中國農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023 56 15 2907 2918 Scientia Agricultura Sinica doi 10 3864 j issn 0578 1752 2023 15 006 收稿日期 2023 04 26 接受日期 2023 06 06 基金項目 國家自然科學(xué)基金 31972482 國家重點研發(fā)計劃 2022YFD1601500 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程 CAAS ASTIP IVFCAAS 國 家大宗蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 CARS 23 聯(lián)系方式 柴阿麗 E mail chaiali 楊紅敏 E mail 2575964580 柴阿麗和楊紅敏為同等貢獻作者 通信作者李寶聚 E mail libaojuivf 開放科學(xué) 資源服務(wù) 標(biāo)識碼 OSID 濕度調(diào)控設(shè)施黃瓜棒孢葉斑病菌產(chǎn)孢和釋放規(guī)律 及防治技術(shù) 柴阿麗 1 楊紅敏 1 2 王少驊 1 趙昆 1 高葦 3 石延霞 1 謝學(xué)文 1 李磊 1 范騰飛 1 李寶聚 1 1 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所 蔬菜生物育種全國重點實驗室 北京 100081 2 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院 沈陽 110866 3 天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院植 物保護研究所 天津 300381 摘要 目的 由多主棒孢 Corynespora cassiicola 侵染引起的棒孢葉斑病給黃瓜產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失 產(chǎn)孢和 釋放是多主棒孢實現(xiàn)再侵染的關(guān)鍵環(huán)節(jié) 論文旨在探究設(shè)施栽培條件下多主棒孢產(chǎn)孢 釋放規(guī)律 濕度對多主棒孢產(chǎn)孢 釋放的影響 以及黃瓜棒孢葉斑病防治的最佳施藥方式和施藥時間 方法 通過測定黃瓜發(fā)病葉片 0 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 和 21 0 0 產(chǎn)孢量 分析多主棒孢的產(chǎn) 孢規(guī)律 在春 夏 秋 冬 不同季節(jié) 分別測定一天 之 內(nèi) 0 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 21 00 時棚室空氣樣本中多主棒孢濃度 分析多主 棒孢釋放的日變 化規(guī)律 在人工氣候暴露倉和塑料拱棚內(nèi) 分別設(shè)置持續(xù)高濕 相對濕度 90 24 h 持續(xù)干燥 相對濕度 60 24 h 先高濕 12 h 后干燥 12 h 先干燥 12 h 后高濕 12 h 等不同的濕度水平 研究不同濕度條件對多主棒孢產(chǎn)孢 釋放的影響 比較 60 多菌靈 乙霉威可濕性粉劑和 5 億活菌 g 熒光假單胞桿菌可濕性粉劑 噴霧法和彌粉法施藥方式 不同施藥時間對 黃瓜棒孢葉斑病的防治效果和對空間病原菌的殺滅效果 結(jié)果 多主棒孢產(chǎn)孢 釋放數(shù)據(jù)顯示 一天內(nèi)不同時間 黃瓜 發(fā)病葉片病斑產(chǎn)孢量和棚室空間孢子濃度均存在顯著性差異 而且二者存在此消彼長的互補關(guān)系 夜間 18 00 之后 隨著 高濕 相對濕度 90 持續(xù)時間延長 葉 片病斑產(chǎn)孢量增大 次日早上 6 00 病斑孢 子數(shù)達峰值 1 344 個孢子 cm 2 開風(fēng) 口后 棚室內(nèi)濕度降低 相對濕度 60 孢子釋放到棚室空間 中午 12 00 空氣中多主棒孢濃度達峰值 12 445 110 697 個孢子 m 3 不同季節(jié)棚室空間多主棒孢孢子濃度日變化規(guī)律一致 均表現(xiàn)為夜間高濕 相對濕度 90 產(chǎn)孢 白天低濕 相對濕度 60 釋放的趨勢 在人工氣候暴露倉和塑料拱棚內(nèi) 干濕交替條件下多主棒孢的產(chǎn)孢 釋放量更高 病情 擴展更快 顯著高于持續(xù)高濕或持續(xù) 干燥條件 用 60 多菌靈 乙霉威可濕性粉劑和 5 億活菌 g 熒光假單胞桿菌可濕性粉劑 在傍晚 19 00 彌粉法施藥 對黃瓜棒孢葉斑病防治效果最好 分別達到 80 60 和 75 08 對空間病原菌的殺滅效果達 84 以上 結(jié)論 濕度是影響多主棒孢產(chǎn)孢和釋放的關(guān)鍵環(huán)境因子 設(shè)施栽培干濕交替環(huán)境加快了多主棒孢的傳播和擴散 彌粉法施藥的防治效果優(yōu)于噴霧施藥 最佳施藥時間為孢子大量繁殖前的傍晚或晚上 研究結(jié)果有助于制定黃瓜棒孢葉斑 病的高效防控策略 關(guān)鍵詞 黃瓜棒孢葉斑病 多主棒孢 濕度 產(chǎn)孢 釋放 彌粉法施藥 施藥時間 Effect of Humidity on Sporulation and Release of Corynespora cassiicola and Control Technology CHAI ALi 1 YANG HongMin 1 2 WANG ShaoHua 1 ZHAO Kun 1 GAO Wei 3 SHI YanXia 1 XIE XueWen 1 LI Lei 1 FAN TengFei 1 LI BaoJu 1 2908 中 國 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 56卷 1 Institute of Vegetables and Flowers Chinese Academy of Agricultural Sciences State Key Laboratory of Vegetable Biobreeding Beijing 100081 2 College of Plant Protection Shenyang Agricultural University Shenyang 110866 3 Institute of Plant Protection Tianjin Academy of Agricultural Sciences Tianjin 300381 Abstract Objective Cucumber target leaf spot caused by Corynespora cassiicola has brought great economic losses to the cucumber industry Sporulation and release of C cassiicola spores play a significant role in the epidemiology of the disease In this study the regularity and the effect of humidity on sporulation and release of C cassiicola and the optimal application method and time for control of cucumber target leaf spot were evaluated Method The sporulation regularity of C cassiicola was evaluated by quantifying the spore concentration on lesions of diseased cucumber leaves at 0 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 and 21 00 respectively The release regularity of C cassiicola was evaluated in different seasons of spring summer autumn and winter air samples were collected from naturally infested cucumber greenhouse at 0 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 and 21 00 respectively and the concentrations of C cassiicola in the air were evaluated The effect of relative humidity on sporulation and release of C cassiicola was also assessed in artificial climate exposure chambers and plastic greenhouses at four different humidity conditions of continuous high humidity RH 90 24 h continuous low humidity RH 60 24 h high humidity for 12 h followed by low humidity for 12 h and low humidity for 12 h followed by high humidity for 12 h The control efficiency of 60 carbendazim diethofencarb wettable powder WP and 500 million spores g Pseudomonas fluorescens WP on cucumber target leaf spot disease was compared by using powder spraying and water spraying at different application times in the field Result The study on the daily variation regularity of sporulation and release of C cassiicola showed significant differences in the quantity of spores on diseased leaves and in the greenhouse air at different times of the day There was a complementary relationship between the number of spores on diseased leaves and in the greenhouse air at the same time After 18 00 as the duration of high humidity RH 90 prolonged the number of spores on diseased leaves increased reaching a peak of 1 344 spores cm 2 at 6 00 the next day Then the humidity decreased gradually to RH 60 after opening the air vent of the greenhouse and spores were released into the greenhouse space At 12 00 the spore concentrations in the greenhouse air reached a peak of 12 445 110 697 spores m 3 In different seasons of spring summer autumn and winter the daily variation regularity of sporulation and release is consistent showing that C cassiicola produced a large amount of spores under high humidity RH 90 at night and released to greenhouses under low humidity RH 60 during the day In artificial climate exposure chambers and plastic greenhouses the highest quantity of C cassiicola spores was detected under alternating wet and dry conditions which was significantly higher than that under continuous high humidity or continuous low humidity condition By powder spraying at 19 00 60 carbendazim diethofencarb WP and 500 million spores g P fluorescens WP gave the best control efficiency of 80 60 and 75 08 respectively and the spore inhibition efficiency was higher than 84 Conclusion Humidity is a key environmental factor affecting the spore reproduction and release of C cassiicola The alternating day dry and night wet environment in the greenhouse promotes the reproduction and diffusion of C cassiicola and accelerates the spread of cucumber target leaf spot Powder spraying method is better than water spraying method for disease control and the best application time is the evening before spore reproduction The results of this study will contribute to the development of new strategies for the effective alleviation and control of cucumber target leaf spot Key words cucumber target leaf spot Corynespora cassiicola humidity sporulation release powder spraying application time 0 引言 研究意義 由多主棒孢 Corynespora cassiicola 引起的棒孢葉斑病是近 20 年黃瓜產(chǎn)區(qū)危害最重的病 害 該病害傳播速度快 田間流行規(guī)律不清楚 已有 的防治措施效果較差 1 3 多主棒孢寄主范圍廣泛 可 侵染 53 科 380 屬 530 多種植物 4 8 1993 年 該病害 在我國遼寧 河南保護地內(nèi)大面積發(fā)生 9 至今已遍 及山東 河北 北京等 19 個省 市 區(qū) 田間發(fā)病 率一般 10 25 嚴重時可達 60 70 甚至 100 對產(chǎn)業(yè)發(fā)展構(gòu)成嚴重威脅 已成為設(shè)施黃瓜 主要病害之一 10 11 病原菌的產(chǎn)孢和釋放是病害短時 間 大面積暴發(fā)的先決條件 12 明確設(shè)施環(huán)境中的 濕度對多主棒孢產(chǎn)孢 釋放的影響和調(diào)控 將有助于 提出科學(xué)有效 切實可行的生態(tài)防控策略 對設(shè)施黃 瓜優(yōu)質(zhì) 綠色 安全生產(chǎn)具有重要指導(dǎo)意義 前人 15 期 柴阿麗等 濕度調(diào)控設(shè)施黃瓜棒孢葉斑病菌產(chǎn)孢和釋放規(guī)律及防治技術(shù) 2909 研究進展 目前 高濕被認 為對許多病害的發(fā)生有重 大影響 相對濕度超過 85 維持 8 h 以上 番茄灰霉 病菌 Botrytis cinerea 才能連續(xù)侵染 13 黃瓜霜霉病 菌 Pseudoperonospora cubensis 侵染需要至少 2 h 的高濕條件 14 另外 當(dāng)葉片濕潤或空氣相對濕度為 100 時 黃瓜霜霉病菌產(chǎn)生大量孢子囊 相對濕度 低于 70 時 幾乎不產(chǎn)生孢子囊 15 子囊菌在高濕 或遇水條件下子囊吸水膨脹 囊壁破裂繼而將子囊孢 子彈射釋放 16 相對濕度降到 75 以下 苔蘚植物 蒴齒開放 孢子從孢蒴釋放而出 17 丁香假單胞菌 Pseudomonas syringae 等引起的細菌性病害一般在 雨后或持續(xù)高濕后暴發(fā) 18 惡疫霉 Phytophthora cactorum 完成顯癥發(fā)病至少需要持續(xù) 40 h 的濕潤時 間 19 課題組前期研究發(fā)現(xiàn) 濕度是影響多主棒孢產(chǎn) 孢量和孢子大小的主要因素 最適產(chǎn)孢相對濕度為 100 在高濕 相對濕度 100 條件下 多主棒孢 產(chǎn)孢量大 分生孢子細長 對黃瓜植株有致病性 在 低濕 相對濕度 75 條件下 多主棒孢產(chǎn)孢量小 分生孢子短寬 對黃瓜植株無致病性 20 本研究 切入點 然而設(shè)施栽培條件下 多主棒孢的產(chǎn)孢 釋 放規(guī)律 以及濕度對其產(chǎn)孢 釋放的調(diào)控機制尚不清 楚 目前生產(chǎn)中黃瓜棒孢葉斑病的防治以噴霧法施 藥為主 不但費時費力 而且增加棚內(nèi)濕度 病害 防治效果較差 擬解決的關(guān)鍵問題 探究設(shè)施栽 培條件下 晝夜干濕交替環(huán)境對多主棒孢產(chǎn)孢 釋 放的影響 明確黃瓜棒孢葉斑病防治的最佳施藥方式 和施藥時間 1 材料與方法 試驗于 2021 2022 年在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花 卉研究所國家蔬菜改良中心和中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院壽光蔬 菜研發(fā)中心溫室完成 1 1 供試菌株和黃瓜品種 供試菌株為黃瓜多主棒孢 HG14102524 保存于 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所蔬菜病害綜合防治課 題組 黃瓜 中農(nóng) 6 號 購自中蔬種業(yè)科技 北京 有限公司 1 2 主要設(shè)備和藥劑 ABI 7500 實時熒光定量 PCR 儀 美國 ABI 公司 3K15 型高速離心機 德國 Sigma 公司 微量移液器 德國 Eppendorf 公司 VB 55 型高壓濕熱滅菌器 德 國賽斯太克高壓滅菌技術(shù)有限公司 60 多菌靈 乙霉威可濕性粉劑 5 億孢子 g 熒光 假單胞桿菌可濕性粉劑 精量電動彌粉機 中蔬生物 壽光 科技有限公司 1 3 多主棒孢產(chǎn)孢規(guī)律 1 3 1 接種 產(chǎn)孢動態(tài)規(guī)律研究在活體發(fā)病黃瓜植 株上完成 供試黃瓜種子 55 溫湯浸種 30 min 后進 行催芽 待露白后播種至育苗缽 每缽 1 株 挑選兩 片真葉期長勢一致的植株進行接種 供試菌株在馬鈴 薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 potato dextrose agar PDA 28 黑暗培養(yǎng) 10 d 后 在培養(yǎng)皿中加入 10 mL 0 05 吐溫 20 使用無菌毛刷輕刷菌落 將菌絲和分生孢子 混合液通過 4 層紗布過濾 血球計數(shù)板調(diào)節(jié)懸浮液濃 度至 1 10 5 個孢子 mL 備用 采用點滴法接種 使用微量移液槍吸取 10 L 孢子懸浮液 接種至黃瓜葉片正面 每個葉片以主 脈為對稱軸從葉尖到葉基均分為 6 個區(qū)域 每個區(qū) 域中心接種 1 滴菌懸液 每株接種兩片真葉 每個 葉片接種 6 滴 接種后的黃瓜植株在 25 相對 濕度 98 2 人工氣候室培養(yǎng) 48 h 后 轉(zhuǎn)移至 15 18 夜晚 24 27 白天 的溫室繼續(xù) 培養(yǎng) 5 d 待黃瓜植株表現(xiàn)明顯的棒孢葉斑病癥狀 后備用 1 3 2 產(chǎn)孢日變化規(guī)律 挑選 6 株發(fā)病一致的黃瓜 植株 首先使用小風(fēng)扇從不同方向吹風(fēng) 去除病斑 表面已存在的孢子 然后轉(zhuǎn)移至日光溫室產(chǎn)孢柜 70 cm 60 cm 60 cm 內(nèi) 分別于 0 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 和 21 00 統(tǒng)計病斑孢子數(shù) 具體方法 使用透明膠帶輕輕粘 貼病斑正面 以添加 0 15 酸性品紅的甘油溶液作 為浮載劑 在光學(xué)顯微鏡 Nikon 80i 日本 100 倍視野下統(tǒng)計孢子個數(shù) 每個處理設(shè)置 3 次重復(fù) 每次重復(fù)統(tǒng)計 18 個病斑產(chǎn)孢量 通過公式 B N S 計算單位病斑面積多主棒孢的孢子數(shù) 式中 B 為 單位病斑面積多主棒孢的孢子數(shù) 個孢子 cm 2 N 為顯微鏡下多主棒孢的分生孢子數(shù) S 為病斑面積 cm 2 病斑面積通過記錄病斑的最長 L 和最 寬 W 長和寬垂直 利用公式 S 1 4 L W 來統(tǒng)計 每個產(chǎn)孢柜中放置溫濕度記錄儀 DL WS210 杭州盡享科技有限公司 每隔 5 min 記錄 溫濕度數(shù)據(jù) 1 4 日光溫室多主棒孢孢子釋放規(guī)律 1 4 1 自然發(fā)病溫室空氣微生物樣本采集 分別于 2021 年 5 月 春季 8 月 夏季 11 月 秋季 2022 年 2 月 冬季 在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院壽光蔬菜研 2910 中 國 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 56卷 發(fā)中心黃瓜棒孢葉斑病自然發(fā)病溫室進行 使用病原 菌收集儀 21 采集棚室空間微生物樣本 采集時間為每 天 00 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 21 00 每個季節(jié)分別采集 3 d 作為 3 次重 復(fù) 每次重復(fù)間隔 1 d 采樣前 將 600 L 無菌礦物 油 MACKLIN 均勻涂抹在直徑 90 mm 無菌鋁箔上 制備油膜平板 21 置于病原菌收集儀樣本采集倉內(nèi) 用于棚室空氣微生物樣本采集 收集儀放置在發(fā)病黃 瓜植株周圍 距離地面 1 5 m 采樣時間為 10 min 流量為 1 000 L min 1 采樣完畢后 樣本置于冰盒中 帶回實驗室 用于空氣中多主棒孢濃度的 qPCR 定量 分析 同時 調(diào)查黃瓜棒孢葉斑病的病情指數(shù) 采用 空氣溫濕度記錄儀 DL WS210 杭州盡享科技有限 公司 每隔 5 min 記錄黃瓜棚室內(nèi)溫濕度數(shù)據(jù) 并 對空氣中多主棒孢濃度與棚室內(nèi)溫濕度進行相關(guān)性 分析 1 4 2 空氣微生物樣本中多主棒孢檢測 將鋁箔油 膜置于 50 mL 離心管中 用管蓋壓住油膜少許 8 000 r min 離心 5 min 將離心管底部的石蠟油轉(zhuǎn)至 1 5 mL 離心管 加無菌水至 1 mL 12 000 r min 離心 2 min 棄上層石蠟油 底部沉淀用于 DNA 提取 DNA 提取 采用真菌基因組 DNA 提取試劑盒 DP305 03 博邁 德 北京 使用課題組前期篩選的多主棒孢特異性引 物 ga4F1 5 ATTGATGGGAATTGCTCTGC 3 和 ga4R1 5 CCTGCTCCGACTTTGTTGA 3 進行 qPCR 擴增 12 引物由北京博邁德科技有限公司合成 qPCR 反應(yīng)體系 20 L SYBR qPCR Master Mix 博邁 德 北京 10 L 上 下游引物各 0 4 L 50 Reference Dye ROX 加入 0 4 L DNA 模板 1 L 反應(yīng)條件 95 預(yù)變性 15 min 95 變性 10 s 60 退火 32 s 共 40 個循環(huán) 反應(yīng)結(jié)束后分析擴增曲線及熔解曲線 每個 qPCR 反應(yīng)進行 3 次重復(fù) 1 5 濕度對多主棒孢產(chǎn)孢和釋放的影響 1 5 1 人工模擬濕度對多主棒孢產(chǎn)孢和釋放的影 響 試驗在人工氣候暴露倉內(nèi)完成 暴露倉由有機 玻璃制成 長 寬 高分別為 70 60 60 cm 4 個 暴露倉分別設(shè)置不同的濕度條件 持續(xù)高濕 相對 濕度 90 24 h 持續(xù)干燥 相對濕度 60 24 h 先干燥后高濕 相對濕度 60 12 h 相 對濕度 90 12 h 先高濕后干燥 相對濕度 90 12 h 相對濕度 60 12 h 暴露倉內(nèi)空氣 溫度由空調(diào)控制在 25 2 濕度調(diào)控主要通過加 濕器 SC EB35B 北京亞都環(huán)?？萍加邢薰?產(chǎn)生 的濕潤氣流經(jīng) HEPA 濾膜進入暴露倉加濕 干燥通過 在暴露倉內(nèi)放置吸附干燥劑變色硅膠 S821279 上 海麥克林生化科技股份有限公司 進行調(diào)控 每個暴 露倉分別放置溫濕度記錄儀 每隔 5 min 記錄黃瓜棚 室內(nèi)溫濕度數(shù)據(jù) 黃瓜幼苗 2 3 葉期 采用點滴法接種后 挑選發(fā) 病一致的植株轉(zhuǎn)移至暴露倉內(nèi) 不同濕度條件下處理 3 d 后 采用病原菌收集儀 收集暴露倉內(nèi)空氣樣本到 鋁箔油膜上 qPCR 定量檢測多主棒孢濃度 同時 調(diào)查各處理黃瓜的發(fā)病情況 按病斑占葉片面積的百 分率進行分級 0 級 無病斑 1 級 0 5 3 級 6 25 5 級 26 50 7 級 51 75 9 級 76 100 病情指數(shù) 各級病葉數(shù) 相對級 數(shù)值 調(diào)查總?cè)~數(shù) 9 試驗設(shè)置 3 次重復(fù) 每 個暴露倉為 1 次重復(fù) 1 5 2 溫室濕度對多主棒孢產(chǎn)孢和釋放的影響 試 驗在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院壽光蔬菜研發(fā)中心塑料拱棚完 成 每個拱棚長 18 m 寬 6 m 拱棚兩側(cè)設(shè)有通風(fēng) 口 黃瓜 5 6 片真葉期 噴霧接種濃度 1 10 5 個 孢子 mL 的孢子懸浮液 保濕培養(yǎng) 2 d 待黃瓜植株 均勻發(fā)病后進行試驗 3 個拱棚分別設(shè)置不同的濕 度條件 持續(xù)高濕 棚室 24 h 封閉 相對濕度 90 持續(xù)干燥 相對濕度 60 風(fēng)口 24 h 打 開 干濕交替 8 00 18 00 風(fēng)口打開 相對 濕度 60 18 00 至次日 8 00 棚室封閉 相對 濕度 90 持續(xù)處理 3 d 每個拱棚分別于處理前 及處理后 用病原菌收集儀收集拱棚內(nèi)空氣樣本到 鋁箔油膜上 qPCR 定量檢測空氣中多主棒孢濃度 同時 調(diào)查各處理黃瓜的發(fā)病情況 3 個拱棚分別 放置溫濕度記錄儀 每隔 5 min 記錄黃瓜拱棚內(nèi)溫 濕度數(shù)據(jù) 試驗分別于 2022 年 3 月 4 月 5 月進 行 3 次重復(fù) 1 6 不同施藥方式和施藥時間對黃瓜棒孢葉斑病的 防治效果 試驗在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院壽光蔬菜研發(fā)中心塑料拱 棚完成 待黃瓜長至 10 片真葉時 噴霧接種濃度 1 10 5 個孢子 mL 的孢子懸浮液 接種后第 2 天 用 化學(xué)農(nóng)藥 60 多菌靈 乙霉威可濕性粉劑和生物農(nóng)藥 5 億活菌 g 熒光假單胞桿菌可濕性粉劑進行防治 分別采用噴霧法和彌粉法兩種施藥方式 在 8 00 16 00 和 19 00 施藥 調(diào)查對黃瓜棒孢葉斑病的防 治效果以及對空間病原菌的殺滅效果 空間病原菌孢 子滅殺效果 不施藥處理棚室空間孢子濃度 施藥后 15 期 柴阿麗等 濕度調(diào)控設(shè)施黃瓜棒孢葉斑病菌產(chǎn)孢和釋放規(guī)律及防治技術(shù) 2911 棚室空間孢子濃度 不施藥處理棚室空間孢子濃度 以接病原菌 不施藥為對照 試驗于 2022 年 3 月 5 月 10 月分別重復(fù) 3 次 噴霧法施藥使用背負式電動噴霧器 3WBD 20L 山東先瑞智能科技有限公司 彌粉法施藥使用手 持式精量電動彌粉機 中蔬生物壽光有限公司 噴粉前將拱棚風(fēng)口關(guān)閉 噴粉管與地面呈 45 對空施 藥 以防止微粉飄散 噴霧法和彌粉法施藥 每次 用藥量均為 50 g 667 m 2 噴霧法施藥按 60 L 667 m 2 兌水量進行葉面噴霧 待對照開始發(fā)病后 采用病 原菌收集儀 收集各處理拱棚內(nèi)空氣樣本到鋁箔油 膜上 qPCR 定量檢測空氣中多主棒孢濃度 同時 調(diào)查各處理黃瓜的發(fā)病情況 計算防治效果 防治 效果 100 對照病情指數(shù) 處理病情指數(shù) 對照病情指數(shù) 1 7 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)采用 Microsoft Excel 2021 整理匯總 SigmaPlot 14 0 作圖 使用 SPSS 23 0 統(tǒng)計分析軟件進 行方差分析 運用 Duncan 法進行顯著性檢驗 2 結(jié)果 2 1 多主棒孢產(chǎn)孢規(guī)律 黃瓜棒孢葉斑病病株置于產(chǎn)孢柜 分別于不同時 間點統(tǒng)計病斑產(chǎn)孢量 濕度數(shù)據(jù)顯示 下午 15 00 之后 產(chǎn)孢柜內(nèi)溫度逐漸降低 相對濕度逐漸上升 18 00 至次日 6 00 產(chǎn)孢柜內(nèi)相對濕度持續(xù)在 90 以上 早上 9 00 開始 產(chǎn)孢柜內(nèi)溫度逐漸上升 相 對濕度逐漸下降 至 12 00 15 00 相對濕度達到 最低 圖 1 A 產(chǎn)孢數(shù)據(jù)顯示 夜間 18 00 后 隨著高濕 相對 濕度 90 持續(xù)時間延長 單位面積病斑產(chǎn)孢數(shù)逐漸 增多 到次日早上 6 00 葉片病斑上的孢子數(shù)量最多 達 1 344 個孢子 cm 2 之后 隨著溫度逐漸升高 相對 濕度逐漸降低 病斑孢子數(shù)又趨于降低 下午 15 00 葉片病斑產(chǎn)孢數(shù)降至最低值 整體分析 白天低濕 相 對濕度 60 葉片病斑上多主棒孢的產(chǎn)孢量少 夜 間高濕 相對濕度 90 病斑產(chǎn)孢量多 圖 1 B 因此 高濕是多主棒孢產(chǎn)孢繁殖的必要條件 10 20 30 40 50 0 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 21 00 24 00 時間 Time 溫度 Temperature 20 40 60 80 100 相對濕度 Relati ve hu mi di ty 0 300 600 900 1200 1500 0 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 21 00 病斑單位面積產(chǎn)孢數(shù) Co ncentrati on of C cas s ii cola spor e s cm 2 溫度 Temperature 相對濕度 Relative humidity 0 時間 Time AB A 產(chǎn)孢柜內(nèi)溫濕度變化 Temperature and relative humidity in artificial sporulation cabinet B 黃瓜棒孢葉斑病單位面積病斑孢子數(shù) The concentration of C cassiicola on leave lesions of cucumber target leaf spot 圖 1 多主棒孢產(chǎn)孢規(guī)律及產(chǎn)孢柜內(nèi)溫濕度變化 Fig 1 Sporulation regularity of C cassiicola and temperature and relative humidity change in sporulation cabinet 2 2 日光溫室多主棒孢孢子釋放規(guī)律 qPCR 檢測結(jié)果表明 一天內(nèi)不同時間棚室空氣 中多主棒孢孢子濃度存在顯著性差異 與相對濕度呈 負相關(guān) R 2 0 643 0 859 與溫度呈正相關(guān) R 2 0 614 0 972 從上午 6 00 開始 棚室內(nèi)溫度逐漸 升高 相對濕度逐漸降低 空氣中多主棒孢濃度也隨 之逐漸增加 到中午 12 00 棚室內(nèi)溫度達到峰值 30 3 41 9 相對濕度達到低谷 31 7 53 0 棚室空氣中多主棒孢孢子濃度也達到最高 值 春季 夏季 秋季 冬季分別為 23 368 110 697 64 882 和 12 445 個孢子 m 3 之后 隨著溫度逐漸降 低 棚室內(nèi)相對濕度逐漸增大 空氣中多主棒孢濃度 2912 中 國 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 56卷 也隨之逐漸降低 夜間 0 00 3 00 溫度達到最低值 14 6 22 7 相對濕度最高 90 空氣 中多主棒孢濃度也降至最低 不同季節(jié)孢子濃度范圍 為 780 1 201 個孢子 m 3 不同季節(jié)棚室內(nèi)相對濕度 和孢子濃度變化均呈相反趨勢 表現(xiàn)為夜間相對濕度 升高 空間病原菌孢子濃度降低 白天相對濕度降低 空間病原菌孢子濃度升高 圖 2 表 1 因此 推測 濕度降低是多主棒孢孢子主動釋放的必要條件 表 1 不同季節(jié)日光溫室多主棒孢孢子釋放規(guī)律及病情指數(shù) Table 1 Regularity of spore release of C cassiicola in different seasons and disease index in greenhouses 孢子濃度 Spore concentration spores m 3 時間 Time 0 00 3 00 6 00 9 00 12 00 15 00 18 00 21 00 病情指數(shù) Disease index 春 2021 年 5 月 Spring 2021 05 823 44 971 171 3309 531 12943 763 23368 159 11016 2 3335 213 1723 579 43 20 夏 2021 年 8 月 Summer 2021 08 779 46 1001 201 55629 853 72313 823 110697 685 82148 172 69252 150 33653 135 59 82 秋 2021 年 11 月 Autumn 2021 11 823 48 1201 180 16880 994 46883 910 64882 990 31170 991 4755 908 2378 780 53 85 冬 2022 年 2 月 Winter 2022 02 780 50 960 45 1683 835 5600 667 12445 774 1804 541 861 29 31 5 39 46 表中數(shù)據(jù)為平均值 標(biāo)準(zhǔn)差 n 3 表 2 同 Data are shown as the mean standard deviation SD The same as Table 2 2 3 濕度條件對多主棒孢產(chǎn)孢和釋放的影響 分析了人工模擬不同濕度條件對多主棒孢產(chǎn)孢 釋放和病情發(fā)展的影響 結(jié)果顯示 先高濕后干燥條 件下 暴露倉空氣中多主棒孢濃度最高 49 892 個孢子 m 3 病情最嚴重 病情指數(shù)為 63 22 其次為先干燥 后高濕和持續(xù)高濕條件下 暴露倉內(nèi)多主棒孢濃度分 別為 23 301 和 12 463 個孢子 m 3 病情指數(shù)為 58 29 和 54 45 持續(xù)干燥條件下 暴露倉內(nèi)多主棒孢濃度最 低 為 3 836 個孢子 m 3 病情指數(shù)為 51 72 圖 3 說明先高濕后干燥條件有利于多主棒孢產(chǎn)孢 釋放和 病害傳播 塑料拱棚內(nèi)干濕交替處理條件下 拱棚內(nèi)夜間相 對濕度 63 28 95 17 白天相對濕度 32 67 63 28 棚室空氣中多主棒孢孢子濃度增加值最大 為 16 868 個孢子 m 3 病情指數(shù)由處理前 24 28 增至 40 76 持續(xù)高濕 拱棚內(nèi)相對濕度 63 93 100 00 或持續(xù)干燥 拱棚內(nèi)相對濕度 28 97 65 37 條件 下 多主棒孢濃度和病情指數(shù)變化差異不顯著 多主 棒孢濃度增大值分別為 9 911 和 10 195 個孢子 m 3 病 情指數(shù)分別由 25 00 增至 31 27 24 11 增至 34 08 圖 4 說明設(shè)施栽培晝夜干濕交替環(huán)境促進了多主棒孢 的夜間高濕產(chǎn)孢繁殖和白天低濕釋放 加快了病菌的 傳播和擴散 加劇了病害的發(fā)生 2 4 不同施藥方式和施藥時間下黃瓜棒孢葉斑病的 防治效果 依據(jù)棚室內(nèi)的溫度 空氣中孢子量及農(nóng)戶習(xí)慣性 選擇上午 8 00 下午 16 00 和傍晚 19 00 3 個施藥 時間 在棚室內(nèi)比較噴霧法和彌粉法兩種施藥方式對黃 瓜棒孢葉斑病的防治效果和對空間病原菌的殺滅效果 施藥量相同 彌粉法施藥對黃瓜棒孢葉斑病的防 治效果和孢子滅殺效果顯著高于噴霧法施藥 60 多 菌靈 乙霉威可濕性粉劑 8 00 16 00 和 19 00 彌 粉法施藥 對黃瓜棒孢葉斑病的防治效果分別為 63 45 74 64 和 80 60 顯著高于噴霧法施藥的防 治效果 41 58 42 26 和 43 45 彌粉法施藥對空 間病原菌殺滅效果在 71 81 以上 顯著高于噴霧法施 藥殺滅效果 52 52 58 12 同樣 5 億活菌 g 熒光 假單胞桿菌可濕性粉劑 8 00 16 00 和 19 00 彌粉 法施藥 對黃瓜棒孢葉斑病的防治效果分別為 59 13 66 14 和 75 08 顯著高于噴霧法施藥的防 治效果 38 69 40 67 和 41 55 彌粉法施藥對空 間病原菌殺滅效果在 72 28 以上 顯著高于噴霧法施 藥殺滅效果 64 81 70 53 因此 彌粉法適時施藥 提高了化學(xué)農(nóng)藥和生物農(nóng)藥的田間防治效果 表 2 施藥量相同 傍晚或晚上施藥對黃瓜棒孢葉斑病 的防治效果和棚室空間孢子滅殺效果高于白天施藥 60 多菌靈 乙霉威可濕性粉劑和 5 億活菌 g 熒光假單 胞桿菌可濕性粉劑傍晚 19 00 彌粉法施藥 對黃瓜棒 孢葉斑病的防治效果分別為 84 12 和 85 80 顯著 高于上午 8 00 彌粉法施藥的防治效果 71 81 和 72 28 因此 病害