楊應杰 張付昆 穆靜怡 等 矮牽?；ò晁ダ虾湍婢趁{迫響應相關NAC基因的鑒定與分析 J 福建農業(yè)學報 2024 39 6 700 710 YANG Y J ZHANG F K MU J Y et al Identification and Analysis of NAC Related to Petal Senescence and Stress Responses of Petunia J Fujian Journal of Agricultural Sciences 2024 39 6 700 710 矮牽牛花瓣衰老和逆境脅迫響應相關NAC基因的 鑒定與分析 楊應杰 張付昆 穆靜怡 付魯峰 陳 倬 李 華 關夏玉 呂培濤 福建農林大學園藝學院 福建 福州 350002 摘 要 目的 NAC NAM ATAF and CUC 參與植物生長發(fā)育和多種逆境脅迫響應過程的調控 本文旨在鑒定 和研究對矮牽牛生長發(fā)育和逆境脅迫響應的關鍵NAC成員 為優(yōu)質抗逆矮牽牛育種提供基因資源 方法 以腋 生矮牽牛 Petunia axillaris 基因組為參考基因組 利用矮牽?；ㄆ鞴偎ダ线^程 煙草脆裂病毒 Tobacco rattle virus TRV 侵染 低磷 低溫 NaCl 銅離子和干旱脅迫處理后的轉錄組數(shù)據(jù) 分析矮牽牛NAC基因 PaNACs 差異 表達情況 并對差異表達PaNACs的啟動子順式作用元件及轉錄因子結合位點進行分析 利用實時熒光定量PCR驗 證了部分差異表達PaNACs在矮牽牛花衰老過程中的表達情況 并預測了差異表達PaNACs編碼蛋白的潛在靶基 因 結果 鑒定的131個PaNAC基因中 59個 45 04 被鑒定為花器官衰老和逆境脅迫響應過程中的差異表 達基因 PaNAC72 PaNAC22 PaNAC29 PaNAC40 PaNAC2 PaNAC90 PaNAC83 PaNAC56 PaNAC36和 PaNAC35在至少3個生物學過程響應中差異表達顯著 其中擬南芥衰老關鍵基因AtNAP的直系同源基因 PaNAC29在花器官衰老過程和低溫 低磷 銅離子脅迫逆境處理中顯著上調表達 PaNAC72在除受銅離子脅迫外的 所有6種處理中表達差異顯著 PaNAC22在花器官衰老過程和低溫和低磷脅迫中上調表達 在銅離子和干旱逆境下 調表達 啟動子分析結果顯示這10個PaNAC啟動子區(qū)域存在多種逆境脅迫響應相關元件 且大量響應衰老和逆境 脅迫的差異表達基因的啟動子區(qū)域存在NAC的結合位點 結論 PaNACs廣泛參與矮牽牛生長發(fā)育及逆境脅迫響 應 其中PaNAC29可能是花衰老關鍵的正調控因子 PaNAC72廣泛響應多種逆境脅迫 關鍵詞 矮牽牛 NAC 轉錄組 衰老 脅迫 生物信息學 中圖分類號 S681 6文獻標志碼 A文章編號 1008 0384 2024 06 0700 11 Identification and Analysis of NAC Related to Petal Senescence and Stress Responses of Petunia YANG Yingjie ZHANG Fukun MU Jingyi FU Lufeng CHEN Zhuo LI Hua GUAN Xiayu L Peitao College of Horticulture Fujian Agriculture and Forestry University Fuzhou Fujian 350002 China Abstract Objective NACs in petunia responsible for the growth floral senescence and stress response were identified and analyzed Method Based on the Petunia axillaris genome transcriptomes on the flower in senescence as well as some other organs under the stress of inoculated tobacco rattle virus TRV low phosphorus low temperature NaCl copper ion or drought were obtained Expression under stress cis acting elements and transcription factor binding sites in promoters of differentially expressed PaNACs were analyzed The expression in flower senescence was determined using qRT PCR and putative target genes of proteins encoded by them predicted Result Of the 131 PaNACs 59 i e 45 04 of all were identified as differentially expressed genes DEGs during flower senescence and in response to stresses PaNAC72 PaNAC22 PaNAC29 PaNAC40 PaNAC2 PaNAC90 PaNAC83 PaNAC56 PaNAC36 and PaNAC35 exhibited significant differential expressions in response to at least 3 stress treatments Among them PaNAC29 an orthologue of the Arabidopsis key senescence related gene AtNAP was highly upregulated during flower senescence and in response to low temperature low 收稿日期 2024 03 25 修回日期 2024 06 15 作者簡介 楊應杰 1996 男 碩士研究生 主要從事花卉與景觀園藝研究 E mail hnyingjieyang 通信作者 關夏玉 1984 女 博士 高級實驗師 主要從事觀賞園藝品質生物學研究 E mail gxy302 呂培濤 1983 男 博士 教授 主要從事園藝作物品質生物學研究 E mail ptlv 基金項目 福建農林大學園藝學院青年學術骨干培養(yǎng)基金項目 722022011 福建省高原學科建設項目 102 71201801101 福建農業(yè)學報 2024 39 6 700 710 Fujian Journal of Agricultural Sciences doi 10 19303 j issn 1008 0384 2024 06 009 phosphorus or copper ion treatment PaNAC72 was significantly affected by all except copper ion treatment PaNAC22 was upregulated during flower senescence and in responses to low temperature and low phosphorus treatments but downregulated in the presence of copper ion or under drought condition Multiple stress responsive elements presented in the promoters of the 10 PaNACs and many senescence and stress responsive DEGs containing NAC binding sites in their promoters Conclusion NAC NAM ATAF and CUC involved widely in the growth development and stress responses of plants PaNACs in petunia such as PaNAC29 appeared to be a key positive regulator of floral senescence and PaNAC72 responsive to a wide variety of stresses Key words Petunia hybrida NAC transcriptome senescence stress bioinformatics 0 引言 研究意義 矮牽牛 Petunia hybrida 是茄科 Solanaceae 矮牽牛屬 Petunia 多年生草本觀賞 植物 也是研究植物花色 器官衰老以及響應逆境 脅迫分子機制的重要模式植物 矮牽?；ü谌菀姿?老 易受外部環(huán)境如病毒侵染 干旱 極端溫度 重金屬等非生物的脅迫 嚴重限制其展示期和觀賞 價值 NAC NAM ATAF and CUC 轉錄因子作為 植物生長發(fā)育及應對逆境脅迫的關鍵分子 已被證 實具有重要作用 矮牽牛PaNAC轉錄因子的功能研 究不僅有助于揭示其在生長發(fā)育中的作用 而且對 于理解其如何幫助植物適應和響應上述逆境脅迫具 有重要意義 進而為優(yōu)質抗逆矮牽牛新品種的育種 工作提供潛在的分子靶標和理論基礎 前人研究 進展 NAC是植物特有的轉錄因子家族 得名于矮 牽牛無頂端分生組織 no apical meristem NAM 擬南芥1 2轉錄激活因子 Arabidopsis thaliana transcri ption activation factor 1 2 ATAF1 2 和杯狀子葉 cup shaped cotyledon CUC2 最早由Souer等 1 和Aida 等 2 發(fā)現(xiàn) NAC轉錄因子N端有1個保守結構域 該結構域包含約150個氨基酸殘基 由A B C D和E等5個基序組成 側翼含有 螺旋和 折疊 結構 A基序可能與NAC二聚體形成有關 C和 D基序存在核定位信號并參與DNA的結合 B與 E基序可能與基因的功能多樣性密切相關 3 5 大量 研究表明 NAC在植物生長發(fā)育及響應不同逆境脅 迫過程中發(fā)揮重要作用 OsNAC6在水稻 Oryza sativa L 對稻瘟病菌的防御反應中發(fā)揮作用 6 過 表達SlNAP1的番茄 Solanum lycopersicum L 植株 對2種廣泛傳播的細菌性疾病的防御能力顯著增 強 7 在郁金香 Tulipa gesneriana L 中過表達TgNAP 會加速花瓣衰老 而沉默TgNAP則會延緩花衰老 8 BrNAC029參與了細胞分裂素途徑延緩采后大白菜 Brassica rapa var glabra Regel 葉片衰老的途徑 9 過表達SNAC1 stress responsive NAC 1 的轉基因水 稻在生長期的抗旱性和耐鹽性顯著提高 10 百合 Lilium lancifolium LlNAC2過表達能夠增強百合對 寒冷 干旱和鹽分的耐受性 11 本研究切入點 目前已有一些關于矮牽牛花冠衰老和多種逆境處理 下的轉錄組數(shù)據(jù)報道 12 18 但關于NAC在這些生物 過程中的響應仍然缺乏集中研究 而來自不同研究 的多個轉錄組數(shù)據(jù)沒有標準化 限制了對參與多種 生物學過程的關鍵矮牽牛目的基因的深入挖掘 擬 解決的關鍵問題 本研究對已公開發(fā)表的矮牽牛在 花衰老和不同逆境脅迫的轉錄組數(shù)據(jù)進行標準化處 理 分析NAC基因家族在矮牽?；ㄋダ霞绊憫{迫 過程中的表達模式 為揭示NAC在矮牽牛生長發(fā)育 和抗逆防御反應過程中的作用提供理論參考 1 材料與方法 1 1 矮牽牛RNA seq數(shù)據(jù)下載及處理 從NCBI https www ncbi nlm nih gov 中下載公 開發(fā)表的矮牽牛花瓣衰老 PRJNA417209 12 煙草 脆裂病毒 TRV 侵染 PRJNA693880 13 冷脅迫 PRJNA640832 14 低磷脅迫 PRJNA997338 15 NaCl脅迫 PRJNA381775 16 銅離子脅迫 PRJNA 774370 17 和干旱脅迫 PRJNA680631 18 相關轉 錄組數(shù)據(jù) 表1 從SolGenomics Network SGN 數(shù)據(jù)庫下載矮牽?；蚪M序列及基因組結構注釋文 件 19 使用SRA toolkit2 11 3軟件的fastp dump將 SRA格式的文件轉化為fastq gz格式后使用Fastp軟 件對轉換格式后的數(shù)據(jù)進行質量控制 從原始數(shù)據(jù) 中刪除低質量和接頭 adapter 序列 使用Hisat2建 立矮牽牛參考基因組的索引并將處理后的測序數(shù) 據(jù)比對到參考基因組 最后通過samtools進行排序 處理 把SAM格式文件轉換為BAM格式文件 利 用subread軟件包中的FeatureCounts 20 計算讀序數(shù) 量 read counts 并均一化為TPM值 transcripts per million 1 2 矮牽牛PaNAC成員序列下載及系統(tǒng)進化分析 從PlantTFDB http planttfdb gao lab org 下載 第 6 期楊應杰等 矮牽?；ò晁ダ虾湍婢趁{迫響應相關NAC基因的鑒定與分析701 矮牽牛和擬南芥的NAC家族基因 使用MEGA 10 1 8將矮牽牛和擬南芥NAC的全長蛋白序列進行 序列比對 之后采用Maximum likelihood ML 法 的GTR CAT替代模型構建系統(tǒng)進化樹 SPR 4 Shimodaira Hasegawa方法檢驗分支支持度 根據(jù) 前人通過與AtNAC蛋白的同源性命名方式對矮牽牛 PaNACs分別命名 21 1 3 基因表達分析及差異表達PaNAC成員鑒定 用Featurecount統(tǒng)計PaNACs的讀序數(shù)量 然后 使用DESeq2以 log2 fold change 1和q value 0 05為標準篩選差異表達基因 Differentially expressed genes DEGs 提取差異表達的PaNAC成員的TPM 值 利用R包EnhancedVolcano和ComplexHeatmap 分別生成火山圖和熱圖 韋恩圖使用https www version 3 14 3 進行Gene ontology term分析 1 4 花瓣衰老差異基因的實時熒光定量PCR 矮牽牛植株在正常溫室條件下生長 22 光 周期14L 10D 取開花期D0 花冠完全展開 和 衰老時期D4 花完全開放后4 d 的花各10朵 于 液氮中速凍后研磨成粉末 保存在 80 冰箱用于 RNA提取 所有試驗均獨立收集并提取至少3次 使用多糖多酚植物總RNA提取試劑盒 TIANGEN 提取矮牽牛花總RNA 用Prime Script RT reagentKit 試劑盒反轉錄獲得cDNA 以Actin7為內參基因 每 種樣品均設3個生物學重復 使用Bio Rad CFX96 Touch實時熒光定量PCR儀對目的基因擴增 表2 通過2 Ct計算基因的相對表達量 1 5 啟動子順式作用元件及轉錄因子結合位點分析 選取PaNAC轉錄起始位點上游2 000 bp的序列作 表 1 矮牽?；ㄋダ霞案鞣N脅迫處理 Table 1 Petunia flower senescence and various stress treatments 脅迫 Stress 處理方法 Treatment 品種 組織 Cultivar tissue 數(shù)據(jù)來源 Data source 花衰老 Flower senescence 采樣時間點 第 0天 D0 花朵開放但在花藥裂開之前 第 4天 D4 花冠在尖端邊緣顯示枯萎跡象 米切爾二倍體 腋生矮牽牛 花瓣 PRJNA417209 12 病毒脅迫 Virus stress 用 100 mmol L 1酸鹽緩沖液均質化的 TRV PPK20 感染性汁液侵染 在侵染后第 0天 S0 3天 S3 和 6天 S6 取樣 藍色好時 腋生矮牽牛 葉 PRJNA693880 13 冷脅迫 Cold stress 分別于 4 C低溫處理后 1 3 6 12 h收集葉片 超越 腋生矮牽牛 葉 PRJNA640832 14 低磷脅迫 Low phosphorus 切除來自節(jié)點 2 側芽 和 7 頂芽 的腋芽 兩種處理 正常磷 250 mol L 1 和低磷 5 mol L 1 V26自交系 腋生矮牽牛 腋芽 PRJNA997338 15 NaCl脅迫 NaCl stress 正常植株用 Hoagland溶液進行培養(yǎng) NaCl處理組用含 150 mmol L 1 NaCl的改良 Hoagland溶液進行處理 在處理后 0 6 24 h取葉片 米切爾二倍體 腋生矮牽牛 葉 PRJNA381775 16 銅離子脅迫 Cu stress 正常營養(yǎng)液培養(yǎng) 28 d后 將植物轉移至含有 40 mol L 1 CuSO4 Cu 的營養(yǎng)液中直至開花 正常植株始終用正常營養(yǎng)液培 養(yǎng) 收集第 7階段 花藥裂開 花瓣 米切爾二倍體 腋生矮牽牛 花瓣 PRJNA774370 17 干旱脅迫 Drought stress 對照組每天用 100 mg L 1氮灌溉直至試驗結束 脅迫組 5 d不澆水 并在第 5天收集葉 米切爾二倍體 腋生矮牽牛 葉 PRJNA680631 18 表 2 實時熒光定量PCR引物信息 Table 2 Oligonucleotide primers used for qRT PCR analysis 基因名稱 Gene 上游引物 Forward primer 下游引物 Reverse primer 退火溫度 Annealing temperature PaNAC2 CTAATGTCGACCGCTCTGCT CATCGATTGTGGCCTTGGTG 57 34 57 03 PaNAC22 ATAGCCAACGTGACCGGAAG AGAGTAGTGAGGGTCGGTCC 57 65 58 56 PaNAC29 TCGGACCTTCCTCCAGGATT TATCGGTGCCTGTAGCCTTC 57 58 PaNAC35 GGATGACAGAAGCAGCAACG GTTCCCAAGGGTCATAGCGA 56 89 57 23 PaNAC36 TGGCAACAATTGGCGAGAGA ACCCAATCAGTCTTGGAGCC 57 23 57 56 PaNAC40 GTCTCCAGTGGGCCTGAATC TCAACCAGCTTGCTGAACCA 58 49 57 19 PaNAC72 TGTGTCACAGGGTACTCAAGC ACCGAATACCAAACGGGTCA 57 56 4 Actin7 TGCTGATCGTATGAGCAAGGAA GGTGGAGCAACAACCTTAATCTTC 56 56 702福建農業(yè)學報第 39 卷 為啟動子序列 使用PlantCARE https bioinformatics psb ugent be webtools plantcare html 預測順式作用元 件 使用PlantTFDB http planttfdb gao lab org 預 測啟動子區(qū)域轉錄因子結合位點 1 6 潛在NAC靶基因的鑒定 選用擬南芥的NAC motif在MEME中 https meme suite org meme 預測差異表達基因的轉錄起 始位點上游2 000 bp序列中是否含有NAC結合位點 2 結果與分析 2 1 矮牽牛PaNAC和擬南芥AtNAC系統(tǒng)進化分析 使用MEGA軟件對131個PaNAC和138個 AtNAC進行系統(tǒng)進化分析 發(fā)現(xiàn)NAC可以被分成 13個組 Group 1 13 圖1 AtNAC基因響應 多種生物學過程并在逆境脅迫中發(fā)揮關鍵作用 PaNAC72 PaNAC2和PaNAC29所在的Group 5中的 擬南芥AtNAC被報道參與了干旱 AtNAC72 22 葉 片衰老 AtNAC55 23 和冷脅迫 AtNAC41 24 過 程 該組中的AtNAC29是擬南芥葉片衰老的關鍵轉 錄因子 25 PaNAC36和PaNAC90所在的Group 8中 的擬南芥AtNAC90被報道參與了鹽脅迫 26 與 PaNAC138和PaNAC40同屬于Group 9的擬南芥 AtNAC89和AtNAC40分別被報道參與了抗病毒 27 和 鹽脅迫 28 過程 一般認為 結構決定功能 29 因此 推斷這些PaNAC很可能與AtNAC具有相似的功能 2 2 矮牽牛PaNAC在花衰老中的表達情況 從公開發(fā)表的數(shù)據(jù)中 共獲得69個轉錄組文 庫 這些文庫的Q30均值為94 91 平均比對率超 AT 5G 07 68 0 AN AC 07 9 AT 5G 61 43 0 AN AC 10 0 Pe ax i16 2Sc f00 12 90 00 11 PaNAC100 Pe ax i16 2Sc f00 45 1g 00 62 5 PaNAC79 Pe ax i16 2Sc f00 27 4g 00 44 3 PaNAC8 0 Pe ax i16 2Sc f00 01 3g 00 43 7 PaNAC59 Pe ax i16 2Sc f00 10 6g 00 32 3 PaNAC92 AT 3G 29 03 5 AN AC 05 9 AT 5G 39 61 0 AN AC 09 2 Pe ax i16 2Sc f00 07 6g 00 07 1 PaNA87 AT 3G 04 06 0 AN AC 04 6 AT 5G 18 27 0 AN AC 08 7 AT 1G 76 42 0 AN AC 03 1 Pe axi 16 2Sc f00 680 g00 630 PaNAC3 1 AT 3G 15 170 AN AC 05 4 AT 5G 53 950 AN AC 09 8 Pea xi1 62Sc f00 027 g00 145 PaNAC9 8 Pea xi1 62Sc f00 069 g01 832 PaNAC5 4 Pea xi1 62Sc f00 045 g00 146 PaNAC3 9 Pea xi1 62Sc f00 213 g00 119 PaNAC3 8 AT 2G 244 30 AN AC 038 AT 3G 184 00 AN AC 058 Pea xi1 62Sc f00 015 g00 941 PaNAC1 13 Pea xi1 62Sc f00 013 g00 103 PaNAC5 8 Pea xi1 62Sc f00 634 g00 032 PaNAC142 AT 1G 560 10 AN AC 021 AT 3G 129 77 Pea xi1 62Sc f00 232 g01 126 PaNAC22 AT 4G 285 30 AN AC 074 Pea xi1 62Sc f00 624 g00 014 PaNAC2 1 Pea xi1 62Sc f00 987 g00 110 PaNAC7 4 Pea xi1 62Sc f00 083 g00 319 PaNAC1 5 Pea xi16 2Sc f00 268 g01 214 PaNAC3 0 AT 1G7 193 0 AN AC 030 Pea xi16 2Sc f000 74g 001 35 PaNAC1 18 Pea xi16 2Sc f008 88g 004 10 PaNAC1 2 AT1 G32 770 AN AC0 12 AT2 G46 770 AN AC0 43 AT3 G61 910 AN AC0 66 AT1 G79 580 AN AC0 33 Peax i162 Scf0 0006 g002 29 PaNAC33 Peax i162 Scf0 0078 g001 21 PaNAC7 0 AT1 G332 80 AN AC0 15 AT4 G103 50 AN AC0 70 AT2G 1806 0 AN AC03 7 AT4G 36160 ANAC 076 Peaxi 162Sc f0008 3g009 15 PaNAC7 6 Peaxi1 62Scf 00799 g0021 6 PaNAC105 AT5G 66300 ANAC 105 AT5G 62380 ANAC 101 AT1G1 2260 AN AC007 AT1G6 2700 AN AC026 Peaxi16 2Scf000 02g0072 0 PaNAC7 Peaxi162 Scf00054 g02213 PaNAC1 05 Peaxi162Sc f00241g0 0423 PaNAC2 6 Peaxi162Sc f00128g01 627 PaNAC83 Peaxi162Sc f00962g000 19 PaNAC125 AT5G13180 AN AC083 Peaxi162Scf005 16g00027 PaNAC4 1 AT2G33480 ANAC 041 Peaxi162Scf00525g000 06 PaNAC139 AT5G64530 ANAC104 Peaxi162Scf00152g01118 PaNAC104 Peaxi162Scf00001g00042 PaNAC110 Peaxi162Scf00001g00044 PaNAC111 Peaxi162Scf00086g00028 PaNAC120 Pe axi162Scf00432g00076 PaNAC102 Peaxi 162Scf00004g02727 PaNAC81 Peaxi162Scf00493g00013 PaNAC6 4 Peaxi162Scf00079g00716 PaNAC1 19 Peaxi162Scf006 10g00367 PaNAC141 AT1G52880 AN AC018 AT3G15510 AN AC056 Peaxi162Scf0018 1g00124 PaNAC18 Peaxi162Scf0099 8g00127 PaNAC56 AT1G61 110 ANAC 025 Peaxi16 2Scf011 53g0003 6 PaNAC2 5 Peaxi16 2Scf000 00g004 81 PaNAC1 9 Peaxi1 62Scf0 0998g0 0126 PaNAC72 AT4G 27410 ANAC 072 AT1G 52890 ANAC 019 AT3G 15500 ANAC 055 Peaxi 162Sc f0018 2g007 11 PaNAC55 Peaxi 162S cf003 51g00 112 PaNAC47 AT3G 0407 0 AN AC04 7 Peax i162Sc f0005 5g02 415 PaNAC163 Peax i162Sc f014 55g0 0015 PaNAC1 4 Peax i162 Scf0 0184 g000 18 PaNAC1 26 Peax i162 Scf0 0222 g006 24 PaNAC2 9 AT1 G69 490 N AP AT1 G01 720 AN AC0 02 Peax i162 Scf0 005 1g0 141 0 PaNAC2 AT1 G77 450 AN AC0 32 Pea xi16 2Sc f008 42g 002 11 PaNAC81 AT5 G08 790 AN AC0 81 AT 5G6 379 0 AN AC 102 AT 3G0 320 0 AN AC 045 AT 5G1 726 0 AN AC 086 AT 1G6 591 0 AN AC 028 AT 3G 177 30 AN AC 057 Pea xi1 62Sc f00 171 g00 619 PaNAC57 Pea xi1 62Sc f00 643 g00 628 PaNAC86 AT 1G 543 30 AN AC 020 Pea xi1 62Sc f00 294 g00 625 PaNAC20 Pea xi1 62Sc f00 521 g00 049 PaNAC161 Pea xi1 62Sc f00 713 g00 018 PaNAC11 AT 1G 325 10 AN AC 011 AT 4G 179 80 AN AC 071 AT 5G 465 90 A NAC 096 Pea xi1 62S cf0 01 02 g00 626 PaNAC9 6 Pea xi1 62Sc f00 695 g00 512 PaNAC71 AT 5G 09 330 AN AC 08 2 AT 5G 64 060 AN AC 10 3 Pe axi 16 2Sc f00 583 g00 020 PaNAC1 03 Pe axi 16 2Sc f00 589 g00 322 PaNAC82 AT 1G 34 180 AN AC 01 6 AT 1G 34 19 0 AN AC 01 7 Pe ax i16 2Sc f00 16 0g 01 63 6 PaNAC1 7 Pe ax i16 2S cf0 02 26 g0 03 19 PaNAC16 AT 1G 32 87 0 AN AC 01 3 AT 3G 10 50 0 AN AC 05 3 AT 5G 04 41 0 AN AC 07 8 Pe ax i16 2Sc f00 25 3g 00 32 1 PaNAC7 8 Pe ax i16 2Sc f01 10 5g 00 21 8 PaNAC53 AT 3G 10 48 0 AN AC 05 0 AT 3G 10 49 0 AN AC 05 1 Pe ax i16 2Sc f00 17 6g 01 63 8 PaNAC50 Pe ax i16 2Sc f01 10 5g 00 01 5 PaNAC5 1 Pe ax i16 2Sc f00 05 7g 00 08 4 CA Na P 95 Peax i16 2Sc f00 54 1g 00 01 0 CA Na P 14 0 Pe ax i16 2Sc f00 91 1g 00 04 9 PaNAC9 4 Pe ax i16 2Sc f00 12 9g 00 23 0 PaNAC9 AT 1G 26 87 0 AN AC 00 9 AT 5G 39 82 0 AN AC 09 4 Pe ax i16 2Sc f00 35 9g 00 81 5 PaNAC1 33 Pe ax i16 2Sc f01 42 5g 00 11 3 PaNAC1 56 AT 3G 12 91 0 AT 2G 43 00 0 AN AC 04 2 Pe ax i16 2Sc f00 45 2g 00 72 0 PaNAC4 2 AT 2G 17 04 0 AN AC 03 6 Pe ax i16 2Sc f00 87 5g 00 11 1 PaNAC3 6 Pe axi 16 2Sc f00 580 g00 710 PaNAC6 3 Pe axi 16 2Sc f00 150 g00 001 PaNAC35 Pe axi 16 2Sc f00 194 g01 039 PaNAC3 4 AT 2G 02 450 AN AC 03 4 Pea xi1 62Sc f00 069 g00 510 PaNAC6 1 Pea xi1 62Sc f00 040 g00 025 PaNAC9 0 AT 3G 44 350 AN AC 06 1 AT 5G 223 80 AN AC 090 AT 1G 022 10 AT 3G 044 10 AT 1G 022 30 AN AC 004 AT 1G 022 50 AN AC 005 AT 1G 022 20 AN AC 003 AT 3G 044 20 AN AC 048 AT 1G 010 10 AN AC 001 AT 4G 015 50 AN AC 069 AT 3G 044 30 AN AC 049 AT 4G 015 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