7 種微型月季組培快繁及葉片直接再生技術(shù)探究 張犖麒 1 莊玥瑩 1 劉鑫穎 1 馮策婷 1 隋云吉 2 郭潤(rùn)華 2 于 超 1 1 北京林業(yè)大學(xué)園林學(xué)院 北京海淀 100083 2 新疆應(yīng)用職業(yè)技術(shù)學(xué)院 新疆奎屯 833200 摘 要 為篩選出不定芽誘導(dǎo)率最高的品種和最優(yōu)培養(yǎng)條件 為微型月季規(guī)?；a(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)和理論基礎(chǔ) null以 7 個(gè)微型月季 品種莖段為外植體 建立組培快繁體系 對(duì)葉片直接再生的影響因子進(jìn)行研究 結(jié)果表明 不同微型月季品種表現(xiàn)出增殖 null生根和 再生能力上的差異 null微型月季莖段最佳消毒方式為 75 酒精沖洗 30s 5 NaClO 沖洗 6min 最適腋芽萌發(fā)培養(yǎng)基為 MS 3 0mg L 6 BA 0 5mg L NAA 萌芽率 81 8 平均每個(gè)外植體萌芽 1 4 個(gè) 不定芽增殖最佳培養(yǎng)基為 MS 2 0mg L 6 BA 0 1mg L NAA 增殖系數(shù)為 1 97 最適生根培養(yǎng)基為 1 2MS 0 5mgL IBA 0 25mg L NA 生根率達(dá)到 81 9 7 個(gè)微型月季品種中能夠通過葉 片直接發(fā)生不定芽的是 null灌木小伊甸園 null 最適合的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS 1 0mg L TDZ 0 5mg L NA 10 mg L AgNO 3 100mg L CH 暗培養(yǎng) 12d 不定芽誘導(dǎo)率為 23 58 null 關(guān)鍵詞 微型月季 快繁體系 激素 直接再生 不定芽 為紅色系 null粉色系 null黃色系 null白色系 null紫色系 null綠色系 null復(fù) 色系等 14 從中選擇 7 個(gè)常見品種作為試驗(yàn)材料 以當(dāng) 年生莖段為外植體 進(jìn)行組培技術(shù)研究 建立高效的快 繁體系 為微型月季快速繁殖提供參考 以不同基因型 的微型月季葉片為材料 篩選出不定芽誘導(dǎo)率較高的 品種 初步研究了影響再生的因素 為創(chuàng)制月季矮化品 種提供基因資源 為建立遺傳轉(zhuǎn)化體系奠定基礎(chǔ) null 1 材料與方法 1 1 試驗(yàn)材料 本試驗(yàn)采用 7 個(gè)微型月季品種 如圖 1 材料保 存于北京林業(yè)大學(xué)人工氣候室 null 微型月季為薔薇科 Rosacea 薔薇屬 R o s a L 多 年生木本植物 是現(xiàn)代月季五大類群之一 由小月季花 R o s a c h i n e n s i s v a r m i n i m a 與小姊妹月季 P o l y a n t h a R o s e 反復(fù)雜交培育而成 1 3 植株株形緊湊 花直徑 2 5cm 常為重瓣 枝密花繁多季開花 4 null它不僅可以作 為微型花籬 null地被應(yīng)用于花境 null草坪 還可以作為盆景 與枯木山石搭配應(yīng)用于陽(yáng)臺(tái) null庭院等場(chǎng)景 是優(yōu)良的多 年生園林綠化材料 5 null隨著園藝花卉盆栽化 null小型化 null多 頭化的發(fā)展 微型植物景觀成為市場(chǎng)新寵 null作為立體花 壇材料 需要植物株型低矮 null花色豐富 null花朵覆蓋率高 null 有一定的抗病耐寒性 以及易于繁殖成活 null目前 用于 立體花壇的月季品種還比較有限 因此急需選育和繁 殖更多優(yōu)秀的品種 null雖然經(jīng)過長(zhǎng)期雜交選育 已經(jīng)培育 出了大量的月季品種 但是由于現(xiàn)代月季遺傳背景狹 窄 還存在基因組復(fù)雜和遠(yuǎn)緣雜交不親和等阻礙 引入 更多的優(yōu)良基因已經(jīng)變得非常困難 增加了雜交育種 的難度 null而組織培養(yǎng)和分子生物學(xué)技術(shù)日趨成熟 有望 突破傳統(tǒng)月季育種方法的限制 通過轉(zhuǎn)基因定向改良 性狀 6 null 在微型月季組織培養(yǎng)方面 null埃斯托里爾 null喜悅陽(yáng) 臺(tái) null等品種可通過莖段誘導(dǎo)叢生芽繁殖 7 但目前還沒 有適用于大多數(shù)品種的組織培養(yǎng)方式 nullHsia 8 對(duì)微型月 季愈傷組織和體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)進(jìn)行研究 null馮歡 9 以微型 月季幼葉為外植體 建立了愈傷組織途徑的再生體系 null 但是薔薇屬植物的再生受基因型影響大 不同品種在 愈傷誘導(dǎo) null胚狀體及芽器官等的發(fā)生方面具有較大差 異 10 11 只有少數(shù)的品種 如 null薩曼莎 null月月紅 null 能獲得 相對(duì)高頻率的再生植株 12 13 null 本研究統(tǒng)計(jì)市面上流行的微型月季品種 將其分 基金項(xiàng)目 北京高校高精尖學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目 null 作者簡(jiǎn)介 張犖麒 197 女 碩士 研究方向 觀賞植物資源與育 種 null 通信作者 于超 1986 男 博士 教授 博士生導(dǎo)師 研究方向 觀 賞植物資源與育種 null 圖 1 7 個(gè)微型月季品種 1 2 試驗(yàn)方法 1 2 1 不同消毒方式對(duì)外植體的影響 null以品種 null紫色時(shí) 代 null為材料 選取健康植株上當(dāng)年生生長(zhǎng)旺盛莖段 飽 和洗潔精溶液浸泡 20min 用毛刷輕輕刷去表面污物 流水沖洗 1h null在超凈工作臺(tái)中酒精沖洗 30s 無菌水沖 洗 2 次 置于 5 的次氯酸鈉溶液分別沖洗 2 null4 null6min 再用無菌水沖洗 4 次 接種于 MS 培養(yǎng)基 null每個(gè)處理接 種 10 瓶 重復(fù) 3 次 2 周后記錄污染率和存活率 null 1 2 2 不同激素處理對(duì)腋芽萌發(fā)的影響 null選取健康植株 上帶飽滿芽點(diǎn)的莖段 消毒后接種于初代培養(yǎng)基上 null以 MS 為基本培養(yǎng)基 添加 6 BA 1 0 null2 0 null3 0mg L 和 NA 0 5mg L 組成初代培養(yǎng)基配方 A 1 A 3 以不添 加植物激素的 MS 培養(yǎng)基為對(duì)照組 CK null每個(gè)處理接種 10 瓶 重復(fù) 3 次 30d 后記錄腋芽萌發(fā)率 null 1 2 3 不同激素處理對(duì)叢生芽增殖的影響 null待初代培養(yǎng) 中腋芽萌發(fā) 30d 后切下 接種到繼代培養(yǎng)基上 null以 MS 為基本培養(yǎng)基 添加 6 BA 0 5 null1 0 null1 5 null2 0mg L 和 NA 0 1mg L 組成繼代培養(yǎng)基配方 B 1 B 4 以不添加 試驗(yàn)研究 現(xiàn)代園藝 2024 年第 7 期 null DOI 10 14051 ki xdyy 2024 07 044 植 物激素的 MS 培養(yǎng)基為對(duì)照組 CK null每個(gè)處理接種 10 瓶 重復(fù) 3 次 30d 后記錄增殖情況 null 1 24 不同激素處理對(duì)生根的影響 null將株高大于 3cm 的組培苗接種到生根培養(yǎng)基上 null以 1 2MS 為基本培養(yǎng) 基 添加 IBA 0 null0 25 null0 5 null1 0mg L 和 NAA 0 null0 25 null 0 5 null1 0mg L 組成生根培養(yǎng)基配方 G 1 G 5 null每個(gè)處理 接種 5 瓶 重復(fù) 3 次 30d 后統(tǒng)計(jì)生根率 null生根數(shù)量和 根長(zhǎng)度 null 1 2 5 基因型對(duì)葉片不定芽誘導(dǎo)率的影響 null將 7 個(gè)品種 微型月季無菌苗葉片 接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基 MS 0 05mg L NAA 2 0mg L TDZ 上 暗培養(yǎng) 10d 后轉(zhuǎn)光照 培養(yǎng) null每個(gè)處理接種 10 個(gè)葉片 重復(fù) 3 次 30d 后統(tǒng)計(jì) 不定芽誘導(dǎo)率 篩選出誘導(dǎo)率最高的品種 null 1 2 6 TDZ nullNA 濃度和暗培養(yǎng)時(shí)間對(duì)不定芽誘導(dǎo)率 的影響 null以誘導(dǎo)率最高品種 null灌木小伊甸園 null的組培苗 葉片為外植體 每葉留約 1m 長(zhǎng)葉柄 接種在誘導(dǎo)培 養(yǎng)基上 null以 MS 為基本培養(yǎng)基 添加 10mg L Ag NO 3 100mg L CH TDZ 1 0 null1 5 null2 0mg L 和 NAA 0 05 null 0 1mg L 組成誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方 E 1 E 6 null暗培養(yǎng)時(shí)間分 別設(shè)置為 10d 和 12d 然后轉(zhuǎn)入光照條件下培養(yǎng) null每個(gè) 處理接種 10 個(gè)葉片 設(shè)置 3 次重復(fù) 30d 后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo) 率 null 1 3 數(shù)據(jù)分析 用 Excel 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理 SP 26 0 進(jìn)行單 因素方差分析 在分析之前 對(duì)百分?jǐn)?shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行反正弦 轉(zhuǎn)換 y sin 1 nullx 表中數(shù)據(jù)表示為平均值 null標(biāo)準(zhǔn)差 不同字母表示在 P 0 05 水平上差異顯著 null 污染率 受到污染的外植體數(shù) 外植體接種 數(shù) null100 存活率 存活的外植體數(shù) 外植體接種數(shù) null 100 腋芽萌發(fā)率 萌發(fā)腋芽的外植體數(shù) 外植體 接種數(shù) null100 增殖系數(shù) 增殖芽總數(shù) 外植體接種數(shù) null100 生根率 生根的外植體數(shù) 外植體接種數(shù) null 100 不定芽誘導(dǎo)率 發(fā)生不定芽葉片數(shù) 接種葉 片數(shù) null100 2 2 6 BA 和 NAA 對(duì)腋芽萌發(fā)能力的影響 外植體接種到初代培養(yǎng)基上 12d 左右開始萌發(fā)新 芽 null如圖 2 所示 當(dāng)培養(yǎng)基不添加植物激素時(shí) 腋芽萌 發(fā)率為 52 48 平均萌芽數(shù)量?jī)H為 1 07 null添加植物激 素后 腋芽萌發(fā)率和平均萌芽數(shù)量均有一定增長(zhǎng) 其中 A 3 0 5mg L NA 3 0mg L 6 BA 培養(yǎng)基中的腋芽萌 發(fā)率達(dá)到 81 0 平均每個(gè)外植體的萌芽數(shù)達(dá)到 1 4 個(gè) null與對(duì)照組相比 添加植物激素有利于莖段腋芽萌 發(fā) 且 6 BA 濃度與腋芽萌發(fā)率和平均芽數(shù)量呈正相 關(guān) null 由表 2 可知 不同品種微型月季腋芽萌發(fā)能力有 很大差異 null在添加外源植物激素后 大多數(shù)品種的腋芽 萌發(fā)率在 80 以上 萌發(fā)率 在 6 BA 濃度 為 3 0mg L 時(shí) 達(dá)到最高 null 2 3 不同濃度 6 BA 對(duì)叢生 芽增殖能力的 5 2 43 33 null5 77ab 60 00 null10 00a 4 60 00 null20 00a 73 33 null15 26a 6 20 00 null10 00b 70 00 null17 32a 2 50 00 null17 32ab 13 33 null11 55b 表 1 不同次氯酸鈉濃度和消毒時(shí)間對(duì)外植體消毒的影響 次氯酸鈉 濃度 消毒時(shí)長(zhǎng) min 污染率 存活率 4 40 00 null10 11ab 3 33 null5 77b 6 33 33 null23 09ab 0 00 null0 00b 10 注 同列數(shù)據(jù)后無相同小寫字母表示差異顯著 P 0 05 下同 null LZYJ YB XNH GZYT XYDY ZSSD FFBS 均值 CK 60 13 null14 2b 48 15 null3 2b 59 56 null6 5ab 63 25 null7 1b 34 67 null12 7c 35 32 null4 6b 66 07 null4 3b 52 48 A 1 79 16 null11 8ab 46 54 null6 7b 53 33 null5 8b 51 11 null1 9b 60 33 null19 6b 41 82 null20 2ab 100 00 null0 0a 61 76 A 2 83 75 null12 8ab 75 79 null18 0a 59 21 null4 9ab 59 96 null1 6b 69 67 null18 5b 65 28 null2 4a 100 00 null0 0a 73 38 A 3 100 00 null0 0a 87 30 null13 6a 69 74 null15 9a 87 67 null10 8a 77 18 null20 2a 50 72 null15 8ab 100 00 null0 0a 81 80 表 2 7 個(gè)微型月季品種腋芽萌發(fā)的差異 編號(hào) 腋芽萌發(fā)率 均值 注 LZYJ 為 null鈴之妖精 null YB 為 null櫻坂 null XNH 為 null小女孩 null GZYT 為 null果汁陽(yáng)臺(tái) null XYDY 為 null灌木小伊甸園 null ZSSD 為 null紫色時(shí)代 null FFBS 為 null芬芳寶石 null 下同 null 80 81 64 44 60 46 65 50 60 46 48 28 91 52 圖 2 不同植物激素配比對(duì)微型月季腋芽萌發(fā)的影響 2024 年第 7 期 現(xiàn)代園藝 試驗(yàn)研究 2 結(jié)果與分析 2 1 消毒方式對(duì)外植體的影響 由表 1 可知 當(dāng)次氯酸鈉濃度為 5 時(shí) 污染率 null存 活率均呈先升高后降低趨勢(shì) 消毒 6min 時(shí)污染率最 低 為 20 各組存活率無顯著差異 當(dāng)次氯酸鈉濃度 為 10 時(shí) 隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng) 材料污染率呈下降 趨勢(shì) 但存活率顯著降低 null對(duì)于微型月季莖段 10 次 氯酸鈉由于濃度過高 外植體難以存活 5 次氯酸鈉 消毒效果更優(yōu) null null L ZYJ ZSSD GZYT FFBS XYDY XNH YB 均值 G 1 53 33 null0 07c 73 33 null0 09bc 40 00 null0 00b 46 67 null0 06b 53 33 null0 07c 80 00 null0 00b 80 00 null0 0b 60 00 G 2 80 00 null0 00ab 86 67 null0 37b 66 67 null0 20a 60 00 null0 00ab 93 33 null0 37a 86 67 null0 37b 93 33 null0 26ab 74 29 G 3 86 67 null0 11bc 100 00 null0 00a 46 67 null0 17b 73 33 null0 09a 73 33 null0 09bc 100 00 null0 00a 100 00 null0 00a 81 90 G 4 66 67 null0 08c 60 00 null00 0c 53 3 null0 07ab 53 33 null0 13b 86 67 null0 37ab 86 67 null0 11b 86 67 null0 37ab 75 24 G 5 60 00 null0 13a 86 67 null0 11b 40 00 null0 00b 46 67 null10 06b 66 67 null0 08bc 100 00 null0 00a 86 67 null0 37ab 70 48 均值 69 33 81 33 49 33 53 33 74 67 90 67 88 00 表 5 7 個(gè)微型月季品種組培苗生根的差異 編號(hào) 生根率 LZYJ YB XNH GZYT XYDY ZSSD FFBS 均值 CK 1 19 null0 12b 1 04 null0 06c 1 07 null0 06c 1 07 null0 06b 1 01 null0 02d 1 14 null0 13c 1 03 null0 05c 1 08 B 1 1 65 null0 48ab 1 36 null0 32bc 1 36 null0 31bc 1 22 null0 08ab 1 18 null0 11cd 1 43 null0 14bc 1 40 null0 17bc 1 37 B 2 1 49 null0 31ab 1 57 null0 35bc 1 35 null0 09bc 1 45 null0 24ab 1 45 null0 18bc 1 58 null0 18b 1 69 null0 36b 1 51 B 3 1 83 null0 22a 2 03 null0 20ab 1 96 null0 47ab 1 55 null0 49ab 1 97 null0 18a 2 07 null0 12a 1 53 null0 26ab 1 85 B 4 1 64 null0 08ab 2 54 null0 40a 1 87 null0 13a 1 79 null0 37a 1 60 null0 15b 2 17 null0 38a 2 13 null0 15a 1 97 表 3 7 個(gè)微型月季品種叢生芽增殖的差異 編號(hào) 增殖系數(shù) 均值 注 A 在 CK 0mg L NAA 0mg L 6 BA 的增殖培養(yǎng) B 在 0 1mg L NAA 2mg L 6 BA 的增殖培養(yǎng) null 1 56 1 71 1 52 1 42 1 44 1 68 1 52 影響 由表 3 可知 不同植物激素濃度對(duì) 7 種微型月季 叢生芽增殖效果影響較大 null在添加相同濃度 NAA 的情 況下 增殖系數(shù)隨 6 BA 濃度增大而提高 植株葉片更 小 株型更為緊湊 圖 3 在不添加外源激素的培養(yǎng)基 中生長(zhǎng)的植株減少了分化增殖 更利于壯苗成熟 null不同 基因型受外源激素影響的效果不同 null櫻坂 null果汁陽(yáng) 臺(tái) null紫色時(shí)代 null芬芳寶石 null在 6 BA 濃度 2mg L 時(shí) 增 殖系數(shù)最大 分別為 2 54 null1 79 null2 17 null2 13 nullnull鈴之妖精 null null小女孩 null灌木小伊甸園 null在 6 BA 濃度 1 5mg L 時(shí) 增 殖系數(shù)最大 分別為 1 83 null1 96 null1 97 null 2 4 IBA 和 NAA 對(duì)組培苗生根能力的影響 由表 4 可知 經(jīng)過 30d 培養(yǎng)后 G 3 0 25mg L I BA 0 25mg L NA 培養(yǎng)基中的生根率最高 為 81 90 null在 G 4 1 0mg L IBA 培養(yǎng)基中 植株平均根數(shù) 最多 為 5 73 條 此時(shí)平均根長(zhǎng)也最長(zhǎng) 為 2 01cm null高 濃度的 IBA 有利于根數(shù)量和根長(zhǎng)度增加 但是莖基部 愈傷組織較多 而且根更細(xì) null表面易黑化 過長(zhǎng)的根在 煉苗移栽過程中容易折斷 null總體來看 添加 IBA 比 NAA 效果更優(yōu) IBA 和 NAA 組合使用比單一使用生長(zhǎng) 素 效 果 更 優(yōu) null因 此 生 根 最 佳 培 養(yǎng) 基 配 方 為 1 2MS 0 25mg L IBA 0 25mg L NAA 能有效促進(jìn)根系 生長(zhǎng) 提高組培苗生根率 根系更為健壯 根生長(zhǎng)情況 見圖 4 null 由表 5 可知 不同微型月季品種生根能力存在差 異 但是添加植物激素后 各個(gè)品種生根率均有顯著提 高 其中 null鈴之妖精 null小女孩 null紫色時(shí)代 null芬芳寶石 null null櫻坂 null在 G 3 培養(yǎng)基中生根率最高 null果汁陽(yáng)臺(tái) null灌木 小伊甸園 null在 G 2 中生根率最高 null 圖 3 null紫色時(shí)代 null增殖培養(yǎng)株型差異 G 1 0 0 5 60 00 null0 08b 4 67 null2 39ab 1 55 null1 50ab 根粗而短 黑色 基部少量愈傷組織 G 2 0 5 0 74 29 null0 17a 4 64 null3 26ab 1 37 null0 84b 根粗而短 白色 基部少量愈傷組織 G 3 0 25 0 25 81 90 null0 13a 5 49 null3 31ab 1 81 null2 06ab 根粗而長(zhǎng) 褐色 基部少量愈傷組織 G 4 1 0 0 75 24 null0 02a 5 73 null3 37a 2 01 null0 98a 根細(xì)而長(zhǎng) 黑色 基部較多愈傷組織 G 5 0 1 0 70 48 null0 14ab 4 36 null2 33b 1 49 null0 87ab 根細(xì)而短 褐色 基部大量愈傷組織 表 4 不同植物激素配比對(duì)微型月季生根的影響 編號(hào) IBA mg L NAA mg L 生根率 平均根數(shù) 條 平均根長(zhǎng) cm 生長(zhǎng)狀態(tài) 圖 4 微型月季組培快繁過程 注 A null小女孩 null腋芽萌發(fā) B null芬芳寶石 null不定芽增殖 15d C null芬芳寶 石 null不定芽增殖 30d D null櫻坂 null繼代出現(xiàn)花苞 E1 5 null灌木小伊甸園 null 生根培養(yǎng)基 G1 G5 中根系生長(zhǎng)狀態(tài) 試驗(yàn)研究 現(xiàn)代園藝 2024 年第 7 期 null 2 5 基因型對(duì)葉片發(fā)生不定芽的影響 7 個(gè)品種微型月季無菌苗葉片 接種到分化培養(yǎng) 基上 30d 后發(fā)現(xiàn) null灌木小伊甸園 null紫色時(shí)代 null和 null櫻 坂 null有不定芽分化 葉柄切口的愈傷組織較少 出愈率 低而不定芽誘導(dǎo)率更高 以 null灌木小伊甸園 null誘導(dǎo)率最 高 達(dá) 10 05 null紫色時(shí)代 null和 null櫻坂 null誘導(dǎo)率為 3 34 見表 6 null 2 6 TDZ nullNAA 濃度和暗培養(yǎng)時(shí)間對(duì)誘導(dǎo)率的影響 將 null灌木小伊甸園 null葉片接種于含不同濃度 TDZ 的分化培養(yǎng)基上 分別暗培養(yǎng) 10d 和 12d 然后轉(zhuǎn)入光 照條件下培養(yǎng) 30d 后從葉柄處分化出不定芽 圖 5 null 由表 7 可知 培養(yǎng)基中 TDZ 和 NA 的配比是產(chǎn)生不 定芽的關(guān)鍵 當(dāng) TDZ 濃度為 1 0mg L nullNAA 濃度為 0 05mg L 時(shí) 誘導(dǎo)率最高為 23 58 null當(dāng) TDZ 濃度達(dá)到 2 0mg L NAA 濃度達(dá)到 0 05mg L 時(shí) 葉柄處分化出芽 的速度變慢 芽體小部分表現(xiàn)有畸形 圖 5 D 不利于 繼續(xù)生長(zhǎng)培養(yǎng) null 將葉片接種于相同的培養(yǎng)基 分別暗培養(yǎng) 10d 和 12d 然后轉(zhuǎn)入光照條件下培養(yǎng) 結(jié)果如表 7 所示 null暗培 養(yǎng) 12d 時(shí) 各激素濃度組合處理下的誘導(dǎo)率均高于暗 培養(yǎng) 10d 的處理組 null 3 結(jié)論與討論 3 1 微型月季組培快繁 外源植物激素對(duì)叢生芽增殖起關(guān)鍵作用 多數(shù)月 季在添加適量細(xì)胞分裂素 6 BA 的培養(yǎng)基中可以實(shí)現(xiàn) 組培苗增殖 15 16 null低濃度 6 BA 可顯著提高微型月季組 培苗增殖速度 但隨濃度升高 出現(xiàn)葉片發(fā)黃 null植株弱 小 null生長(zhǎng)緩慢的問題 7 null在本研究中 隨 6 BA 濃度增 高 叢生芽數(shù)量增多 但是植株節(jié)間縮短矮化 葉片變 小卷曲 部分品種 如 null櫻坂 null果汁陽(yáng)臺(tái) null 出現(xiàn)玻璃化 和葉片黃化 后續(xù)生長(zhǎng)緩慢 null與前人研究結(jié)果相似 17 18 細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素之比例過大 容易誘發(fā)叢生芽的 玻璃化現(xiàn)象出現(xiàn) 而細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素比例過小 容 易在植株基部形成更多愈傷組織 阻礙幼苗吸收水分 null 營(yíng)養(yǎng) null針對(duì)這一問題 王錢錢 19 的研究證實(shí) 在 6 BA 和 NAA 濃度適宜時(shí) 加入 GA 3 能改善植株黃化和玻璃化 問題 可在后續(xù)研究中對(duì)微型月季增殖系數(shù)提高作進(jìn) 一步探究 null 生根培養(yǎng)是組織培養(yǎng)形成完整植株的重要一步 null 根系的發(fā)生與伸長(zhǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)素峰值 20 在生 根階段添加生長(zhǎng)素 可使組培苗薄壁細(xì)胞脫落形成愈 傷組織 接著長(zhǎng)出不定根 21 常用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是 NAA 或 IBA 22 null李彥江 7 的研究表明 單獨(dú)添加 0 5mg L IBA 微型月季生根率高達(dá) 97 5 null而本研究中 單獨(dú)添 加 IBA 或 NAA 生根率較低 只有 76 2 和 62 9 這 一現(xiàn)象可能是基因型差異導(dǎo)致的 null對(duì)于某些植物而言 單一生長(zhǎng)素雖然能起到生根作用 但是 2 種激素配合 使用會(huì)有更好的生根效果 23 這在本研究同樣得到了 印證 IBA 與 NAA 組合生根率高達(dá) 81 9 根數(shù)量和 長(zhǎng)度也有增加 優(yōu)于單一生長(zhǎng)素對(duì)微型月季組培苗生 根的作用效果 null 繼代增殖過程中出現(xiàn)花芽分化現(xiàn)象 圖 4 D 不 同微型月季品種出現(xiàn)開花的頻率不同 在本研究中發(fā) 現(xiàn) null芬芳寶石 null果汁陽(yáng)臺(tái) null櫻坂 null灌木小伊甸園 null在 培養(yǎng)過程中更容易開花 null目前有部分關(guān)于微型月季試 管開花的報(bào)道 25 國(guó)外有研究 24 26 認(rèn)為 椰子水中含大 LZYJ 64 75 null0 13bc 0 00 少量黃綠色愈傷組織團(tuán) ZSSD 86 67 null0 06a 3 34 null0 06b 大量淡黃綠色顆粒狀水潤(rùn)愈傷 GXYT 27 02 null0 06d 0 00 葉柄生長(zhǎng)少量綠色硬質(zhì)愈傷 FFBS 16 83 null0 12d 0 00 傷口發(fā)黑 null幾乎沒有愈傷 XYDY 56 36 null0 07c 10 05 null0 10a 少量愈傷 null呈灰褐色 XNH 83 27 null0 16b 0 00 淺綠色硬質(zhì)較干燥愈傷 YB 13 39 null0 06d 3 34 null0 06b 少量綠色硬質(zhì)愈傷 表 6 不同基因型微型月季不定芽誘導(dǎo)情況 基因型 出愈率 不定芽誘導(dǎo) 率 生長(zhǎng)狀況 E 1 10 1 0 0 01 0 00 E 2 1 5 0 01 10 02 null0 00bcd E 3 2 0 0 01 6 68 null0 06cd E 4 1 0 0 05 20 21 null0 10ab E 5 1 5 0 05 6 68 null0 06cd E 6 2 0 0 05 10 02 null0 00bcd E 1 12 1 0 0 01 0 00 E 2 1 5 0 01 13 39 null0 06abc E 3 2 0 0 01 13 39 null0 06abb E 4 1 0 0 05 23 58 null0 06a E 5 1 5 0 05 10 02 null0 00bcd E 6 2 0 0 05 16 67 null0 06abc 表 7 植物激素濃度和暗培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)對(duì) null灌木小伊甸園 null不定芽誘導(dǎo)的影響 編號(hào) 暗培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng) d TDZ mg L NAA mg L 不定芽誘導(dǎo)率 圖 5 微型月季 null灌木小伊甸園 null再生 注 A 組培苗葉片接種 30d B 接種 30d 發(fā)生不定芽 C 不定芽生長(zhǎng) 壯大 D 生長(zhǎng)畸形的不定芽 2024 年第 7 期 現(xiàn)代園藝 試驗(yàn)研究 null 量 細(xì)胞分裂素和糖類物質(zhì) 有利于試管苗開花 未來有 望對(duì)微型月季花芽分化和開花的分子生物學(xué)機(jī)制展開 更深入研究 null 3 2 null灌木小伊甸園 null器官發(fā)生途徑的植株再生 根據(jù)細(xì)胞全能性理論 植物細(xì)胞有形成完整植株 的潛力 但是在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn) 基因型依然是影響再生能 力的重要因素 任桂芳等 27 對(duì) 13 個(gè)月季品種小葉再生 能力進(jìn)行研究 只有 6 個(gè)品種能不同程度地實(shí)現(xiàn)再生 null 在本研究的 7 個(gè)微型月季品種中 僅 null灌木小伊甸園 null 和 null櫻坂 null能夠再生不定芽 并且兩者在相同培養(yǎng)條件 下的誘導(dǎo)率有顯著差異 null李敬蕊 28 認(rèn)為不同月季品種 與植物激素濃度互作效應(yīng)是特定的 null在本研究中選用 再生率較高的品種 null灌木小伊甸園 null為材料 成功獲得 了再生植株 null TDZ 發(fā)揮細(xì)胞分裂素活性的同時(shí)也促進(jìn)了植物內(nèi) 源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的合成與積累 導(dǎo)致其在離體葉片誘導(dǎo) 過程中表現(xiàn)出高效再生的效果 29 null但是 TDZ 濃度并不 是越高越好 在本研究中 TDZ 濃度過高 不定芽會(huì)出 現(xiàn)畸變 不利于繼續(xù)生長(zhǎng) null內(nèi)源激素含量是導(dǎo)致分化的 主要原因 后續(xù)可以測(cè)量再生過程中外植體細(xì)胞分裂 素含量變化 進(jìn)一步分析相關(guān)激素的基因表達(dá)差異 從 而闡述再生的機(jī)制 null此外 暗培養(yǎng)也是誘導(dǎo)不定芽的關(guān) 鍵因素之一 可以減少酚類物質(zhì)的產(chǎn)生 防止褐化 而 暗培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)促進(jìn)愈傷生長(zhǎng) 時(shí)間過短則不能產(chǎn) 生不定芽 15 在本研究中暗培養(yǎng) 12d 高于 10d 時(shí)的誘 導(dǎo)率 null 綜上 本研究從外源植物激素的組合 null質(zhì)量濃度與 暗培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)等方面優(yōu)化了微型月季的組培快繁配方 結(jié)果表明 微型月季適宜的消毒方式為 75 酒精處理 30s 5 NaClO 消毒 6min 腋芽萌發(fā)的最適培養(yǎng)基為 MS 0 05mg L NAA 3 0mg L 6 BA 培 養(yǎng) 基 MS 1 5 20mg L 6 BA 0 1mg L NA 可促進(jìn)組培苗增殖 組培苗生根過程中 NA 與 IBA 組合使用顯著優(yōu)于單 一激素處理 葉片直接再生不定芽的品種以 null灌木小伊 甸園 null較為適宜 培養(yǎng)條件以暗培養(yǎng) 12d 培養(yǎng)基 MS 0 05mg L NAA 1 0mg L TDZ 10mg L AgNO 3 100mg L CH 為最佳 不定芽誘導(dǎo)率為 23 58 null本研究為微型月 季繁殖提供了完善的組培快繁方式 通過葉片誘導(dǎo)不 定芽的方式實(shí)現(xiàn) null灌木小伊甸園 null的再生 為微型月季 多品種的推廣生產(chǎn)和種質(zhì)改良奠定基礎(chǔ) null 收稿 2023 05 11 參考文獻(xiàn) 1 陳俊愉 中國(guó)花卉品種分類學(xué) M 北京 中國(guó)林業(yè)出版社 2001 2 李淑斌 王煒佳 吳高瓊 等 月季組學(xué)及其開花習(xí)性和花香性狀研 究進(jìn)展 J 園藝學(xué)報(bào) 2019 46 05 995 1010 3 鐘光躍 黃平 楊敏 等 月季分類方法及其研究進(jìn)展 J 南方農(nóng)業(yè) 2020 14 31 69 4 孫憲芝 北林月季雜交育種技術(shù)體系初探 D 北京 北京林業(yè)大學(xué) 2004 5 武榮花 劉引 卜燕華 等 北京地區(qū) 138 個(gè)月季品種夏秋觀賞效果 綜合評(píng)價(jià) J 中國(guó)園林 2021 37 10 118 122 6 王鐳 張英杰 張京偉 等 月季組培快繁技術(shù)研究進(jìn)展 J 黑龍江農(nóng) 業(yè)科學(xué) 2019 06 179 182 7 李彥江 微型月季扦插與組培快繁體系的建立與優(yōu)化 D 南京 南 京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019 8 Hsia C Korban S S Organogenesis and somatic embryogenesis in callus cultures of Rosa hybrida and Rosa chinensis minima J Plant cell tissue and organ culture 1996 44 1 1 6 9 馮歡 易姝利 謝佳恒 等 微型月季愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生 J 植 物學(xué)報(bào) 2014 49 05 595 602 10 Burger D W C U Liu L Zary K W et al Organogenesis and plant re generation from immature embryos of Rosa hybrida L J Plant cell tissue and organ culture 1990 21 2 147 152 11 Nguyen T H N Winkelmann T Debener T Genetic analysis of callus formation in a diversity panel of 96 rose genotypes J Plant cell tissue and organ culture 2020 142 3 505 517 12 楊瑩瑩 周云鶴 黃文鏡 等 月季胚性愈傷的誘導(dǎo)及體細(xì)胞胚的發(fā) 生 J 分子植物育種 2020 18 23 7854 7859 13 包穎 月季不同途徑再生體系的建立與優(yōu)化及遺傳轉(zhuǎn)化的研究 D 武漢 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010 14 溫佳辛 王超林 馮慧 等 月季花色研究進(jìn)展 J 園藝學(xué)報(bào) 2021 48 10 2044 2056 15 咸宏康 支秋娟 李卉 等 金櫻子 Rosa laevigata Michx 葉片直接 再生不定芽體系的建立 J 北方園藝 2019 13 93 100 16 任杰 林榕王燕等 豐花月季杏花村組培快繁條件篩選 J 熱帶 農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021 41 10 66 72 17 Bredmose N Kristiansen K Nrbk R et al Changes in Concentrations of Cytokinins CKs in Root and Axillary Bud Tissue of Miniature Rose Suggest that Local CK Biosynthesis and Zeatin Type CKs Play Impor tant Roles in Axillary Bud Growth J Journal of plant growth regulation 2005 24 3 238 18 Xing W Bao M Qin H et al Micropropagation of Rosa rugosa Through Axillary Shoot Proliferation J Acta biologica cracoviensia Series Botanica 2010 52 2 69 19 王錢 五種月季品種的快繁和再生體系的優(yōu)化探究 D 合肥 安 徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2020 20 Pacurar D I Perrone I Bellini C et al Auxin is a central player in the hormone cross talks that control adventitious rooting J Physiologia plantarum 2014 151 1 83 96 21 張治 植物生理學(xué) M 北京 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 2022 2 廖偉彪 張美玲 楊永花 等 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度和處理時(shí)間對(duì)月 季扦插生根的影響 J 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2012 47 03 47 51 23 孫大寬 馬莉 楊宏艷 等 3 種因素對(duì)木棉組培苗生根的影響 J 云 南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2022 37 01 137 144 24 周俊輝 楊寅桂劉義存等 微型月季的試管開花誘導(dǎo)研究 J 江西 農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2008 03 504 508 25 Nguyen N H Van Le B A simple economical and high efficient pro tocol to produce in vitro miniature rose J In vitro cellular develop mental biology Plant 2020 56 3 362 365 26 Vu N H Anh P H Nhut D T The role of sucrose and different cy tokinins in the in vitro floral morphogenesis of rose hybrid tea cv nullFirst Prize null J Plant cell tissue and organ culture 2006 87 3 315 320 27 任桂芳 王建紅馮慧等 現(xiàn)代月季 Rosa hybrida 葉片植株再生體 系的建立 J 園藝學(xué)報(bào) 2004 04 533 536 28 李敬蕊 月季再生體系的建立及葉盤法轉(zhuǎn)化月季 null薩蔓莎 null的研究 D 武漢 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006 29 張健 王璐 袁嘉瑋 等 魯麗蘋果植株再生體系的建立 J 種子 2022 41 09 127 133 試驗(yàn)研究 現(xiàn)代園藝 2024 年第 7 期 null