214 2023 年 第 64 卷 第 1 期 收 稿 日 期 2021 12 29 基 金 項 目 浙 江 省 農(nóng) 業(yè) 重 大 技 術 協(xié) 同 推 廣 計 劃 2021XTTGHH01 3 作 者 簡 介 方 麗 1978 女 浙 江 新 昌 人 碩 士 從 事 經(jīng) 濟 作 物 病 害 及 其 致 病 機 理 研 究 工 作 E mail fl0155 163 com 通 信 作 者 王 漢 榮 研 究 員 E mail wanghrg yahoo com cn 文 獻 著 錄 格 式 方 麗 葉 琪 明 郭 方 其 等 浙 江 地 區(qū) 非 洲 菊 菌 核 病 的 病 原 鑒 定 及 品 種 抗 性 鑒 定 J 浙 江 農(nóng) 業(yè) 科 學 2023 64 1 214 216 DOI 10 16178 j issn 0528 9017 20220081 浙 江 地 區(qū) 非 洲 菊 菌 核 病 的 病 原 鑒 定 及 品 種 抗 性 鑒 定 方 麗 a 葉 琪 明 a 郭 方 其 b 謝 昀 燁 a 吳 超 b 武 軍 a 王 漢 榮 a 浙 江 省 農(nóng) 業(yè) 科 學 院 a 植 物 保 護 與 微 生 物 研 究 所 b 園 藝 研 究 所 浙 江 杭 州 310021 摘 要 菌 核 病 是 非 洲 菊 生 產(chǎn) 中 發(fā) 生 最 為 嚴 重 的 土 傳 病 害 本 研 究 鑒 定 了 浙 江 非 洲 菊 生 產(chǎn) 中 菌 核 病 菌 的 優(yōu) 勢 菌 株 并 對 常 規(guī) 種 植 和 新 引 進 的 21 個 非 洲 菊 品 種 進 行 菌 核 病 的 抗 性 鑒 定 和 評 價 結 果 表 明 供 試 的 21 個 非 洲 菊 品 種 對 菌 核 病 的 抗 性 差 異 顯 著 高 抗 和 抗 菌 核 病 的 品 種 為 14 個 占 66 7 中 抗 和 感 病 品 種 為 7 個 占 33 3 關 鍵 詞 非 洲 菊 病 原 鑒 定 菌 核 病 抗 性 鑒 定 中 圖 分 類 號 S436 文 獻 標 志 碼 A 文 章 編 號 0528 9017 2023 01 0214 03 非 洲 菊 為 菊 科 大 丁 草 屬 多 年 生 草 本 植 物 又 稱 扶 郎 花 太 陽 花 燈 盞 花 等 其 色 澤 艷 麗 花 型 優(yōu) 美 花 色 多 樣 花 期 長 不 易 衰 敗 具 有 極 高 的 觀 賞 價 值 和 經(jīng) 濟 價 值 是 深 受 大 眾 歡 迎 的 鮮 切 盆 栽 和 庭 院 觀 賞 植 物 1 菌 核 病 是 非 洲 菊 生 產(chǎn) 上 危 害 最 為 嚴 重 的 土 傳 病 害 造 成 死 苗 缺 株 長 勢 衰 弱 每 年 導 致 產(chǎn) 量 損 失 率 為 10 30 嚴 重 影 響 花 農(nóng) 和 花 企 的 經(jīng) 濟 效 益 和 生 產(chǎn) 積 極 性 而 種 植 抗 性 品 種 是 預 防 非 洲 菊 菌 核 病 發(fā) 生 的 最 經(jīng) 濟 有 效 的 途 徑 然 而 尚 未 有 關 于 非 洲 菊 菌 核 病 的 品 種 抗 性 的 系 統(tǒng) 研 究 包 括 接 種 方 法 抗 性 評 價 等 相 關 報 道 為 了 促 進 非 洲 菊 抗 病 性 育 種 的 發(fā) 展 本 文 對 目 前 侵 染 非 洲 菊 的 菌 核 病 菌 進 行 鑒 定 以 非 洲 菊 的 主 栽 和 新 引 進 品 種 為 對 象 建 立 對 菌 核 病 的 抗 性 水 平 和 評 價 方 法 并 對 21 個 品 種 進 行 抗 性 鑒 定 為 非 洲 菊 的 抗 菌 核 性 育 種 研 究 提 供 理 論 基 礎 和 技 術 支 持 1 材 料 與 方 法 1 1 病 原 菌 的 分 離 純 化 供 試 的 非 洲 菊 菌 核 病 菌 為 浙 江 省 嘉 興 地 區(qū) 海 寧 種 植 基 地 的 優(yōu) 勢 菌 株 通 過 組 織 分 離 方 法 2 從 自 然 發(fā) 病 的 非 洲 菊 病 株 中 分 離 純 化 獲 得 致 病 力 強 人 工 接 種 后 經(jīng) 相 同 方 法 分 離 獲 得 菌 種 1 2 病 原 菌 的 分 子 鑒 定 將 菌 核 病 菌 移 至 新 的 PDA 培 養(yǎng) 基 上 25 黑 暗 培 養(yǎng) 5 d 后 刮 取 菌 絲 用 Invitrogen 的 HyPure 真 菌 基 因 組 DNA 提 取 試 劑 盒 Genenode 提 取 菌 核 病 菌 的 基 因 組 DNA 采 用 16S rDNA 基 因 ITS5 ITS4 GGAAGTAAAAGTCGTAAGG TCCTCCGCTTA TTGATATGC 3 擴 增 相 應 基 因 序 列 引 物 合 成 及 測 序 工 作 由 北 京 擎 科 生 物 科 技 有 限 公 司 杭 州 分 公 司 完 成 利 用 軟 件 MEGA7 0 將 分 離 到 的 菌 株 與 已 發(fā) 表 的 菌 核 病 菌 菌 株 構 建 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 分 析 菌 株 間 的 遺 傳 關 系 1 3 接 種 方 法 將 菌 核 病 菌 接 種 于 新 的 PDA 培 養(yǎng) 基 上 置 于 25 霉 菌 培 養(yǎng) 箱 黑 暗 培 養(yǎng) 4 d 后 沿 菌 落 邊 緣 用 打 孔 器 打 出 直 徑 為 5 mm 的 菌 塊 將 菌 塊 置 于 非 洲 菊 植 株 的 葉 柄 底 部 每 株 1 個 菌 絲 塊 每 個 品 種 接 種 30 株 左 右 用 透 明 塑 料 膜 保 濕 培 養(yǎng) 48 h 接 種 后 每 天 觀 察 并 記 錄 植 株 發(fā) 病 情 況 1 4 供 試 品 種 系 及 抗 性 鑒 定 方 法 2021 年 春 季 供 試 非 洲 菊 品 種 包 括 世 紀 紅 水 粉 和 桃 紅 3 個 常 規(guī) 種 植 品 種 以 及 理 想 太 陽 風 暴 綠 球 50 拉 絲 6 號 金 桂 50 拉 絲 1 號 拉 絲 8 號 拉 絲 4 號 粉 佳 人 大 雪 桔 亮 粉 美 滿 香 檳 粉 拉 絲 福 娃 黑 杰 克 安 娜 柯 萊 托 和 安 迪 奶 油 18 個 新 引 進 的 品 種 非 洲 菊 種 植 于 浙 江 省 農(nóng) 業(yè) 科 學 院 桑 園 基 地 大 棚 內(nèi) 的 箱 式 框 內(nèi) 選 取 苗方 麗 等 浙 江 地 區(qū) 非 洲 菊 菌 核 病 的 病 原 鑒 定 及 品 種 抗 性 鑒 定 215 齡 為 3 個 月 左 右 成 株 用 菌 絲 塊 方 法 同 上 接 種 菌 核 病 2021 年 11 月 3 日 接 種 前 后 1 個 月 內(nèi) 不 使 用 任 何 殺 菌 劑 其 他 栽 培 管 理 如 常 設 置 清 水 對 照 1 5 非 洲 菊 菌 核 病 病 級 分 級 標 準 根 據(jù) 非 洲 菊 菌 核 病 發(fā) 生 發(fā) 展 規(guī) 律 的 調(diào) 查 分 析 參 考 油 菜 菌 核 病 和 白 菜 菌 核 病 4 5 的 抗 性 分 級 和 評 價 標 準 采 用 植 株 發(fā) 病 情 況 與 菌 絲 菌 核 形 成 情 況 相 結 合 確 定 分 級 標 準 0 級 為 全 株 無 病 1 級 為 部 分 葉 片 萎 焉 5 葉 片 枯 死 3 級 為 部 分 葉 片 萎 焉 或 有 病 斑 枯 死 的 葉 片 占 總 葉 片 數(shù) 的 5 10 5 級 為 10 25 葉 片 萎 焉 或 枯 死 或 枯 死 葉 片 或 花 葶 出 現(xiàn) 白 色 菌 絲 或 菌 絲 團 7 級 為 25 50 葉 片 萎 焉 或 枯 死 或 枯 死 葉 片 或 花 葶 出 現(xiàn) 白 色 菌 絲 或 菌 絲 團 9 級 為 50 以 上 的 葉 片 萎 焉 或 枯 死 或 心 葉 萎 焉 花 葶 倒 伏 葉 片 或 花 葶 出 現(xiàn) 菌 絲 團 或 菌 核 1 6 非 洲 菊 菌 核 病 病 情 調(diào) 查 方 法 病 情 調(diào) 查 一 般 在 接 種 后 20 25 d 也 可 根 據(jù) 對 照 品 種 發(fā) 病 至 最 高 病 級 時 的 時 間 作 適 當 調(diào) 整 每 小 區(qū) 均 調(diào) 查 全 部 植 株 調(diào) 查 發(fā) 病 株 數(shù) 和 發(fā) 病 病 級 并 記 錄 1 7 菌 核 病 抗 感 的 劃 分 根 據(jù) 上 述 病 情 指 數(shù) 將 其 劃 分 為 6 個 類 型 免 疫 I 無 病 高 抗 HR 病 情 指 數(shù) 為 0 10 抗 病 R 病 情 指 數(shù) 為 10 30 中 抗 MR 病 情 指 數(shù) 為 30 50 感 病 S 病 情 指 數(shù) 為 50 70 高 感 HS 病 情 指 數(shù) 為 70 100 2 結 果 與 分 析 2 1 非 洲 菊 菌 核 病 的 田 間 癥 狀 菌 核 病 發(fā) 病 初 期 表 現(xiàn) 為 老 葉 枯 死 增 加 長 勢 衰 弱 分 蘗 減 少 隨 著 病 原 菌 的 進 一 步 侵 入 多 個 葉 片 萎 焉 葉 片 出 現(xiàn) 枯 黃 色 的 枯 死 病 斑 甚 至 新 葉 或 花 葶 萎 焉 全 株 枯 死 在 濕 度 高 時 可 見 發(fā) 病 部 位 出 現(xiàn) 大 量 白 色 菌 絲 和 菌 核 低 溫 高 濕 有 利 于 促 進 菌 核 病 的 發(fā) 生 6 秋 冬 季 為 非 洲 菊 菌 核 病 發(fā) 生 的 主 要 時 期 2 2 非 洲 菊 的 菌 核 病 菌 的 形 態(tài) 鑒 定 菌 核 病 菌 菌 株 在 PDA 平 板 上 25 黑 暗 培 養(yǎng) 下 生 長 迅 速 放 射 狀 生 長 平 鋪 于 培 養(yǎng) 基 表 面 生 長 速 度 為 2 3 cm d 1 菌 絲 白 色 長 絮 狀 隨 著 培 養(yǎng) 時 間 的 增 加 菌 落 邊 緣 菌 絲 集 結 成 團 初 為 白 色 后 漸 變 為 黑 色 表 面 粗 糙 圓 形 或 不 規(guī) 則 形 菌 核 直 徑 2 10 mm 圖 1 圖 1 非 洲 菊 菌 核 病 田 間 癥 狀 及 病 原 菌 在 PDA 上 的 生 長 情 況 2 3 非 洲 菊 的 菌 核 病 菌 的 分 子 鑒 定 本 研 究 擴 增 獲 得 非 洲 菊 菌 核 病 菌 jh fzj 1 的 16S rDNA 基 因 序 列 得 到 1 條 大 小 約 為 589 bp 的 產(chǎn) 物 將 該 序 列 與 NCBI 數(shù) 據(jù) 庫 中 已 知 多 個 序 列 構 建 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 并 以 B o t r y t i s c i n e r e a strain strain QS 1 MN589850 1 為 外 組 結 果 圖 2 表 明 本 研 究 分 離 獲 得 的 菌 株 jh fzj 1 與 已 發(fā) 表 的 S c l e r o t i n i a s c l e r o t i o r u m 株 系 為 同 一 個 分 枝 但 相 似 率 較 低 因 此 侵 染 非 洲 菊 的 菌 核 菌 為 S c l e r o t i n i a s c l e r o t i o r u m Lib de Bary 這 與 曹 奕 鴦 7 的 結 果 一 致 2 4 非 洲 菊 對 菌 核 病 的 品 種 抗 病 性 篩 選 對 21 個 非 洲 菊 品 種 進 行 田 間 接 種 鑒 定 接 種 5 d 后 部 分 非 洲 菊 葉 片 可 見 明 顯 病 斑 隨 著 時 間 的 推 移 病 斑 持 續(xù) 擴 展 接 種 20 d 后 調(diào) 查 病 害 發(fā) 生 情 況 如 表 1 所 示 不 同 非 洲 菊 品 種 感 染 菌 核 病 的 病 情 指 數(shù) 差 異 顯 著 對 菌 核 病 抗 性 水 平 也 不 相 同 其 中 高 抗 的 品 種 為 有 3 個 占 鑒 定 材 料 的 14 3 抗 病 和 中 抗 病 品 種 分 別 為 11 和 3 個 分 別 占 鑒 定 材 料 的 52 4 和 14 3 感 病 和 高 感 品 種 分 別 為 3 個 和 1 個 分 別 占 鑒 定 材 料 的 14 3 和 4 8 其 中 常 規(guī) 種 植 品 種 基 本 為 抗 病 僅 水 粉 為 中 抗 其 中 新 引 進 的 品 種 中 抗 病 及 高 抗 病 品 種 占 比 為 62 5 大 大 降 低 了 非 洲 菊 種 植 過 程 中 菌 核 病 的 發(fā) 病 率 3 討 論 菌 核 病 是 一 種 世 界 性 分 布 的 土 傳 真 菌 性 病 害 216 2023 年 第 64 卷 第 1 期 圖 2 基 于 ITS 核 苷 酸 序 列 非 洲 菊 菌 核 病 菌 的 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 表 1 非 洲 菊 品 種 對 菌 核 病 的 抗 性 評 價 品 種 病 情 指 數(shù) 評 價 理 想 7 4 HR 太 陽 風 暴 30 0 R 綠 球 50 69 9 S 拉 絲 6 號 18 1 R 金 桂 50 22 2 R 拉 絲 1 號 23 6 R 拉 絲 8 號 8 9 HR 拉 絲 4 號 14 3 R 粉 佳 人 44 4 MR 大 雪 桔 18 5 R 亮 粉 77 8 HS 美 滿 51 1 S 香 檳 55 1 S 世 紀 紅 21 8 R 水 粉 33 4 MR 桃 紅 26 3 R 粉 拉 絲 42 5 MR 福 娃 7 7 HR 黑 杰 克 14 6 R 安 娜 柯 萊 托 16 3 R 柯 迪 奶 油 14 1 R 其 中 核 盤 菌 引 起 的 菌 核 病 就 可 危 害 約 75 科 278 屬 408 種 植 物 菌 核 病 作 為 非 洲 菊 生 產(chǎn) 栽 培 過 程 中 發(fā) 生 最 為 嚴 重 的 土 傳 病 害 整 個 生 育 期 均 可 發(fā) 病 并 且 條 件 適 宜 時 發(fā) 病 迅 猛 導 致 產(chǎn) 區(qū) 持 續(xù) 缺 苗 死 苗 目 前 該 病 的 防 控 主 要 以 栽 培 管 理 化 學 藥 劑 防 治 和 局 部 土 壤 消 毒 為 主 要 技 術 手 段 但 由 于 土 地 資 源 的 限 制 輪 作 困 難 菌 核 病 的 病 害 發(fā) 生 頻 繁 應 用 抗 病 品 種 是 非 洲 菊 菌 核 病 防 治 中 最 經(jīng) 濟 有 效 的 方 法 而 當 前 非 洲 菊 的 品 種 選 育 仍 以 花 型 花 色 株 高 葉 形 等 栽 培 指 標 為 衡 量 標 準 花 卉 的 抗 病 性 育 種 研 究 起 步 晚 相 關 的 研 究 論 文 少 對 非 洲 菊 的 抗 性 等 級 和 評 價 指 標 研 究 尚 屬 空 白 本 研 究 對 浙 江 地 區(qū) 非 洲 菊 菌 核 病 的 優(yōu) 勢 菌 種 進 行 了 鑒 定 確 定 了 非 洲 菊 菌 核 病 的 菌 種 為 S c l e r o t i n i a s c l e r o t i o r u m Lib de Bary 同 時 也 對 市 場 上 普 遍 種 植 和 最 新 引 進 的 共 21 個 非 洲 菊 品 種 進 行 了 菌 核 病 的 抗 性 篩 選 發(fā) 現(xiàn) 不 同 非 洲 菊 品 種 對 菌 核 病 的 抗 性 具 有 顯 著 差 異 性 高 抗 或 抗 菌 核 病 的 非 洲 菊 品 種 占 66 7 以 上 中 抗 及 以 下 的 非 洲 菊 品 種 約 占 33 3 常 規(guī) 種 植 品 種 和 新 引 進 的 品 種 均 以 抗 病 品 種 為 主 這 為 非 洲 菊 菌 核 病 的 發(fā) 生 提 供 了 較 好 的 天 然 屏 障 參 考 文 獻 1 李 有 清 呂 長 平 胡 春 梅 等 非 洲 菊 種 質(zhì) 資 源 研 究 進 展 J 湖 南 農(nóng) 業(yè) 科 學 2014 5 53 55 2 方 中 達 植 病 研 究 方 法 M 3 版 北 京 中 國 農(nóng) 業(yè) 出 版 社 1998 3 WHITE T J BRUNS T LEE S et al Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics M INNIS M GEL FAND J SAINSKY J et al PCR protocols a guide to methods and applications San Diego Academic Press 1990 315 322 4 范 會 云 劉 小 娟 劉 子 榮 等 不 同 油 菜 品 種 對 油 菜 菌 核 病 的 田 間 抗 性 鑒 定 J 中 國 農(nóng) 學 通 報 2019 35 31 124 128 5 孫 葉 爍 郝 玲 玉 張 杰 等 大 白 菜 菌 核 病 抗 性 鑒 定 方 法 研 究 J 西 北 農(nóng) 林 科 技 大 學 學 報 自 然 科 學 版 2019 12 47 123 129 6 汪 國 森 王 崇 仁 吳 友 三 核 盤 菌 屬 真 菌 有 性 世 代 的 研 究 J 沈 陽 農(nóng) 業(yè) 大 學 學 報 1992 23 4 286 291 7 曹 奕 鴦 夏 朝 水 陳 昌 銘 等 非 洲 菊 菌 核 病 病 原 菌 的 分 離 鑒 定 及 抑 菌 藥 劑 篩 選 J 福 建 農(nóng) 業(yè) 學 報 2021 36 10 1210 1216 責 任 編 輯 張 瑞 麟