LA雜交系百合特征花香釋放規(guī)律及關(guān)鍵基因研究
<p>園藝學(xué)報(bào)，2018， 45 (4)： 702716. Acta Horticulturae Sinica 702 doi： 10.16420/j.issn.0513-353x.2017-0313； http： /www. ahs. ac. cn 收稿日期 ： 2017 07 04； 修回日期 ： 201803 12 基金項(xiàng)目 ： 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31672190 ）；國家十二五863 計(jì)劃項(xiàng)目（2011AA1002084） * 共同第一作者 * 通信作者 Author for correspondence （E-mail：luyingminbjfu.edu.cn ） LA 雜交系百合特征花香釋放規(guī)律及關(guān)鍵基因研究 章毅穎*，李雯琪*，呂英民*（北京林業(yè)大學(xué)園林學(xué)院，國家花卉工程技術(shù)研究中心，北京 100083） 摘 要： 使用頂空固相微萃?。?HS SPME）氣相色譜質(zhì)譜（GC MS）聯(lián)用技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)，分析 LA 雜交系百合（Lilium longiflorum × Asiatic hybrids ）花香釋放代謝途徑的生物化學(xué)規(guī)律和遺傳特征。對比 LA系百合、 麝香百合 （Longiflorum hybrids）、 亞洲百合 （ Asiatic hybrids）、 OT系百合 （Oriential hybrids × Trumpet hybrids） 4 個(gè)雜交系的 5 個(gè)品種揮發(fā)物釋放差異；利用同源克隆從 LA 百合中克隆得到3 個(gè)甲羥戊酸合成途徑（MVA ）中的關(guān)鍵基因。結(jié)果表明： 5 個(gè)百合品種花香成分釋放存在顯著差異，萜烯類化合物的釋放規(guī)律與香氣程度基本一致。 LA 百合愛神在初開期花香釋放達(dá)到頂峰，隨后逐漸降低；花瓣的香味釋放量最大。不同雜交系百合 MVA 途徑合成酶基因（ HMGR、 MVD、FPS 、TPS ）的表達(dá)模式不同，關(guān)鍵基因的表達(dá)量影響最終產(chǎn)物的生成。在 LA 百合愛神中克隆得到 LlaTPS，在開花進(jìn)程中， LlaTPS 表達(dá)趨勢與萜烯類化合物釋放規(guī)律相似，表明其是控制萜烯類化合物揮發(fā)量的關(guān)鍵基因。LlaTPS cDNA 全長 1 799 bp，具開放閱讀框 1 764 bp，共編碼 587 個(gè)氨基酸。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析得出 LlaTPS與同屬百合 Siberia親緣關(guān)系最近，屬于 TPSb 亞家族?？寺〉玫胶铣杀栋胼魄疤嵛镔|(zhì) FPP 的關(guān)鍵基因法尼基焦磷酸合酶基因 LlaFPPS，cDNA 全長 1 072 bp，開放閱讀框 1 056 bp，共編碼 351 個(gè)氨 基酸； 其編碼蛋白與 單子葉植物 FPPS 蛋白親緣關(guān)系較近?？寺〉玫浇沽姿峒琢u戊酸脫羧酶（MVD）基因LlaMVD（ KX034060）， cDNA 全長 1 439 bp，開放閱讀框 1 275 bp，共編碼 424 個(gè)氨基酸；百合 MVD 與油棕（ Elaeis guineensis） 、短花藥野生稻（Oryza brachyantha ）等單子葉植物親緣關(guān)系較近。 關(guān)鍵詞： 百合；花香；TPS ； FPPS； MVD 中圖分類號： S 682.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：0513-353X （2018 ） 04-0702-15 Characterization of Emitted Volatiles and Key Genes in Lilium longiflorum × Asiatic ZHANG Yiying*，LI Wenqi*，and LÜ Yingmin*（ College of Landscape Architecture， China National Floriculture Engineering Research Centre， Beijing Forestry University，Beijing 100083，China ） Abstract： Using headspace solidphase microextraction （HS SPME）， gas chromatography mass spectrometry（ GCMS ）and quantitative real-time PCR techniques ， we analyzed the biochemical and genetic characterization of the metabolic pathway on fragrance emission of Lilium longiflorum × Asiatic 章毅穎，李雯琪，呂英民. LA 雜交系百合特征花香釋放規(guī)律及關(guān)鍵基因研究. 園藝學(xué)報(bào)， 2018， 45 (4)： 702716. 703 hybrids（ LA） . Five interspecific Lilium hybrids cultivars were collected to analyze the differences in scent emissions including Lilium longiflorum × Asiatic hybrids，Longiflorum hybrids， Asiatic hybrids and Oriential hybrids × Trumpet hybrids. These five cultivars were divided into three levels：non-scented ，light-scented，and strong-scented. Three key genes of the mevalonic acid （MVA ）pathway were isolated from LA hybrids by the homology cloning. The results indicated that there were significant differences in the release of floral scent components in five lily hybrids with different levels of fragrance， and the emitted regulation of terpene compounds was consistent with the degree of perceptible fragrance. The aroma content of Freya reached the maximum in the early flowering period， and the aroma content of tepal was the highest among the four floral tissues. The expression patterns of enzyme genes（ HMGR， MVD，F(xiàn)PS and TPS）in the MVA pathway were different in different interspecific lily cultivars. The expression level of TPS was consistent with the emitted regulation of terpene compounds on the flowering of Freya，which indicated that TPS played a pivotal role in the volatilization of terpene compounds. We obtained a terpene synthase gene named as LlaTPS in LA hybridsFreya ，which was the final step in the MVA pathway. The full length of the cDNA was 1 799 bp，with an open reading frame of 1 764 bp ，encoding a total of 587 amino acids. The phylogenetic tree analysis showed that LlaTPS was the closest to the monoterpene synthase of Lilium hybrid cultivar Siberia， and belonged to TPSb subfamily. LlaFPPS was cloned from LA hybrids Freya，which can catalyze farnesyl diphosphate （ FPP）as the precursor for sesquiterpene. The full length of the cDNA was 1 072 bp， with an open reading frame of 1 056 bp，encoding a total of 351 amino acids. The phylogenetic tree analysis showed that LlaFPPS encoding protein had a close relationship with monocotyledons plant FPPS protein，and far more distant from leguminous plants. LlaMVD（ KX034060） was isolated from LA hybrids Freya， which was the key gene in the MVA pathway. The full length of the cDNA was 1 439 bp，with an open reading frame of 1 275 bp ，encoding a total of 424 amino acids. The phylogenetic tree analysis showed that Lilium MVD is closely related to that of Elaeis guineensis and Oryza brachyantha. Keywords： lily；Lilium longiflorum × Asiatic hybrids；floral scent ；TPS； FPPS；MVD 探究百合（ Lilium spp.）的花香形成機(jī)制，根據(jù)人們需求選育出不同香氣的品種，是提高百合花香資源利用的重要手段之一。LA 百合雜交系是麝香百合和亞洲百合的雜交品系。麝香百合雜交系由麝香百合（ Lilium longiflorum）與臺灣百合（ Lilium philippinense）雜交而成，喇叭形，花香清新。 Kong 等（2013 ）對喇叭形百合種淡黃花百合（Lilium sulphureum ）進(jìn)行晝夜花香釋放規(guī)律的研究發(fā)現(xiàn)，其 1,8桉樹腦和苯甲酸甲酯含量最豐富，其他化合物，如 蒎烯（2.4% ） ，檜萜（ 1.2%），檸檬烯 （1.5% ）， (E) 羅勒烯 （4.7% ），和 松油醇 （2.4% ）， 也發(fā)揮 了重要作用。 張輝秀等 （2012）在對麝香百合雜交系品種白天堂不同開花期的香氣成分變化研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，在其開花的 4 個(gè)時(shí)期（初開期、半開期、盛開期、衰敗期）中，隨著花的開放，其香氣釋放量逐漸增大，并在盛開期達(dá)到峰值，隨后逐漸降低。亞洲百合雜交系主要由亞洲地區(qū)原產(chǎn)的百合及品種雜交而成，一般為無香型或淡香型。范艷萍等（ 2008）對亞洲百合品種精辟的花瓣進(jìn)行揮發(fā)性成分和含量的測定，釋香量最大的是十九烷，其次是十六烷；張輝秀等（ 2013）對不同百合揮發(fā)性成分分析得出，烷烴類釋放物所占比例比較高，達(dá)到了 40%以上。大部分 LA 百合沒有香味，少數(shù)品種花香濃淡適宜，花色豐富，花形多變，抗逆性強(qiáng)，適合百合多種種植形式，也是百合切花生產(chǎn)及園林地被種植的首選Zhang Yiying，Li Wenqi ，Lü Yingmin. Characterization of emitted volatiles and key genes in Lilium longiflorum × Asiatic. 704 Acta Horticulturae Sinica，2018， 45 (4)：702716. 材料之一。 目前對于 LA 百合花香研究不多，某些 LA 百合品種中萜烯類物質(zhì)（ terpenoids）是主要香氣成分，這與麝香百合花香主要成分相似。萜烯類化合物是植物香味物質(zhì)的主要成分，大多數(shù)是由異戊烯二磷酸（ isopentenyl diphosphates， IPP）在單萜或倍半萜合成酶的作用下合成的。萜烯類化合物包括兩個(gè)合成途徑（ Mahmoud et al.，2002） ，一個(gè)是在細(xì)胞溶質(zhì)中發(fā)生的甲羥戊酸途徑（ mevalonic acid， MVA） ，另一個(gè)是在質(zhì)體中發(fā)生的甲基赤蘚糖醇磷酸途徑（methylerythritol-phosphate pathway ，MEP） 。本研究中，對百合特征花香物質(zhì)生物合成的關(guān)鍵基因進(jìn)行克隆分析，探索其在 LA 雜交系百合植株上的時(shí)空表達(dá)，以解釋 LA 雜交系百合相關(guān)花香成分生物合成途徑的調(diào)節(jié)機(jī)制，從而指導(dǎo) LA雜交系百合新品種的選育工作。 1 材料與方法 1.1 試驗(yàn)材料和樣品采集 根據(jù)嗅覺識別強(qiáng)弱將 5 個(gè)百合品種的花香程度分成 3 個(gè)水平：無香型亞洲百合穿梭（Tresort ）和 LA 百合耀眼 （ Aladdin） ；輕香型 LA 百合愛神 （ Freya） ；濃香型麝香百合白天堂 （White Heaven ）和 OT 百合薩爾塔列洛 （ Saltarello） 。揮發(fā)物采集前，將每個(gè)品種的 5 6 個(gè)莖（每莖 3 5 個(gè)花芽）收集并浸沒在清水中，置于 28 ，光周期為 16 h 光照 /8 h黑暗，相對濕度為 68%的室內(nèi)。 2016 年 6 月 1417 日 9：0016 ：00 ，從北京市海淀區(qū)八家三頃園苗圃基地采集到 5 個(gè)百合雜交品種（圖 1）盛開期的花瓣。選擇 LA 百合愛神作為模型來探索 LA 百合花香釋放物的特征規(guī)律，將其開花進(jìn)程分成 5 個(gè)階段（圖 2） ，將花器官分花瓣、花藥、花絲和心皮（柱頭 + 花柱 + 子房）。每個(gè)樣品取樣（ 2.0 ± 0.2）g ，重復(fù) 3 次。 1.2 花 香成分收 集與分析 利用頂空固相微萃取（HS SPME ）和氣相色譜質(zhì)譜（GC MS ）對花香成分進(jìn)行收集，將固相微萃取纖維頭在氣相色譜儀的進(jìn)樣口老化 2 h，老化溫度 250 。用無菌鑷子將材料分別裝到25 mL 樣品瓶中并立即將樣品瓶密封。將樣品瓶置入 45 水浴鍋，隨后插入固相微萃取頭，推出纖維頭至樣品上方 0.5 cm 處，在 45 水浴中吸收揮發(fā)性化合物 30 min 后，抽回纖維頭，將萃取頭插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口，推出纖維頭，解析進(jìn)樣。 GCMS 與 DB-5MS 硅膠毛細(xì)管柱（ 30 m × 0.25 mm i.d.，0.25 m 膜厚度）偶聯(lián)（Shimadzu GCMS-QP2010） 。使用氦氣作為載氣。色譜的升溫程序：起始溫度 40 保持 2 min，以 5 · min-1升至 200 ，并在 200 溫度下保持 6 min。質(zhì)譜條件：通過 EI 電離模式， EI 電離能量 70 eV，MS 四級桿溫度為 260 ，離子阱溫度 230 ，掃描范圍為 30 500 amu。 揮發(fā)物成分分析：通過具有 NIST08（ National Institute of Standards and Technology）數(shù)據(jù)庫的G1711EA MSD 化學(xué)工作站 （ Agilent， USA） 鑒定花香揮發(fā)性化合物。初步結(jié)果通過其保留指數(shù) （RI ）與相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較來確認(rèn)。通過峰面積歸一化法對化合物進(jìn)行定量。 1.3 百合總 RNA 的提取與實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（ qRT-PCR） 反應(yīng) 采用艾德萊（Aidlab）植物 RNA 提取試劑盒說明書進(jìn)行 RNA 提取。將提取好的 RNA 樣品用章毅穎，李雯琪，呂英民. LA 雜交系百合特征花香釋放規(guī)律及關(guān)鍵基因研究. 園藝學(xué)報(bào)， 2018， 45 (4)： 702716. 705 微量紫外分光光度計(jì)進(jìn)行質(zhì)量檢測。質(zhì)量合格的 RNA 樣品通過艾德萊公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。 圖 1 5 個(gè)百合栽培品種 Fig. 1 The five commerical hybrid Lilium cultivars 圖 2 LA 百合愛神花發(fā)育 5 個(gè)階段和花器官解剖 Fig. 2 The five development stages and the anatomy of floral organ on Lilium longiflorum × Asiatic hybrid Freya 標(biāo)準(zhǔn)曲線分析：將待測的 cDNA 模板按 10 倍濃度進(jìn)行依次稀釋，共稀釋 5 次，用 6 個(gè)濃度的樣品進(jìn)行熒光定量 PCR 反應(yīng)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而驗(yàn)證引物擴(kuò)增效率。 根據(jù)百合測序、注釋結(jié)果及 cluster 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析，查找目的序列，用 Primer Premier 5 軟件設(shè)計(jì)引物，選擇最優(yōu)的 qRT-PCR 引物序列（表 1） 。引物由中美泰和生物技術(shù)合成。 Zhang Yiying，Li Wenqi ，Lü Yingmin. Characterization of emitted volatiles and key genes in Lilium longiflorum × Asiatic. 706 Acta Horticulturae Sinica，2018， 45 (4)：702716. 表 1 qRT-PCR 引物序列 Table 1 Genes and primer sequences for qRT-PCR 基因名稱 Gene 引物序列（ 5 3） Primer sequence HMGR GTTACCACTCTTCACCCCTT；CAGCCTGTTTGGAACTACTT MVD CTTGTCTTGTCTACTCCCTTG； TTCCTTCTGCCTTGAACTTACC FPS GCACTTGGTTGGTGTATTGA； CGCCTTGTGTGAGAGTTGTC TPS CTCTTGCCTTTCGTCTTCTC；TCCTCCATTACTTGCTCTCC LoTIP1（ Actin） CGAAGCCAGAAACGGAGAAGAAT；GGGTAGGGTGGATTGGGAAGA qRT-PCR 反應(yīng)條件為： 95 預(yù)變性 3 min；95 變性 10 s，退火溫度（ Tm）退火 30 s，72 延伸 30 s，共 39 個(gè)循環(huán)， 65 下孵化 20 s，從 65 95 每 0.5 讀取 1 次熔解曲線。 熒光定量分析：以 LoTIP1（表 1）為內(nèi)參基因，并對各樣品進(jìn)行熒光定量 PCR 反應(yīng)，每個(gè)樣品3 次重復(fù)，利用 2-Ct法計(jì)算相對表達(dá)量，隨后導(dǎo)出相對表達(dá)量柱狀圖。 根據(jù) GenBank 上近源物種以及百合轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，利用 Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)正向和反向引物（表 2）。 表 2 百合基因克隆所用引物序列 Table 2 The primer sequences for isolation of LA hybrid Freya 引物名稱 Primer 引物序列 Sequence TPS F：5 -ATGGCAGCTATGAGCTGTTTCTCAC-3； R：5 -TCATTCCAATGGGACATTATTGACA-3 FPPS ：5 -ATGACGGCGGCGGCGGT-3； R：5 -CTACTTCTCTCTCTTGTAAATCTTG-3 MVD ：5 -ATGTCGACAGAGCCGGAG-3； R： 5-TTATTTTGGAATCCCTGT-3 將已獲得的百合 cDNA 文庫為模板，利用上述合成好的引物采用 Thermo Scientific Phusion Hot Start II 高保真 DNA 聚合酶對基因進(jìn)行擴(kuò)增。 PCR 反應(yīng)條件為： 98 預(yù)變性 30 s； 98 變性 10 s，55 退火 30 s，72 延伸 2 min，共 35 個(gè)循環(huán)； 72 繼續(xù)延伸 10 min，4 保存。 PCR 產(chǎn)物通過 1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，進(jìn)行 DNA 純化回收，回收后的 DNA 進(jìn)行加 A 反應(yīng)后，連接到克隆載體 T-Vector pCloneEZ-TOPO。隨后將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH10B 感受態(tài)細(xì)胞，復(fù)蘇，隨后將菌液涂在含 Kan 的 LB 固體培養(yǎng)基上，過夜培養(yǎng) 12 16 h；待平板菌斑生長到合適大小時(shí)，挑取菌落進(jìn)行 PCR 鑒定，將菌液 PCR 驗(yàn)證正確的菌液交由睿博興科生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序。 通過 Contig 軟件對所測得的核苷酸序列片段進(jìn)行拼接，獲得 cDNA 全長。通過 NCBI 中的 ORF Finder 程序分析該基因的開放閱讀框并推導(dǎo)出其氨基酸序列。用 ProtParam（ http： /web.expasy.org/ prot-param/） 計(jì)算蛋白分子量及等電點(diǎn)。使用 NCBI 中的 BLAST 對所得基因的氨基酸序列進(jìn)行比對，用 Clustal X 和 MEGA 5.1 軟件繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹。采用丹麥技術(shù)大學(xué)生物序列分析中心（CBS ， DUT）的 SignalP 4.1 服務(wù)端， TMHMM 2.0 服務(wù) 端， TargetP 1.1 服務(wù)端分別進(jìn)行蛋白信號肽定位和預(yù)測，跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測，亞細(xì)胞定位預(yù)測。蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)模型圖通過在線軟件 SWISS-MODEL（ https： / swissmodel.expasy.org/）繪制獲得。 2 結(jié)果與分析 2.1 百合不同品種花香釋放成分釋放規(guī)律分析 在 5 個(gè)百合雜交品種上共檢測到 37 種發(fā)性化合物（表 3） 。其中，濃香型麝香百合白天堂和 LA 百合愛神揮發(fā)物種類更多，白天堂主要香氣成分為醇類化合物，包括芳樟醇、橙花叔醇、桉葉油醇，尤其是芳樟醇的相對含量貢獻(xiàn)最大，達(dá)到 53.34%。無香型的亞洲百合穿梭揮發(fā)章毅穎，李雯琪，呂英民. LA 雜交系百合特征花香釋放規(guī)律及關(guān)鍵基因研究. 園藝學(xué)報(bào)， 2018， 45 (4)： 702716. 707 物種類較少，脂肪酸衍生物是其主要的釋放物。在 LA 百合輕香型品種愛神和無香型品種耀眼中檢測到了萜烯類化合物，包括 (Z)羅勒烯、石竹烯、 法尼烯，倍半萜的含量超過萜烯類總含量的 70%。 表 3 百合品種盛開期揮發(fā)性化合物成分及其相對含量 Table 3 Volatiles compositions and proportions of floral fragrance emitted from lily hybrid cultivars in mature period 主要成分 Main component 保留時(shí)間 /min Retention time 相對含量 /% Relative content 穿梭 Tresort 耀眼 Aladdin 愛神 Freya 白天堂 White Heaven 薩爾塔列洛 Saltarello 烷烴類 Alkane 正戊烷 Pentane 1.701 3.59 正己烷 Hexane 2.137 3.97 甲基環(huán)戊烷 Methyl-cyclopentane 2.385 0.67 環(huán)己烷 2-ethenyl-1,1-dimethyl-3-methylene- Cyclohexane 14.796 4.55 萜烯類 Terpene 月桂烯 -Myrcene 10.882 0.60 3.22 ( E)羅勒烯 -(E)-Ocimene 12.368 0.46 ( Z)羅勒烯 -(Z)-Ocimene 12.701 8.29 40.69 石竹烯 Caryophyllene 23.587 23.64 法尼烯（金合歡烯） F arnesene 25.668 8.34 醇類 Alcohol 甲醇 Methyl Alcohol 1.516 12.84 0.92 8.38 乙醇 Ethanol 1.616 14.40 已二醇 2-methyl-Pentane 1.952 2.24 順式 3己烯醇 3-Hexen-1-ol 6.768 6.23 順式 2己烯醇 ( Z)-2-Hexen-1-ol 7.058 3.36 17.66 3.82 反式 2己烯醇 ( E)-2-Hexen-1-ol 7.073 4.09 正己醇 1-Hexanol 7.154 4.89 5.02 12.86 2.45 2乙基 1己醇 2-ethyl-1-Hexanol 12.108 10.81 0.79 S ( ) 3,7,11三甲基 1,6,10十二烷三烯3醇 S-(Z)-3,7-dimethyl-2,6-Octadien-1-ol 12.162 1.38 桉葉油醇 Eucalyptol 12.238 1.68 0.76 0.69 10.68 芳樟醇 3,7-dimethyl-1,6-Octadien-3-ol 14.381 0.81 53.34 橙花叔醇 Nerolidol 27.058 10.30 8.17 醛類 Aldehyde 3甲基戊二醛 3-methyl- pentane 2.036 0.96 己烯醛 Hexenal 5.270 2.54 0.84 反式 2己烯醛 ( E)-2-Hexenal 6.712 3.18 3.41 酮類 Ketone 3羥基 2丁酮 3-hydroxy-2-Butanone 3.476 6.32 酯類 Ester 乙酸甲酯 Methyl acetate 1.819 2.11 乙酸 3己烯酯 ( Z)-acetate-3-Hexen-1-ol 11.395 0.31 乙酸己酯 Acetic acid，hexyl ester 11.621 0.42 乙酸 2己烯酯 ( E)-acetate-2-Hexen-1-ol 11.711 1.09 苯甲酸甲酯 Methylbenzoate 14.208 5.59 8.53 (S)-,-4三甲基 3環(huán)己烯 1甲醇（丙酸松油酯） ,-4-trimethyl-3-Cyclohexene-1-methanol, 17.307 2.98 0.44 其他 Others 甘醇酸 Hydroxy-acetic acid 1.520 15.45 檸檬腈 Geranyl nitrile 14.775 0.91 苯甲酸 Benzoic acid ， ethyl ester 16.547 4.04 4,8,12 三甲基 3,7,11十三烷三烯腈 4,8,12-trimethyl-3,7,11-Tridecatrienenitrile 27.330 5.36 注：“”未檢測到或不存在。 Note： “” Not detected or not exist. Zhang Yiying，Li Wenqi ，Lü Yingmin. Characterization of emitted volatiles and key genes in Lilium longiflorum × Asiatic. 708 Acta Horticulturae Sinica，2018， 45 (4)：702716. 2.2 LA 百合不同開花時(shí)期花香成分釋放規(guī)律分析 將 LA 百合品種愛神作為研究對象，以探討不同開花進(jìn)程和不同花器官上的差異（表 4）。該品種揮發(fā)物種類在開花的 5 個(gè)時(shí)期均不同，花蕾期 8 種，初開期 19 種，半開期 16 種，盛開期 17種，衰老期 7 種?？倱]發(fā)性化合物相對含量在初開期和半開期達(dá)到峰值，隨后呈下降趨勢。 表 4 LA 百合愛神不同開花時(shí)期和花器官的揮發(fā)性化合物成分及相對含量 Table 4 Volatiles compositions and proportions of floral fragrance emitted from different developmental floral stages and different floral parts of lily hybrid Freya 主要成分 Main component 保留時(shí) 間/min Retention time 相對含量 /% Relative content 花蕾期 Flower bud 初開期 Starting-opening 半開期 Mid- opening 盛開期 Mature 衰老期 Fully mature 花絲 Filament 花藥 Anther 心皮 Carpels 烷烴類 Alkane 環(huán)己烷 Cyclohexane 2.742 0.22 萜烯類 Terpn 月桂烯 -Myrcene 10.882 0.48 0.60 檸檬烯 D-Limonene 12.146 3.79 反式羅勒烯 (E)-Ocimene 12.368 0.50 0.46 順式羅勒烯 (Z)-Ocimene 12.701 1.42 8.96 1.33 8.29 7.31 石竹烯 Caryophyllene 23.587 28.23 17.17 13.05 23.64 7.02 44.90 7.54 16.34 石竹烯 -Caryophyllene 24.512 2.00 1.27 1.07 2.92 醇類 Alcohol 甲醇 Methyl Alcohol 1.516 0.93 0.87 0.92 2.32 2.96 乙醇 Methyl Alcohol 1.618 4.83 3己烯醇 3-Hexen-1-ol 6.617 0.11 反式 2己烯醇 (E)-2-Hexen-1-ol 7.033 15.06 17.90 17.03 17.66 23.23 順式 2己烯醇 (Z)-2-Hexen-1-ol 7.057 3.11 環(huán)乙醇 Cyclohexanol 7.071 2.68 正己醇 1-Hexanol 7.154 22.42 17.66 22.75 12.86 14.83 15.61 6.60 1.23 2乙基 1己醇 2-ethyl-1-Hexanol 12.129 0.94 2甲基 1戊醇 2-Propyl-1-pentanol 12.137 1.10 桉葉油醇 Eucalyptol 12.238 0.44 0.76 芳樟醇 3,7-dimethyl-1,6-Octadien-3-ol14.381 0.73 0.81 , 4三甲基3 環(huán)己烯1甲醇 ,-4-trimethyl-3- Cyclohexene-1-methanol 17.307 0.44 醛類 Aldehyde 3己烯醛 ( Z)-3-Hexenal 5.208 0.49 0.81 正己醛 Hexenal 5.270 1.54 1.74 2.39 0.84 3.80 27.88 3.63 2己烯醛 ( E)-2-Hexenal 6.712 5.92 8.55 14.10 3.41 11.69 1.72 22.12 酯類 Ester 順式 3己烯酯 (Z)-formate-3-Hexen-1-ol 6.733 9.41 8.40 11.39 6.23 8.87 3.40 乙酸 3己烯酯 (Z)-acetate-3-Hexen-1-ol 11.395 0.77 0.75 0.31 乙酸已酯 Acetic acid，hexyl ester 11.621 1.16 1.18 0.42 乙酸 2己烯酯 (E)-2-Hexen-1-ol， acetate 11.711 </p>
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