<p>Molecular Identification of Tomato mottle mosaic virus CHENLing-zhi1，ZHANGRu1，WEIBing-qiang1，WANGLan-lan1，GAOYan-ping2，ZHANGWu21InstituteofVegetables， GansuAcademyofAgriculturalSciences， Lanzhou730070， Gansu， China；2GansuPotatoSeed（ Seedling） VirusDetectionandEvaluationofEngineeringTechnologyResearchCenter， Lanzhou730070， Gansu， ChinaAbstract： UsingDAS-ELISAandRT-PCRmethods，this studyidentifiedpepperpathogeneticvirusinexperimentalfieldsofVegetableInsititute，Gansu AcademyofAgriculturalSciences.Theresultsshowedthatin72diseaseinfectedsamples，the totalTMVdetectionratewas66.7%，whereas CMVhadnotbeendetectedaspositive.Threepairsofprimersweredesignedtoamplifypositivesamples.AstripwithsimilarsegmentswasamplifiedonlyfromprimerTMV1，which had97%sequencesimilaritywithToMMVbyBLASTNcomparison.AimingatToMMV，3 pairsofprimersToMMV1，ToMMVcp andToMMVspeweredesignedtoamplifyToMMV.Asingletargetbandwithsamesizeasexpectedwasamplified.Itssequencewas98%accordedwithToMMVbysequencing，provingthevirusfoundintheexperimentalfieldsofVegetableInsititutewastrulyToMMV.Key words：Pepper；Virusdisease；DAS-ELISA；ToMMV；RT-PCR北京地區(qū)南瓜病毒病病原種類(lèi)鑒定陳利達(dá) 曹金強(qiáng) 石延霞 柴阿麗 謝學(xué)文*李寶聚*（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，北京 100081）摘 要 ：為明確北京地區(qū)南瓜病毒病種類(lèi)及其主要侵染病原，20162017 年在北京周邊采集疑似感染病毒的南瓜病樣 84 份，并根據(jù)南瓜上的 6 種病毒特異性引物對(duì)其進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）檢測(cè)。結(jié)果表明：共有 79 份南瓜病樣檢測(cè)顯示陽(yáng)性，其中黃瓜花葉病毒（ Cucumber mosaic virus，CMV）的檢出率最高，為 52.38%；其次是小西葫蘆黃花葉病毒（ Zucchini yellowmosaic virus，ZYMV）和西瓜花葉病毒（ Watermelon mosaic virus，WMV），檢出率分別為 44.01%、14.29%，其他病毒暫未檢出。此外，16.67% 的樣品受 2 種病毒復(fù)合侵染，CMV 和 ZYMV 復(fù)合侵染占 7.14%，ZYMV 和 WMV 復(fù)合侵染占 9.52%。北京地區(qū)南瓜上優(yōu)勢(shì)病毒種類(lèi)為 CMV，且存在病毒復(fù)合侵染現(xiàn)象。關(guān)鍵詞 ：南瓜；病毒病；種類(lèi)鑒定ficifoliaBouché）并列為世界上南瓜屬作物的5個(gè)栽培種（李昕升 等，2017）。南瓜因產(chǎn)量高、效益好，且具有一定的保健作用，成為我國(guó)北方地區(qū)菜糧兼用作物之一。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）統(tǒng)計(jì)，2014年全世界南瓜產(chǎn)量約為2 519萬(wàn)t，我國(guó)占世界當(dāng)年總產(chǎn)量的28.74 %，居世界第1位（王璐，2017）。隨著南瓜種植規(guī)模的擴(kuò)大，病毒病也愈發(fā)嚴(yán)重，成為制約南瓜產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素之一，尤其在高溫干旱的年份，嚴(yán)重影響南瓜的品質(zhì)與產(chǎn)量。據(jù)報(bào)道，能夠侵染南瓜的病毒種類(lèi)有 80 多種，其中小西葫蘆黃花葉病毒（ Zucchini yellow mosaic 陳利達(dá)，男，碩士，科研助理，專業(yè)方向：蔬菜病害檢測(cè)，E-mail：1271840305qq.com* 通訊作者（Corresponding authors）：謝學(xué)文，男，博士，專業(yè)方向：蔬菜病害綜合防治，E-mail：xiexuewencaas.cn；李寶聚，男，研究員，專業(yè)方向：蔬菜病害綜合防治，E-mail：Libaojucaas.cn收稿日期：2017-12-04；接受日期：2018-03-06基金項(xiàng)目 ：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2016YFD0201010），公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)課題項(xiàng)目（201303112）南瓜（ Cucurbita moschata Duch.，中國(guó)南瓜）、筍瓜（ Cucurbita maxima Duch.exLam.，印度南瓜）、西葫蘆（ Cucurbita pepoL.，美洲南瓜）、墨西哥南瓜（ Cucurbita mixtaPangalo）和黑籽南瓜（ Cucurbita 43新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲(chóng)防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES2018（6）：43-47virus，ZYMV）、黃瓜花葉病毒（ Cucumber mosaic virus，CMV）、西瓜花葉病毒（ Watermelon mosaic virus，WMV）、南瓜花葉病毒（ Squash mosaic virus，SqMV）、番木瓜環(huán)斑病毒（ Papaya ringspot virus，PRSV）和馬鈴薯 Y 病毒（ Potato viurs Y，PVY）（Lecoq etal.，1997；Fletcher etal.，2000；周賢，2013；劉嘉峪等，2017）發(fā)生相對(duì)普遍。近年來(lái)北京地區(qū)南瓜的種植面積逐年增加，南瓜病毒病危害日趨嚴(yán)重，本文針對(duì)北京周邊地區(qū)采集的疑似感染病毒病的南瓜葉片，采用反轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，以期了解北京地區(qū)南瓜上主要病毒種類(lèi)及其分布，為當(dāng)?shù)啬瞎喜《静〉姆揽睾涂共∑贩N的選育提供參考。1 材料與方法1.1 樣品采集20162017年，在北京周邊地區(qū)采集疑似感染病毒病的南瓜樣本（葉片）共 84 份：順義區(qū) 32份、昌平區(qū)15份、大興區(qū)12份、海淀區(qū)25份。所采樣品均保存在 -80冰箱備用。1.2 試劑與儀器試劑： TRIzolReagent 購(gòu)自英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒 FastQuant RTKit購(gòu)自天根生物科技（北京）有限公司；2× Taq Mix（MT201）購(gòu)自博邁德科技（北京）有限公司。儀器設(shè)備：3K15 型高速離心機(jī)，德國(guó) Sigma公司生產(chǎn)；DYY-6C 型電泳儀，北京市六一儀器廠生產(chǎn)；移液槍，德國(guó) Eppendorf 公司生產(chǎn)；Jel Doc2001 型凝膠成像系統(tǒng)、Bio-Rad S1000PCR 儀，美國(guó)伯樂(lè)公司生產(chǎn)。1.3 植物總 RNA 提取采用 TRIzol 法提取南瓜葉片總 RNA。取 100mg南瓜葉片于液氮中研磨，將0.2 g粉末轉(zhuǎn)入1.5 mL 離心管，迅速加入 1mLTRIzol 試劑，振蕩混勻，室溫下靜置 5 min；4 下 12 000r·min-1離心 10min；將上清液轉(zhuǎn)入 1.5 mL 離心管，加入 0.2 mL 氯仿混勻，室溫放置 5 min；4 下 12 000r·min-1離心 10 min；取水相（約 400 L）加入等體積的異丙醇，室溫下靜置 10 min；4 下 12 000r·min-1離心 10 min；棄上清液，加入 1 mL75% 乙醇洗滌沉淀 2 次，4 下 12 000r·min-1離心 5 min；自然干燥，加入 50 L RNase-FreeddH2O溶解；以健康南瓜葉片總 RNA 為陰性對(duì)照，-80保存?zhèn)溆谩?.4 南瓜病毒病樣本 RT-PCR 檢測(cè)以提取總 RNA 為模板，用 FastQuant RTKit 試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成病毒的 cDNA 第一條鏈。使用已報(bào)道的 CMV-F/CMV-R、 SqMV-1/SqMV-2、 PRSV-F/PRSV-R 和 PVY-1/PVY-2 特異性引物（表 1）對(duì)不同樣本進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，其中 ZYMV-1/2 和WMV-1/2 是根據(jù)GenBank已有的病毒外殼蛋白基因（ Coat Protein， CP）序列所設(shè)計(jì)。所用引物均由博邁德科技（北京）有限公司合成。表 1 用于南瓜病毒病分子檢測(cè)的引物信息引物編號(hào) 引物序列（5-3） PCR 產(chǎn)物/bp 參考文獻(xiàn)CMV-F CGTTTAGTGACTTCAGACAG 735 宋婷婷CMV-R ATGGACAAATCTGAATCAAC 等，2007ZYMV-1 AAAGAAGAAGACAAAGGGAA 582 自行設(shè)計(jì)ZYMV-2 AGCGTATCGTGCTAAACTWMV-1 ACACCAGTGGCAAAGGG 697 自行設(shè)計(jì)WMV-2 CCATCAAGTCCAAATAACCSqMV-1 CATGGTACAGCAGCTTGGAAC 597 廖富榮SqMV-2 GAAGCCACAACAAAACCCAGA 等，2013PRSV-F ATGAGGCTGTGGATGCTGGTTTA 325 任春梅PRSV-R GATTGAGTGGCACGAGTATTAGA 等，2015PVY-1 GCCAACTGTGATGAATGGGC 400 馮光惠PVY-2 TGTACTGATGCCACCGTCCA 等，2014PCR 擴(kuò)增體系： 2× TaqPCRMasterMix10 L，上下游引物各 0.5 L， cDNA 模板 1 L，ddH2O 補(bǔ)足至 20 L。 PCR 擴(kuò)增條件： 94預(yù)變性 4 min； 94變性 30 s， 53退火 30 s， 72延伸 45 s，共 34 個(gè)循環(huán)； 72補(bǔ)充延伸 10 min。擴(kuò)增結(jié)束后，取 5L PCR 產(chǎn)物于 1.5% 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，使用全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)記錄結(jié)果。PCR 產(chǎn)物送至博邁德科技（北京）有限公司進(jìn)行測(cè)序，并利用 NCBI 序列比對(duì)工具 BLAST（http：/blast.ncbi.nlm.nih.gov/）程序，根據(jù)核酸序列同源性確定病毒種類(lèi)。2 結(jié)果與分析2.1 &nbsp;RT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果對(duì)采集的 84 份南瓜病毒病樣本（葉片）提取總 RNA，利用不同特異性引物進(jìn)行 RT-PCR 檢測(cè)，部分檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。待測(cè)樣品中引物CMV-F/CMV-R 可擴(kuò)增出大小 735 bp 的條帶（圖 1-a），44新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲(chóng)防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES引物 ZYMV-1/ZYMV-2 可擴(kuò)增出大小 582 bp 的條帶（圖 1-b），引物 WMV-1/WMV-2 可擴(kuò)增出大小697bp 的條帶（圖 1-c），陰性對(duì)照均未擴(kuò)增出目的條帶。表明在待檢樣品中能分別測(cè)出 CMV、ZYMV和 WMV，但未檢測(cè)到 SqMV、PRSV、PVY。2.3 南瓜植株上病毒的復(fù)合侵染情況北京地區(qū) 84 份南瓜病毒病樣品中，發(fā)現(xiàn) 14 份病樣為2種病毒復(fù)合侵染，復(fù)合侵染率為16.67% （表3）。其中，北京順義區(qū)南瓜病毒病復(fù)合侵染種類(lèi)為 CMV 和 ZYMV，侵染率為 18.75%；海淀區(qū)南瓜病毒病復(fù)合侵染種類(lèi)為 ZYMV 和 WMV，侵染率為 32.00%，未檢出 3 種病毒復(fù)合侵染。表 3 北京地區(qū)南瓜病毒復(fù)合侵染類(lèi)型及分布采樣地樣品數(shù)量CMV+ZYMV ZYMV+WMV CMV+WMV檢出數(shù)檢出率/%檢出數(shù)檢出率/%檢出數(shù)檢出率/%順義區(qū) 32 6 18.75 0 0 0 0昌平區(qū) 15 0 0 0 0 0 0大興區(qū) 12 0 0 0 0 0 0海淀區(qū) 25 0 0 8 32.00 0 0總計(jì) 84 6 7.14 8 9.52 0 02.4 北京地區(qū)南瓜病毒病田間癥狀南瓜病毒病的發(fā)生可貫穿植株整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育期，為系統(tǒng)性侵染。北京地區(qū)南瓜病毒病主要包括花葉、褪綠和皺縮等癥狀，經(jīng)室內(nèi)分子檢測(cè)后得知田間病毒種類(lèi)為 CMV、ZYMV 和 WMV 3 種。CMV田間癥狀（圖2-a）：葉片葉綠素分布不均，易出現(xiàn)黃色或淡黃色病斑。嚴(yán)重時(shí)葉片變小變脆，出現(xiàn)淺黃色部分斑駁，呈現(xiàn)黃綠分布不均的鑲嵌狀花葉癥狀。ZYMV 田間癥狀（圖 2-b）：葉面出現(xiàn)花葉及斑駁癥狀，部分葉肉逐漸褪綠黃化，易出現(xiàn)明脈。嚴(yán)重時(shí)植株矮化，節(jié)間變短，葉緣卷曲形成雞爪狀，圖 1 南瓜部分樣品 RT-PCR 檢測(cè)結(jié)果a 為 CMV 引物擴(kuò)增結(jié)果，b為 ZYMV 引物擴(kuò)增結(jié)果，c為 WMV引物擴(kuò)增結(jié)果；M，BM5000 DNAMarker；N，健康植株；111，部分感病植株。M N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 112000bp1000bp750bp500bp250bp100bpa2000bp1000bp750bp500bp250bp100bpbM N 1 2 3 4 5 6 7 8 92000bp1000bp750bp500bp250bp100bpcM N 1 2 3 4 5 6 7 8 92.2 南瓜主要病毒種類(lèi)檢測(cè)結(jié)果對(duì)采集的84份南瓜病毒病樣本進(jìn)行PCR檢測(cè)，其中79份病樣檢測(cè)顯示陽(yáng)性，檢出3種病毒 分 別 為 CMV、ZYMV 和 WMV， 病 毒 檢 出 率94.05%。其中 CMV 檢出率最高，可達(dá) 52.38%；其次為 ZYMV，檢出率 44.01%；WMV 檢出率 14.29%（表2）。因此，CMV在北京地區(qū)南瓜上侵染最普遍，為優(yōu)勢(shì)病毒種類(lèi)。北京不同地區(qū)南瓜病毒種類(lèi)及發(fā)生程度有所差異（表2）。在南瓜植株上檢出的病毒種類(lèi)最多的是順義區(qū)和海淀區(qū)，檢測(cè)到 3 種病毒，這 2 個(gè)地區(qū)南瓜病毒病發(fā)生最為嚴(yán)重；其次是昌平區(qū)和大興區(qū)，分別檢測(cè)出 2 種病毒，該地區(qū)病毒病危害較輕。表 2 北京地區(qū)南瓜病毒種類(lèi)及分布采樣地樣品數(shù)量CMV ZYMV WMV檢出數(shù)檢出率/%檢出數(shù)檢出率/%檢出數(shù)檢出率/%順義區(qū) 32 21 65.63 11 34.38 4 12.50昌平區(qū) 15 10 66.67 2 13.33 0 0大興區(qū) 12 8 66.67 4 33.33 0 0海淀區(qū) 25 5 20.00 20 80.00 8 32.00總計(jì) 84 44 52.38 37 44.01 12 14.29圖 2 南瓜病毒病田間發(fā)病癥狀a，CMV 侵染南瓜葉片癥狀；b，ZYMV 侵染南瓜葉片癥狀；c，WMV 侵染南瓜葉片癥狀；d，CMV+ZYMV 復(fù)合侵染南瓜葉片癥狀；e，ZYMV+WMV 復(fù)合侵染南瓜葉片癥狀。彩色圖版見(jiàn)中國(guó)蔬菜網(wǎng)站：www.cnveg.org。a b c d e45新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲(chóng)防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES并常伴有蕨葉及葉面凹凸起伏癥狀。WMV 田間癥狀（圖2-c）：葉片變小變硬，葉緣部分失綠并伴有斑駁等癥狀。發(fā)病中后期植株表現(xiàn)皺縮矮化、葉片卷曲，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)莖蔓變短，發(fā)病組織呈瘤狀突起?；旌锨秩镜闹仓臧l(fā)病癥狀表現(xiàn)較為復(fù)雜，發(fā)病較重。CMV和ZYMV復(fù)合侵染后植株矮化，葉緣卷曲，葉片顏色變淺，出現(xiàn)蕨葉及葉面不平現(xiàn)象（圖2-d）。ZYMV 和 WMV 復(fù)合侵染現(xiàn)象廣泛存在，其癥狀在葉片上表現(xiàn)明顯，葉片出現(xiàn)褪綠黃化，易形成深淺綠色相間花葉，伴有皺褶卷曲現(xiàn)象。有時(shí)葉緣處有斑駁突起，病株生長(zhǎng)遲緩，開(kāi)花結(jié)果后病情趨于加重（圖 2-e）。3 結(jié)論與討論病毒病是制約南瓜生產(chǎn)的重要因素之一，隨著我國(guó)南瓜種植面積逐年增加，病毒病的危害日益加重，給南瓜生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。南瓜病毒病在我國(guó)長(zhǎng)江地區(qū)、內(nèi)蒙古、新疆、黑龍江等地普遍發(fā)生（馬英，2017）。不同地區(qū)引起南瓜病毒病的毒源種類(lèi)不盡相同，新疆石河子地區(qū)南瓜病毒病毒源種類(lèi)主要為 CMV、ZYMV、WMV、PRSV-W（任琛榮 等，2016）；黑龍江地區(qū)南瓜病毒病的毒源種類(lèi)為 CMV 和 WMV（楊國(guó)慧，2003）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，侵染北京地區(qū)南瓜的主要毒源有CMV、ZYMV 和 WMV 3 種， 未 檢 測(cè) 到 SqMV、PRSV、PVY等其他病毒，由于病毒分布具有區(qū)域性，目前 SqMV 只在黑龍江南瓜上有相關(guān)報(bào)道（李鳳梅，2002）。其他病毒種類(lèi)也未檢出，可能是由于采樣數(shù)量少或部分南瓜植株病毒癥狀表現(xiàn)不明顯，導(dǎo)致漏采。在所有檢測(cè)樣品中 CMV 的檢出率較高，可能是由于 CMV 寄主范圍廣，可侵染 1000 多種單、雙子葉植物（王海河 等，2001），且 CMV 可由 60多種蚜蟲(chóng)進(jìn)行非持久性傳播，因此成為北京地區(qū)南瓜病毒病優(yōu)勢(shì)毒源。此外，本次采集樣本共84份，其中有79份病樣顯示陽(yáng)性，5份疑似感染南瓜病毒病，但在該樣本內(nèi)未檢測(cè)到病毒，可能是生理性病害或藥害所致。瓜類(lèi)病毒復(fù)合侵染現(xiàn)象在不同地區(qū)均有報(bào)道，部分學(xué)者對(duì)我國(guó)瓜類(lèi)主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行病毒種類(lèi)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)存在多種病毒復(fù)合侵染現(xiàn)象，其中以 PRSV 和WMV組合最為常見(jiàn)，占復(fù)合侵染組合的31.25%（尤毅 等，2016）；重慶地區(qū)南瓜檢測(cè)樣品中有93.22% 的樣品受 2 種以上病毒復(fù)合侵染（青玲等，2010）。本試驗(yàn)中 2 種病毒復(fù)合侵染率為 16.67%，可能與連作、傳毒媒介、種子與土壤帶毒有關(guān)。尤其是昆蟲(chóng)傳毒，CMV、ZYMV 、WMV 均可通過(guò)蚜蟲(chóng)進(jìn)行傳播，部分蚜蟲(chóng)可攜帶多種病毒進(jìn)行再侵染，導(dǎo)致一種植株上出現(xiàn) 2 種或 2 種以上病毒復(fù)合侵染現(xiàn)象。也可能與病毒越冬習(xí)性有關(guān)，如國(guó)內(nèi)學(xué)者在重慶地區(qū)對(duì)南瓜病毒病進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)農(nóng)田周?chē)劜萆洗嬖?7 種病毒，且復(fù)合侵染的比例 高 達(dá) 80%（ 青玲 等，2009）。CMV、ZYMV 和WMV均為種傳病毒（楊國(guó)慧，2003），再加上田間管理不當(dāng)、單一品種種植模式等，成為南瓜病毒病發(fā)生嚴(yán)重且存在復(fù)合侵染的主要原因。本試驗(yàn)已檢測(cè)出北京地區(qū)南瓜病毒病的毒源種類(lèi)主要有 CMV、ZYMV 和 WMV，但受采集數(shù)量和地域性的限制，無(wú)法涵蓋北京地區(qū)南瓜病毒所有種類(lèi)，因此，是否存在其他病毒種類(lèi)還有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)馮光惠，杜虎平，李夏隆，亢福仁2014陜北地區(qū)馬鈴薯Y病毒的RT-PCR檢測(cè)及其序列分析山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，42（9）：941-944李鳳梅2002黑龍江省南瓜病毒病毒原鑒定和品種資源抗性篩選的研究碩士論文哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)李昕升，吳昊，劉宜生2017南瓜屬作物與南瓜品種資源中國(guó)野生植物資源，36（5）：1-6廖富榮，葉志紅，陳青，吳媛，陳紅運(yùn)，林石明2013應(yīng)用 RT-PCR 和 IC-RT-PCR 方法檢測(cè)南瓜花葉病毒植物檢疫，27 （2）：60-64劉嘉裕，戴良英，劉勇，張德詠，譚新球，李迅，唐前君2017 長(zhǎng)沙地區(qū)南瓜的小西葫蘆黃花葉病毒檢測(cè)及其分子進(jìn)化分 析湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，43（3）：274-281馬英2017籽用西葫蘆病毒病發(fā)病流行原因分析及防治中國(guó)蔬菜，（7）：86-88青玲，楊水英，孫現(xiàn)超，王進(jìn)軍，周常勇2009從葎草中檢出復(fù)合侵染的多種病毒植物保護(hù)，35（4）：138-139青玲，包凌云，周常勇，楊水英，孫現(xiàn)超2010重慶南瓜病毒病病原ELISA檢測(cè)及 CMV 變異分析園藝學(xué)報(bào)，37（3）：405-412任春梅，程兆榜，楊柳，繆倩，周益軍2015江蘇省葫蘆科作物6 種病毒的多重RT-PCR方法及應(yīng)用江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，31（4）：756-763任琛榮，郝小軍，都業(yè)娟，向本春2016新疆石河子及新湖籽用西葫蘆病毒病分子檢測(cè)北方園藝，（1）：102-106宋婷婷，陳榮溢，楊雷亮2007應(yīng)用多重 RT-PCR 檢測(cè)煙草上的46新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲(chóng)防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLESTMV 和 CMV遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，（1）：53-54王海河，林奇英，謝聯(lián)輝，吳祖建2001黃瓜花葉病毒三個(gè)毒株對(duì)煙草細(xì)胞內(nèi)防御酶系統(tǒng)及細(xì)胞膜通透性的影響植物病理學(xué)報(bào)，31（1）：43-49王璐2017南瓜籽不同干燥方式及工藝對(duì)南瓜籽油功能性品質(zhì)的影響碩士論文北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)楊國(guó)慧2003滇黑兩省南瓜病毒病病原鑒定及其外殼蛋白基因克隆博士論文哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)尤毅，李華平，謝大森2016侵染冬瓜的病毒病原種類(lèi)鑒定植物保護(hù)，42（2）：182-186周賢2013蘇丹首次報(bào)道南瓜感染番木瓜環(huán)斑病毒植物檢疫，（3）：100FletcherJD，W allaceAR，Rogers BT2000 PotyvirusesinNewZealandbuttercupsquash（ Cucurbits maximaDuch ）：yield andqualityeffectsofZYMVandWMV2virusinfectionsNew ZealandJournalofCropandHorticulturalScience，28（1）：17-26LecoqH，Dafalla G，Desbiez C，Wipfscheibel C，Delecolle B1997 BiologicalandmolecularcharacterizationofMoroccanWatermelon mosaic virus andapotyvirusisolatefromEasternSudanP lantDisease，85（5）：547-552Identification of Pathogen Species of Virus Diseases Infecting Squash in Beijing AreaCHENLi-da， CAOJin-qiang， SHIYan-xia， CHAIA-li， XIEXue-wen*， LIBao-ju*（ InsitituteofVegetablesandFlowers， ChineseAcademyofAgriculturalSciences， Beijing100081， China）Abstract：InordertoclearanddefinitespeciesofsquashvirusdiseasesinBeijingareaandtheirmaininfectionpathogens，this papercollected84squashsampleswithsuspectedvirus-likesymptomsduring2016-2017fromBeijingarea，and carriedoutdetectionbyRT-PCRused6pairsofspecificvirusprimersThe resultsshowedthat79sampleswerepositive，among which Cucumber mosaic virus （CMV） hadthehighestdetectionrate-52.38%，followed by Zucchini yellow mosaic virus （ZYMV） andWatermelon mosaic virus （WMV）Their detectionratewere44.01%and14.29%，respectivelyOther viruseswerenotyetdetectedIn addition，16.67% samplesweremix-infectedby2kindsofvirusesMix infectionofCMVandZYMVtook7.14%Mix infectionofZYMVandWMVtook9.52%CMV wastheprevalentpathogenicvirusinBeijingarea，where themixinfectionofvirusesonsquashwasexistedKey words：Squash；Virus diseases；Species identification 47新優(yōu)品種栽培管理本期視點(diǎn)產(chǎn)業(yè)市場(chǎng)病蟲(chóng)防控 研究論文中 國(guó) 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES</p>