農(nóng) 業(yè) 環(huán) 境 科 學(xué) 學(xué) 報(bào) J o u r n a l o f A g r o E n v i r o n m e n t S c i e n c e 2 0 2 2 4 1 1 2 2 8 0 5 2 8 0 9 2 0 2 2 年 1 2 月 張 寅 寅 黑 多 爾 劉 玥 婷 等 荷 蘭 進(jìn) 境 百 合 種 球 中 線 蟲(chóng) 的 分 離 及 分 子 鑒 定 J 農(nóng) 業(yè) 環(huán) 境 科 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2 0 2 2 4 1 1 2 2 8 0 5 2 8 0 9 Z H A N G Y Y H E I D E L I U Y T e t a l I s o l a t i o n a n d m o l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o n o f n e m a t o d e s i n t e r c e p t e d f r o m i m p o r t e d N e t h e r l a n d s l i l y b u l b s J J o u r n a l o f A g r o E n v i r o n m e n t S c i e n c e 2 0 2 2 4 1 1 2 2 8 0 5 2 8 0 9 開(kāi) 放 科 學(xué) O S I D 荷 蘭 進(jìn) 境 百 合 種 球 中 線 蟲(chóng) 的 分 離 及 分 子 鑒 定 張 寅 寅 黑 多 爾 劉 玥 婷 李 鑫 大 連 海 關(guān) 技 術(shù) 中 心 遼 寧 大 連 1 1 6 0 0 1 I s o l a t i o n a n d m o l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o n o f n e m a t o d e s i n t e r c e p t e d f r o m i m p o r t e d N e t h e r l a n d s l i l y b u l b s Z H A N G Y i n y i n H E I D u o e r L I U Y u e t i n g L I X i n T e c h n o l o g y C e n t e r o f D a l i a n C u s t o m s D a l i a n 1 1 6 0 0 1 C h i n a A b s t r a c t T h e i n c r e a s i n g i m p o r t o f t h e N e t h e r l a n d s l i l y b u l b s o v e r t h e y e a r s h a s m e a n t i n t r o d u c t i o n o f a v a r i e t y o f p e s t s i n t o t h e c o u n t r y a n d o n e s u c h n e m a t o d e p e s t h a s t u r n e d i n t o r i s k e n d a n g e r i n g t h e n a t i o n a l b i o s a f e t y Q u a r a n t i n e a n d i d e n t i f i c a t i o n o f n e m a t o d e s a r e t h u s i m p e r a t i v e T h i s p a p e r p r o v i d e s r e f e r e n c e f o r t h e q u a r a n t i n e o f i m p o r t e d s e e d l i n g s a n d f l o w e r s t o v a r i o u s p o r t s a n d t h e s u p e r v i s i o n o f p l a n t i n g s i t e s I n t h i s s t u d y m o r p h o l o g y B e e m a n f u n n e l m e t h o d c o m b i n e d w i t h m o l e c u l a r b i o l o g i c a l m e t h o d s D N A e x t r a c t i o n a n d P C R a m p l i f i c a t i o n w e r e u s e d t o q u a r a n t i n e a n d i d e n t i f y p l a n t p a r a s i t i c n e m a t o d e s i s o l a t e d f r o m l i l y b u l b s T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h r e e s p e c i e s o f p l a n t p a r a s i t i c n e m a t o d e s w e r e f o u n d P r a t y l e n c h u s p e n e t r a n s A p h e l e n c h o i d e s b l a s t o p h t h o r u s a n d A p h e l e n c h u s a v e n a e T h e r e s u l t s a l s o i n d i c a t e d t h a t t h e q u a n t i t y o f n e m a t o d e s i s o l a t e d f r o m t h e i m p o r t e d l i l y b u l b s w a s l i m i t e d w i t h m o s t b e i n g l a r v a e a s i s i t d i f f i c u l t t o a c c u r a t e l y i d e n t i f y n e m a t o d e s b a s e d o n t h e i r m o r p h o l o g y t h i s p r o c e s s n e e d e d t o b e s u p p l e m e n t e d b y m o l e c u l a r b i o l o g i c a l m e t h o d s t o e n s u r e t h e a c c u r a c y o f t h e r e s u l t s K e y w o r d s N e t h e r l a n d s l i l y b u l b n e m a t o d e m o l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o n 收 稿 日 期 2 0 2 2 1 1 1 0 錄 用 日 期 2 0 2 2 1 2 0 6 作 者 簡(jiǎn) 介 張 寅 寅 1 9 8 7 女 遼 寧 大 連 人 碩 士 從 事 植 物 檢 疫 工 作 E m a i l 2 0 3 5 4 2 5 6 1 0 q q c o m 黑 多 爾 與 張 寅 寅 同 等 貢 獻(xiàn) 通 信 作 者 李 鑫 E m a i l 1 4 8 2 6 1 5 5 q q c o m 基 金 項(xiàng) 目 十 四 五 國(guó) 家 重 點(diǎn) 研 發(fā) 計(jì) 劃 課 題 2 0 2 1 Y F D 1 4 0 0 1 0 0 P r o j e c t s u p p o r t e d T h e N a t i o n a l K e y R e s e a r c h a n d D e v e l o p m e n t P r o j e c t D u r i n g t h e 1 4 t h F i v e Y e a r P l a n o f C h i n a 2 0 2 1 Y F D 1 4 0 0 1 0 0 摘 要 隨 著 荷 蘭 百 合 種 球 的 進(jìn) 口 量 逐 年 增 加 其 極 易 攜 帶 多 種 有 害 生 物 入 境 線 蟲(chóng) 傳 入 風(fēng) 險(xiǎn) 隨 之 增 大 危 害 國(guó) 門 生 物 安 全 因 此 對(duì) 其 準(zhǔn) 確 的 檢 疫 鑒 定 十 分 重 要 本 文 采 用 形 態(tài) 學(xué) 改 良 貝 曼 漏 斗 法 結(jié) 合 分 子 生 物 學(xué) 方 法 D N A 提 取 及 P C R 擴(kuò) 增 對(duì) 百 合 種 球 中 分 離 到 的 植 物 寄 生 線 蟲(chóng) 進(jìn) 行 分 離 鑒 定 最 終 鑒 定 出 3 個(gè) 種 類 分 別 為 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) P r a t y l e n c h u s p e n e t r a n s 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) A p h e l e n c h o i d e s b l a s t o p h t h o r u s 和 燕 麥 真 滑 刃 線 蟲(chóng) A p h e l e n c h u s a v e n a e 研 究 表 明 在 進(jìn) 境 百 合 種 球 中 分 離 到 的 線 蟲(chóng) 數(shù) 量 有 限 幼 蟲(chóng) 較 多 無(wú) 法 通 過(guò) 形 態(tài) 學(xué) 準(zhǔn) 確 鑒 定 應(yīng) 結(jié) 合 分 子 生 物 學(xué) 方 法 保 證 結(jié) 果 的 準(zhǔn) 確 性 關(guān) 鍵 詞 荷 蘭 百 合 種 球 線 蟲(chóng) 分 子 鑒 定 中 圖 分 類 號(hào) S 4 3 6 8 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 A 文 章 編 號(hào) 1 6 7 2 2 0 4 3 2 0 2 2 1 2 2 8 0 5 0 5 d o i 1 0 1 1 6 5 4 j a e s 2 0 2 2 1 1 4 1 隨 著 國(guó) 內(nèi) 鮮 花 消 費(fèi) 需 求 的 逐 步 提 升 優(yōu) 質(zhì) 百 合 花 的 需 求 量 逐 年 增 加 荷 蘭 是 世 界 上 最 大 的 百 合 種 球 等 花 卉 生 產(chǎn) 國(guó) 1 我 國(guó) 每 年 從 荷 蘭 進(jìn) 口 大 量 百 合 種 球 其 已 成 為 我 國(guó) 主 要 的 鮮 切 花 品 種 百 合 種 球 極 易 攜 帶 線 蟲(chóng) 隨 貿(mào) 易 進(jìn) 入 我 國(guó) 2 近 年 來(lái) 在 我 國(guó) 口 岸 檢 疫 工 作 中 多 次 截 獲 重 要 線 蟲(chóng) 3 4 線 蟲(chóng) 是 一 種 最 難 鑒 定 的 動(dòng) 物 之 一 目 前 隨 著 分 子 生 物 學(xué) 的 不 斷 發(fā) 展 基 于 D N A 的 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 方 法 已 廣 泛 應(yīng) 用 于 線 蟲(chóng) 的 檢農(nóng) 業(yè) 環(huán) 境 科 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 4 1 卷 第 1 2 期 疫 鑒 定 中 國(guó) 內(nèi) 外 的 研 究 人 員 主 要 采 用 線 蟲(chóng) 1 8 S 2 8 S 核 糖 體 基 因 I T S 區(qū) 和 線 粒 體 基 因 的 核 苷 酸 序 列 作 為 識(shí) 別 線 蟲(chóng) 的 條 形 碼 以 建 立 線 蟲(chóng) 的 D N A 分 類 學(xué) 5 近 年 來(lái) 以 上 述 序 列 作 為 分 子 標(biāo) 記 在 線 蟲(chóng) 鑒 定 中 得 到 廣 泛 應(yīng) 用 6 7 尤 其 在 口 岸 截 獲 線 蟲(chóng) 為 幼 蟲(chóng) 近 似 種 難 以 區(qū) 分 時(shí) 常 采 用 形 態(tài) 學(xué) 方 法 與 分 子 生 物 學(xué) 技 術(shù) 相 結(jié) 合 的 綜 合 鑒 定 方 法 8 9 以 保 證 鑒 定 結(jié) 果 的 準(zhǔn) 確 性 本 文 針 對(duì) 進(jìn) 境 的 荷 蘭 百 合 種 球 進(jìn) 行 線 蟲(chóng) 分 離 采 用 形 態(tài) 學(xué) 初 步 判 斷 結(jié) 合 分 子 生 物 學(xué) 技 術(shù) 進(jìn) 行 檢 疫 鑒 定 最 終 獲 得 植 物 寄 生 線 蟲(chóng) 3 種 本 研 究 為 進(jìn) 境 種 苗 花 卉 中 線 蟲(chóng) 的 檢 疫 鑒 定 及 后 續(xù) 監(jiān) 管 防 治 提 供 了 參 考 依 據(jù) 1 材 料 與 方 法 1 1 線 蟲(chóng) 分 離 將 百 合 種 球 的 鱗 球 莖 根 重 點(diǎn) 選 取 有 根 腐 癥 狀 的 及 介 質(zhì) 一 并 搜 集 采 用 改 良 貝 曼 漏 斗 法 B e e m a n f u n n e l m e t h o d 分 離 線 蟲(chóng) 室 溫 保 持 在 2 0 2 8 2 4 h 后 用 凹 面 皿 接 取 水 樣 約 5 m L 置 于 Z E I S S S t e m i 5 0 8 體 視 顯 微 鏡 下 觀 察 1 2 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 經(jīng) 體 視 顯 微 鏡 觀 察 后 挑 取 待 檢 線 蟲(chóng) 采 用 S E I N H O R S T 1 0 發(fā) 明 的 丙 三 醇 乙 醇 脫 水 法 制 作 永 久 玻 片 在 L e i c a D M 3 0 0 0 顯 微 鏡 下 進(jìn) 行 形 態(tài) 觀 察 根 據(jù) 形 態(tài) 特 征 進(jìn) 行 初 步 判 斷 并 搜 集 該 線 蟲(chóng) 以 備 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 1 3 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 由 于 線 蟲(chóng) 的 形 態(tài) 特 征 變 異 較 大 進(jìn) 境 百 合 種 球 中 分 離 到 的 線 蟲(chóng) 數(shù) 量 有 限 幼 蟲(chóng) 較 多 很 難 僅 依 靠 形 態(tài) 特 征 對(duì) 線 蟲(chóng) 進(jìn) 行 準(zhǔn) 確 鑒 定 1 1 因 此 在 形 態(tài) 學(xué) 初 步 判 斷 的 基 礎(chǔ) 上 結(jié) 合 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 方 法 對(duì) 線 蟲(chóng) 種 屬 進(jìn) 一 步 確 認(rèn) 1 3 1 線 蟲(chóng) D N A 提 取 在 2 0 0 L P C R 管 中 加 入 8 L d d H 2 O 和 1 L 1 0 P C R B u f f e r M g 2 f r e e 挑 取 待 檢 的 單 條 線 蟲(chóng) 放 入 d d H 2 O 清 洗 后 加 入 上 述 P C R 管 將 P C R 管 置 于 液 氮 中 1 m i n 取 出 后 置 于 8 5 水 浴 加 熱 2 m i n 再 向 P C R 管 中 加 入 1 L 1 m g m L 1 蛋 白 酶 K 5 6 水 浴 加 熱 1 5 m i n 9 5 水 浴 加 熱 1 0 m i n 得 到 待 檢 線 蟲(chóng) 的 D N A 提 取 液 可 直 接 用 于 P C R 擴(kuò) 增 1 3 2 引 物 合 成 P C R 擴(kuò) 增 及 產(chǎn) 物 測(cè) 序 選 擇 核 糖 體 D N A 的 2 8 S D 2 D 3 區(qū) 引 物 對(duì) 進(jìn) 行 擴(kuò) 增 引 物 為 D 2 A 5 A C A A G T A C C G T G A G G G A A A G T T G 3 和 D 3 B 5 T C G G A A G G A A C C A G C T A C T A 3 1 2 以 提 取 的 待 測(cè) 線 蟲(chóng) D N A 為 模 板 按 反 應(yīng) 體 系 表 1 及 條 件 表 2 進(jìn) 行 P C R 擴(kuò) 增 將 P C R 產(chǎn) 物 送 至 生 物 公 司 測(cè) 序 將 測(cè) 序 結(jié) 果 B L A S T 比 對(duì) 分 析 引 物 合 成 試 劑 測(cè) 序 服 務(wù) 均 購(gòu) 于 大 連 寶 生 物 公 司 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) P r a t y l e n c h u s p e n e t r a n s 分 類 地 位 根 據(jù) v a n d e n B e r g E s t h e r 最 新 分 類 系 統(tǒng) 該 線 蟲(chóng) 屬 于 動(dòng) 物 界 A n i m a l i a 線 蟲(chóng) 門 N e m a t o d a 有 腺 綱 A d e n o p h o r e a 雙 胃 亞 綱 D i p l o g a s t e r i a 墊 刃 線 蟲(chóng) 目 T y l e n c h i d a 墊 刃 總 科 T y l e n c h o i d e a 短 體 科 P r a t y l e n c h i d a e 短 體 亞 科 P r a t y l e n c h u i n a e 短 體 線 蟲(chóng) 屬 P r a t y l e n c h u s 2 1 1 形 態(tài) 特 征 描 述 雌 蟲(chóng) 蟲(chóng) 體 粗 短 唇 區(qū) 較 低 平 且 無(wú) 縊 縮 圖 1 口 針 強(qiáng) 壯 基 部 球 發(fā) 達(dá) 中 食 道 球 卵 圓 形 約 占 該 處 體 寬 的 1 2 2 3 陰 門 位 于 蟲(chóng) 體 約 4 5 處 尾 部 圓 柱 形 末 端 寬圓 雄 蟲(chóng) 形 態(tài) 與 雌 蟲(chóng) 相 近 交 合 刺 細(xì) 交 合 傘 邊 緣 呈 不 規(guī) 則 鋸 齒 狀 包 裹 至 尾 端 2 1 2 分 子 生 物 學(xué) 結(jié) 果 分 析 將 搜 集 到 的 雌 蟲(chóng) 雄 蟲(chóng) 分 別 提 取 其 D N A 采 用 D 2 A D 3 B 引 物 對(duì) 分 別 進(jìn) 行 P C R 擴(kuò) 增 獲 得 長(zhǎng) 度 均 為 7 5 0 b p 左 右 的 片 段 測(cè) 序 后 B L A S T 比 對(duì) 結(jié) 果 表 明 雌 表 1 P C R 反 應(yīng) 體 系 T a b l e 1 P C R r e a c t i o n s y s t e m 試 劑 R e a g e n t T a K a R a L A T a q 5 U L 1 1 0 L A T a q B u f f e r M g 2 p l u s d N T P M i x t u r e 2 5 m m o l L 1 e a c h 引 物 D 2 A 引 物 D 3 B T e m p l a t e D N A d H 2 O 使 用 量 U s a g e 0 5 L 5 L 8 L 1 L 1 L 1 g 5 0 L 最 終 濃 度 F i n a l c o n c e n t r a t i o n 0 4 m o l L 1 0 4 m o l L 1 表 2 P C R 反 應(yīng) 條 件 T a b l e 2 P C R r e a c t i o n c o n d i t i o n s 溫 度 T e m p e r a t u r e 9 4 9 8 6 8 7 2 時(shí) 間 T i m e 1 m i n 1 0 s 1 5 m i n 1 0 m i n 循 環(huán) 數(shù) C y c l e 3 0 2 8 0 6張 寅 寅 等 荷 蘭 進(jìn) 境 百 合 種 球 中 線 蟲(chóng) 的 分 離 及 分 子 鑒 定 2 0 2 2 年 1 2 月 w w w a e s o r g c n 蟲(chóng) 的 序 列 與 G e n B a n k 中 已 登 錄 的 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) K P 1 6 1 6 1 2 1 序 列 相 似 性 為 9 7 雄 蟲(chóng) 序 列 與 J X 0 4 6 9 9 0 1 序 列 相 似 性 為 9 8 因 此 鑒 定 該 線 蟲(chóng) 為 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) P p e n e t r a n s 2 2 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) A p h e l e n c h o i d e s b l a s t o p h t h o r u s 分 類 地 位 動(dòng) 物 界 A n i m a l i a 線 蟲(chóng) 門 N e m a t o d a 色 矛 綱 C h r o m a d o r e a 色 矛 亞 綱 C h r o m a d o r i a 小 桿 目 R h a b d i t i d a 真 滑 刃 總 科 A p h e l e n c h o i d e a 滑 刃 科 A p h e l e n c h o i d i d a e 滑 刃 亞 科 A p h e l e n c h o i d i n a e 滑 刃 屬 A p h e l e n c h o i d e s 2 2 1 形 態(tài) 特 征 描 述 雌 蟲(chóng) 整 個(gè) 蟲(chóng) 體 細(xì) 長(zhǎng) 熱 殺 死 后 蟲(chóng) 體 略 向 腹 面 彎 頭 部 半 球 形 口 針 細(xì) 唇 區(qū) 縊 縮 不 明 顯 中 食 道 球 卵 圓 形 食道球發(fā)達(dá) 尾部近圓柱形 尾端有尾尖突 圖 2 雄 蟲(chóng) 未 見(jiàn) 2 2 2 分 子 生 物 學(xué) 結(jié) 果 分 析 提 取 搜 集 到 的 雌 蟲(chóng) 的 D N A 采 用 D 2 A D 3 B 引 物 對(duì) 擴(kuò) 增 獲 得 長(zhǎng) 度 為 7 5 0 b p 左 右 的 產(chǎn) 物 片 段 測(cè) 序 并 B L A S T 比 對(duì) 結(jié) 果 表 明 該 雌 蟲(chóng) 序 列 與 G e n B a n k 中 已 登 錄 的 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) M K 9 8 1 8 9 4 1 序 列 相 似 性 為 9 9 因 此 鑒 定 其 為 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) A b l a s t o p h t h o r u s 2 3 燕 麥 真 滑 刃 線 蟲(chóng) A p h e l e n c h u s a v e n a e 分 類 地 位 動(dòng) 物 界 A n i m a l i a 線 蟲(chóng) 門 N e m a t o d a 尾 感 器 綱 S e c e r n e n t e a 墊 刃 目 T y l e n c h i d a 真 滑 刃 總 科 A p h e l e n c h o i d e a 真 滑 刃 科 A p h e l e n c h i d a e 真 滑 刃 亞 科 A p h e l e n c h i n a e 真 滑 刃 屬 A p h e l e n c h u s 2 3 1 形 態(tài) 特 征 描 述 雌 蟲(chóng) 頭 部 低 平 口 針 較 細(xì) 無(wú) 基 部 球 中 食 道 球 大 直 徑 近 體 寬 陰 門 橫 裂 位 置 較 后 陰 門 唇 略 突 起 肛 門 前 唇 略 突 起 尾 短 稍 向 腹 面 彎 曲 末 端 鈍 圓 圖 3 雄 蟲(chóng) 未 見(jiàn) 2 3 2 分 子 生 物 學(xué) 結(jié) 果 分 析 提 取 搜 集 到 的 雌 蟲(chóng) D N A 采 用 D 2 A D 3 B 引 物 對(duì) a 雌 蟲(chóng) 整 體 b 雄 蟲(chóng) 整 體 c 頭 部 d 雌 蟲(chóng) 尾 部 e 雄 蟲(chóng) 尾 部 a e n t i r e f e m a l e b o d y b e n t i r e m a l e b o d y c a n t e r i o r r e g i o n d f e m a l e p o s t e r i o r r e g i o n e m a l e p o s t e r i o r r e g i o n 圖 1 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) 形 態(tài) 特 征 F i g u r e 1 M o r p h o l o g y o f P r a t y l e n c h u s p e n e t r a n s 圖 2 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) 形 態(tài) 特 征 F i g u r e 2 M o r p h o l o g y o f A p h e l e n c h o i d e s b l a s t o p h t h o r u s a 雌 蟲(chóng) 整 體 b 頭 部 c 雌 蟲(chóng) 尾 部 a e n t i r e f e m a l e b o d y b a n t e r i o r r e g i o n c f e m a l e p o s t e r i o r r e g i o n a b c d e a b c 2 8 0 7農(nóng) 業(yè) 環(huán) 境 科 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 4 1 卷 第 1 2 期 擴(kuò) 增 獲 得 長(zhǎng) 度 為 7 5 0 b p 左 右 的 產(chǎn) 物 片 段 測(cè) 序 并 B L A S T 比 對(duì) 結(jié) 果 表 明 該 雌 蟲(chóng) 序 列 與 G e n B a n k 中 已 登 錄 的 燕 麥 真 滑 刃 線 蟲(chóng) K P 3 1 3 8 3 8 1 序 列 相 似 性 為 9 9 4 3 因 此 鑒 定 其 為 燕 麥 真 滑 刃 線 蟲(chóng) A a v e n a e 3 討 論 近 年 來(lái) 我 國(guó) 每 年 大 量 從 荷 蘭 等 國(guó) 家 引 進(jìn) 優(yōu) 良 的 百 合 種 球 在 國(guó) 內(nèi) 種 植 真 菌 病 毒 線 蟲(chóng) 等 植 物 病 害 極 易 由 百 合 種 球 攜 帶 入 境 危 害 國(guó) 門 生 物 安 全 各 入 境 口 岸 在 加 大 查 驗(yàn) 力 度 的 同 時(shí) 口 岸 實(shí) 驗(yàn) 室 也 逐 步 提 高 了 線 蟲(chóng) 的 檢 疫 鑒 定 水 平 在 重 點(diǎn) 關(guān) 注 檢 疫 性 線 蟲(chóng) 的 同 時(shí) 一 些 非 檢 疫 性 限 定 性 的 線 蟲(chóng) 也 逐 步 成 為 檢 疫 工 作 的 重 點(diǎn) 關(guān) 注 對(duì) 象 1 本 文 在 進(jìn) 境 百 合 種 球 中 檢 出 3 種 寄 生 線 蟲(chóng) 其 中 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) 是 短 體 線 蟲(chóng) 屬 線 蟲(chóng) 在 荷 蘭 花 卉 種 球 進(jìn) 境 植 物 檢 疫 要 求 中 規(guī) 定 其 感 染 率 不 得 超 過(guò) 2 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) 的 寄 主 眾 多 主 要 危 害 大 麥 小 麥 玉 米 馬 鈴 薯 煙 草 百 合 郁 金 香 等 多 種 經(jīng) 濟(jì) 作 物 和 花 卉 6 可 在 寄 主 的 組 織 根 部 或 土 壤 中 生 存 不 僅 危 害 寄 主 的 根 系 造 成 根 腐 癥 狀 甚 至 植 株 死 亡 還 可 傳 播 一 些 致 病 的 植 物 寄 生 細(xì) 菌 真 菌 該 線 蟲(chóng) 耐 低 溫 及 干 旱 的 環(huán) 境 可 隨 進(jìn) 境 種 球 遠(yuǎn) 距 離 傳 播 口 岸 檢 疫 時(shí) 應(yīng) 重 點(diǎn) 關(guān) 注 其 感 染 率 目 前 短 體 屬 線 蟲(chóng) 在 我 國(guó) 口 岸 檢 疫 時(shí) 一 般 重 點(diǎn) 關(guān) 注 除 了 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) 傷 殘 短 體 線 蟲(chóng) P v u l n u s 咖 啡 短 體 線 蟲(chóng) P c o f f e a e 艾 短 體 線 蟲(chóng) P a r t e m i s i a e 和 玉 米 短 體 線 蟲(chóng) P z e a e 以 外 的 非 中 國(guó) 種 類 由 于 短 體 線 蟲(chóng) 種 類 眾 多 其 屬 內(nèi) 形 態(tài) 近 似 度 較 高 傳 統(tǒng) 形 態(tài) 學(xué) 方 法 要 通 過(guò) 雌 蟲(chóng) 雄 蟲(chóng) 2 齡 幼 蟲(chóng) 的 特 征 及 測(cè) 量 值 鑒 定 但 口 岸 檢 疫 時(shí) 獲 得 的 線 蟲(chóng) 數(shù) 量 有 限 無(wú) 法 保 證 獲 得 大 量 的 成 蟲(chóng) 1 3 因 此 僅 依 靠 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 無(wú) 法 保 證 結(jié) 果 的 準(zhǔn) 確 性 需 要 結(jié) 合 分 子 生 物 學(xué) 方 法 的 測(cè) 序 結(jié) 果 進(jìn) 一 步 確 認(rèn) 1 4 2 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) 是 滑 刃 線 蟲(chóng) 屬 線 蟲(chóng) 最 早 于 1 9 5 2 年 在 英 國(guó) 的 高 加 索 藍(lán) 盆 花 中 發(fā) 現(xiàn) 該 線 蟲(chóng) 1 5 在 2 0 2 1 年 4 月 更 新 的 中 華 人 民 共 和 國(guó) 進(jìn) 境 植 物 檢 疫 性 有 害 生 物 名 錄 中 滑 刃 屬 的 檢 疫 性 線 蟲(chóng) 有 菊 花 滑 刃 線 蟲(chóng) A r i t z e m a b o s i 和 草 莓 滑 刃 線 蟲(chóng) A f r a g a r i a e 2 種 滑 刃 屬 線 蟲(chóng) 種 類 目 前 已 知 的 有 1 8 0 多 種 廣 泛 分 布 于 土 壤 種 球 苗 木 中 本 研 究 中 分 離 到 的 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) 在 已 知 的 報(bào) 道 中 十 分 有 限 僅 我 國(guó) 2 0 2 0 年 4 月 首 次 從 荷 蘭 進(jìn) 境 的 毛 蕊 銀 蓮 花 中 檢 出 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) 1 6 經(jīng) 查 閱 文 獻(xiàn) 該 線 蟲(chóng) 能 危 害 薔 薇 科 如 草 莓 等 經(jīng) 濟(jì) 作 物 造 成 減 產(chǎn) 1 7 目 前 在 荷 蘭 等 歐 洲 國(guó) 家 有 發(fā) 生 我 國(guó) 每 年 從 荷 蘭 大 量 進(jìn) 口 百 合 等 花 卉 種 球 該 線 蟲(chóng) 隨 種 球 貿(mào) 易 傳 入 風(fēng) 險(xiǎn) 極 大 由 于 我 國(guó) 尚 未 有 該 線 蟲(chóng) 的 危 害 及 分 布 情 況 報(bào) 道 各 口 岸 應(yīng) 重 點(diǎn) 關(guān) 注 并 加 強(qiáng) 檢 疫 進(jìn) 行 風(fēng) 險(xiǎn) 評(píng) 估 3 燕 麥 真 滑 刃 線 蟲(chóng) 是 真 滑 刃 屬 線 蟲(chóng) 是 一 種 取 食 真 菌 的 線 蟲(chóng) 1 8 在 世 界 各 地 廣 泛 分 布 寄 主 廣 泛 有 柑 桔 屬 咖 啡 屬 枇 杷 屬 草 莓 煙 草 馬 鈴 薯 豌 豆 和 小 麥 等 經(jīng) 濟(jì) 作 物 1 9 目 前 尚 未 有 該 線 蟲(chóng) 對(duì) 植 物 造 成 嚴(yán) 重 危 害 的 報(bào) 道 有 待 進(jìn) 一 步 研 究 4 結(jié) 論 本 研 究 在 進(jìn) 境 的 荷 蘭 百 合 種 球 中 分 離 并 鑒 定 出 3 種 寄 生 線 蟲(chóng) 分 別 是 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) 毀 芽 滑 刃 線 蟲(chóng) 燕 麥 真 滑 刃 線 蟲(chóng) 其 中 穿 刺 短 體 線 蟲(chóng) 分 離 到 少 量 的 雌 蟲(chóng) 和雄蟲(chóng) 且部分鑒定特征不明顯 而毀芽滑刃線蟲(chóng)和燕 麥 真 滑 刃 線 蟲(chóng) 僅 分 離 到 雌 蟲(chóng) 成 蟲(chóng) 均 需 依 靠 形 態(tài) 學(xué) 初 步判斷結(jié)合分子生物學(xué)方法 才能準(zhǔn)確鑒定到種 參 考 文 獻(xiàn) 1 趙 良 平 黃 正 秋 荷 蘭 花 卉 業(yè) 發(fā) 展 的 成 功 經(jīng) 驗(yàn) 及 其 借 鑒 J 林 業(yè) 經(jīng) 濟(jì) 2 0 0 1 7 3 9 4 4 Z H A O L P H U A N G Z Q T h e s u c c e s s f u l e x p e r i e n c e o f N e t h e r l a n d f l o w e r i n d u s t r y a n d i t s r e f e r e n c e J F o r e s t r y E c o n o m i c s 2 0 0 1 7 3 9 4 4 2 邊 勇 劉 奇 志 趙 紀(jì) 文 等 進(jìn) 口 百 合 種 球 攜 入 植 物 線 蟲(chóng) 數(shù) 量 風(fēng) 險(xiǎn) 初 探 J 植 物 保 護(hù) 2 0 0 7 3 3 3 9 3 9 6 B I A N Y L I U Q Z Z H A O J 圖 3 燕 麥 真 滑 刃 線 蟲(chóng) 形 態(tài) 特 征 F i g u r e 3 M o r p h o l o g y o f A p h e l e n c h u s a v e n a e a 雌 蟲(chóng) 整 體 b 頭 部 c 雌 蟲(chóng) 尾 部 a e n t i r e f e m a l e b o d y b a n t e r i o r r e g i o n c f e m a l e p o s t e r i o r r e g i o n a b c 2 8 0 8張 寅 寅 等 荷 蘭 進(jìn) 境 百 合 種 球 中 線 蟲(chóng) 的 分 離 及 分 子 鑒 定 2 0 2 2 年 1 2 月 w w w a e s o r g c n W e t a l P i l o t s t u d y o n q u a n t i t y r i s k o f p h y t o p a r a s i t i c n e m a t o d e s b r o u g h t i n b y i m p o r t e d l i l y c o r m J P l a n t P r o t e c t i o n 2 0 0 7 3 3 3 9 3 9 6 3 劉 奇 志 邊 勇 趙 紀(jì) 文 等 進(jìn) 口 球 根 花 卉 攜 入 線 蟲(chóng) 營(yíng) 養(yǎng) 類 群 及 數(shù) 量 檢 測(cè) J 中 國(guó) 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2 0 0 7 1 2 3 2 7 3 1 L I U Q Z B I A N Y Z H A O J W e t a l I n s p e c t i o n o n t r o p h i c g r o u p s a n d q u a n t i t y o f n e m a t o d e s c a r r i e d i n b y i m p o r t e d c o r m f l o w e r s J J o u r n a l o f C h i n a A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y 2 0 0 7 1 2 3 2 7 3 1 4 鄧 艷 鳳 高 淵 陳 云 芳 江 蘇 口 岸 進(jìn) 境 種 苗 截 獲 植 物 線 蟲(chóng) 疫 情 分 析 J 植 物 檢 疫 2 0 2 0 3 4 6 5 6 6 0 D E N G Y F G A O Y C H E N Y F A n a l y s i s o n t h e n e m a t o d e i n t e r c e p t i o n f r o m i m p o r t e d s e e d l i n g s a t J i a n g s u p o r t s J P l a n t Q u a r a n t i n e 2 0 2 0 3 4 6 5 6 6 0 5 P O W E R S T N e m a t o d e m o l e c u l a r d i a g n o s t i c s F r o m b a n d s t o b a r c o d e s J A n n u a l R e v i e w o f P h y t o p a t h o l o g y 2 0 0 4 4 2 3 6 7 3 8 3 6 S U B B O T I N S A R A G S D A L E E J M U L L E N S T e t a l A p h y l o g e n e t i c f r a m e w o r k o f r o o t l e s i o n n e m a t o d e s o f t h e g e n u s P r a t y l e n c h u s N e m a t o d a E v i d e n c e f r o m t h e 1 8 S a n d D 2 D 3 e x p a n s i o n s e g m e n t s o f 2 8 S r i b o s o m a l R N A g e n e s a n d m o r p h o l o g i c a l c h a r a c t e r s J M o l e c u l a r P h y l o g e n e t i c s a n d E v o l u t i o n 2 0 0 8 4 8 4 9 1 5 0 5 7 D E L F R E Y E S A T R O C C O L I A e t a l M o l e c u l a r v a r i a b i l i t y a n d p h y l o g e n e t i c r e l a t i o n s h i p s a m o n g d i f f e r e n t s p e c i e s a n d p o p u l a t i o n s o f P r a t y l e n c h u s N e m a t o d a P r a t y l e n c h i d a e a s i n f e r r e d f r o m t h e a n a l y s i s o f t h e I T S r D N A J E u r o p e a n J o u r n a l o f P l a n t P a t h o l o g y 2 0 1 1 1 3 0 4 1 5 4 2 6 8 王 金