） ： 161 165. 5 陳玉環(huán) ， 彭旋 ， 陳楚英 ， 等 . 三顆針提取液復(fù)合涂膜對(duì) “ 紐荷爾 ” 臍橙 貯藏保鮮的影響 J . 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ， 2016 ， 38 （ 3 ） ： 469 475. 6 張阿珊 ，曾榮 ，陳金印 ，等 . 丁香提取液對(duì)臍橙采后生理相關(guān)酶 活性的影響 J . 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ， 2011 ， 33 （ 6 ） ： 1067 1071. 7 陳楚英 ， 陳明 ， 陳金印 ， 等 . 殼聚糖涂膜對(duì)新余蜜橘常溫貯藏保鮮 效果的影響 J . 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ， 2012 ， 34 （ 6 ） ： 1112 1117. 8 段愛莉 ，雷玉山 ，孫翔宇 ，等 . 獼猴桃果實(shí)貯藏期主要真菌病害 的 rDNA-ITS 鑒定及序列分析 J . 中國農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2013 ， 46 （ 4 ） ： 810 818. （下轉(zhuǎn) 202 頁 ） · 9 8 1 · 2018 綜合以上試驗(yàn)研究結(jié)果 ，從防治效果 、增產(chǎn)效果 及投入成本等多因素考慮 ，建議從發(fā)病初期開始施 藥 ，使用 300g L 苯甲 ·丙環(huán)唑 EC3000 倍液配施 0. 136% 赤 ·吲乙 ·蕓苔 8000 倍液 1 次 ，隨后連續(xù) 噴施 300g L 苯甲 ·丙環(huán)唑 EC3000 倍 2 次 ，間隔 約 10d ，可在減少農(nóng)藥使用量的同時(shí) ，有效防治花生 網(wǎng)斑病并能提高花生莢果產(chǎn)量 。此外 ，在不同時(shí)期 進(jìn)行殺菌劑交替使用 ，以延緩抗藥性的產(chǎn)生 ，降低防 治成本 ，達(dá)到有效控制病害的目的 。 參 考 文 獻(xiàn) 1 徐秀娟 ，崔鳳高 . 中國花生網(wǎng)斑病研究 J . 植物保護(hù)學(xué)報(bào) ， 1995 ， 22 （ 1 ） ： 70 74. 2 KOKALIS-BURELLEN ， PORTERDM ， RODRIGUEZ-KA- BANAR ， etal.Compendiumofpeanutdisease M .USA AmericanPhytopathologicalSociety ， 1997 ： 39 40. 3 SUBRAHMANYAMP ， SMITHDH.Effectofhostgenotype onincubationperiod ， receptivity ， lesiondiameter ， andleafare- adamageofDidymellaarachidicola onpeanut J .Peanut Science ， 1987 ， 14 （ 2 ） ： 90 94. 4 全鑫 ，宋玉立 ，何文蘭 ，等 . 花生網(wǎng)斑病國內(nèi)外研究進(jìn)展 J . 河 南農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2008 （ 7 ） ： 13 16. 5 傅俊范 ，王大洲 ，周如軍 ，等 . 遼寧花生網(wǎng)斑病發(fā)生危害及流行 動(dòng)態(tài)研究 J . 中國油料作物學(xué)報(bào) ， 2013 ， 35 （ 1 ） ： 80 83. 6 傅俊范 ，崔建潮 ，周如軍 ，等 . 遼寧花生主栽品種 （系 ）對(duì)褐斑病 和網(wǎng)斑病抗性鑒定 J . 植物保護(hù) ， 2015 ， 41 （ 1 ） ： 171 173. 7 陳華 ，李志敏 ，楊海棠 ，等 . 花生葉斑病 、網(wǎng)斑病的綜合防治技術(shù) J . 河南農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2004 （ 9 ） ： 91. 8 劉美昌 ，豐燕 ，馮志花 ，等 . 新型殺菌劑防治花生網(wǎng)斑病的效果 J . 山東農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2004 （ 3 ） ： 58 59. 9 王建偉 . 推廣節(jié)約農(nóng)藥生產(chǎn)技術(shù)減少面源污染促進(jìn)循環(huán)農(nóng)業(yè) 發(fā)展 J . 河北農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2012 ， 16 （ 11 ） ： 50 52. 10 吳定邦 ，王東明 ，馬勇 . 淺談農(nóng)藥減量使用的技術(shù)措施 J . 安徽 農(nóng)學(xué)通報(bào) ， 2010 ， 16 （ 6 ） ： 106 107. 11 周長勇 ，劉偉中 ，郭小山 . 愛苗在花生上應(yīng)用試驗(yàn)初報(bào) J . 安徽 農(nóng)學(xué)通報(bào) ， 2011 ， 17 （ 24 ） ： 61 62. 12 陳發(fā)宏 ，榮維國 . 愛苗的防病效果及增產(chǎn)效果分析 J . 安徽農(nóng) 學(xué)通報(bào) ， 2007 ， 13 （ 22 ） ： 89. 13 王偉 . “愛苗 ”防治草莓白粉病的試驗(yàn) J . 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2007 ， 35 （ 22 ） ： 6844. 14 REUVENIM ， SHEGLOVD.Effectsofazoxystrobin ， difeno- conazole ， polyoxinB （ polar ） andtrifloxystrobinongermina- tionandgrowthofAlternariaalternataanddecayinreddelicious applefruit J .CropProtection ， 2002 ， 21 （ 10 ） ： 951 955. 15 劉燕菁 ，范玉 ，張旭光 ，等 . 丙環(huán)唑在香蕉和土壤中的消解動(dòng)態(tài) 及殘留安全性評(píng)價(jià) J . 植物保護(hù) ， 2010 ， 36 （ 2 ） ： 109 111. 16 何晶晶 ，周如軍 ，崔健潮 ，等 . 不同殺菌劑對(duì)花生網(wǎng)斑病菌室內(nèi) 毒力測定及田間防效研究 J . 中國油料作物學(xué)報(bào) ， 2015 ， 37 （ 4 ） ： 525 531. 17 袁虹霞 ，孫炳劍 ，李洪連 ，等 . 花生品種 （系 ）對(duì)葉斑病的抗性鑒 定 J . 河南農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2004 ， 33 （ 12 ） ： 35 38. 18 WOODWARDJE ， BRENNEMANTB ， KEMERAITRC ， et al.Managementofpeanutdiseaseswithreducedinputfungi- cideprogramsinfieldswithvaryinglevelsofdiseaserisk J . CropProtection ， 2010 ， 29 （ 3 ） ： 222 229. 19 牛海龍 ，王義生 ，李偉堂 ，等 . 防治花生葉斑病藥劑篩選 J . 遼 寧農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2016 （ 5 ） ： 20 23. 20 晏立英 ， 宋亞輝 ， 倪皖莉 ， 等 . 三種殺菌劑在不同生態(tài)區(qū)對(duì)花生葉 斑病的防治效果 J . 中國油料作物學(xué)報(bào) ， 2016 ， 38 （ 5 ） ： 644 648. 21 傅華龍 ，何天久 ，吳巧玉 . 植物生長調(diào)節(jié)劑的研究與應(yīng)用 J . 生 物加工過程 ， 2008 ， 6 （ 4 ） ： 7 12. 22 刁春玲 ，劉芳 ，宋寶安 . 農(nóng)用殺菌劑作用機(jī)理的研究進(jìn)展 J . 農(nóng) 藥 ， 2006 ， 45 （ 6 ） ： 374 377. 23 劉美昌 ，馬世洪 ，張佃文 ，等 . 花生網(wǎng)斑病防治技術(shù)研究 J . 花 生科技 ， 1999 （ S1 ） ： 436 438. 24 梁英 ，趙志偉 ，孫國臣 ，等 .4 種農(nóng)藥及植物生長調(diào)節(jié)劑在花生 上的應(yīng)用效果 J . 農(nóng)業(yè)科技與裝備 ， 2014 （ 2 ） ： 25 26. （ 責(zé) 任 編 輯 ： 楊 明 麗 櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍 ） （上接 189 頁 ） 9 吳新安 . 中草藥提取物對(duì)幾種植物病原菌的抗菌活性研究 D . 合肥 ：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) ， 2002. 10 孫偉 ，蔣紅云 ，張燕寧 ，等 .55 種中草藥提取物對(duì) 2 種植物病原 菌的生物活性 J . 植物保護(hù) ， 2011 ， 37 （ 3 ） ： 124 127. 11 陳年春 . 農(nóng)藥生物測定 M . 北京 ：北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社 ， 1991 ： 176 781. 12 陳仕江 ，丁偉 ，楊幫 ，等 .10 種中藥植物對(duì) 4 種植物病原真菌的 生物活性研究 J . 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) ， 2005 ， 3 （ 18 ） ： 311 314. 13 慕立義 . 植物化學(xué)保護(hù)研究方法 M . 北京 ：中國農(nóng)業(yè)出版 社 ， 1994. 14 朱玉燕 ，鄔波龍 ，姜天甲 ，等 . 外源草酸對(duì)獼猴桃采后果實(shí)擴(kuò)展 青霉生長及展青霉素積累的影響 J . 果樹學(xué)報(bào) ， 2015 ， 32 （ 2 ） ： 298 303. 15 趙金梅 ，高貴田 ，谷留杰 ，等 . 中華獼猴桃褐斑病病原鑒定及抑 菌藥劑篩選 J . 中國農(nóng)業(yè)科學(xué) ， 2013 ， 46 （ 23 ） ： 4916 4925. 16 李黎 ，陳美艷 ，張鵬 ，等 . 獼猴桃軟腐病的病原菌鑒定 J . 植物保 護(hù)學(xué)報(bào) ， 2016 ， 43 （ 3 ） ： 527 528. （ 責(zé) 任 編 輯 ： 楊 明 麗 ） · 2 0 2 ·