<p>甘 肅農(nóng)業(yè)科技 Gansu Agr. Sci. and Techn. No. 8 2018 2018年 第 8 期 甘肅農(nóng)業(yè)科技 摘要： 為篩選出防治梨黑斑病的高效低毒殺菌劑，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了 11種殺菌劑對(duì)梨樹黑斑病 菌的毒力。 結(jié)果表明： 40%氟硅唑乳油對(duì)梨樹黑斑病菌絲的毒力最強(qiáng)， EC 50值最低， 為 0.401 6 g/mL ； 其次是 10%苯醚甲環(huán)唑乳油、 20%丙環(huán)唑乳油、 25%戊唑醇乳油， EC 50值分別為 1.478 0、 2.018 5、 4.101 0 g/mL ； 1.5% 噻霉酮乳油和 75%百菌清可濕性粉對(duì)菌絲的抑制效果相對(duì)較差， EC 50較高， 分別為 886.52 、 759.468 g/mL 。 11 種殺菌劑對(duì)梨樹黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)均有抑制作用。 關(guān)鍵詞： 梨樹； 黑斑病菌； 殺菌劑； 毒力測(cè)定 中圖分類號(hào)： S436.612.1 &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 文章編號(hào)： 1001-1463 （ 2018） 08-0070-03doi ： 10.3969/j.issn.1001-1463.2018.08.021 收稿日期： 2018-04-02 基金項(xiàng)目 ： 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金資助（ CARS-29-41 ）； 梨現(xiàn)代省力高效栽培技術(shù)模式創(chuàng)新及配套關(guān)鍵技術(shù) 研究與示范（ 1604NKCA063-2 ）； 農(nóng)業(yè)部園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制學(xué)科群西北果樹科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站。 作者簡(jiǎn)介： 曹素芳（ 1979-），女，河南新鄉(xiāng)人，助理研究員，主要從事植物病蟲害及其綜合防治研究。 Email ： caosufang1210sina.com 。 通信作者 ： 李紅旭（ 1974-）， 男， 陜西岐山人， 副研究員， 主要從事梨樹育種及栽培技術(shù)研究。 Email ： lihongxu8588sina. com 。 11 種殺菌劑對(duì)梨樹黑斑病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定 曹素芳， 王 瑋， 趙明新， 曹 剛， 李紅旭 （ 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院林果花卉研究所， 甘肅 蘭州 730070） 梨是世界和我國的重要水果之一，在我國的 栽培面積僅次于蘋果 1 - 2 。由互隔交鏈孢（ Alternar - ia alternata ）引起的梨黑斑病是梨主產(chǎn)區(qū)危害嚴(yán)重 的主要病害之一 3 - 4 ， 導(dǎo)致梨葉與果實(shí)產(chǎn)生黑斑癥 狀及早期落葉，對(duì)梨樹體健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。該 病在甘肅省各地均有發(fā)生， 尤其在天水秦州區(qū)普 遍發(fā)生， 嚴(yán)重影響了梨的產(chǎn)量與品質(zhì)， 已成為制 約當(dāng)?shù)乩娈a(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素之一。 目前，生產(chǎn)上防治梨黑斑病主要依靠化學(xué)藥 劑。 為了減少果農(nóng)在農(nóng)田用藥時(shí)的盲目性， 有效 降低梨黑斑病菌的侵染概率，減少因該病害造成 的經(jīng)濟(jì)損失，我們對(duì)近年來生產(chǎn)上應(yīng)用比較多的 11種殺菌劑在室內(nèi)采用菌絲生長(zhǎng)速率法對(duì)梨黑斑 病菌進(jìn)行了毒力測(cè)定，以期篩選出對(duì)黑斑病菌高 效低毒的殺菌劑， 為生產(chǎn)上科學(xué)合理用藥和病害 的有效控制提供參考依據(jù)。 1 &nbsp; 材料與方法 1.1 供試菌株 病菌分離自天水市秦州區(qū)梨園發(fā)病嚴(yán)重且癥 狀典型的梨樹黑斑病病斑，根據(jù)菌落特征和病菌 顯微鏡檢確認(rèn)為梨樹黑斑病菌，試驗(yàn)前將菌種轉(zhuǎn) 接到 PDA 平板進(jìn)行培養(yǎng)待用。 1.2 供試藥劑 10%苯醚甲環(huán)唑乳油（中國農(nóng)科院植保所廊坊 農(nóng)藥中試廠）， 20%丙環(huán)唑乳油（中國農(nóng)科院植保所 廊坊農(nóng)藥中試廠）， 40%氟硅 唑乳油（ 美 國 杜邦公司 產(chǎn)品）， 25%戊 唑 醇 乳油（ 浙江永 農(nóng)化 工 有 限公司 ）， 1.5%噻霉酮 乳油（ 陜西西大華 特科技有 限公司 ）， 50% 多 菌 靈可濕 性 粉 劑（ 山東華陽 科技 股份 有 限公 司 ）， 70% 代森錳鋅可濕 性 粉 劑（ 利民 化 工股份 有 限 公司 ）， 25%嘧 菌 酯懸浮 劑（ 英 國 先正達(dá) 有 限公司 ）， 12.5%腈 菌唑乳油（ 華北 制藥 集團(tuán)愛諾 有 限公司 ）， &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;2 王 珍、 陳彥鋒、 范 榮 . 相同密度條件下不同種植 模式對(duì)大豆產(chǎn)量的影響 J . 甘肅農(nóng)業(yè)科技， 2017（ 9）： 50-52. 3 環(huán)縣志編纂委員會(huì) . 環(huán)縣志 M . 蘭州： 甘肅省人民 出版社， 1993： 10-17. 4 劉生瑞， 陳彥鋒 . 環(huán)縣耕地質(zhì)量評(píng)價(jià) M . 蘭州： 甘 肅科學(xué)技術(shù)出版社， 2015： 62. 5 范 榮， 劉生瑞， 劉豐淵 . 環(huán)縣大豆全膜壟作膜側(cè)栽 培技術(shù) J . 甘肅農(nóng)業(yè)科技， 2015（ 5）： 44-45. 6 王 珍 . 環(huán)縣玉米全膜雙壟溝播技術(shù)推廣中存在的問 題和對(duì)策 J . 甘肅農(nóng)業(yè)科技， 2015（ 4）： 52-54 （ 本文責(zé)編： 楊 杰） 70 甘 肅農(nóng)業(yè)科技 Gansu Agr. Sci. and Techn. No. 8 2018 2018 年 第 8 期 藥劑名稱 毒力回歸方程（ y = bx+a ） EC 50 / （ g/mL ） 相關(guān)系數(shù) / r 1.5%噻霉酮乳油 y =0.919 2 x + 2.290 4 886.520 0 0.995 7* 70%代森錳鋅可濕性粉劑 y =1.528 9 x +2.179 9 69.920 0 0.997 0* 12.5% 烯唑醇可濕性粉劑 y =0.862 0 x + 4.295 1 6.572 6 0.986 2* 10%苯醚甲環(huán)唑乳油 y =0.891 4 x +4.848 8 1.478 0 0.987 3* 25% 戊唑醇乳油 y =1.064 7 x + 4.347 5 4.101 0 0.971 6* 20% 丙環(huán)唑乳油 y =0.904 0 x + 4.724 3 2.018 5 0.988 2* 75%百菌清可濕性粉劑 y =0.530 7 x + 3.471 2 759.468 0 0.876 1 50%多菌靈可濕性粉劑 y =1.430 5 x + 2.143 1 98.930 8 0.990 7* 12.5% 腈菌唑乳油 y =1.313 5 x + 2.752 7 51.398 0 0.997 7* 40%氟硅唑乳油 y =1.465 7 x +5.580 7 0.401 6 0.972 5* 25% 嘧菌酯懸浮劑 y =0.611 2 x + 4.474 4 7.244 9 0.974 3* 藥劑名稱 藥劑濃度梯度 / （ g/mL ） 抑制率 /% 濃度 1 濃度 2 濃度 3 濃度 4 濃度 5 濃度 1 濃度 2 濃度 3 濃度 4 濃度 5 1.5%噻霉酮乳油 50 100 400 1 000 2 000 14.52 19.35 35.48 50.54 65.05 70%代森錳鋅可濕性粉劑 6.25 25.00 50.00 200.00 800.00 17.20 35.48 65.05 79.03 91.40 12.5% 烯唑醇可濕性粉劑 1.25 5.00 10.00 40.00 160.00 25.81 46.24 59.68 68.82 92.47 10%苯醚甲環(huán)唑乳油 0.312 5 1.250 0 5.000 0 10.000 0 40.000 0 28.49 47.85 67.74 72.04 96.24 25% 戊唑醇乳油 0.312 5 1.250 0 5.000 0 10.000 0 40.000 0 15.05 32.80 48.39 59.68 96.24 20% 丙環(huán)唑乳油 0.312 5 1.250 0 5.000 0 10.000 0 40.000 0 20.97 46.24 65.05 67.74 91.40 75%百菌清可濕性粉劑 6.25 25.00 200.00 400.00 800.00 16.67 24.73 29.03 37.10 61.83 50%多菌靈可濕性粉劑 6.25 12.50 25.00 50.00 200.00 5.91 13.98 19.35 29.03 69.35 12.5% 腈菌唑乳油 5 10 20 400 160 11.29 18.28 28.49 42.47 75.81 40%氟硅唑乳油 0.062 5 0.250 0 0.500 0 1.000 0 2.000 0 16.13 40.86 47.31 69.35 94.09 25% 嘧菌酯懸浮劑 1.25 2.50 5.00 10.00 40.00 27.96 43.55 54.84 58.06 67.74 75%百菌清可濕性粉劑（江陰蘇利化學(xué)有限公司）， 12.5% 烯唑醇可濕性粉劑（江蘇劍牌農(nóng)藥化工有限 公司）。 1.3 供試培養(yǎng)基 培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（ PDA ）， 采用常規(guī)方法制備，分裝入 150 mL 三角瓶（每瓶 49 mL ）， 高壓蒸汽滅菌后備用。 1.4 供試藥劑母液的配制及保存 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果，在無菌環(huán)境下配制 各供試藥劑的母液，置于消毒的三角瓶中在 4 冰箱保存?zhèn)溆谩?1.5 毒力測(cè)定方法 采用菌絲生長(zhǎng)速率法 5 。將供試藥劑母液分 別稀釋 5個(gè)系列濃度（表 1）， 各取 1 mL 加入 49 &nbsp;mL 定量滅菌冷卻至 5055 的 PDA 培養(yǎng)基中， 搖勻， 制成不同濃度帶藥平板， 以加入 1 mL 無 菌水的培養(yǎng)基平板為對(duì)照， 4次重復(fù)。 在無菌條 件下，用滅菌打孔器自菌落邊緣切取直徑 5 mm 菌餅，接入帶藥和對(duì)照培養(yǎng)基平板中央，菌絲面 朝下。 各處理培養(yǎng)皿置于 25 恒溫培養(yǎng)， 對(duì)照菌落 直徑長(zhǎng)到培養(yǎng)皿直徑的 90%時(shí)，用十字交叉法測(cè) 量各處理的菌落直徑，計(jì)算各藥劑處理對(duì)病菌菌 絲生長(zhǎng)的抑制率。采用唐啟義和馮明光 6 的實(shí)用 統(tǒng)計(jì)分析及其 DPS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 軟 件， 用生 物 測(cè) 定 -數(shù) 量型 數(shù)據(jù) 機(jī) 率 值 分析 模型 計(jì)算各 種 藥劑的 毒力回歸方 程 （ y = bx +a） 、 EC 50 和相關(guān)系數(shù) r。 2 &nbsp; 結(jié)果與分析 2.1 不同藥劑對(duì)病原菌的抑制效果 從 表 1看出 ， 11種 藥劑在 設(shè) 計(jì)濃度下 均 對(duì) 梨 樹黑斑 病病 原 菌有抑制 作 用。 隨著 藥劑濃度的 升 高， 其對(duì)病 原 菌的抑制率 增 加。 70%代森錳鋅可濕 性粉劑 800.00 g/mL 、 12.5% 烯唑醇可濕性粉劑 160.00 g/mL 、 10%苯醚甲環(huán)唑乳油 40.000 0 g/mL 、 25% 戊唑醇乳油 40.000 0 g/mL 、 20% 丙環(huán)唑乳油 40.000 0 g/mL 和 40%氟硅唑乳油 2.000 0 g/mL 對(duì)病 原 菌的抑制率 均 在 91%以 上 ， 表明 這 6種 藥 劑在 該 濃度下對(duì)病 原 菌的抑制 效 果 較好 。 2.2 不同殺菌劑對(duì)病原菌的毒力測(cè)定 各藥劑對(duì) 梨樹黑斑 病菌的毒力 大小 不同（表 2）。 表 1 11 種殺菌劑對(duì)梨樹黑斑病菌的抑制率 表 2 11 種殺菌劑對(duì)病原菌的毒力測(cè)定結(jié)果 71 甘 肅農(nóng)業(yè)科技 Gansu Agr. Sci. and Techn. No. 8 2018 2018 年 第 8 期 甘肅農(nóng)業(yè)科技 40%氟硅唑乳油 EC 50 值最低， 為 0.401 6 g/mL ， 表明 40%氟硅唑乳油對(duì)病原菌的毒力作用最強(qiáng)； 其次是 10%苯醚甲環(huán)唑乳油、 20%丙環(huán)唑乳油和 25%戊唑醇乳油， EC 50 值分別為 1.4780 g/mL 、 2.018 5 g/mL 和 4.101 0 g/mL ； 而 1.5%噻霉酮乳 油和 75% 百菌清可濕性粉劑 EC 50 較高， 分別達(dá) 886.520 0 g/mL 和 759.468 0 g/mL ， 表明這兩種 藥劑對(duì)病原菌的毒力作用最弱。相關(guān)性（ r）分析表 明， 75% 百菌清可濕性粉劑對(duì)病原菌的相關(guān)性系數(shù) 為 0.876 1， 沒有達(dá)到顯著水平， 其它 10種供試藥 劑均達(dá)到極顯著水平。 2.3 病原菌對(duì)不同藥劑的敏感性 從毒力回歸方程看出，不同藥劑處理的斜率 （ b 值）不同（表 2）。 40%氟硅唑乳油、 50%多菌靈可 濕性粉劑和 70% 代森錳鋅可濕性粉劑的 b 值較大， 分別達(dá)到 1.465 7 、 1.430 4和 1.528 9， 表明病原菌 對(duì) 40%氟硅唑乳油、 50%多菌靈可濕性粉劑和 70% 代森錳鋅可濕性粉劑較敏感。 而 75% 百菌清 可濕性粉劑和 25%嘧菌酯懸浮劑的 b 值較小， 分別 為 0.530 7和 0.611 2 ， 表明病原菌對(duì) 75% 百菌清可 濕性粉劑和 25%嘧菌酯懸浮劑不敏感。 3 &nbsp; 小結(jié)與討論 選用 11種殺菌劑測(cè)定了對(duì)梨黑斑病菌菌絲生 長(zhǎng)抑制作用， 結(jié)果表明， 10%苯醚甲環(huán)唑乳油、 25%戊唑醇乳油、 40%氟硅唑、 12.5%烯唑醇可濕 性粉劑、 20%丙環(huán)唑乳油及 70% 代森錳鋅可濕性 粉劑對(duì)梨黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率均能達(dá)到 90% 以上。 在供試的 11 種殺菌劑中， 對(duì)病原菌菌絲生 長(zhǎng)毒力最強(qiáng)的是 40%氟硅唑乳油； EC 50 為 0.401 6 &nbsp; g/mL ； 其次為 10%苯醚甲環(huán)唑乳油、 20%丙環(huán)唑 乳油和 25%戊唑醇乳油； 1.5%噻霉酮乳油的毒力 最弱， 為 886.520 0 g/mL ，從毒力回歸方程的 b 值分析看出， 梨樹黑斑病病菌對(duì) 70% 代森錳鋅可 濕性粉劑、 40%氟硅唑乳油和 50%多菌靈可濕性 粉劑敏感性較高。 綜合比較分析， 40%氟硅唑乳 油、 10%苯醚甲環(huán)唑乳油、 20%丙環(huán)唑乳油及 25% 戊唑醇乳油這 4個(gè)處理可以作為防治梨黑斑病的 首選藥劑和劑量。 化學(xué)殺菌劑是防治梨黑斑病的主要手段。本 研究通過對(duì)梨黑斑病菌的藥劑篩選，初步明確了 對(duì)病菌有較高毒力的殺菌劑，結(jié)果與付余波 7 和 崔建潮 8 的報(bào)道基本一致。 本試驗(yàn)所測(cè)的藥劑 EC 50 值相對(duì)較高， 這可能與菌株地理來源不同有 關(guān)。 朱紅艷 9 研究表明， 苯醚甲環(huán)唑?qū)婧诎卟?菌菌株的 EC 50 分布在 0.719 01.488 6 g/mL 范圍 內(nèi)，菌株表現(xiàn)為敏感， 但存在敏感性降低的菌株。 本研究測(cè)得的苯醚甲環(huán)唑的 EC 50 值為 1.478 0 &nbsp; g/mL ，也可能與病原菌對(duì)藥劑的敏感性降低有 關(guān)。黑斑病菌分生孢子產(chǎn)生在病害循環(huán)中是非常 關(guān)鍵的一環(huán)，本研究?jī)H測(cè)定了供試藥劑對(duì)病原菌 菌絲的毒力大小，對(duì)分生孢子的毒力大小還需進(jìn) 一步研究。 在長(zhǎng)期的農(nóng)藥使用過程中， 梨樹病害對(duì)常規(guī) 性的殺菌劑 勢(shì)必會(huì) 產(chǎn)生一定的 抗 藥性， 還 易造成 農(nóng)藥 殘留 和環(huán) 境污染 。 在生產(chǎn) 實(shí)際 中， 還 應(yīng)根據(jù) 根據(jù) 梨黑斑病的 發(fā) 病規(guī) 律 ， 交替 使用藥劑， 以有 效控 制梨黑斑病的 發(fā) 生。 還 應(yīng) 通過 整形修剪改善 田間 通 風(fēng)透光條件 及 溫 濕 度變 化 等 其它農(nóng)業(yè) 措施 ， 降低 發(fā) 病 條件 ， 減少 農(nóng)藥的使用量， 以 延緩 病原 菌 抗 藥性的產(chǎn)生， 延 長(zhǎng)這 些 殺菌劑的使用 壽命 。 本試驗(yàn) 只 供 田間 病害防治 時(shí) 選藥 提 供 參考 ， 為了 更 進(jìn)一步明確藥 效 ， 還 應(yīng) 對(duì)這 些 殺菌劑進(jìn) 行 系 統(tǒng) 的 田間 防 效 試驗(yàn)。 參考文獻(xiàn)： 1 李秀根， 張紹鈴 .世界梨產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)分析 J .煙臺(tái)果樹， 2007 （ 1）： 1-3. 2 趙明新， 王 瑋， 畢淑海， 等 .不同砧木建園方式對(duì) 一年生早酥梨生長(zhǎng)發(fā)育的影響 J . 甘肅農(nóng)業(yè)科技， 2017 （ 10）： 48-50. 3 李永才， 畢 陽 .蘋果梨黑斑病的發(fā)生及侵染過程 J .植物保護(hù)學(xué)報(bào)， 2006， 33（ 2）： 131-135. 4 刁春英， 畢 陽， 李永才 .殼聚糖對(duì)互隔交鏈孢菌 （ Alternaria alternate ）的離體抑制作用 J .中國農(nóng)學(xué)通 報(bào)， 2010， 26 （ 10）： 91-94. 5 方中達(dá) .植物病害研究法 M .北京： 中國農(nóng)業(yè)出版 社， 1998. 6 唐啟義， 馮明光 .實(shí)用統(tǒng)計(jì)分析及其 DPS 數(shù)據(jù)處理系 統(tǒng) M .北京： 科學(xué)出版社， 2002. 7 付余波， 錢國良， 胡白石， 等 . 21種殺菌劑對(duì)梨炭疽 病菌、 輪紋病菌、 黑斑病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定 J .江蘇 農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2011， 39（ 2）： 178-180. 8 崔建潮， 賈曉輝， 孫平平， 等 . 14種殺菌劑對(duì)梨黑斑 病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定 J .中國南方果樹， 2016， 45 （ 3）： 49-54. 9 朱紅艷， 蔣小芬， 李先明， 等 .梨黑斑病菌對(duì)苯醚甲 環(huán)唑的敏感性分析 J .湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2016， 35（ 24 ）： 6448-6450. （ 本文責(zé)編： 陳 珩） 72</p>