現(xiàn) 代 農(nóng) 業(yè) 科 技 2 0 2 5 年 第 3 期 植 物 保 護(hù) 植 物 營 養(yǎng) 海 南 地 區(qū) 櫻 桃 番 茄 上 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 病 鑒 定 與 分 析 嚴(yán) 婉 榮 吉 訓(xùn) 聰 王 寶 譚 詩 夢 魏 瑩 趙 志 祥 海 南 省 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 植 物 保 護(hù) 研 究 所 海 南 省 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 農(nóng) 產(chǎn) 品 質(zhì) 量 安 全 與 標(biāo) 準(zhǔn) 研 究 中 心 海 南 省 植 物 病 蟲 害 防 控 重 點(diǎn) 實(shí) 驗(yàn) 室 農(nóng) 業(yè) 農(nóng) 村 部 海 口 作 物 有 害 生 物 科 學(xué) 觀 測 實(shí) 驗(yàn) 站 海 南 海 口 5 7 1 1 0 0 摘 要 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 病 嚴(yán) 重 威 脅 海 南 省 櫻 桃 番 茄 的 生 產(chǎn) 為 了 明 確 該 病 在 海 南 省 不 同 種 植 區(qū) 的 感 染 率 和 危 害 程 度 采 集 了 6 個(gè) 市 縣 的 6 5 個(gè) 櫻 桃 番 茄 樣 本 通 過 小 R N A 深 度 測 序 共 獲 得 1 5 條 與 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 T Y L C V 相 關(guān) 的 序 列 明 確 了 每 個(gè) 市 縣 T Y L C V 及 其 分 離 物 在 所 有 病 毒 中 的 比 例 統(tǒng) 計(jì) 了 不 同 分 離 物 在 不 同 地 區(qū) 出 現(xiàn) 的 頻 次 結(jié) 果 表 明 昌 江 縣 T Y L C V 及 其 分 離 物 占 總 病 毒 數(shù) 量 的 4 9 4 4 有 4 個(gè) 分 離 物 在 6 個(gè) 地 區(qū) 均 檢 測 到 通 過 P C R 驗(yàn) 證 所 有 地 區(qū) 均 檢 測 到 T Y L C V 陵 水 的 檢 出 率 高 達(dá) 到 1 0 0 0 0 對 3 個(gè) 分 離 物 進(jìn) 行 了 測 序 比 對 分 析 發(fā) 現(xiàn) 海 南 省 分 離 物 多 且 復(fù) 雜 從 地 理 關(guān) 系 上 很 難 確 定 其 來 源 及 所 屬 關(guān) 系 關(guān) 鍵 詞 櫻 桃 番 茄 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 小 R N A 深 度 測 序 P C R 驗(yàn) 證 檢 出 率 海 南 地 區(qū) D O I 1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 0 0 7 5 7 3 9 2 0 2 5 0 3 0 1 9 開 放 科 學(xué) 資 源 服 務(wù) 標(biāo) 識 碼 O S I D 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 t o m a t o y e l l o w l e a f c u r l v i r u s T Y L C V 屬 于 雙 生 病 毒 科 G e m i n i v i r i d a e 菜 豆 金 色 花 葉 病 毒 屬 B e g o m o v i r u s 最 早 于 2 0 世 紀(jì) 5 0 年 代 后 期 在 阿 拉 伯 半 島 發(fā) 現(xiàn) 隨 后 在 世 界 范 圍 內(nèi) 大 面 積 暴 發(fā) 1 文 獻(xiàn) 檢 索 發(fā) 現(xiàn) 該 病 毒 主 要 集 中 在 1 9 9 7 2 0 0 7 年 開 始 出 現(xiàn) 侵 染 番 茄 的 報(bào) 道 我 國 于 2 0 0 6 年 在 上 海 首 次 檢 測 到 T Y L C V 2 隨 后 該 病 毒 在 全 國 范 圍 大 面 積 流 行 T Y L C V 是 現(xiàn) 階 段 番 茄 生 產(chǎn) 上 最 具 毀 滅 性 的 病 毒 3 2 0 1 9 年 湯 亞 飛 等 4 首 次 在 海 南 櫻 桃 番 茄 上 檢 測 到 了 T Y L C V 目 前 海 南 櫻 桃 番 茄 主 要 種 植 區(qū) 均 檢 測 到 該 病 毒 T Y L C V 是 一 種 單 鏈 閉 合 環(huán) 狀 D N A s i n g e l s t r a n d e d D N A s s D N A 病 毒 在 自 然 條 件 下 只 能 由 煙 粉 虱 以 持 久 方 式 傳 播 番 茄 是 T Y L C V 的 主 要 宿 主 研 究 表 明 T Y L C V 也 可 侵 染 蠶 豆 矮 牽 牛 和 桔 梗 5 該 病 毒 可 引 起 番 茄 葉 緣 黃 化 葉 片 皺 縮 卷 曲 生 長 緩 慢 節(jié) 間 變 短 早 期 染 病 影 響 開 花 結(jié) 果 后 期 染 病 影 響 產(chǎn) 量 和 品 質(zhì) 6 T Y L C V 與 番 茄 褪 綠 病 毒 t o m a t o c h l o r o s i s v i r u s T o C V 復(fù) 合 侵 染 非 常 普 遍 兩 者 具 有 協(xié) 同 作 用 復(fù) 合 侵 染 時(shí) 會(huì) 導(dǎo) 致 病 害 指 數(shù) 升 高 發(fā) 生 程 度 加 重 3 5 7 在 T Y L C V 的 侵 染 與 擴(kuò) 散 中 研 究 者 也 分 離 鑒 定 了 不 同 地 區(qū) 的 分 離 物 國 內(nèi) 分 離 物 親 緣 關(guān) 系 較 近 且 與 伊 朗 阿 巴 代 及 阿 曼 T o m 4 8 分 離 物 親 緣 關(guān) 系 較 遠(yuǎn) 8 9 本 文 利 用 小 R N A 深 度 測 序 技 術(shù) 和 P C R 技 術(shù) 對 海 南 地 區(qū) 櫻 桃 番 茄 上 T Y L C V 進(jìn) 行 鑒 定 與 分 析 明 確 該 病 毒 在 海 南 地 區(qū) 的 侵 染 和 危 害 程 度 1 材 料 與 方 法 1 1 病 樣 采 集 與 保 存 2 0 2 1 2 0 2 3 年 在 陵 水 縣 定 安 縣 昌 江 縣 澄 邁 縣 文 昌 市 和 瓊 海 市 采 集 櫻 桃 番 茄 病 毒 病 病 樣 及 正 常 葉 片 采 集 前 用 7 5 乙 醇 噴 灑 清 洗 葉 片 用 無 菌 剪 刀 直 接 將 葉 片 剪 至 無 R N A s e 的 凍 存 管 內(nèi) 做 好 標(biāo) 記 表 1 迅 速 置 于 干 冰 內(nèi) 暫 存 置 于 8 0 冰 箱 內(nèi) 待 用 1 2 櫻 桃 番 茄 樣 本 小 R N A 深 度 測 序 對 采 集 的 葉 片 進(jìn) 行 小 R N A 深 度 測 序 根 據(jù) 采 集 的 樣 本 對 相 同 地 區(qū) 樣 本 進(jìn) 行 混 樣 設(shè) 置 未 表 現(xiàn) 癥 狀 樣 本 作 為 對 照 組 3 次 重 復(fù) 提 取 樣 本 總 R N A 瓊 脂 糖 凝 膠 電 泳 分 析 R N A 降 解 程 度 以 及 是 否 有 污 染 N a n o d r o p 檢 測 R N A 樣 本 的 純 度 Q u b i t 2 0 精 確 定 量 R N A 樣 本 的 濃 度 A g i l e n t 2 1 0 0 生 物 分 析 器 精 確 檢 測 R N A 樣 本 的 完 整 性 樣 品 檢 測 合 格 后 使 用 S m a l l R N A S a m p l e P r e p a r a t i o n K i t s I l l u m i n a 公 司 構(gòu) 建 文 庫 使 用 A g i l e n t 2 1 0 0 對 文 庫 的 D N A 片 段 i n s e r t s i z e 進(jìn) 行 檢 測 使 用 Q P C R 方 法 對 文 庫 的 有 效 濃 度 進(jìn) 行 準(zhǔn) 確 定 量 在 庫 檢 合 格 之 后 利 用 測 序 儀 I l l u m i n a H i S e q 基 金 項(xiàng) 目 海 南 省 省 屬 科 研 院 所 技 術(shù) 創(chuàng) 新 專 項(xiàng) j s c x 2 0 2 0 1 3 海 南 省 重 大 科 技 計(jì) 劃 項(xiàng) 目 Z D K J 2 0 2 1 0 0 7 第 一 作 者 嚴(yán) 婉 榮 1 9 8 6 女 碩 士 副 研 究 員 研 究 方 向 植 物 病 理 學(xué) 通 信 作 者 收 稿 日 期 2 0 2 4 0 6 1 1 7 2表 1 櫻 桃 番 茄 病 毒 病 樣 本 信 息 樣 本 編 號 L S 1 L S 2 L S 3 L S 4 L S 5 L S 6 L S 7 L S 8 L S 9 L S 1 1 L S 1 0 D A 1 D A 2 D A 3 D A 4 D A 5 D A 6 D A 8 D A 9 D A 1 0 D A 7 C J 1 C J 3 C J 4 C J 6 C J 7 C J 8 C J 9 C J 1 1 C J 1 2 C J 1 3 C J 2 C J 5 C J 1 0 C M 1 C M 2 C M 4 C M 3 W C 1 W C 3 W C 2 D A 1 1 D A 1 2 D A 1 3 D A 1 4 Q H 2 Q H 3 Q H 1 L S 1 2 L S 1 4 L S 1 5 L S 1 6 L S 1 3 采 集 地 點(diǎn) 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 大 補(bǔ) 山 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 大 補(bǔ) 山 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 大 補(bǔ) 山 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 大 補(bǔ) 山 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 坡 村 仔 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 坡 村 仔 陵 水 縣 椰 林 鎮(zhèn) 鞍 馬 洋 陵 水 縣 椰 林 鎮(zhèn) 鞍 馬 洋 陵 水 縣 椰 林 鎮(zhèn) 鞍 馬 洋 陵 水 縣 椰 林 鎮(zhèn) 聯(lián) 豐 村 陵 水 縣 椰 林 鎮(zhèn) 聯(lián) 豐 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 羅 溫 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 羅 溫 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 羅 溫 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 羅 溫 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 羅 溫 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 坡 上 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 坡 上 村 田 洋 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 坡 上 村 田 洋 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 坡 上 村 田 洋 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 坡 上 村 田 洋 村 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 姜 園 村 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 姜 園 村 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 姜 園 村 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 五 豐 村 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 五 豐 村 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 南 嶺 村 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 南 嶺 村 昌 江 縣 紅 林 農(nóng) 場 昌 江 縣 紅 林 農(nóng) 場 昌 江 縣 紅 林 農(nóng) 場 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 姜 園 村 昌 江 縣 十 月 田 鎮(zhèn) 姜 園 村 昌 江 縣 紅 林 農(nóng) 場 澄 邁 縣 永 發(fā) 鎮(zhèn) 農(nóng) 科 院 基 地 澄 邁 縣 永 發(fā) 鎮(zhèn) 農(nóng) 科 院 基 地 澄 邁 縣 永 發(fā) 鎮(zhèn) 金 安 農(nóng) 場 澄 邁 縣 永 發(fā) 鎮(zhèn) 農(nóng) 科 院 基 地 文 昌 縣 東 閣 鎮(zhèn) 李 六 村 文 昌 縣 東 閣 鎮(zhèn) 李 六 村 文 昌 縣 東 閣 鎮(zhèn) 李 六 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 高 龍 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 高 龍 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 高 龍 村 定 安 縣 定 城 鎮(zhèn) 高 龍 村 瓊 海 市 嘉 積 鎮(zhèn) 龍 壽 洋 瓊 海 市 嘉 積 鎮(zhèn) 龍 壽 洋 瓊 海 市 嘉 積 鎮(zhèn) 下 嶺 村 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 武 山 村 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 武 山 村 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 武 山 村 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 武 山 村 陵 水 縣 光 坡 鎮(zhèn) 武 山 村 生 長 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 期 中 期 中 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 地 理 坐 標(biāo) 東 經(jīng) 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 1 1 0 0 7 1 1 0 0 6 1 1 0 0 7 1 1 0 0 7 1 1 0 0 4 1 1 0 0 4 1 1 0 0 5 1 1 0 0 5 1 1 0 0 5 1 1 0 2 8 1 1 0 2 8 1 1 0 2 8 1 1 0 2 8 1 1 0 2 8 1 1 0 2 9 1 1 0 3 3 1 1 0 3 3 1 1 0 3 3 1 1 0 3 3 1 0 8 8 7 1 0 8 8 6 1 0 8 8 6 1 0 8 8 7 1 0 8 8 7 1 0 8 9 5 1 0 8 9 5 1 0 8 9 5 1 0 8 9 6 1 0 8 9 6 1 0 8 8 6 1 0 8 8 6 1 0 8 9 6 1 1 0 2 0 1 1 0 2 0 1 1 0 1 1 1 1 0 2 0 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 3 5 1 1 0 3 5 1 1 0 3 4 1 1 0 3 4 1 1 0 5 0 1 1 0 5 0 1 1 0 5 0 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 北 緯 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 7 1 8 5 7 1 8 5 7 1 8 4 9 1 8 4 9 1 8 4 9 1 8 4 9 1 8 4 9 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 7 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 2 9 1 9 2 9 1 9 2 9 1 9 3 0 1 9 3 0 1 9 3 8 1 9 3 8 1 9 3 3 1 9 3 3 1 9 3 3 1 9 2 9 1 9 2 9 1 9 3 3 1 9 7 5 1 9 7 5 1 9 7 7 1 9 7 5 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 7 1 1 9 7 1 1 9 7 1 1 9 7 1 1 9 2 2 1 9 2 2 1 9 2 5 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 6 海 拔 高 度 m 1 8 6 1 8 0 1 7 1 2 8 4 2 1 6 2 4 0 5 4 8 9 6 8 4 7 9 3 2 3 6 2 2 0 2 0 8 1 8 8 1 7 8 1 8 6 1 7 6 1 9 3 2 0 8 1 6 5 4 8 4 4 8 5 4 8 6 5 7 1 5 4 8 5 9 2 6 4 2 9 2 0 9 4 4 9 0 6 4 5 5 5 1 8 9 3 0 1 7 2 2 4 5 2 0 5 2 4 5 1 2 8 5 8 5 1 1 5 5 7 4 7 4 4 0 7 0 7 1 2 1 1 1 1 7 5 1 7 0 1 7 1 1 0 2 癥 狀 描 述 斑 駁 卷 曲 皺 縮 小 葉 黃 化 卷 曲 小 葉 起 泡 黃 化 卷 葉 黃 化 卷 葉 橢 圓 花 瓣 卷 曲 黃 化 卷 葉 畸 形 矮 小 小 葉 黃 化 卷 曲 黃 化 卷 曲 畸 形 黃 化 卷 曲 畸 形 輕 度 黃 化 正 常 黃 化 斑 駁 小 葉 輕 微 黃 化 花 葉 斑 駁 黃 化 斑 駁 卷 曲 黃 化 斑 駁 皺 縮 葉 緣 尖 黃 化 斑 駁 小 葉 黃 化 輕 度 斑 駁 畸 形 卷 曲 黃 化 小 葉 畸 形 正 常 小 葉 皺 縮 黃 化 小 葉 皺 縮 斑 駁 黃 化 斑 駁 黃 化 小 葉 斑 駁 黃 化 小 葉 斑 駁 斑 駁 皺 縮 小 葉 斑 駁 皺 縮 小 葉 小 葉 黃 化 皺 縮 斑 駁 小 葉 皺 縮 斑 駁 小 葉 皺 縮 斑 駁 正 常 正 常 正 常 小 葉 皺 縮 曲 葉 小 葉 黃 化 小 葉 正 常 黃 化 曲 葉 小 葉 小 葉 曲 葉 正 常 小 葉 卷 曲 黃 化 小 葉 黃 化 卷 曲 黃 化 皺 縮 尖 葉 小 葉 黃 葉 卷 曲 黃 化 正 常 小 葉 卷 曲 黃 化 黃 化 小 葉 斑 駁 皺 縮 黃 化 卷 曲 小 葉 正 常 嚴(yán) 婉 榮 等 海 南 地 區(qū) 櫻 桃 番 茄 上 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 病 鑒 定 與 分 析 7 3現(xiàn) 代 農(nóng) 業(yè) 科 技 2 0 2 5 年 第 3 期 植 物 保 護(hù) 植 物 營 養(yǎng) 4 0 0 0 進(jìn) 行 深 度 測 序 將 測 序 組 裝 后 的 拼 接 序 列 C o n t i g s 與 G e n B a n k V i r u s R e f S e q 病 毒 核 酸 數(shù) 據(jù) 庫 進(jìn) 行 比 對 對 比 對 結(jié) 果 進(jìn) 行 注 釋 測 序 過 程 及 結(jié) 果 分 析 均 由 北 京 百 邁 客 生 物 科 技 有 限 公 司 完 成 1 3 櫻 桃 番 茄 樣 本 T Y L C V 的 P C R 驗(yàn) 證 采 用 多 糖 多 酚 植 物 總 D N A 提 取 試 劑 盒 提 取 番 茄 樣 本 總 D N A 板 利 用 T Y L C V 特 異 性 引 物 T Y L C V F 5 T A A T C T G T T G T A A G G G C C C G T G A C T 3 T Y L C V R 5 A T G T A A T C A G A G C A G T T G A T C A T G 3 7 8 0 b p 進(jìn) 行 P C R 擴(kuò) 增 P C R 反 應(yīng) 體 系 3 0 L D N A 1 0 L 2 T a q m i x 1 0 L T Y L C V F 引 物 1 0 L T Y L C V R 引 物 1 0 L d d H 2 O 1 2 L 擴(kuò) 增 條 件 9 4 預(yù) 變 性 5 m i n 9 4 變 性 3 0 s 5 5 退 火 3 0 s 7 2 延 伸 1 m i n 3 0 個(gè) 循 環(huán) 7 2 延 伸 1 0 m i n 4 保 存 擴(kuò) 增 產(chǎn) 物 連 接 到 p L B v e c t o r 上 轉(zhuǎn) 化 大 腸 桿 菌 D H 5 菌 株 在 含 有 氨 芐 青 霉 素 濃 度 為 1 0 0 g m L 的 L B 平 板 上 挑 取 陽 性 克 隆 送 至 北 京 天 一 輝 遠(yuǎn) 生 物 科 技 有 限 公 司 進(jìn) 行 測 序 測 序 結(jié) 果 在 N C B I 上 進(jìn) 行 B l a s t 分 析 試 驗(yàn) 所 用 試 劑 盒 和 大 腸 桿 菌 D H 5 菌 株 均 購 自 天 根 生 化 科 技 北 京 有 限 公 司 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 樣 本 采 集 情 況 共 計(jì) 采 集 到 6 5 個(gè) 櫻 桃 番 茄 樣 本 包 含 6 個(gè) 市 縣 的 2 1 個(gè) 不 同 地 點(diǎn) 其 中 陵 水 縣 樣 本 1 6 個(gè) 定 安 縣 樣 本 1 4 個(gè) 昌 江 縣 樣 本 1 3 個(gè) 澄 邁 縣 樣 本 8 個(gè) 文 昌 市 和 瓊 海 市 樣 本 均 為 7 個(gè) 分 別 記 錄 每 個(gè) 樣 本 的 名 稱 采 集 時(shí) 間 地 點(diǎn) 及 癥 狀 病 毒 病 癥 狀 主 要 有 皺 縮 斑 駁 小 葉 卷 曲 畸 形 黃 化 等 多 發(fā) 于 植 株 上 部 發(fā) 生 嚴(yán) 重 地 塊 整 株 畸 形 矮 小 每 個(gè) 相 同 樣 本 采 集 3 管 分 別 用 于 小 R N A 深 度 測 序 R T P C R 檢 測 驗(yàn) 證 和 預(yù) 留 備 用 為 了 檢 測 病 毒 的 豐 富 度 采 集 每 個(gè) 地 方 不 同 癥 狀 的 樣 本 進(jìn) 行 混 樣 對 混 樣 樣 本 進(jìn) 行 編 號 送 至 相 關(guān) 公 司 進(jìn) 行 小 R N A 深 度 測 序 2 2 櫻 桃 番 茄 T Y L C V 小 R N A 深 度 測 序 結(jié) 果 采 用 小 R N A 深 度 測 序 后 獲 得 了 櫻 桃 番 茄 每 個(gè) 樣 本 中 可 能 存 在 的 所 有 與 病 毒 相 關(guān) 的 C o n t i g s 拼 接 序 列 G e n B a n k 數(shù) 據(jù) 庫 比 對 后 與 T Y L C V 相 關(guān) 的 序 列 進(jìn) 行 歸 納 總 結(jié) 結(jié) 果 表 明 6 個(gè) 市 縣 共 測 得 1 5 條 與 T Y L C V 相 關(guān) 的 序 列 陵 水 縣 共 獲 得 1 2 條 數(shù) 據(jù) 占 陵 水 縣 總 病 毒 數(shù) 量 的 2 3 3 5 其 中 T Y L C V A x a r q u i a 分 離 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V 次 之 T Y L C V S a r d i n i a 比 例 最 低 定 安 縣 共 獲 得 1 0 條 數(shù) 據(jù) 占 定 安 縣 總 病 毒 數(shù) 量 的 1 6 0 6 其 中 T Y L C V 分 離 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V A x a r q u i a 次 之 T Y L C V I n d o n e s i a 比 例 最 低 昌 江 縣 共 獲 得 1 2 條 數(shù) 據(jù) 占 昌 江 縣 總 病 毒 數(shù) 量 的 4 9 4 4 其 中 T Y L C A x V S i c 1 分 離 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V 次 之 T Y L C V T h a i l a n d 和 T Y L C V S a r d i n i a 比 例 最 低 澄 邁 縣 共 獲 得 8 條 數(shù) 據(jù) 占 澄 邁 縣 總 病 毒 數(shù) 量 的 2 9 5 3 其 中 T Y L C V 分 離 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C A x V S i c 1 次 之 T Y L C V S a u d i 比 例 最 低 文 昌 市 共 獲 得 7 條 數(shù) 據(jù) 占 文 昌 市 總 病 毒 數(shù) 量 的 5 6 1 其 中 T Y L C V T h a i l a n d 分 離 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V S h u a n g b a i 次 之 T Y L C V V i e t n a m 比 例 最 低 瓊 海 市 共 獲 得 6 條 數(shù) 據(jù) 占 瓊 海 市 總 病 毒 數(shù) 量 的 3 1 0 其 中 T Y L C V O m a n 分 離 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V A x a r q u i a 次 之 T Y L C V S a u d i 所 占 比 例 最 低 從 地 區(qū) 來 看 昌 江 地 區(qū) 的 T Y L C V 各 類 分 離 物 檢 出 比 例 最 高 占 比 幾 乎 接 近 所 有 病 毒 的 5 0 說 明 昌 樣 本 編 號 W C 4 W C 5 W C 7 W C 6 Q H 4 Q H 5 Q H 6 Q H 7 C M 5 C M 6 C M 7 C M 8 采 集 地 點(diǎn) 文 昌 市 東 閣 鎮(zhèn) 李 山 村 文 昌 市 東 閣 鎮(zhèn) 鳳 山 村 文 昌 市 東 閣 鎮(zhèn) 李 山 村 文 昌 市 東 閣 鎮(zhèn) 鳳 山 村 瓊 海 市 嘉 積 鎮(zhèn) 龍 壽 洋 瓊 海 市 嘉 積 鎮(zhèn) 龍 壽 洋 瓊 海 市 嘉 積 鎮(zhèn) 龍 壽 洋 瓊 海 市 嘉 積 鎮(zhèn) 龍 壽 洋 澄 邁 縣 永 發(fā) 鎮(zhèn) 永 發(fā) 基 地 澄 邁 縣 永 發(fā) 鎮(zhèn) 永 發(fā) 基 地 澄 邁 縣 永 發(fā) 鎮(zhèn) 金 安 農(nóng) 場 澄 邁 縣 永 發(fā) 鎮(zhèn) 金 安 農(nóng) 場 生 長 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 經(jīng) 緯 度 經(jīng) 度 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 5 0 1 1 0 5 0 1 1 0 5 0 1 1 0 4 9 1 1 0 2 0 1 1 0 2 0 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 緯 度 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 2 4 1 9 2 4 1 9 2 4 1 9 2 3 1 9 7 5 1 9 7 5 1 9 7 7 1 9 7 7 海 拔 高 度 m 1 6 0 2 7 2 1 6 0 2 7 2 1 9 2 1 9 2 1 9 2 1 8 1 2 5 0 2 3 0 2 0 8 2 0 4 癥 狀 描 述 斑 駁 皺 縮 尖 葉 皺 縮 黃 化 黃 化 正 常 卷 曲 斑 駁 皺 縮 卷 曲 卷 曲 畸 形 黃 化 卷 曲 細(xì) 長 花 葉 卷 曲 葉 片 泡 狀 突 起 突 起 部 分 變 淺 卷 曲 畸 形 黃 化 斑 駁 表 1 續(xù) 7 4江 地 區(qū) T Y L C V 發(fā) 生 最 嚴(yán) 重 其 次 為 澄 邁 陵 水 定 安 和 文 昌 地 區(qū) 瓊 海 地 區(qū) T Y L C V 的 檢 出 率 最 低 從 分 離 物 類 型 來 看 在 1 5 條 與 T Y L C V 相 關(guān) 的 序 列 中 T Y L C V A x a r q u i a T Y L C V O m a n T Y L C V M a l a g a 和 T Y L C V S a u d i 4 個(gè) 分 離 物 在 6 個(gè) 地 區(qū) 均 檢 測 到 T Y L C V A l B a t i n a h 和 T Y L C V M a l i 在 除 文 昌 市 外 的 其 他 地 區(qū) 均 檢 測 到 T Y L C V 和 T Y L C A x V S i c 1 在 除 文 昌 市 和 瓊 海 市 外 的 其 他 地 區(qū) 均 檢 測 到 T Y L C V V i e t n a m 在 陵 水 縣 昌 江 縣 和 文 昌 市 檢 測 到 T Y L C V G u a n g d o n g 僅 在 陵 水 縣 檢 測 到 T Y L C V Y u n n a n 在 陵 水 縣 和 昌 江 縣 檢 測 到 T Y L C V S a r d i n i a 在 陵 水 縣 和 昌 江 縣 檢 測 到 T Y L C V S h u a n g b a i 在 定 安 縣 和 文 昌 市 檢 測 到 T Y L C V I n d o n e s i a 僅 在 安 定 縣 檢 測 到 2 3 櫻 桃 番 茄 T Y L C V 的 P C R 的 驗(yàn) 證 及 分 析 P C R 驗(yàn) 證 結(jié) 果 表 明 6 5 個(gè) 櫻 桃 番 茄 樣 本 中 有 5 5 個(gè) 樣 本 檢 測 到 T Y L C V 總 體 檢 出 率 為 8 4 6 2 陵 水 縣 T Y L C V 的 檢 出 率 為 1 0 0 0 0 定 安 縣 T Y L C V 的 檢 出 率 為 9 2 8 6 昌 江 縣 T Y L C V 的 檢 出 率 為 8 4 6 2 文 昌 市 T Y L C V 的 檢 出 率 為 7 1 4 3 澄 邁 縣 T Y L C V 的 檢 出 率 為 7 5 0 0 瓊 海 市 T Y L C V 的 檢 出 率 為 5 7 1 4 部 分 檢 測 結(jié) 果 見 圖 1 選 取 陵 水 定 安 瓊 海 的 分 離 物 進(jìn) 行 測 序 分 析 將 測 序 結(jié) 果 共 享 后 分 別 獲 得 G e n B a n k 登 錄 號 即 L S 2 3 O R 7 6 6 0 2 4 D A 2 2 O R 7 6 6 0 2 2 和 Q H 2 3 O R 7 6 6 0 2 5 比 對 發(fā) 現(xiàn) L S 2 3 O R 7 6 6 0 2 4 與 海 南 分 離 物 M W 8 1 4 9 0 9 1 和 河 南 分 離 物 J N 9 9 0 9 2 5 1 的 相 似 率 均 達(dá) 到 9 9 7 4 與 廣 東 分 離 物 P P 4 3 8 3 6 3 1 陜 西 分 離 物 K U 8 9 2 7 1 7 1 日 本 分 離 物 L C 7 9 0 4 7 2 1 等 的 相 似 率 均 為 9 9 6 1 與 廣 東 分 離 物 M T 6 7 1 4 2 9 1 北 京 分 離 物 K M 5 0 6 9 4 8 1 海 南 分 離 物 O Q 4 2 8 1 8 2 1 澳 大 利 亞 分 離 物 K X 3 4 7 1 0 1 1 等 的 相 似 率 均 為 9 9 4 9 D A 2 2 O R 7 6 6 0 2 2 和 Q H 2 3 O R 7 6 6 0 2 5 與 廣 東 分 離 物 P P 4 3 8 3 6 3 1 P P 4 3 8 3 5 4 1 的 相 似 率 均 為 1 0 0 0 0 與 澳 大 利 亞 分 離 物 K X 3 4 7 1 3 1 1 海 南 分 離 物 O R 6 7 0 9 4 9 1 M W 8 1 4 9 0 9 1 的 相 似 率 均 為 9 9 8 7 與 江 蘇 分 離 物 M N 3 8 1 7 1 3 1 美 國 分 離 物 K Y 9 7 1 3 2 8 1 廣 東 分 離 物 P P 4 3 8 3 4 0 1 等 的 相 似 率 均 為 9 9 6 1 從 比 對 結(jié) 果 來 看 陵 水 定 安 和 瓊 海 T Y L C V 與 已 發(fā) 布 的 海 南 分 離 物 相 似 率 有 高 有 低 與 部 分 中 國 海 南 廣 東 河 南 及 澳 大 利 亞 相 關(guān) 分 離 物 相 似 率 達(dá) 9 9 7 0 以 上 但 也 存 在 相 似 性 較 低 的 菌 株 這 說 明 T Y L C V 分 離 物 較 復(fù) 雜 從 地 理 關(guān) 系 上 也 很 難 確 定 其 來 源 存 在 地 理 位 置 較 遠(yuǎn) 但 親 緣 關(guān) 系 較 近 以 及 地 理 位 置 較 近 但 親 緣 關(guān) 系 較 遠(yuǎn) 的 a 中 1 2 4 分 別 為 L S 1 L S 2 L S 3 L S 4 L S 5 L S 6 L S 7 L S 8 L S 9 L S 1 0 L S 1 1 D A 1 D A 2 D A 3 D A 4 D A 5 D A 6 D A 8 D A 9 D A 1 0 C J 1 C J 4 C J 8 C J 9 M 為 D L 5 0 0 0 D N A M a r k e r b 中 1 2 0 分 別 為 C M 1 C M 2 C M 3 C M 4 W C 1 W C 2 W C 3 W C 4 D A 1 1 D A 1 2 D A 1 3 D A 1 4 Q H 1 Q H 2 Q H 3 L S 1 2 L S 1 3 L S 1 4 L S 1 5 L S 1 6 M 為 D L 5 0 0 0 D N A M a r k e r 5 0 0 0 b p 3 0 0 0 b p 2 0 0 0 b p 1 0 0 0 b p 7 5 0 b p 5 0 0 b p 2 5 0 b p 1 0 0 b p 5 0 0 0 b p 3 0 0 0 b p 2 0 0 0 b p 1 0 0 0 b p 7 5 0 b p 5 0 0 b p 2 5 0 b p 1 0 0 b p 7 8 0 b p 7 8 0 b p a b 圖 1 不 同 地 區(qū) 樣 本 T Y L C V 檢 測 結(jié) 果 情 況 3 結(jié) 論 與 討 論 本 研 究 采 集 了 海 南 省 6 個(gè) 市 縣 櫻 桃 番 茄 主 栽 區(qū) 的 病 毒 病 樣 本 通 過 小 R N A 深 度 測 序 比 對 獲 得 了 每 個(gè) 市 縣 可 能 存 在 的 T Y L C V 相 似 分 離 物 統(tǒng) 計(jì) 了 不 同 地 區(qū) T Y L C V 及 其 分 離 物 在 所 有 病 毒 中 的 檢 出 比 例 結(jié) 果 表 明 T Y L C V 及 其 分 離 物 在 所 有 病 毒 中 的 下 轉(zhuǎn) 第 8 1 頁 嚴(yán) 婉 榮 等 海 南 地 區(qū) 櫻 桃 番 茄 上 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 病 鑒 定 與 分 析 7 5 2 7 P E R N A S L B E A N C B O O T H R O Y D J C e t a l M i t o c h o n d r i a r e s t r i c t g r o w t h o f t h e i n t r a c e l l u l a r p a r a s i t e T o x o p l a s m a g o n d i i b y l i m i t i n g i t s u p t a k e o f f a t t y a c i d s J C e l l M e t a b o l i s m 2 0 1 8 2 7 4 8 8 6 8 9 7 e 4 2 8 G U Q N Y U A N Q F Z H A O D e t a l A c e t y l c o e n z y m e A s y n t h e t a s e g e n e C h A c s 1 i s e s s e n t i a l f o r l i p i d m e t a b o l i s m c a r b o n u t i l i z a t i o n a n d v i r u l e n c e o f t h e h e m i b i o t r o p h i c f u n g u s C o l l e t o t r i c h u m h i g g i n s i a n u m J M o l e c u l a r P l a n t P a t h o l o g y 2 0 1 9 2 0 1 1 0 7 1 2 3 2 9 L I Y Z H U J D H U J X e t a l F u n c t i o n a l c h a r a c t e r i z a t i o n o f e l e c t r o n t r a n s f e r r i n g f l a v o p r o t e i n a n d i t s d e h y d r o g e n a s e r e q u i r e d f o r f u n g a l d e v e l o p m e n t a n d p l a n t i n f e c t i o n b y t h e r i c e b l a s t f u n g u s J S c i e n t i f i c R e p o r t s 2 0 1 6 6 2 4 9 1 1 3 0 B H A M B R A G K W A N G Z Y S O A N E S D M e t a l P e r o x i s o m a l c a r n i t i n e a c e t y l t r a n s f e r a s e i s r e q u i r e d f o r e l a b o r a t i o n o f p e n e t r a t i o n h y p h a e d u r i n g p l a n t i n f e c t i o n b y M a g n a p o r t h e g r i s e a J M o l e c u l a r M i c r o b i o l o g y 2 0 0 6 6 1 1 4 6 6 0 3 1 W A N G Z Y T H O R N T O N C R K E R S H A W M J e t a l T h e g l y o x y l a t e c y c l e i s r e q u i r e d f o r t e m p o r a l r e g u l a t i o n o f v i r u l e n c e b y t h e p l a n t p a t h o g e n i c f u n g u s M a g n a p o r t h e g r i