2960 2024年第65卷第12期 收稿日期 2023 11 18 作者簡介 余冬冬 1991 女 浙江溫州人 農(nóng)民技師 從事蔬菜病蟲害防治工作 E mail 969889164 qq com 通信作者 王漢榮 1966 男 浙江杭州人 研究員 主要從事經(jīng)濟(jì)作物病害診斷及綠色防控技術(shù)研發(fā) E mail ZJNKYJJBH hotmail com 文獻(xiàn)著錄格式 余冬冬 沈年橋 曾祥亮 等 溫州龍港市設(shè)施栽培番茄病毒病種類分析 J 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2024 65 12 2960 2963 DOI 10 16178 j issn 0528 9017 20231058 溫州龍港市設(shè)施栽培番茄病毒病種類分析 余冬冬1 沈年橋2 曾祥亮1 王漢榮3 1 龍港市信實(shí)莊稼醫(yī)院 浙江 溫州 325805 2 蒼南縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站 浙江 溫州 325800 3 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)與微生物研究所 浙江 杭州 310021 摘 要 近年來 隨著溫州市設(shè)施番茄產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展 番茄病毒病已成為限制番茄產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要病害之 一 本試驗(yàn)于2018 2023年從蒼南縣和龍港市采集疑似番茄病毒病的樣品 并通過特異性引物進(jìn)行分子生物學(xué) 檢測 以分析番茄病毒病的種類 結(jié)果表明 2018 2023年 蒼南縣和龍港市番茄病毒病普遍發(fā)生 檢出率平 均值均超過40 共檢測出6種病毒 以黃瓜花葉病毒的檢出率最高 試驗(yàn)結(jié)果可以為溫州市番茄病毒病的防 治提供參考依據(jù) 關(guān)鍵詞 番茄 病毒病 分子生物學(xué) 中圖分類號 S641 2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 0528 9017 2024 12 2960 04 Analysis of virus disease species in facility cultivated tomatoes in Longgang City W enzhou YU Dongdong1 SHEN Nianqiao2 ZENG Xiangliang1 WANG Hanrong3 1 Longgang Xinshi Crop Hospital Wenzhou 325805 Zhejiang 2 Cangnan County Agricultural Technology Extension Station Wenzhou 325800 Zhejiang 3 Institute of Plant Protection and Microbiology Zhejiang Academy of Agricultural Sciences Hangzhou 310021 Zhejiang Abstract In recent years with the rapid development of the tomato industry in Wenzhou tomato virus diseases have become a significant constraint on the industry growth From 2018 to 2023 samples suspected of tomato virus diseases were collected from Cangnan County and Longgang City Molecular biological tests using specific primers were conducted to analyze the species of tomato virus diseases The results showed that from 2018 to 2023 tomato virus diseases were widespread in Cangnan County and Longgang City with average detection rates exceeding 40 A total of six viruses were identified with cucumber mosaic virus being the most frequently detected The findings provide a reference for the prevention and control of tomato virus diseases in Wenzhou Keywords tomato virus diseases molecular biological tests 番茄 Solanum lycopersicum 是全世界栽培最 為普遍的蔬菜之一 1 2021年我國番茄種植面積 約為111萬hm2 產(chǎn)量為6 690萬t 2 近年來 浙 江省的設(shè)施番茄產(chǎn)業(yè)飛速發(fā)展 進(jìn)入21世紀(jì)后 浙江省的番茄生產(chǎn)區(qū)域發(fā)生了變化 由以前的浙 北 浙中等地 逐漸向東南沿海地區(qū)擴(kuò)展 3 尤 其以溫州地區(qū)的設(shè)施番茄產(chǎn)業(yè)表現(xiàn)最為突出 溫州 市的設(shè)施番茄主要集中在龍港市 蒼南縣 平陽縣 和瑞安市等區(qū)域 這些區(qū)域已經(jīng)成為了我國最大的 秋冬季設(shè)施栽培番茄生產(chǎn)地 設(shè)施番茄的栽培面積 為2 400 3 467 hm2 據(jù)不完全統(tǒng)計 2021年 這 些區(qū)域的番茄種植面積達(dá)5 133 hm2 年產(chǎn)番茄 25 72萬t 年產(chǎn)值達(dá)15億元 在國內(nèi)番茄的生產(chǎn) 供應(yīng)中占有重要地位 4 隨著設(shè)施栽培番茄的快 速發(fā)展 設(shè)施番茄上病蟲害的發(fā)生也日益嚴(yán)重 番 茄黃化曲葉病毒病 tomato yellow leaf curl virus 余冬冬 等 溫州龍港市設(shè)施栽培番茄病毒病種類分析2961 TYLCV 和臺灣番茄曲葉病毒病 tomato leaf curl Tanwan virus ToLCTWV 等對龍港市和蒼南縣的 設(shè)施番茄生產(chǎn)造成了極其嚴(yán)重的影響 5 6 為了有 效地監(jiān)測 預(yù)警和防控設(shè)施番茄病蟲害的發(fā)生 促 進(jìn)番茄產(chǎn)業(yè)的持續(xù)發(fā)展 2018 2023年 作者從 溫州龍港市 蒼南縣等地的設(shè)施番茄采集了疑似病 毒病的病樣 并進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定 具體結(jié)果 總結(jié)如下 1 材料與方法 1 1 病樣采集 疑似發(fā)病的番茄葉片和果實(shí)的采樣時間在 2018 2023年 在溫州龍港 蒼南 平陽 瑞安 等地進(jìn)行采集 病樣癥狀主要表現(xiàn)為花葉 皺縮 畸形 黃化等 1 2 總RNA提取 RT PCR 材料 本試驗(yàn)所用的植物RNA提取試劑盒和 FastKing一步法反轉(zhuǎn)錄熒光定量試劑盒 SYBR Green 均購自天根生化科技有限公司 方法 采用Trizol法 參照試劑盒說明書 提 取番茄果實(shí)表皮總RNA 以總RNA為模版 參照 FastKing cDNA第一鏈合成試劑盒說明書 進(jìn)行反 轉(zhuǎn)錄 第一步gDNA反應(yīng)去除體系 10 L RNA 模板1 5 L 5 gDNA Buffer 2 L RNase Free H2O 6 5 L 42 變性 3 min 立即置于冰浴中 第二步反轉(zhuǎn)錄體系 10 King RT Buffer 2 L FastKing RT Enzyme Mix 1 L FQ RT Primer Mix 2 L RNase Free H2O 5 L 42 孵育15 min 95 變性 3 min 立即置于冰浴中 備用 采用8對特異性檢測引物 7 9 進(jìn)行PCR擴(kuò)增 表1 分別檢測黃瓜花葉病毒 番茄黃化曲葉病 毒 番茄花葉病毒 番茄褪綠病毒 番茄斑萎病 毒 番茄褐色皺紋果病毒和番茄不孕病毒 PCR 反應(yīng)體系 取上述合成的cDNA模板2 L 加入 10 Taq Buffer 5 L dNTP Mixture 4 L DNA Polymerase 1 L ddH2O 38 L 擴(kuò)增條件 預(yù)變 性94 3 min 94 30 s X 30 s 溫度見 表1 72 1 min 共35次循環(huán) 最后 72 10 min 取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在1 瓊脂糖凝膠上進(jìn)行 電泳 檢測并拍照 表1 設(shè)施番茄病毒檢測引物 Table 1 Facility cultivated tomato virus detection primers 檢測病毒引物名稱序列片段長度 bp退火溫度 黃瓜花葉病毒 CMV CMVCPuF TCTCATGGATGCTTCTCCGCG 760 55 CMVCPuR CCGTAAGCTGGATGGACAACC 番茄黃化曲葉病毒 TYLCV PA TAATATTACCKGWKGVCCSC 550 52 PB TGGACYTTRCAWGGBCCTTCACA 番茄花葉病毒 ToMV ToMV F AAAGGTGGTTTTGGTGGATGGC 1 500 50 ToMV R TGCCTTGTAAGCTCACTGAAAAGAGGAC 番茄斑萎病毒 TSWV ToCVdR TGTCGAAAGTACCGCCACC 861 52 TSWVdF TCACTGTAATGTTCCATAGCAA 番茄褐色皺果病毒 TOBRFV TSWVdR AGAGCAATYGTGTCAATTTTATTC 680 57 ToBRFV F 5506 GTCCCGATGTCTGTAAGGCTTGC 番茄不孕病毒 TAV ToBRFV R 6186 GCAGGTGCAGAGGACCATTGTAA 657 57 TAVdF ATGGCCCAAAACGGTACGG 煙草花葉病毒 TMV TAVdR TCACACCGGGAGCGTTGAAG 600 46 TMVdF GATTCGTTTTAAATATGTCTTAC 蠶豆萎蔫病毒2號 BBWV2 TMVdR CTTCGATTTAAGTGGAGGGA 490 57 BBWV2dF AGRTATATGCTTGGGCAAGCGCATG 2 結(jié)果與分析 2 1 番茄病毒病發(fā)病癥狀 如圖1所示 番茄感染病毒病后會出現(xiàn)葉片卷 縮 變黃 變脆 花葉 蕨葉和植株矮化等癥狀 發(fā)病果實(shí)表現(xiàn)為紅白或黃白相間 嚴(yán)重者果實(shí) 僵縮 2 2 蒼南縣和龍港市的番茄病毒病檢出率 2018 2023年 本研究調(diào)查了蒼南縣和龍港 市番茄病毒病種類鑒定和發(fā)生的情況 共收集番茄 疑似病毒病樣品652份 其中 2018 2019年番 茄葉片疑似病毒病樣品161份 番茄果實(shí)疑似病毒 病樣品135份 2020 2023年番茄葉片疑似病毒 病樣品186份 番茄果實(shí)疑似病毒病樣品170份 2962 2024年第65卷第12期 圖1 番茄病毒病癥狀 Fig 1 Symptoms of tomato virus disease 采用特異性引物對樣品進(jìn)行帶病毒率檢測 檢測結(jié) 果表明 2018 2023年的平均值 蒼南縣和龍港 市的番茄病毒病的檢出率均超過40 番茄病毒 病普遍發(fā)生且發(fā)病率較高 表2 3 2020 2023 年蒼南縣橋墩鎮(zhèn) 沿浦鎮(zhèn)和金鄉(xiāng)鎮(zhèn)的番茄葉片和果 實(shí)病毒病檢出率均超過60 表2 2018 2019年蒼南縣和龍港市番茄 病毒病檢出率 Table 2 Detection rate of tomato virus disease in Cangnan Country and Longgang City in 2018 2019 鄉(xiāng)鎮(zhèn)葉果檢出數(shù)總數(shù)檢出率 檢出數(shù)總數(shù)檢出率 蒼南靈溪5 11 45 4 3 5 60 0 蒼南宜山4 13 30 7 4 10 40 0 蒼南橋墩9 17 52 9 3 11 27 2 蒼南沿浦6 19 31 5 4 14 28 5 蒼南藻溪5 15 33 3 6 13 46 1 蒼南望里6 14 42 8 5 12 41 6 蒼南錢庫10 16 62 5 7 11 63 6 蒼南金鄉(xiāng)11 11 100 0 4 8 50 0 蒼南馬站5 10 50 0 9 14 64 2 蒼南霞關(guān)6 12 50 0 8 13 61 5 龍港11 23 47 8 10 24 41 6 2 3 蒼南縣和龍港市番茄病毒病的種類和分布 共檢測652份樣品 6種病毒 Tobamovirus屬的 TMV ToMV Begomovirus屬的TYLCV Tospovirus屬 的TSWV 以及CMV和BBWV2 存在多種病毒 復(fù)合侵染的現(xiàn)象 在這些為害番茄的病毒中 CMV的檢出率最高 然后是BBWV2 TYLCV TMV TAV和ToBRFV未檢出 圖2 3 結(jié)論與討論 近年來 隨著蔬菜種植面積的擴(kuò)大 種植模式 及氣候的變化 番茄病毒病的發(fā)生越來越嚴(yán)重 對 表3 2020 2023年蒼南縣和龍港市番茄 病毒病檢出率 Table 3 Detection rate of tomato virus disease in Cangnan Country and Longgang City in 2020 2023 鄉(xiāng)鎮(zhèn)葉果檢出數(shù)總數(shù)檢出率 檢出數(shù)總數(shù)檢出率 蒼南靈溪11 20 55 0 2 12 16 6 蒼南宜山13 23 56 5 6 11 54 5 蒼南橋墩9 14 64 2 8 13 61 5 蒼南沿浦10 11 90 9 10 15 66 6 蒼南藻溪13 16 81 2 6 19 31 5 蒼南望里10 18 55 5 5 22 22 7 蒼南錢庫11 16 68 7 6 24 25 0 蒼南金鄉(xiāng)12 15 80 0 7 11 63 6 蒼南馬站6 11 54 5 6 10 60 0 蒼南霞關(guān)3 19 15 8 5 9 55 5 龍港11 23 47 8 10 24 41 6 圖2 蒼南縣和龍港市的設(shè)施番茄上的 病毒種類及其檢出率 Fig 2 Virus species and detection rate of facility cultivated tomato in Cangnan County and Longgang City 我國的蔬菜產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失 8 Xu 等 10 對采自我國的170個番茄樣本進(jìn)行了小RNA 余冬冬 等 溫州龍港市設(shè)施栽培番茄病毒病種類分析2963 測序 鑒定出22種主要病毒 其中 危害新疆番 茄的病毒主要有黃瓜花葉病毒 CMV 番茄花葉 病毒 ToMV 而且以二者復(fù)合侵染為主 11 劉 勇等 8 對全國的番茄病毒病樣品進(jìn)行了檢測 共 檢測出25種病毒 且存在多種病毒復(fù)合侵染的現(xiàn) 象 2019年 新型病毒 番茄褐色皺紋果病毒 tomato brown rugose fruit virus ToBRFV 嚴(yán)重危 害番茄果實(shí) 12 在蔬菜產(chǎn)業(yè)上 CMV已經(jīng)超越 TMV成為第一大優(yōu)勢病毒 在全國范圍內(nèi)均可被 檢測出 8 本研究發(fā)現(xiàn) 蒼南縣和龍港市的設(shè)施 番茄病毒病發(fā)生普遍 共檢測出6種病毒 其中 CMV為優(yōu)勢病毒 當(dāng)前我國蔬菜病毒病的發(fā)生區(qū) 域由局部地區(qū)逐漸向全國擴(kuò)張 其中 通過昆蟲或 種子傳播的病毒 防控難度較大 8 作物品種單 一化 規(guī)模化種植以及介體昆蟲的高效傳播等有助 于病毒的復(fù)合侵染 在生產(chǎn)實(shí)踐中 可進(jìn)行多樣化 品種種植 并在苗期做好防蟲工作 8 參考文獻(xiàn) 1 辛竹琳 崔彥娟 楊小薇 等 全球蔬菜產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及中國蔬 菜育種發(fā)展路徑研究進(jìn)展 J 分子植物育種 2022 20 9 3122 3132 2 張飛雪 周利利 周肖瑜 等 我國番茄秸稈廢棄物資源化 利用研究進(jìn)展 J 蔬菜 2023 2 28 32 3 楊新琴 杜葉紅 林輝 等 浙江省番茄產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展對 策的探討 J 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018 59 10 1739 1742 4 黃歆賢 趙佩歐 吳穎 等 溫州市番茄產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展對 策探討 J 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021 62 8 1539 1541 1544 5 張純胄 溫州發(fā)生一種新的嚴(yán)重危害蔬菜的病害 臺灣番 茄曲葉病毒病 J 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2007 48 3 351 6 李寶聚 周艷芳 許方程 等 李寶聚博士診病手記 二十 四 浙江溫州蔬菜病害調(diào)查 J 中國蔬菜 2010 9 26 28 7 王少立 譚瑋萍 楊園園 等 山東省辣椒主要病毒種類的 分子檢測與鑒定 J 中國農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017 50 14 2728 2738 8 劉勇 李凡 李月月 等 侵染我國主要蔬菜作物的病毒種 類 分布與發(fā)生趨勢 J 中國農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019 52 2 239 261 9 李獻(xiàn)鋒 劉明航 魏霜 等 番茄褐色皺果病毒RT PCR檢 測方法的建立與評價 J 病毒學(xué)報 2022 38 4 905 914 10 XU C X SUN X P TAYLOR A et al Diversity distribution and evolution of tomato viruses in China uncovered by small RNA sequencing J Journal of Virology 2017 91 11 e00173 17 11 楊海燕 崔百明 張強(qiáng) 等 新疆番茄病毒病檢測及南方番 茄病毒全基因組序列測定與傳播特性分析 J 植物保護(hù) 學(xué)報 2017 44 2 253 259 12 YAN Z Y MA H Y HAN S L et al First report of tomato brown rugose fruit virus infecting tomato in China J Plant Disease 2019 103 11 2973 責(zé)任編輯 杜琳