<p>ICS 65.020.01 B 61 DB21 遼寧省地方標準 DB 21/T 24332015 樹莓組培育苗技術(shù)規(guī)程 Technical regulation on tissue culture of raspberry 2015 03 01發(fā)布 2015 05 01實施 遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 &nbsp; 發(fā)布 DB21/T 24332015 I 目 &nbsp;次 前言. 1 &nbsp;范圍.1 2 &nbsp;規(guī)范性引用文件.1 3 &nbsp;術(shù)語與定義.1 4 &nbsp;材料的選擇.2 4.1 &nbsp;選擇的部位.2 4.2 &nbsp;取材季節(jié)的選擇.2 4.3 &nbsp;器官發(fā)育年齡的選擇.2 4.4 &nbsp;取材的大小.2 5 &nbsp;消毒滅菌.2 5.1 &nbsp;外植體消毒滅菌.2 5.2 &nbsp;培養(yǎng)基高壓滅菌.2 5.3 &nbsp;接種器具滅菌.2 6 &nbsp;初代培養(yǎng).3 6.1 &nbsp;培養(yǎng)基配制.3 6.2 &nbsp;培養(yǎng)環(huán)境條件.3 6.3 &nbsp;培養(yǎng)方法.3 7 &nbsp;繼代培養(yǎng).3 7.1 &nbsp;培養(yǎng)基配制.3 7.2 &nbsp;培養(yǎng)環(huán)境條件.3 7.3 &nbsp;培養(yǎng)方法.3 7.4 &nbsp;增殖速率的計算.3 7.3.1 &nbsp;按理論計算.3 7.3.2 &nbsp;實際計算.3 8 &nbsp;生根培養(yǎng).4 8.1 &nbsp;培養(yǎng)基配制.4 8.2 &nbsp;培養(yǎng)室環(huán)境條件.4 8.3 &nbsp;培養(yǎng)方法.4 8.4 &nbsp;根的生長.4 9 &nbsp;組培苗的移栽.4 9.1 &nbsp;移苗的季節(jié).4 9.2 &nbsp;移苗的方法.4 9.2.1 &nbsp;清除培養(yǎng)基.4 9.2.2 &nbsp;苗床準備.4 9.2.3 &nbsp;移栽后的管理.4 9.2.3.1 &nbsp;移植后10d之內(nèi).5 9.2.3.2 &nbsp;移栽后10d19d.5 DB21/T 24332015 II 9.2.3.3 &nbsp;生長20d30d.5 10 &nbsp;技術(shù)檔案.5 附錄A（規(guī)范性附錄） 樹莓組培苗木質(zhì)量分級.6 附錄B（資料性附錄） 樹莓組培苗移栽病蟲害防治藥劑用量. 7 附錄C（資料性附錄） 組培室的構(gòu)成及基本設(shè)備. 8 DB21/T 24332015 III 前 &nbsp;言 本標準依據(jù)GB/T 1.1-2009的規(guī)則起草。 本標準的附錄A為規(guī)范性附錄，附錄B、C為資料性附錄。 本標準由遼寧省林業(yè)廳提出并歸口。 本標準主要起草單位：阜新市林業(yè)種苗管理站、阜蒙縣林業(yè)科技示范中心。 本標準主要起草人：張秀艷、齊金海、丁立娜、曹 &nbsp;穎、武春艷、李 &nbsp;錢、于 &nbsp;丹、楊樹勇、丁瑞軍、田明芳、趙方明、張志會、劉金城、宋春穎、付 &nbsp;玉、李 &nbsp;暢、霍 &nbsp;旺、柳士東、王國興、舒紅、胡玉珠、楊志勇、李亞輝、陳寶財、張 &nbsp;瑩、龍忠勤、姬 &nbsp;東、扈延伍、董芷維、齊金艷、李 &nbsp;寧、賈斌英、柴旭光、楊愛風。DB21/T 24332015 1 樹莓組培育苗技術(shù)規(guī)程 1 范圍 本標準規(guī)定了樹莓（Rubus corchorifolius L.f.）組織培養(yǎng)育苗過程中材料的選擇、消毒滅菌、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、組培苗的移栽和技術(shù)檔案等。 本標準適用于樹莓在省內(nèi)的工廠化組織培養(yǎng)育苗生產(chǎn)作業(yè)。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6001 育苗技術(shù)規(guī)程 LY/T 1770 桉樹無性系組培快繁技術(shù)規(guī)程 LY/T 1882 林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程 LY/T 2041 黃藤和單葉省藤組培快繁技術(shù)規(guī)程 NY/T 2253 菠蘿組培苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程 DB31/T 349 非洲菊組培苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范 DB34/T 1806 藍莓組培育苗技術(shù)規(guī)程 3 術(shù)語與定義 下列術(shù)語和定義適用于本標準。 3.1 樹莓 Rubus corchorifolius L.f. &nbsp;薔薇科懸鉤子屬的多年生落葉性灌木。 3.2 組培苗 Tissue cultured seeding 根據(jù)植物細胞具有全能性的理論，利用植物體離體的器官（如根、莖、葉、莖尖、花、果實等）組織（如形成層、表皮、皮層、髓部細胞、胚乳等）或細胞（如大孢子、小孢子、體細胞等）以及原生質(zhì)體，在無菌和適宜的人工培養(yǎng)基及光照、溫度等人工條件下，誘導出愈傷組織，不定芽、不定根，最后形成完整的植株，這個植株叫組培苗。 3.3 外植體 Explants 植物組織培養(yǎng)所利用植物體離體的器官（如根、莖、葉、莖尖、花、果實等）組織（如形成層、表DB21/T 24332015 2 皮、皮層、髓部細胞、胚乳等）或細胞（如大孢子、小孢子、體細胞等）以及原生質(zhì)體，稱為外植體。 3.4 初代培養(yǎng) Primary culture 又稱誘導芽培養(yǎng)，外植體接種到培養(yǎng)基上以后，一般先放在培養(yǎng)室進行弱光培養(yǎng)，首先要得到無菌的材料，然后逐漸促進材料的分化和生長，這是試管苗的第一代，稱初代培養(yǎng)。 3.5 繼代培養(yǎng) Subculture 又稱分化培養(yǎng)，初代培養(yǎng)以后通過不斷調(diào)試培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)接試管苗，使試管苗數(shù)量很快擴大，這種不斷轉(zhuǎn)苗增殖的過程稱為繼代培養(yǎng)。 3.6 生根培養(yǎng) Rooting culture 在培養(yǎng)基上，利用從莖表皮細胞分裂形成突起的根原基，進一步從表皮培養(yǎng)形成根的過程。 4 材料的選擇 4.1 選擇的部位 應(yīng)選擇樹莓的莖尖、莖段。 4.2 取材季節(jié)的選擇 在春季芽開始萌發(fā)或正萌發(fā)生長時取材。 4.3 器官發(fā)育年齡的選擇 以當年枝的嫩芽、嫩枝段做材料，分生能力強，形態(tài)建成快。 4.4 取材的大小 莖尖、莖段長0.5cm1.0cm，莖段每段留芽1個2個。 5 消毒滅菌 5.1 外植體消毒滅菌 用流水沖洗2h以上，拿到超凈工作臺上，用75%酒精沖洗30s40s，無菌水沖洗3次，再用0.1%的升汞處理3min4min，無菌水沖洗5次。 5.2 培養(yǎng)基高壓滅菌 用高壓滅菌鍋在壓力1.1MPa，溫度為121下，滅菌20min。 5.3 接種器具滅菌 DB21/T 24332015 3 剪子、鑷子、500ml燒杯（處理外植體使用）用牛皮紙包裝，做到無漏洞，捆綁好，用高壓滅菌鍋在壓力1.1MPa，溫度為121下，滅菌20min。 6 初代培養(yǎng) 6.1 培養(yǎng)基配制 初代培養(yǎng)所用培養(yǎng)基：MS+BA1.0mg/L+GA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L+瓊脂4.8g/L。 6.2 培養(yǎng)環(huán)境條件 在無菌的環(huán)境下，培養(yǎng)室溫度2325，濕度20%30%，光照強度2200lx2500lx，整齊擺放在培養(yǎng)架（五層，每層間隔45cm,透光）上，培養(yǎng)室技術(shù)要求參照附錄C。 6.3 培養(yǎng)方法 在植物生長季節(jié)取樹莓莖，將葉片去掉，并將莖剪成0.5cm1.0cm帶芽莖段，休眠芽預先剝除鱗片，采用75%酒精消毒30s40s，0.1%升汞水溶液消毒處理3min4min，再用無菌水洗滌5次。然后在超凈工作臺上接種在初代培養(yǎng)基上。 7 繼代培養(yǎng) 7.1 培養(yǎng)基配制 分化培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為MS+BA0.5mg/L+GA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L+瓊脂4.8g/L。 7.2 培養(yǎng)環(huán)境條件 在無菌的環(huán)境下，培養(yǎng)室溫度2325，濕度20%30%，光照強度2200lx2500lx，整齊擺放在培養(yǎng)架（五層，每層間隔45cm,透光）上，培養(yǎng)室技術(shù)要求參照附錄C。 7.3 培養(yǎng)方法 外植體長滿培養(yǎng)瓶，就需轉(zhuǎn)入到新的增殖培養(yǎng)基中，在無菌操凈工作臺上，用接種剪子和鑷子剪段1.0cm1.2cm插入培養(yǎng)瓶內(nèi)，三段為一簇，每瓶6簇。長滿瓶后重復操作，這樣一代一代地繼續(xù)下去，就形成了樹莓組織苗的無性繁殖體系。樹莓擴繁方法有分株繁殖方式。 7.4 增殖速率的計算 7.4.1按理論計算 1年內(nèi)能繁殖試管苗的數(shù)量,可用式（1）計算 nmxy = （1） 式中：y為年繁殖苗數(shù)； m為無菌母株苗數(shù)； x為每個培養(yǎng)周期增殖的倍數(shù)； n為全年可增殖的周期次數(shù)。 7.4.2實際計算 DB21/T 24332015 4 從接種開始，由1個芽經(jīng)過1年繁殖后，應(yīng)記錄轉(zhuǎn)接次數(shù)，統(tǒng)計實際得到的苗數(shù)，然后可以計算出實際繁殖周期和每個周期試管苗增殖的倍數(shù)。實際繁殖數(shù)往往低于理論計算數(shù)。 8 生根培養(yǎng) 8.1 培養(yǎng)基配制 生根培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為1/2MS+BA0.3mg/L+IAA0.2mg/L+糖15g/L+瓊脂4.8g/L。 8.2 培養(yǎng)室環(huán)境條件 培養(yǎng)室溫度1825，濕度20%30%，光照強度2200lx2500lx，培養(yǎng)室技術(shù)要求參照附錄C。 8.3 培養(yǎng)方法 在生根培養(yǎng)基中誘導生根。樹莓采用培養(yǎng)基瓶內(nèi)一步生根法生根。將生長健壯的莖尖接入生根培養(yǎng)基中誘導生。在無菌操凈工作臺上，用接種剪子和鑷子剪段1.0cm1.2cm插入培養(yǎng)瓶內(nèi)，每瓶插10株12株。 8.4 根的生長 根細長，通常有1條5條根，顏色白色。正在生長的白色根吸收力強，移苗容易成活。 9 組培苗的移栽 9.1 移苗的季節(jié) 組培苗的生長不受季節(jié)的影響，如果溫室條件很好，夏季能降溫，達到四季如春，則移苗也沒有季節(jié)性。但組培苗移入溫室的時候以冬季和早春為最好，經(jīng)過冬季和早春的移苗和生長，到春暖花開的季節(jié)移苗到大田，再經(jīng)過田間較長時間的生長而成為理想的壯苗。 9.2 移苗的方法 9.2.1清除培養(yǎng)基 組培苗從瓶中取出，放在盛有20左右的水中，將附著在根上的培養(yǎng)基清洗掉，洗時注意不能傷根，對生根過長的根要適當修剪。再放入另一盆溫水中清洗1次，將培養(yǎng)基徹底洗掉，以免殘留的培養(yǎng)基引起污染和霉爛。最后蘸1000倍2000倍海藻素類（促進生根）溶液后移栽。 9.2.2苗床準備 在溫室大棚內(nèi)準備好移苗床。苗床要鋪上裝好基質(zhì)的穴盤?；|(zhì)要求排水性和透氣性良好，同時也要有一定的保水性。采用草炭和沙子混合，按照比例為1:1。對基質(zhì)進行消毒，用500倍800倍敵克松溶液噴灑基質(zhì)。 70孔穴盤，每個孔種3棵，均勻分布在穴孔內(nèi)，先挖一小穴，舒展根系，深度以葉片不接觸基質(zhì)、葉心不能埋入土內(nèi)為宜，種植后輕輕鎮(zhèn)壓。種好后用細噴霧器噴水，沖掉葉面上可能沾著的基質(zhì)，并使基質(zhì)和根系密切接觸。 9.2.3移栽后的管理</p>