<p>ICS 65.020.02 B 39 DB21 遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn) DB 21/T 22622014 食用菌固體菌種制作規(guī)程 2014 - 03 -21發(fā)布 2014 - 05 - 21實(shí)施 遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 &nbsp; 發(fā)布 DB21/T 22622014 I 前 &nbsp;言 本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T 1.1-2009起草規(guī)則編制。 本標(biāo)準(zhǔn)由遼陽市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)由遼陽市食用菌研究所提出。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：遼陽市食用菌研究所。 本標(biāo)準(zhǔn)起草人：劉文華、孫艷霞、李 威、陳江霞、王星繞、李 紅。 本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。 DB21/T 22622014 1 食用菌固體菌種制作規(guī)程 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了各級(jí)食用菌固體菌種制作要求、生產(chǎn)工藝流程。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于遼寧地區(qū)普遍栽培的食用菌品種的各級(jí)固體菌種生產(chǎn)。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 4789.28 &nbsp;食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑 GB 5749 &nbsp; &nbsp; &nbsp; 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB 9687 &nbsp; &nbsp; &nbsp; 食品包裝用聚乙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) &nbsp;GB 9688 &nbsp; &nbsp; &nbsp; 食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB/T 12728 &nbsp; &nbsp;食用菌術(shù)語 NY/T 528 &nbsp; &nbsp; &nbsp;食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程 NY/T 1731 &nbsp; &nbsp; 食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范 NY/T 1742 &nbsp; &nbsp; 食用菌菌種通用技術(shù)要求 NY 5010 &nbsp; &nbsp; &nbsp; 無公害食品 蔬菜產(chǎn)地環(huán)境條件 NY 5358 &nbsp; &nbsp; &nbsp; 無公害食品 食用菌產(chǎn)地環(huán)境條件 要求 3.1 技術(shù)人員 應(yīng)有掌握菌種生產(chǎn)相關(guān)知識(shí)技能的專業(yè)技術(shù)人員及檢驗(yàn)人員。 3.2 場地選擇 應(yīng)符合NY 5010和NY 5358的要求，周圍5千米以內(nèi)無土礦企業(yè)污染源，3千米以內(nèi)無生活垃圾堆放和填埋場、工業(yè)固體廢棄物和危險(xiǎn)廢棄物堆放和填埋場。 3.3 廠房設(shè)置和布局 廠房從結(jié)構(gòu)和功能上滿足食用菌菌種生產(chǎn)的基本需要：有各自隔離的原料庫、攤曬場、配料分裝室(場)、洗滌室、滅菌室、接種室、培養(yǎng)室、貯存室、菌種檢驗(yàn)室等。 3.3.1 原料庫 原料庫要求干燥、通風(fēng)，防雨，遠(yuǎn)離畜圈、禽舍，遠(yuǎn)離火源。 DB21/T 22622014 2 3.3.2 攤曬場 要求平坦、通風(fēng)良好，光照充足、空曠寬闊，遠(yuǎn)離火源。最好鋪一定面積的水泥地面，便于攤晾、粉碎培養(yǎng)料，也可供培養(yǎng)料堆積發(fā)酵時(shí)使用。 3.3.3 配料分裝室（場） 要求水電方便，空間充足。如安排在室外，應(yīng)有天棚，防雨防曬要求地面平整光滑，最好用水泥抹面。配備拌料槽或拌料機(jī)、衡器、拌料、配料工具、分裝操作臺(tái)、分裝工具。 3.3.4洗滌室 要因地制宜，就地取材修建上、下水道，下水道口裝濾網(wǎng)以免堵塞、污水經(jīng)下水道流入滲水井，避免污水四處流淌污染環(huán)境。 3.3.5滅菌室 要求水電安全方便，通風(fēng)良好，空間充足，散熱暢通。除去滅菌鍋以外，室內(nèi)應(yīng)有擺放菌種筐的空間。以電為能源需安裝380伏、220伏的電源插座；以蒸氣鍋爐為熱源，或以煤、柴為熱源，要把鍋爐、土灶的加煤（柴）口、出灰口設(shè)在隔壁。滅菌設(shè)備，應(yīng)能滿足生產(chǎn)需要。 3.3.6 接種室 要求防塵換氣性能良好，內(nèi)壁和屋頂光滑，便于擦洗消毒，做到空氣潔凈；門窗要嚴(yán)密，關(guān)閉后能與外界空氣隔絕應(yīng)分里、外兩間，外間2平方米3平方米，是緩沖間；內(nèi)間5平方米6平方米，是接種間，均應(yīng)安有30瓦紫外線殺菌燈，緩沖間內(nèi)配備專用工作服、鞋、帽、口罩、常用消毒藥品和小型噴霧器。緩沖間與接種間門的位置不應(yīng)設(shè)在相對(duì)的平行線上。接種間墻壁上開一寬60厘米、高40厘米、深30厘米的小櫥窗，內(nèi)外裝有對(duì)拉的櫥門，與接種間外普通房間相通用于接種過程中傳遞器材。 3.3.7 培養(yǎng)室 房間大小、數(shù)量要根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模而定。室溫應(yīng)能保持菌絲發(fā)育為宜（25左右），冬季有加溫設(shè)備（暖氣、電熱線、火墻等），夏季可通風(fēng)降溫；室內(nèi)空氣相對(duì)濕度在 70%以下；配備窗簾遮光，避免日光直射培養(yǎng)架；室內(nèi)墻壁、地面光滑、平整，利于清潔消毒。 3.3.8 貯存室 要求清潔、通風(fēng)、無光或暗光，低溫（15以下）但冬季不結(jié)冰，最好保持4左右；地面撒布石灰，保持干燥。應(yīng)遠(yuǎn)離原料庫及其他污染源。 3.3.9 菌種檢驗(yàn)室 &nbsp;要求水電方便，符合微生物檢驗(yàn)室基本要求。 DB21/T 22622014 3 3.4 設(shè)備設(shè)施 3.4.1 配料設(shè)備 磅秤（量程依據(jù)生產(chǎn)規(guī)模而定）、天平（量程大于200克）、量筒（量程10毫升1000毫升）、量杯（量程50毫升1000毫升）等衡器量具。切片機(jī)、粉碎機(jī)等。 3.4.2 拌料設(shè)備 拌料時(shí)必備的用具有鐵鏟、鋁鍋、電爐或煤爐、塑料桶或鉛（鐵）桶、專用掃帚和簸箕等；產(chǎn)量大的菌種廠還應(yīng)配備攪拌機(jī) 3.4.3 裝料設(shè)備 采用手工裝料，應(yīng)備一塊墊瓶（袋）底的木板（供裝料時(shí)振動(dòng)用）和一根丁字形搗木（供壓料用），以玻璃瓶作容器的要壓料和打接種穴，可用瓶料專用打穴器；但具有一定規(guī)模的菌種廠，應(yīng)購置裝料機(jī)。 3.4.4 滅菌設(shè)備 常壓蒸汽滅菌鍋及高壓蒸汽滅菌鍋。 3.4.5 接種設(shè)備 主要有接種室配備設(shè)備（酒精燈、接種工具、70%酒精、5%苯酚溶液、小噴霧器、脫脂棉、玻璃棒、火柴等）、接種箱、超凈工作臺(tái)以及各式接種工具。 3.4.6 培養(yǎng)設(shè)備 主要有恒溫培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)室。 3.5 菌種和種源 3.5.1 品種 應(yīng)使用經(jīng)省級(jí)以上農(nóng)作物品種審定委員會(huì)登記的菌種，并且清楚種性。不應(yīng)使用來源和種性不清的菌種和生產(chǎn)性狀未經(jīng)系統(tǒng)試驗(yàn)驗(yàn)證的組織分離物作種源生產(chǎn)菌種。應(yīng)從具有相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種。 3.5.2 種源質(zhì)量檢驗(yàn) DB21/T 22622014 4 菌種生產(chǎn)單位每年在種源進(jìn)入擴(kuò)大生產(chǎn)程序之前，應(yīng)進(jìn)行菌種質(zhì)量和種性檢驗(yàn)，包括純度、活力、菌絲長勢的一致性、菌絲生長速度、菌落外觀等，并做出菇試驗(yàn)，驗(yàn)證種性。種源出菇試驗(yàn)方法及種源質(zhì)量要求，應(yīng)符合NY/T 1742的規(guī)定。 4 &nbsp;生產(chǎn)工藝流程 培養(yǎng)基配制分裝滅菌冷卻接種培養(yǎng)(檢查)成品 4.1培養(yǎng)基配制 4.1.1 培養(yǎng)基配方舉例 4.1.1.1 母種培養(yǎng)基配方舉例 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000毫升。 馬鈴薯葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200克，葡萄糖20克，蛋白胨10克，瓊脂20克，水1000毫升。 馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200克，蔗糖20克，瓊脂20克，水1000毫升。 馬鈴薯麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）300克，麥芽糖10克，瓊脂20克，水1000毫升。 馬鈴薯綜合培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，維生素B1 2克4克，瓊脂20克，水1000毫升。 4.1.1.2 原種和栽培種培養(yǎng)基配方舉例 以木屑為主料的培養(yǎng)基配方 闊葉樹木屑78%，麩皮或米糠20%，蔗糖1%，石膏粉1%，適于制作香菇、平菇類、黑木耳、金針菇、滑菇、靈芝、猴頭菇等木腐型菌種。 闊葉樹木屑77%，麩皮或米糠20%，蔗糖1.5 %，石膏粉 1%，尿素0.5%，適于制作平菇、鳳尾菇和金針菇等菌種。 闊葉樹木屑98%，麩皮1%，尿素0.4 %，碳酸鈣0.3%，磷酸二氫鉀0.2%，硫酸鎂0.1%，適于制作香菇、側(cè)耳類等菌種。 以玉米芯為主料的培養(yǎng)基配方 玉米芯78%，麩皮或米糠20%，石膏粉1%，蔗糖1%，適于制作草菇、平菇、木耳、猴頭菇等木腐菌菌種。 玉米芯80%，米糠15%，玉米粉3%，石膏粉1%，復(fù)合肥1%（制原種改用0.2%磷酸二氫鉀），適于制作平菇等菌種。 以麥粒為主料的培養(yǎng)基配方 小麥或燕麥98%，碳酸鈣2%，適于制作除銀耳外的木腐型菌和糞草腐型菌種。 DB21/T 22622014 5 小麥93%，碳酸鈣或石膏粉2%，木屑5%，適于制作蘑菇、平菇等菌種。 以糞草為主料的培養(yǎng)基配方 糞草（經(jīng)發(fā)酵）90%，糖1%，麩皮或米糠8%，碳酸鈣或石膏1%，此培養(yǎng)基適于制作蘑菇菌種。 4.1.2 培養(yǎng)基配制方法 4.1.2.1 母種培養(yǎng)基配制 去皮切塊的馬鈴薯，按配方稱取后置于容器中，加清水1000毫升，文火煮沸20分鐘30分鐘后，用雙層濕紗布過濾取汁；對(duì)易溶物質(zhì)，按配方稱取后置于容器中，加入其量1/31/4的水，攪成糊狀；對(duì)難溶的物質(zhì)，按配方稱取后加適量水，并加熱不斷攪拌促其溶解；所用微量藥物，可稱取適量先溶解調(diào)成高濃度母液，再按比例換算成相應(yīng)量加入。 4.1.2.2 原種及栽培種培養(yǎng)基配制 以木屑為主料的培養(yǎng)基配制：按配方稱取原料，先將糖溶于適量水中，其他原料進(jìn)行混合后加入糖水拌勻，使料含水量達(dá)60%65%（每百千克料加水120千克130千克）。 以玉米芯為主料的培養(yǎng)基配制：玉米芯經(jīng)碾碎處理后將其置于pH值為 1011的石灰水中浸泡一夜，撈出瀝至不滴水后，再按木屑培養(yǎng)基的制作方法拌入輔料和調(diào)控含水量。 以麥粒為主料的培養(yǎng)基配制：小麥先過篩，除去雜物，再放入清水浸泡，一般 4 月5 月份浸24小時(shí)，6月9月份浸16小時(shí)；撈出并用清水沖洗數(shù)次，瀝干后置沸水鍋中煮沸3分鐘5分鐘撈出，入清水冷卻至常溫，瀝去多余水份，即可與輔料拌勻。 以糞草為主料的培養(yǎng)基配制：將干牛糞與稻草（麥草）以6：4之比，按堆肥制作工藝進(jìn)行堆積發(fā)酵15天20天，在此過程中要翻堆2次3次，挑出半腐熟的稻草，切成2厘米3厘米長，曬干即為糞草備用。制培養(yǎng)基時(shí)，按比例取糞草與其他輔料混勻，用糖水拌料，含水量約60%。 4.2分裝 4.2.1 母種 使用玻璃試管和棉塞，試管18毫米 ×180毫米或20毫米×200毫米，棉塞主要使用梳棉，不應(yīng)使用脫脂棉。母種培養(yǎng)基的分裝量掌握在試管長度的 1/41/5，滅菌后擺放成的斜面頂端距試管口不少于50毫米。 4.2.2 原種 使用650毫升750毫升，耐126高溫的無色或近無色的玻璃菌種瓶，或850毫升，耐126高溫白色半透明，符合GB 9687衛(wèi)生規(guī)定的塑料菌種瓶，或15厘米×28厘米，耐126高溫，符合GB 9688DB21/T 22622014 6 衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋。各類容器應(yīng)使用棉塞；也可用能滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋代替棉塞。 4.2.3 栽培種 可使用大于等于17厘米×33厘米，耐126高溫，符合GB 9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋。培養(yǎng)基裝至距瓶(袋)口不少于60毫米，滅菌后不少于45毫米，原種和栽培種培養(yǎng)基的松緊度要一致。 4.3滅菌 4.3.1 滅菌條件 母種的培養(yǎng)基配制分裝后應(yīng)立即滅菌；原種和栽培種培養(yǎng)基配制后應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)進(jìn)鍋滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌0.11 MPa0.12 MPa，30分鐘，木屑培養(yǎng)基和草料培養(yǎng)基滅菌0.12MPa，1.5小時(shí)，或0.14 MPa0.15 MPa，1小時(shí)，谷粒培養(yǎng)基、糞草培養(yǎng)基滅菌0.14 MPa0.15 MPa，2.5小時(shí)。容量較大時(shí)，滅菌時(shí)間要適當(dāng)延長。滅菌完畢后，應(yīng)自然降壓，不應(yīng)強(qiáng)制降壓常壓滅菌時(shí)，在2小時(shí)之內(nèi)使滅菌室溫度達(dá)到100，保持100，8小時(shí)lO小時(shí)。母種培養(yǎng)基、原種培養(yǎng)基、谷粒培養(yǎng)基、糞草培養(yǎng)基，應(yīng)高壓滅菌，不應(yīng)常壓滅菌。滅菌時(shí)應(yīng)防止棉塞被冷凝水打濕。 4.3.2 冷卻 冷卻室使用前要進(jìn)行清潔和除塵處理。地面鋪消毒過的塑料薄膜后，將滅菌后的原種瓶（袋）或栽培種瓶（袋）放置在冷卻室中冷卻到料溫降至適宜溫度。 4.3.3 滅菌效果的檢查 母種培養(yǎng)基置于28恒溫培養(yǎng)，原種和栽培種培養(yǎng)基經(jīng)無菌操作接種于GB 4789.28中規(guī)定的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于28恒溫培養(yǎng)，48 小時(shí)后檢查，無微生物長出的為滅菌合格。 4.4 接種 4.4.1 接種室及超凈工作臺(tái)消毒方法 試管種（母種）的接種在接種箱或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。原種（瓶裝）和栽培種（瓶裝或袋裝）可在接種箱、超凈工作臺(tái)或接種室內(nèi)進(jìn)行。接種室用藥物消毒并用紫外燈照射；超凈工作臺(tái)先用 75酒精進(jìn)行表面擦拭消毒，然后紫外燈照射預(yù)凈20分鐘。 4.4.2 母種的接種 在進(jìn)行接種操作之前，工作人員需先將手洗干凈，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘或用75%酒精棉球擦手。接種時(shí)左手拿試管，右手拿接種針，將接種針放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后，在酒精燈火焰附近拔開試管棉塞，試管口向下傾斜，用酒精燈火焰封鎖，接著把火焰滅菌、并冷卻后的接種針伸入斜面菌種的試管內(nèi)，鉤取一小塊帶培養(yǎng)基的菌種塊，在菌種塊出入試管口時(shí)，不要接觸管壁或管口，也不要過火焰，迅速把菌種塊移接入斜面培養(yǎng)基的中部，把棉塞頭的四周在火焰上燒一下，然后立即將棉D(zhuǎn)B21/T 22622014 7 塞塞入試管口，塞入后將棉塞旋轉(zhuǎn)一兩下，使之與管壁緊貼。根據(jù)斜面的大小，每支斜面菌種可擴(kuò)大移植20支50支。 4.4.3 原種和栽培種（瓶裝或袋裝）的接種 原種接種需按無菌操作，將母種用接種針移接入瓶內(nèi)，一支母種可接4瓶6瓶原種。 栽培種接種需按無菌操作，用接種匙，長柄鑷子或接種鏟取出一塊蠶豆大的原種，放入栽培種培養(yǎng)基中?？蓡稳瞬僮?，也可雙人配合操作。進(jìn)行單人操作時(shí)，先將母種棉塞拔出，瓶口經(jīng)火焰滅菌之后，平放在筐架上，并使瓶口保持靠近火焰上部，然后進(jìn)行接種。進(jìn)行雙人操作時(shí)，各自要有一盞酒精燈，以便進(jìn)行瓶口、接種工具和棉塞滅菌，其中一人手拿菌種瓶和接種工具，另一人手拿栽培種培養(yǎng)基和拔、塞棉花塞。 4.4.4 接種室及超凈工作臺(tái)后處理 接種室每次使用后，要及時(shí)清理清潔，排除廢氣、清除廢物，臺(tái)面要用75酒精擦試消毒。 4.5 菌種培養(yǎng) 在使用培養(yǎng)室的前兩天，采用藥物消毒。菌種培養(yǎng)條件的控制主要是對(duì)溫度、濕度、空氣、光線的控制，依食用菌的生理要求而定。 4.6 培養(yǎng)期的檢查 各級(jí)菌種培養(yǎng)期間應(yīng)定期檢查，及時(shí)揀出不合格菌種。 4.7 入庫 完成培養(yǎng)的菌種要及時(shí)登記，放入滿足3.3.8條件的貯存室。 4.8 記錄 &nbsp;生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)詳細(xì)記錄。 4.9 留樣 各級(jí)菌種都應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)以每個(gè)批號(hào)母種3支5支，原種和栽培種5瓶7瓶（袋），于46下貯存，貯存至使用者在正常生產(chǎn)條件下該批菌種出第一潮菇（耳）。</p>