2025 01 09 發(fā)布 2025 05 01 實施 甜瓜品種鑒定 SSR分子標記法 05 中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準 備案號 XXXX XXXX 65 020 01 CCS B 4489 2025 Identification of melonvarieties SSR marker method 中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 發(fā)布 NY T 目 次 前言 范圍 規(guī)范性引用文件 術語和定義 縮略語 原理 主要儀器設備及試劑 溶液配制 引物信息及使用 參照品種及使用 操作程序 結果判定與表述 附錄A 規(guī)范性 主要儀器設備及試劑 附錄B 規(guī)范性 溶液配制 附錄C 規(guī)范性 引物及序列 附錄D 資料性 引物相關信息 附錄E 資料性 參照品種相關信息 附錄F 資料性 引物分組 NY T 前 言 本文件按照GB T 標準化工作導則 第 部分 標準化文件的結構和起草規(guī)則 的規(guī)定起 草 請注意本文件的某些內容可能涉及專利 本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任 本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司提出 本文件由全國植物新品種測試標準化技術委員會 SAC TC 歸口 本文件起草單位 新疆農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)作物品種資源研究所 新疆農(nóng)業(yè)科學院哈密瓜中心 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 科技發(fā)展中心 本文件主要起草人 顏國榮 韓瑞璽 鄧超宏 楊永 王威 徐麟 劉寧 宋羽 王帆 趙連佳 張永兵 肖 菁 阿布都克尤木 阿不都熱孜克 李嬡嬡 楊巖巖 何姝燃 NY T 甜瓜品種鑒定 SSR分子標記法 范圍 本文件規(guī)定了利用簡單重復序列 SSR 標記進行甜瓜 CucumismeloL 品種鑒定的術語和定義 縮略 語 原理 主要儀器設備及試劑 溶液配制 引物信息及使用 參照品種及使用 操作程序 結果判定與表述 本文件適用于甜瓜品種的DNA分子數(shù)據(jù)采集和品種鑒定 規(guī)范性引用文件 下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款 其中 注日期的引用文件 僅 該日期對應的版本適用于本文件 不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改單 適用于本文件 GB T 農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 扦樣 GB T 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 NY T 植物品種鑒定DNA分子標記法 總則 術語和定義 NY T 界定的術語和定義適用于本文件 縮略語 下列縮略語適用于本文件 APS 過硫酸銨 ammoniumpersulphate bp 堿基對 basepair CTAB 十六烷基三甲基溴化銨 cetyltrimethylammoniumbromide DNA 脫氧核糖核酸 deoxyribonucleicacid dNTPs 脫氧核糖核苷三磷酸 deoxy ribonucleosidetriphosphates EDTA 乙二胺四乙酸 ethylenediaminetetraaceticacid PAGE 聚丙烯酰胺凝膠電泳 polyacrylamidegelelectrophoresis PCR 聚合酶鏈式反應 polymerasechainreaction SSR 簡單重復序列 simplesequencerepeat Taq酶 耐熱DNA聚合酶 Taq DNApolymerase TBE 三羥甲基氨基甲烷硼酸鹽乙二胺四乙酸 Tris borate EDTA TE 三羥甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸 Tris EDTA TEMED 四甲基乙二胺 N N N N tetramethylethylenediamine Tris 三羥甲基氨基甲烷 Tris hydroxymethyl methylaminomethaneTHAM 原理 甜瓜品種基因組中存在著大量能夠穩(wěn)定遺傳的SSR標記 不同甜瓜品種在同一SSR的重復次數(shù)存 在差異 這種差異可通過PCR擴增及電泳方法進行檢測 進而區(qū)分不同的品種 主要儀器設備及試劑 主要儀器設備及試劑見附錄A 溶液配制 溶液配制方法見附錄B NY T 引物信息及使用 引物及序列見附錄C 引物相關信息見附錄D 利用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 PAGE 檢測時選擇普 通引物 利用熒光毛細管電泳檢測時選擇熒光標記引物 熒光標記位于正向引物 端 推薦的熒光標記見 附錄D 可利用附錄C中的引物序貫檢測 當檢測到的差異位點數(shù)能判定送檢樣品與對照樣品不同時 停 止檢測 參照品種及使用 參照品種用于輔助確定送檢樣品在某個位點的等位變異 宜與送檢樣品同時檢測 參照品種相關信息 見附錄E 操作程序 樣品準備 送檢樣品可為種子 幼苗 葉片等組織或器官 種子樣品需扦樣時 應符合GB T 的規(guī)定 每 份樣品不少于 個個體 等量混合分析 必要時進行個體檢測 DNA提取 取混合樣本約 mg 置于 mL圓底離心管中 經(jīng)液氮冷凍后充分研磨 每管加入 L預熱到 的CTAB提取液 充分混合 水浴 min min 每隔 min輕緩顛倒混勻一次 每管加入 與CTAB提取液等體積的三氯甲烷和異戊醇混合液 輕緩混勻后靜置 min rpm離心 min 吸取上清液轉移至新的離心管中 加入等體積預冷的異丙醇 輕輕顛倒混勻 放置 min rpm離心 min 棄上清液 用體積分數(shù)為 的乙醇溶液洗滌 遍 晾干 加入 L雙蒸水 或TE緩沖液充分溶解 檢測DNA濃度和質量 保存?zhèn)溆?注 以上為推薦的DNA提取方法 DNA質量能夠滿足PCR擴增要求的其他DNA提取方法均適用于本標準 DNA 溶液的紫外吸光度OD 與OD 的比值宜介于 之間 注 三氯甲烷和異戊醇混合液中三氯甲烷與異戊醇的體積比為 PCR擴增 反應體系 PCR擴增反應體系的總體積和各組分的終濃度參照表 配制 可以依據(jù)試驗條件調整 表 PCR擴增反應體系 反應組分原濃度終濃度推薦體積 L 緩沖液 含MgCl dNTPs mmol L mmol L Taq酶 U L U L 正向引物 mol L mmol L 反向引物 mol L mmol L DNA ng L ng L 雙蒸水 總體積 反應程序 推薦反應程序 預變性 min 變性 s 退火 s 延伸 s 共 個循環(huán) 延伸 min 產(chǎn)物 保存 反應程序中各反應參數(shù)可根據(jù)PCR擴增儀型號 酶 引物等不同而做適當?shù)恼{整 NY T PCR產(chǎn)物電泳 垂直板變性PAGE 制膠 用洗滌劑將玻璃板清洗干凈 再用雙蒸水 無水乙醇依次擦洗 遍 玻璃板干燥后 將 mL親和 硅烷工作液均勻涂在長玻璃板上 將 mL剝離硅烷工作液均勻涂在帶凹槽的短玻璃板上 操作過程 中應防止兩塊玻璃板互相污染 玻璃板徹底干燥后 將 mm厚的塑料隔條整齊放在長玻璃板兩側 蓋 上凹槽短玻璃板 用夾子固定 用水平儀調平 取 mL質量分數(shù)為 的PAGE膠溶液 加入 L 四甲基乙二胺 TEMED 和 L質量分數(shù)為 的過硫酸銨 APS 迅速混勻 將膠灌入玻璃膠室 灌 膠過程中應防止出現(xiàn)氣泡 待膠室灌滿后 在凹槽處將 mm厚鯊魚齒梳子平齊端向里輕輕插入膠液 約 mm 室溫聚合 h以上 膠聚合后 清理膠板表面溢出的膠液 輕輕拔出梳子 用水洗凈備用 變性 在 LPCR產(chǎn)物中加入 L 加樣緩沖液 混勻 在PCR擴增儀上運行 變性 min 冷卻 min以上備用 電泳 將膠板安裝于電泳槽上 在電泳正極槽和負極槽 上槽 各加入 mL的 TBE緩沖液 使其沒過 電極線 V恒壓預電泳 min min 用移液器吹吸加樣槽 清除氣泡和雜質 將樣品梳 鯊魚 齒朝下 插入凝膠 mm mm 每一個加樣孔點入 L L樣品 除送檢樣品外 還宜同時加入?yún)?照品種擴增產(chǎn)物和合適的DNA分子量標準 V恒壓電泳 電泳時間參考二甲苯青指示帶泳動的位 置和擴增產(chǎn)物預期片段大小范圍 見附錄D 加以確定 二甲苯青指示帶在質量分數(shù)為 PAGE膠電泳 的泳動位置與 bp擴增產(chǎn)物泳動的位置大致相當 擴增產(chǎn)物片段大小在 bp bp bp bp范圍的 電泳參考時間分別為 h h h h 當?shù)任蛔儺悏A基對數(shù) 差異較小時 可適當延長電泳時間 電泳結束后關閉電源 取下玻璃板并輕輕撬開 凝膠附著在長玻璃板上 染色 將附著凝膠的長玻璃板膠面向上浸入固定液中 輕輕晃動 min后取出 在雙蒸水中快速漂洗 時間 不超過 s 將膠板放入染色液中 輕輕晃動 min min后取出 在雙蒸水中快速漂洗 時間不超過 s 將膠板放入顯影液中 輕搖晃動待條帶清晰后取出 再迅速放入固定液中定影 min取出 在雙蒸水中 漂洗 min 取出膠板 晾干 放在膠片觀察燈上觀察 記錄結果 拍照保存 注 固定液 染色液 雙蒸水和顯影液的用量 以淹沒膠面為準 熒光毛細管電泳 PCR產(chǎn)物樣品準備 根據(jù)預先確定的引物分組 見附錄F 分別取等體積不同熒光標記引物的擴增產(chǎn)物 混勻稀釋 吸取 L混合液 加入到DNA分析儀配套上樣板中 注 稀釋倍數(shù)通過熒光毛細管電泳預實驗確定 變性 上樣板各孔分別加入 L分子量內標和 L去離子甲酰胺 在PCR擴增儀上 變性 min 取出后立即置于冰上 冷卻 min以上 瞬時離心 s后備用 電泳 按照DNA分析儀操作手冊電泳 并保存電泳原始數(shù)據(jù)文件 數(shù)據(jù)分析 等位變異確定與記錄 每個SSR位點的等位變異參照擴增片段大小確定 見附錄D 對于變性PAGE 將送檢樣品在某一 位點擴增片段的遷移位置與對應的參照品種進行比較 確定送檢樣品在該位點的等位變異 對于熒光毛 NY T 細管電泳 通過參照品種消除不同批次或者不同型號DNA分析儀可能存在的系統(tǒng)誤差 使用片段分析軟 件讀取送檢樣品在該位點的等位變異 純合位點的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X X 雜合位點的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X Y 其中X Y分別為該位 點上的兩個等位變異 小片段數(shù)據(jù)在前 大片段數(shù)據(jù)在后 缺失位點的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 示例 樣品在某個位點上僅出現(xiàn)一個等位變異 為 bp 則該位點的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 示例 樣品在某個位點上有兩個等位變異 分別為 bp bp 則該位點的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 數(shù)據(jù)比對與差異位點統(tǒng)計 逐一比對送檢樣品與對照樣品每個位點的等位變異數(shù)據(jù) 按照位點相同 位點差異 數(shù)據(jù)缺失 無法判 定情形 記錄每個位點的比對結果 統(tǒng)計檢測位點數(shù)和差異位點數(shù) 結果判定與表述 判定規(guī)則 當差異位點數(shù)大于 判定為 不同 當差異位點數(shù)小于等于 判定為 疑同 結果表述 送檢樣品與對照樣品 或對照樣品指紋 采用檢測 檢 測位點數(shù)為 差異位點數(shù)為 判定為 NY T 附 錄 A 規(guī)范性 主要儀器設備及試劑 A 主要儀器設備 A PCR擴增儀 A 高壓電泳儀 最高電壓不低于 V 具有恒電壓 恒電流和恒功率功能 A 垂直電泳槽及配套的制膠附件 A 離心機 A 水平搖床 A 膠片觀察燈 A 電子天平 感量為 g和 g A 微量移液器 規(guī)格分別為 L L L L L 連續(xù)可調 A 磁力攪拌器 A 核酸濃度測定儀或超微量紫外分光光度計 A 微波爐 A 高壓滅菌鍋 A 酸度計 A 水浴鍋 A 低溫冰箱 A 制冰機 A 凝膠成像系統(tǒng)或紫外透射儀 A DNA分析儀 基于毛細管電泳 有片段分析功能和數(shù)據(jù)分析軟件 最低區(qū)分力 bp A 其他相關儀器和設備 A 主要試劑 除非另有說明 均使用分析純試劑 A 十六烷基三甲基溴化銨 CTAB C H CH NBr CAS號 A 三氯甲烷 CHCl CAS號 A 異戊醇 C H O CAS號 A 異丙醇 CH CHOH CAS號 A 乙二胺四乙酸二鈉 EDTA Na C H N Na O CAS號 A 三羥甲基氨基甲烷 Tris C H NO CAS號 A 濃鹽酸 HCl CAS號 A 氫氧化鈉 NaOH CAS號 A PCR緩沖液 含Mg mmol L A 種脫氧核糖核苷酸 dATP dTTP dGTP dCTP A SSR引物 A 氯化鈉 NaCl CAS號 NY T A TaqDNA聚合酶 Taq酶 CAS號 A DNAMarker DNA片段分布范圍在 bp bp A 甲酰胺 CH NO CAS號 A 溴酚藍 C H Br O S CAS號 A 二甲苯青 C H N NaO S CAS號 A 甲叉雙丙烯酰胺 H C CHCONH CH CAS號 A 丙烯酰胺 C H NO CAS號 A 硼酸 H BO CAS號 A 尿素 CH N O CAS號 A 親和硅烷 A 二甲基二氯硅烷 C H Cl Si CAS號 A 無水乙醇 C H O CAS號 A 四甲基乙二胺 TEMED C H N CAS號 A 過硫酸銨 APS NH S O CAS號 A 冰醋酸 CH COOH CAS號 A 硝酸銀 AgNO CAS號 A 甲醛 HCHO CAS號 A DNA分析儀用丙烯酰胺膠液 A DNA分析儀用分子量內標 A DNA分析儀用電泳緩沖液 A DNA分析儀用光譜校準基質 NY T 附 錄 B 規(guī)范性 溶液配制 試劑配制用水應符合標準GB T 的要求 B DNA提取溶液的配制 B mol LEDTA溶液 稱取 gNa EDTA H O溶于 mL水中 充分攪拌溶解 加NaOH調pH至 加水定容 至 mL 高壓滅菌 min B mol LHCl溶液 量取 mL濃鹽酸 質量分數(shù)為 加水定容至 mL B mol LNaOH溶液 稱取 gNaOH溶于 mL水中 充分攪拌溶解 加水定容至 mL B mol LTris HCl溶液 稱取 gTris堿溶于 mL水中 充分攪拌溶解 加HCl調pH至 加水定容至 mL 高壓滅菌 min B CTAB提取液 稱取 gCTAB gNaCl置于 mL燒杯中 量取 mL mol LTris HCl溶液和 mL mol LEDTA溶液倒入燒杯中 加 mL水 充分攪拌溶解 加水定容至 mL 高壓滅菌 min B TE緩沖液 量取 mL mol LTris HCl溶液和 mL mol LEDTA溶液 加水定容至 mL 高壓 滅菌 min 保存 B PCR擴增試劑的配制 B dNTPs溶液 分別配制dATP dTTP dCTP dGTP終濃度為 mmol L的儲存液 各取 L混合 加 L TE緩沖液定容 配制成每種脫氧核糖核苷酸終濃度為 mmol L的工作液 高壓滅菌 min 保存 B SSR引物溶液 開蓋前瞬時離心 s 按照說明書加TE緩沖液 分別配制正向引物和反向引物終濃度為 mol L的儲存液 分別取 L正向引物和反向引物儲存液 加 LTE緩沖液配制成終濃度 mol L的 工作液 B 變性PAGE試劑的配制 B 質量分數(shù)為 的丙烯酰胺溶液 稱取 g丙烯酰胺和 g甲叉雙丙烯酰胺溶于 mL水中 充分攪拌溶解 加水定容至 mL 置于棕色瓶中 儲存 B 質量分數(shù)為 的變性PAGE膠溶液 稱取 g尿素置于 mL燒杯中 加入 mL TBE緩沖液和 mL質量分數(shù)為 的丙烯酰胺溶液 定容至 mL B 親和硅烷緩沖液 NY T 分別量取 mL無水乙醇和 L冰醋酸 加水定容至 mL B 親和硅烷工作液 分別量取 mL親和硅烷緩沖液和 L親和硅烷原液 混勻 B 剝離硅烷工作液 分別量取 mL二甲基二氯硅烷和 mL三氯甲烷 混勻 B 質量分數(shù)為 的APS溶液 稱取 gAPS溶于 mL水中 混勻 于 保存 不超過 天 B TBE緩沖液 稱取Tris g 硼酸 g 溶于 mL水中 加入 mLEDTA溶液 mol L pH 定 容至 mL B TBE緩沖液 量取 mL TBE緩沖液 加水定容至 mL 混勻 B 加樣緩沖液 分別稱取 g溴酚藍和 g二甲苯青 加入 mL去離子甲酰胺和 mLEDTA溶液 mol L pH 攪拌溶解 B 銀染溶液的配制 B 固定液 量取 mL冰醋酸 加水定容至 mL B 染色液 稱取 g硝酸銀 加水定容至 mL B 顯影液 稱取 g氫氧化鈉溶于 mL水中 用前加 mL甲醛 NY T 附 錄 C 規(guī)范性 引物及序列 引物及序列見表C 表C 引物及序列 引物編號引物名稱染色體定位正向引物序列 反向引物序列 ME TGGAATACCATCTTACACCTTTCATCCATAAACATTTCCCCGTT ME GGCCACGTGACCTTATGATTCCTTCATCATTTCCAAGGGA ME TTGGCTCCTCTTAGTGTCCTCATGTCAATGCCTTGTGAAGC ME ATGGGCTTTTGGTGATTGATTTCTTCCCACCAAACCTACG ME ACACACCTAATCTCCCTACCTTCAAAGCCAACCCATATCCCAT ME CCCTCAATTACAAGAAAAGCATTACTGGGTTTTGCCGATTT ME GCGCAAATCAAGGGATTTTAATCCAAGGGAAAATGGGAAC ME GGAGGACGAAAGACCAATGAAACCGCAAATACGAGACCTG ME GACAGTAATCACCTCATCAACGCTCCTCCTTAACTCTATAC ME CCCCAAGATTCGTATTAATCAGATTCTTGAAATGGTGGCG ME GCCTTTTGTGATGCTCCAATAATGACACTGCCCACATTCT ME CCACCAACATAACACACAACAGAGTCTCATTCCTCTCGACG ME GGTCGGTCCCCTATTCTCTTGTGCAAATGCAAGATCGAAG ME CATCTCGAACCTAAGAGCCGGCCCTCCCAAAAATTTCAGT ME ATGGTCTCCCCAACCTATCCGAACAATGCAAGAAAATGGGA ME GCGTTTCCAAACAAACATGAAAATGGCAGAGAGCGAGAAA ME CTCAAACAACGTCAGCTGGTACCCAGAAGTGCTTTTCCCT ME TGAACTGTGCAACCACCTGTAATTCCGTATTCAACTCTCC ME ATGATTGGAAGCCACCAAAGTTGAGCCCCAAAATAAATGG ME CGACCGCCATTAATCAAAACTCTCCTGCATAAACCCCAAG ME GGGAATGTAAATTGGATATGGCATTATTACCCATGTACGAG ME TGGTAGTAGAGATGATATACTCAATCTCCGGTTCCAACTC ME AAACAAACATGGAAATAGCTTTCAAGGTTTTTCAATGGAGGGGA ME CTCTCACACTGTTGGGAAGATGTGTATGGAGGGCTTTTCC NY T 附 錄 D 資料性 引物相關信息 引物相關信息見表D 表D 引物相關信息 引物編號引物名稱熒光標記等位變異范圍 bp 主要等位變異 bp 參照品種 ME FAM 卡拉其里甘 八一香梨 PMR ME HEX 白皮脆 安農(nóng) 號 哈莫尼 白蘭瓜 伯些克辛 光皮勝金白瓜 ME FAM 青皮白肉冬瓜 ME FAM 鐵皮 劈山 卡拉可口奇 金棒子 魯薄二號 ME HEX 景甜 號 黑眉毛密極甘 哈莫尼 酥皮菜瓜 ME TAMRA 卡拉可口奇 ME ROX 白蘭瓜 阿克可口奇 伯些克辛 ME TAMRA 光皮勝金白瓜 阿克可口奇 伯些克辛 白蘭瓜 ME HEX 酥皮菜瓜 安農(nóng) 號 哈莫尼 阿克可口奇 白蘭瓜 金棒子 ME HEX 安農(nóng) 號 哈莫尼 伯些克辛 白皮脆 NY T 表D 續(xù) 引物編號引物名稱熒光標記等位變異范圍 bp 主要等位變異 bp 參照品種 ME ROX 青皮白肉冬瓜 白皮脆 安農(nóng) 號 PMR 酥皮菜瓜 ME FAM 安農(nóng) 號 酥皮菜瓜 哈莫尼 卡拉其里甘 八一香梨 ME TAMAR 哈莫尼 魯薄二號 含笑 ME ROX 景甜 號 白蘭瓜 卡拉可口奇 ME HEX 魯薄二號 阿克可口奇 八一香梨 卡拉可口奇 白皮脆 ME TAMRA 黑眉毛密極甘 白皮脆 哈莫尼 光皮勝金白瓜 ME TAMRA 景甜 號 黑眉毛密極甘 鐵皮 金棒子 ME ROX 卡拉其里甘 哈莫尼 光皮勝金白瓜 白蘭瓜 ME FAM 青皮白肉冬瓜 八一香梨 白皮脆 魯薄二號 ME HEX 伯些克辛 光皮勝金白瓜 八一香梨 PMR 酥皮菜瓜 ME FAM 金棒子 光皮勝金白瓜 白蘭瓜 阿克可口奇 NY T 表D 續(xù) 引物編號引物名稱熒光標記等位變異范圍 bp 主要等位變異 bp 參照品種 ME FAM 卡拉可口奇 白蘭瓜 哈莫尼 ME FAM 哈莫尼 安農(nóng) 號 魯薄二號 含笑 黑眉毛密極甘 ME ROX 青皮白肉冬瓜 阿克可口奇 景甜 號 注 附錄D中采用的熒光標記僅為示例 采用其他類型熒光標記時 應使用參照品種校正數(shù)據(jù) 注 對于附錄D中未包括的等位變異 應按本文件方法 確定其大小和相應參照品種 注 附錄D中所列參照品種僅為示例 與參照品種具有相同等位變異的其他品種也可用作該等位變異的參照品種 注 同一名稱不同來源的參照品種 在某些位點上的等位變異可能不相同 使用前應確認其等位變異 NY T 附 錄 E 資料性 參照品種相關信息 參照品種相關信息見表E 表E 參照品種相關信息 編號品種名稱品種來源編號品種名稱品種來源 卡拉其里甘 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 黑眉毛密極甘 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 白皮脆 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 含笑 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 八一香梨 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 安農(nóng) 號 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 光皮勝金白瓜 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 哈莫尼 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 伯些克辛 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 PMR 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 白蘭瓜 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 酥皮菜瓜 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 金棒子 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 阿克可口奇 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 鐵皮 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 卡拉可口奇 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 魯薄二號 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 劈山 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 景甜 號 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 青皮白肉冬瓜 國家中亞特色作物種質 資源中期庫 烏魯木齊 NY T 附 錄 F 資料性 引物分組 引物分組見表F 表F 引物分組 組別FAM標記引物TAMRA標記引物ROX標記引物HEX標記引物 ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME 注 括號內是各引物的等位變異范圍 注 同組別內引物的擴增產(chǎn)物可以多重電泳 注 可結合引物等位變異范圍 更換熒光標記 調整分組