中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2 0 2 3 2 8 2 3 5 4 2 J o u r n a l o f C h i n a A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y h t t p z g n y d x x b i j o u r n a l s c n 劉國霞 張全芳 楊雪 譚晴晴 胡悅 范陽陽 姚川 崔剛 步迅 陳雪燕 劉炳福 八倍體草莓D N A指紋圖譜的構(gòu)建與初步遺傳分析 J 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2 0 2 3 2 8 0 2 3 5 4 2 L I U G u o x i a Z H A N G Q u a n f a n g Y A N G X u e T A N Q i n g q i n g H U Y u e F A N Y a n g y a n g Y A O C h u a n C U I G a n g B U X u n C H E N X u e y a n L I U B i n g f u C o n s t r u c t i o n o f D N A f i n g e r p r i n t i n g o f o c t o p l o i d s t r a w b e r r y a n d p r e l i m i n a r y g e n e t i c a n a l y s i s J JournalofChinaAgriculturalUniversity 2 0 2 3 2 8 0 2 3 5 4 2 D O I 1 0 1 1 8 4 1 j i s s n 1 0 0 7 4 3 3 3 2 0 2 3 0 2 0 4 八倍體草莓DNA指紋圖譜的構(gòu)建與初步遺傳分析 劉國霞1 張全芳1 楊雪1 譚晴晴1 胡悅1 范陽陽1 姚川1 崔剛2 步迅1 陳雪燕1 劉炳福3 1 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)作物種質(zhì)資源研究所 濟(jì)南2 5 0 1 0 0 2 山東普朗特農(nóng)業(yè)技術(shù)有限公司 濟(jì)南2 5 0 1 0 0 3 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院休閑農(nóng)業(yè)研究所 濟(jì)南2 5 0 1 0 0 摘 要 為對草莓品種進(jìn)行分子鑒定 從5 9對S S R引物中篩選出1 8對多態(tài)性好的引物 采用毛細(xì)管電泳檢測方 法對8 4份八倍體草莓品種進(jìn)行標(biāo)記分析 檢測每個(gè)標(biāo)記等位變異大小 并進(jìn)行初步遺傳分析 將每個(gè)引物對8 4 份草莓?dāng)U增的帶型按照一定原則進(jìn)行數(shù)字標(biāo)注 為了簡化編碼 引物P 1 P 1 8分別編號為字母A R 將引物編號 與相應(yīng)的帶型編碼進(jìn)行組合得到該樣品在特定引物的擴(kuò)增產(chǎn)物編碼 按照1 8對引物順序串聯(lián)這些編碼形成該品 種的D N A指紋圖譜 結(jié)果表明 1 8對S S R引物共擴(kuò)增得到多態(tài)性條帶1 5 0個(gè) 不同引物擴(kuò)增到多態(tài)性條帶數(shù)4 1 7個(gè) 共檢測到3 7 7個(gè)帶型 各引物的多態(tài)性信息含量 P I C 值為0 4 9 4 0 9 0 8 平均值為0 7 3 8 利用1 8對S S R 引物共構(gòu)建了8 4個(gè)草莓品種的D N A指紋圖譜 聚類分析結(jié)果表明 在遺傳相似系數(shù)為0 9 9時(shí)能將所有品種區(qū) 分開 一些來源相同的品種被優(yōu)先聚在一起 綜上 本研究成功構(gòu)建8 4個(gè)草莓品種的D N A指紋圖譜 這些品種遺 傳關(guān)系較近 關(guān)鍵詞 草莓 S S R D N A指紋圖譜 遺傳分析 中圖分類號 S 6 6 8 4 文章編號 1 0 0 7 4 3 3 3 2 0 2 3 0 2 0 0 3 5 0 8 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 收稿日期 2 0 2 2 0 4 1 5 基金項(xiàng)目 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院揭榜科技難題項(xiàng)目 S H J B 2 0 2 1 4 7 第一作者 劉國霞 O R C I D 0 0 0 0 0 0 0 2 6 6 1 5 9 2 9 8 助理研究員 主要從事農(nóng)作物種質(zhì)資源分子檢測研究 E m a i l l i u g u o x i a 1 6 3 c o m 通訊作者 陳雪燕 O R C I D 0 0 0 0 0 0 0 2 8 4 2 1 5 3 2 9 助理研究員 主要從事植物分子生物學(xué)研究 E m a i l c h x y t v s 1 6 3 c o m 劉炳福 O R C I D 0 0 0 0 0 0 0 2 6 5 6 6 2 7 6 4 副研究員 主要從事草莓栽培與育種研究 E m a i l n k y 2 0 1 9 1 6 3 c o m ConstructionofDNAfingerprintingofoctoploidstrawberry andpreliminarygeneticanalysis LIUGuoxia1 ZHANGQuanfang1 YANGXue1 TANQingqing1 HUYue1 FANYangyang1 YAOChuan1 CUIGang2 BUXun1 CHENXueyan1 LIUBingfu3 1 InstituteofCropGermplasmResources ShandongAcademyofAgriculturalSciences Jinan250100 China 2 ShandongPlantAgriculturalTechnologyCo Ltd Jinan250100 China 3 InstituteofLeisureAgriculture ShandongAcademyofAgriculturalSciences Jinan250100 China Abstract Inordertoscreenstrawberrycultivarsatmolecularlevel 18SSRprimerpairswithhighpolymorphismwere identifiedfrom59primerpairs and84octoploidcultivatedstrawberrysampleswerescreened Byusingcapillary electrophoresismethod thesizeofdifferentallelesweredetected andthemolecularfingerprintingandgenetic analysisforallsampleswereestablished Differentallelesofeveryprimeweredigitallylabelledon84strawberry varietyaccordingtocertainprinciples Forsimplicity theprimersP1toP18werelabelledasAtoR thenthecodefor 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)2 0 2 3年第2 8卷 onestrawberryvarietyonspecificprimerwasgotthroughcombiningtheprimerlabelandthecorrespondingallelelabel Combinationofthesecodesof18primersaccordingtotheprimersequencetoformoneDNAfingerprintforone particularvariety Theresultsshowedthat Atotalof150polymorphicbandswereamplified andthenumberof polymorphicbandsamplifiedbydifferentprimersrangedfrom4to17 Finally 377bandcombinationswereobtainedin thisstudy Thevalueofpolymorphisminformationcontentrangedfrom0 494to0 908 andtheaveragevaluewas 0 738 DNAfingerprintofall84strawberryvarietywasconstructedfollowingtheabovemethod Theresultof clusteringanalysisshowedthatallvarietieswerecompletelydifferedfromeachotherbyusingthese18primerpairs basedonthethresholdofgeneticsimilaritycoefficientat0 99 Somecultivarsfromsameoriginwereclusteredtogether obviously Inconclusion theDNAfingerprintofall84strawberryvarietywasconstructed andtherelationshipamong themwasclose Keywords strawberry SSR DNAfingerprinting geneticanalysis 草莓 FragariaananassaD u c h 是一種重要 的經(jīng)濟(jì)作物 因其獨(dú)特的風(fēng)味和較高的營養(yǎng)價(jià)值素 有 水果皇后 的美譽(yù) 1 中國是世界上草莓主要生 產(chǎn)國之一 2 0 2 0年我國草莓栽培面積和產(chǎn)量分別為 1 2 6 6萬h m 2和3 3 2 6 8萬t 占世界種植面積和產(chǎn) 量的3 2 9 2 和3 7 5 4 2 我國野生草莓資源豐 富 自然分布的草莓屬植物約有1 3種 分別為二倍 體和四倍體 3 2 0世紀(jì)初八倍體的栽培草莓鳳梨 草莓傳入我國 4 目前為止已從國外引進(jìn)八倍體 草莓品種上百個(gè) 其中以日本品種和歐美品種居 多 5 近年來我國自主繁育的品種逐年增加 截 至2 0 1 7年 我國草莓育種單位育成品種1 1 2 個(gè) 6 由于我國草莓種植區(qū)分布廣泛 不同地區(qū) 均存在引種現(xiàn)象 品種命名混亂 加上草莓本身的 營養(yǎng)繁殖特性 同名異物或同物異名的現(xiàn)象時(shí)有 出現(xiàn) 4 因此 使用分子技術(shù)手段準(zhǔn)確區(qū)分現(xiàn)有 草莓品種資源很有必要 利用分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建D N A指紋圖譜 能夠 從遺傳本質(zhì)層面對品種進(jìn)行鑒別和保護(hù) 中國已將 利用D N A指紋圖譜輔助草莓新品種測試列為重要 發(fā)展方向 7 簡單重復(fù)序列標(biāo)記 S i m p l e s e q u e n c e r e p e a t S S R 具有多態(tài)性豐富和穩(wěn)定性好等特點(diǎn) 國 內(nèi)外學(xué)者開發(fā)了大量S S R標(biāo)記用于草莓品種鑒 定 4 遺傳多樣性分析 8 9 及指紋圖譜構(gòu)建 1 0 1 2 等研 究 傳統(tǒng)S S R擴(kuò)增產(chǎn)物需要經(jīng)過銀染顯色等復(fù)雜 工序 步驟繁瑣費(fèi)時(shí) 而毛細(xì)管電泳熒光檢測方法具 有操作簡便和靈敏度高的優(yōu)勢 可克服這一難題 本研究擬利用最新S S R引物結(jié)合毛細(xì)管電泳技術(shù) 對收集的8 4個(gè)八倍體草莓資源進(jìn)行D N A指紋圖 譜構(gòu)建和遺傳分析 以期為草莓資源保護(hù) 品種鑒定 和新品種選育提供技術(shù)支持 1 材料與方法 1 1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)材料包括歐美 日韓及我國選育草莓品種 共計(jì)8 4份 現(xiàn)種植于山東普朗特農(nóng)業(yè)技術(shù)有限公 司 樣品信息見表1 1 2 DNA提取與PCR反應(yīng) 取草莓幼嫩葉片 加入液氮 用組織研磨儀研磨 成粉末 采用天根植物基因組D N A提取試劑盒提 取D N A 提取的D N A用適量T E緩沖液溶解 使 用微量紫外分光光度計(jì)檢測D N A濃度和純度 置 于 2 0 保存 參考苗立祥等 1 3 的研究方法 選用5 9對引物 對部分樣品進(jìn)行擴(kuò)增 選擇條帶清晰 單一和擴(kuò)增 多態(tài)性較好的1 8對引物對所有樣品進(jìn)行P C R擴(kuò) 增 上游引物連接M 1 3引物序列 以便與熒光標(biāo)記 的M 1 3引物進(jìn)行互補(bǔ)配對 M 1 3引物序列參考賈 琳琳等 1 4 普通引物和熒光引物由上海捷瑞生物 工程有限公司合成 P C R反應(yīng)體系總體積2 0 L 1 0 B u f f e r 2 0 L 2 5 m m o l L d N T P s 2 L 5 U L T a q酶0 2 L 1 0 m o l L M 1 3熒光引物1 L 1 m o l L上下游 引物m i x 1 L D N A模板2 L 用去離子水補(bǔ)足 2 0 L P C R反應(yīng)程序 9 5 模板預(yù)變性5 m i n 1 個(gè)循環(huán) 9 5 模板變性1 m i n 6 2 5 2 每循環(huán) 降低1 7 2 引物延伸4 5 s 共1 0個(gè)循環(huán) 9 5 模板變性1 m i n 5 2 復(fù)性結(jié)合4 5 s 7 2 引物延 伸4 5 s 共2 5個(gè)循環(huán) 最后6 0 延伸3 0 m i n 1 6 保存 P C R結(jié)束后 取產(chǎn)物1 2 L 加入含有 R O X 5 0 0內(nèi)標(biāo)的甲酰胺1 0 L 9 5 變性5 m i n 在 A B I 3 7 3 0 X L D N A分析儀上進(jìn)行熒光檢測 檢測 63 第2期劉國霞等 八倍體草莓D N A指紋圖譜的構(gòu)建與初步遺傳分析 表1 本研究所用的84份草莓資源信息 T a b l e 1 I n f o r m a t i o n o f 8 4 s t r a w b e r r y r e s o u r c e s u s e d i n t h i s s t u d y 序號 N o 品種名稱 C u l t i v a r 原產(chǎn)地 O r i g i n 序號 N o 品種名稱 C u l t i v a r 原產(chǎn)地 O r i g i n 序號 N o 品種名稱 C u l t i v a r 原產(chǎn)地 O r i g i n 1小桃紅中國2 9保3歐美5 7奈良8日本 2雪香韓國3 0格林2號德國5 8阿依孜歐美 3美香莎荷蘭3 1益香日本5 9提奧加歐美 4西班牙L西班牙3 2姆托歐美6 0里瓦歐美 5紅富美中國3 3紅崗特利德英國6 1星都2號中國 6斯坦勒美國3 4蘇維尼亞歐美6 2碩露中國 7粉佳人中國3 5長虹2號中國6 3長白中國 8 T u f t s美國3 6愛莓日本6 4石頭河子中國 9加拿大四季加拿大3 7戈利瑪荷蘭6 5丹東大果中國 1 0紅珍珠日本3 8布蘭登堡歐洲6 6雪里香中國 1 1達(dá)斯萊克特法國3 9貢品歐美6 7寧玉中國 1 2奇妙美國4 0冬花中國6 8艷雪中國 1 3都卡荷蘭4 1中國四季中國6 9艷麗中國 1 4西5歐美4 2綏中中國7 0雪兔日本 1 5輕騎中國4 3綏陵中國7 1章姬日本 1 6荷蘭草莓荷蘭4 4明旭中國7 2紅顏日本 1 7荷蘭西峽荷蘭4 5福特拉米歐美7 3甜查理美國 1 8 G o r e r h o r s i m c o e歐美4 6紅太后意大利7 4白雪公主中國 1 9駿河日本4 7宮本7號日本7 5明晶中國 2 0鄧肯特美國4 8卡瑪歐美7 6春旭中國 2 1上2歐美4 9胡得歐美7 7京怡香中國 2 2紅衣加拿大5 0格林1號德國7 8香野日本 2 3青島F中國5 1 M O H O W K歐美7 9越秀中國 2 4京泉香中國5 2賀登歐美8 0圣誕紅美國 2 5 D A G M A R歐美5 3新星2號中國8 1幸香日本 2 6韓韻中國5 4靜香日本8 2妙七中國 2 7塞納歐美5 5緋美子日本8 3粉玉中國 2 8美德萊特加拿大5 6肇國日本8 4紅袖添香中國 結(jié)果通過G e n e m a p p e r V 4 0軟件進(jìn)行片段大小和 基因型分析 1 3 數(shù)據(jù)分析 檢測產(chǎn)物明顯峰值按照四舍五入取整數(shù)記錄片段 大小 將這些引物擴(kuò)增主要片段帶型進(jìn)行組合 即為品 種的D N A指紋圖譜 將數(shù)據(jù)通過D a t a F o r m a t e r 2 7軟 件轉(zhuǎn)換為N T S Y S軟件要求的數(shù)據(jù)格式 1 5 利用 N T S Y S p c 2 1軟件 h t t p w w w a p p l i e d b i o s t a t c o m S M S i m p l e m a t c h i n g 法計(jì)算其遺傳相似系 數(shù) 然后根據(jù)相似系數(shù)用S A H N C l u s t e r i n g和非加 73 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)2 0 2 3年第2 8卷 權(quán)成對算術(shù)平均法 U n w e i g h t e d p a i r g r o u p m e t h o d w i t h a r i t h m e t i c m e a n U P G M A 進(jìn)行聚類分析 1 2 多態(tài)信息含量 P o l y m o p h i s m i n f o r m a t i o n c o n t e n t P I C 為某一標(biāo)記在群體中出現(xiàn)的頻率 反映該標(biāo)記 在群體檢測多態(tài)性的價(jià)值 1 6 根據(jù)N e i 1 7 方法計(jì) 算引物P I C值 P I C 1 Pi2 其中Pi為第i等位 變異的頻率 2 結(jié)果與分析 2 1 SSR引物篩選與多態(tài)性分析 選用D N A提取量較大 編號為9 1 5的7個(gè) 草莓樣品對5 9個(gè)S S R引物進(jìn)行篩選 經(jīng)毛細(xì)管電 泳檢測 選出1 8對多態(tài)性好和擴(kuò)增信號強(qiáng)的引物 引物名分別為 S 0 0 1 1 S 0 0 5 1 S 0 0 6 1 S 0 1 2 1 S 0 1 8 1 S 0 2 3 1 S 0 2 9 1 S 0 3 0 1 S 0 3 3 1 S 0 3 4 1 S 0 3 5 1 S 0 4 7 1 S 0 4 9 1 S 0 6 1 1 S 0 6 4 1 S 0 7 0 1 S 0 7 9 1和S 0 9 7 1 這些 引物分別編號P 1 P 1 8 每對引物擴(kuò)增產(chǎn)物相對片 段大小基本與此前苗立祥等 1 3 研究公布的一致 表2 引物P 1 0和P 1 1在部分草莓品種中檢測的 不同類型的等位變異峰見圖1 樣品 紅太后 宮本 7號 綏陵 胡得 經(jīng)引物P 1 0擴(kuò)增得到的帶型組合 分別為2 0 5 1 9 2 2 6 6 2 6 0 2 6 6和2 0 5 2 7 2 而 賀登 新星2號 靜香 肇國 經(jīng)引物P 1 1擴(kuò)增得到的帶 型組合分別為2 0 0 2 2 3 1 9 7 1 9 5 2 5 0和2 2 3 2 5 0 表2 擴(kuò)增多態(tài)性信息所用18對引物 T a b l e 2 P o l y m o r p h i c a m p l i f i c a t i o n i n f o r m a t i o n o f t h e 1 8 p r i m e r s u s e d 編號 C o d e 名稱 N a m e 片段大 小 b p F r a g m e n t s i z e 文獻(xiàn)中片段 大小 1 3 b p F r a g m e n t s i z e i n c i t e d p a p e r 總條帶 數(shù) 個(gè) T o t a l b a n d s 多態(tài)性 條帶數(shù) 個(gè) P o l y m o r p h i c b a n d s 帶型數(shù) 個(gè) F r a g m e n t c o m b i n a t i o n P I C值 P I C v a l u e P 1 S 0 0 1 1 2 4 1 2 7 8 2 1 6 8 8 2 0 0 7 6 8 P 2 S 0 0 5 1 1 7 6 2 0 6 2 0 1 6 6 2 4 0 8 0 5 P 3 S 0 0 6 1 1 7 1 2 1 3 1 9 5 1 2 1 2 4 7 0 8 7 4 P 4 S 0 1 2 1 2 3 5 2 5 9 2 1 9 6 4 8 0 5 5 4 P 5 S 0 1 8 1 2 0 1 2 5 1 2 1 3 8 8 1 4 0 7 4 7 P 6 S 0 2 3 1 2 3 7 2 5 8 2 1 6 5 4 1 2 0 7 2 4 P 7 S 0 2 9 1 2 0 0 2 3 7 2 0 2 7 7 2 2 0 7 7 8 P 8 S 0 3 0 1 1 9 9 2 3 5 2 1 1 9 9 1 6 0 6 9 5 P 9 S 0 3 3 1 2 0 6 2 5 5 2 1 3 1 3 1 3 2 4 0 8 2 5 P 1 0 S 0 3 4 1 1 9 8 2 7 5 2 3 1 1 0 9 2 0 0 5 4 6 P 1 1 S 0 3 5 1 1 9 5 2 5 2 2 1 0 9 9 2 4 0 8 3 0 P 1 2 S 0 4 7 1 1 2 4 1 9 6 1 9 3 1 1 1 1 3 0 0 6 9 2 P 1 3 S 0 4 9 1 2 3 0 2 3 8 2 2 5 4 4 9 0 6 6 7 P 1 4 S 0 6 1 1 2 1 2 2 8 2 2 3 5 1 7 1 7 4 3 0 8 3 0 P 1 5 S 0 6 4 1 2 4 0 2 7 5 2 1 6 1 1 9 2 2 0 7 5 2 P 1 6 S 0 7 0 1 2 3 4 2 5 8 2 1 2 8 8 1 6 0 9 0 8 P 1 7 S 0 7 9 1 2 4 8 2 6 8 2 4 1 8 8 1 8 0 7 4 4 P 1 8 S 0 9 7 1 2 6 4 2 8 6 2 4 7 4 4 7 0 4 9 4 83 第2期劉國霞等 八倍體草莓D N A指紋圖譜的構(gòu)建與初步遺傳分析 圖1 引物P10 a 和P11 b 對部分草莓樣品擴(kuò)增峰圖 F i g 1 A m p l i f i e d p r o f i l e s o f p r i m e r P 1 0 a a n d P 1 1 b f r o m s o m e s t r a w b e r r y s a m p l e s 使用1 8對S S R熒光標(biāo)記引物對8 4份草莓品 種進(jìn)行擴(kuò)增 共得到1 5 6個(gè)條帶 其中多態(tài)性條帶 1 5 0個(gè) 不同引物擴(kuò)增到的多態(tài)性條帶數(shù)為4 1 7 個(gè) 多態(tài)性條帶帶型總數(shù)為3 7 7個(gè) 采用遺傳多樣 性分析各引物的P I C值范圍為0 4 9 4 0 9 0 8 平均 值為0 7 3 8 表2 說明這些引物多態(tài)性較高 可用 于對這些草莓品種進(jìn)行多態(tài)性分析 2 2 84個(gè)草莓品種DNA指紋數(shù)據(jù)庫的建立 為便于記錄 將1 8對S S R引物P 1 P 1 8分別 編號為A R 每對引物在8 4個(gè)草莓品種中擴(kuò)增出 的帶型 按照條帶的個(gè)數(shù)從少到多 條帶個(gè)數(shù)相同的 按照分子量從小到大 排序 依次將不同的帶型標(biāo)注 為1 2 3 再將每個(gè)品種在1 8對引物上擴(kuò)增帶 型進(jìn)行對應(yīng)的數(shù)字編碼 1 8 將引物編號與相應(yīng)的帶 型編碼進(jìn)行組合得到該樣品在特定引物的擴(kuò)增產(chǎn)物 編碼 1 8對引物順序串聯(lián)這些編碼形成該品種的 D N A指紋圖譜 如P 1共擴(kuò)增帶型數(shù)2 0個(gè) 按照以 上原則進(jìn)行編號分別為1 2 5 0 2 2 5 4 3 2 5 8 4 2 6 2 5 2 4 1 2 5 0 6 2 4 1 2 5 4 7 2 4 1 2 5 8 8 2 4 1 2 6 2 9 2 4 3 2 5 0 1 0 2 4 3 2 5 4 1 1 2 4 3 2 5 8 1 2 2 4 3 2 6 2 1 3 2 4 3 2 7 8 1 4 2 5 0 2 5 4 1 5 2 5 0 2 5 8 1 6 2 5 0 2 6 2 1 7 2 5 4 2 5 8 1 8 2 5 4 2 6 2 1 9 2 5 8 2 6 2 2 0 2 5 8 2 6 6 例如 1號樣品 小桃紅 由P 1擴(kuò)增到多態(tài)性 帶型為2 5 0 2 5 4 對應(yīng)第1 4種帶型 因此引物P 1對 小桃紅 擴(kuò)增帶型編碼為A 1 4 引物P 2共擴(kuò)增帶 型數(shù)2 4個(gè) 該引物擴(kuò)增 小桃紅 的帶型為1 7 6 1 8 5 1 8 8 1 9 7 對應(yīng)第1 7種帶型 則引物P 2對 小 桃紅 擴(kuò)增帶型編碼為B 1 7 按照同樣原則 將其他 引物對 小桃紅 的擴(kuò)增帶型進(jìn)行編碼 按照P 1 P 1 8引物順序?qū)途幋a進(jìn)行組合 得到 小桃紅 的指紋代碼為A 1 4 B 1 7 C 2 5 D 5 E 1 0 F 4 G 1 5 H 8 I 1 7 J 1 K 7 L 1 8 M 7 N 3 5 O 1 4 P 1 2 Q 6 R 1 按照此方法建立了 8 4個(gè)草莓品種的D N A指紋圖譜數(shù)據(jù)庫 2 3 聚類分析 基于1 8對S S R引物對8 4份草莓品種進(jìn)行聚 類分析 圖2 表明 8 4份草莓品種資源的遺傳相似 系數(shù)范圍為0 6 1 0 9 9 一些品種之間相似系數(shù)接 近0 9 9 如 紅富美 紅珍珠 福特拉米 紅太 后 和 胡得 格林1號 聚類結(jié)果顯示一些來源 接近的品種聚在一起 如紅花草莓 小桃紅 粉佳 人 我國的地方品種 丹東大果 石頭河子 聚在一 起 荷蘭西峽 荷蘭草莓 聚在一起 在遺傳相似 系數(shù)為0 7 4處可把供試品種劃分為4個(gè)主要類群 第I類有7個(gè)品種 歐美3個(gè) 我國3個(gè)和日本1 個(gè) 第I I類有1 7個(gè)品種 以歐美品種為主 1 2個(gè) 還包括廣泛用作育種親本的日本 紅顏 草莓以及我 國培育的 京怡香 草莓 紅顏 是 京怡香 的親本 之一 第 類包括1 1個(gè)品種 其中歐美品種有6個(gè) 93 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)2 0 2 3年第2 8卷 紅富美 紅珍珠 加拿大四季 聚在一起 歐美品 種 西5 賀登 和日本品種 宮本7號 聚在一起 推測這些草莓可能具有較近的親緣關(guān)系 第 類共 4 9個(gè)品種 其中歐美品種1 7個(gè) 我國品種2 2個(gè) 日 本和韓國品種共1 0個(gè) 包括市場主栽草莓品種 甜 查理 紅袖添香 妙七 香野 等 我國地方品種 丹東大果 石頭河子 與我國選育品種遺傳距離 較遠(yuǎn) 圖中序號對應(yīng)的草莓品種詳見表1 I I V表示在遺傳相似系數(shù)0 7 4處8 4個(gè)草莓品種所聚類成的4個(gè)類群 S e e t a b l e 1 f o r t h e d e t a i l e d s t r a w b e r r y i n f o r m a t i o n c o r r e s p o n d i n g t o t h e c o d e n u m b e r i n t h e F i g 2 I I V r e p r e s e n t s 4 g r o u p s o f 8 4 s t r a w b e r r y s a m p l e s c l u s t e r e d a t g e n e t i c s i m i l a r i t y c o e f f i c i e n t 0 7 4 圖2 基于18對SSR標(biāo)記的84個(gè)草莓品種聚類分析樹狀圖 F i g 2 D e n d r o g r a m o f 8 4 s t r a w b e r r y b a s e d o n 1 8 S S R m a r k e r s 3 討論與結(jié)論 經(jīng)過不同渠道引進(jìn)國外草莓資源以及各地頻繁 引種 導(dǎo)致我國草莓名稱容易出現(xiàn)同物異名或同名 異物等現(xiàn)象 如本研究中的草莓品種 都卡 疑似為 荷蘭品種 因都卡 I n d u k a 草莓品種 紅崗特利 德 R e d g a u n t l e d 有研究稱為 紅崗利特德 2 1 或 稱為 紅手套 8 因此 對于國外引進(jìn)品種有必要 04 第2期劉國霞等 八倍體草莓D N A指紋圖譜的構(gòu)建與初步遺傳分析 規(guī)范品種名稱 建議從國外引進(jìn)的品種可直接記錄 英文名稱 避免出現(xiàn)命名混亂的情況 另外 對于品 種名稱不確定的資源 可以通過建立D N A指紋圖 譜來區(qū)分不同品種 本研究構(gòu)建了8 4個(gè)草莓品種 的D N A指紋信息數(shù)據(jù)庫 為這些草莓品種準(zhǔn)確區(qū) 分提供了方法 本研究所用的S S R引物選自苗立祥等 1 3 基于 草莓基因組序列開發(fā)的 從中篩選出的1 8對引物多 態(tài)性較好 對8 4個(gè)草莓品種擴(kuò)增條帶數(shù)和片段范圍 與苗立祥等 1 3 報(bào)道的有些差異 其原因除了苗立祥 等 1 3 引物直接標(biāo)記熒光而本研究使用M 1 3熒光引 物之外 還可能跟所用試驗(yàn)材料不同有關(guān) 許多研 究者應(yīng)用熒光S S R標(biāo)記的毛細(xì)管電泳技術(shù)檢測的 方法構(gòu)建了小麥 1 8 高粱 1 9 和水稻 2 0 等作物的指 紋圖譜 黃志城等 1 2 參照小麥指紋編碼方法 按照 固定引物順序 串聯(lián)各帶型編碼 形成1組代表該品 種的數(shù)字信息 構(gòu)建了中國草莓已知品種D N A指 紋信息數(shù)據(jù)庫 本研究參考前人的方法對每對引物 擴(kuò)增草莓樣品的帶型進(jìn)行編碼 但與前人研究的區(qū) 別在于之前研究中帶型編碼以數(shù)字1 9和英文 A Z 記錄1 0以上的帶型 表示 所以指紋信息中 每一位數(shù)字或字母代表每個(gè)引物的擴(kuò)增帶型信息 如第2位數(shù)字或字母代表第2個(gè)引物擴(kuò)增的帶型特 征 而本研究中僅以數(shù)字記錄帶型 首次將引物進(jìn)行 編號 引物編號與相應(yīng)的帶型編碼進(jìn)行組合得到該 樣品在特定引物的擴(kuò)增產(chǎn)物編碼 按照1 8對引物順 序串聯(lián)這些編碼形成該品種的D N A指紋圖譜 與 前人指紋圖譜編碼方法相比 本研究采用的編碼加 入引物編號 使編碼更方便 不易出錯(cuò) 本研究基于1 8對S S R引物建立了8 4份草莓 品種資源的遺傳關(guān)系 品種間遺傳相似系數(shù)范圍 為0 6 1 0 9 9 與韓柏明等 2 1 利用1 8對S S R引 物研究9 6份草莓資源的相似系數(shù)在0 6 2 1 0 0 的研究一致 說明現(xiàn)有草莓品種之間親緣關(guān)系較 近 可能與常規(guī)雜交選育新品種的方式有關(guān) 本 研究中聚類分析發(fā)現(xiàn) 我國選育的品種與國外品 種混雜在一起 其可能原因是我國選育品種和地 方品種及日本品種都直接或間接來源于歐美品 種 2 1 導(dǎo)致遺傳基礎(chǔ)狹窄 因此今后我國草莓育 種應(yīng)收集利用更多種質(zhì)資源 尤其是野生資源 拓 寬草莓品種遺傳基礎(chǔ) 為培育出優(yōu)質(zhì)的草莓新品 種奠定基礎(chǔ) 參考文獻(xiàn) References 1 鄧明琴 雷家軍 中國果樹志 草莓卷 M 北京 中國林業(yè)出版社 2 0 0 5 D e n g M Q L e i J J ChinaFruit plantMornographofStrawberry Fragaria M B e i j i n g C h i n a F o r e s t r y P u b l i s h i n g H o u s e 2 0 0 5 i n C h i n e s e 2 F A O F o o d a n d a g r i c u l t u r e d a t a E B O L 2 0 2 2 0 6 2 0 h t t p w w w f a o o r g f a o s t a t z h d a t a Q C 3 雷家軍 薛莉 代漢萍 鄧明琴 世界草莓屬 Fragaria 植物的種類與分 布 C 草莓研究進(jìn)展 I V 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 2 0 1 5 3 4 9 3 6 0 L e i J J X u e L D a i H P D e n g M Q S p e c i e s a n d d i s t r i b u t i o n o f t h e F r a g a r i a i n t h e w o r l d C I n AdvanceofStrawberryResearch IV B e i j i n g C h i n a A g r i c u l t u r e P r e s s 2 0 1 5 3 4 9 3 6 0 i n C h i n e s e 4 陳堅(jiān) 鄭益平 郭文杰 楊志敏 莊志鴻 朱炳耀 福建省草莓主栽與 引進(jìn)品種的S S R分子標(biāo)記鑒定 J 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2 0 1 8 3 3 2 1 5 0 1 5 3 C h e n J Z h e n g Y P G u o W J Y a n g Z M Z h u a n g Z H Z h u B Y I d e n t i f i c a t i o n o f m a j o r a n d i n t r o d u c e d s t r a w b e r r y c u l t i v a r s i n F u j i a n u s i n g S S R m o l e c u l a r m a r k e r s J FujianJournalofAgriculturalSciences 2 0 1 8 3 3 2 1 5 0 1 5 3 i n C h i n e s e 5 冀蘆沙 肖慶振 于守超 趙燕 山東境內(nèi)1 1個(gè)草莓品種的品質(zhì)及遺 傳特性分析 J 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2 0 1 2 4 7 2 3 9 4 4 J i L S X i a o Q Z Y u S C Z h a o Y N u t r i t i o n a l q u a l i t y a n d g e n e t i c c h a r a c t e r i s t i c s o f e l e v e n s t r a w b e r r y c u l t i v a r s i n S h a n d o n g P r o v i n c e J JournalofGansuAgriculturalUniversity 2 0 1 2 4 7 2 3 9 4 4 i n C h i n e s e 6 常琳琳 董靜 鐘傳飛 孫健 孫瑞 石琨 王桂霞 張運(yùn)濤 中國育成 草莓品種的系譜分析 J 果樹學(xué)報(bào) 2 0 1 8 3 5 2 1 5 8 1 6 7 C h a n g L L D o n g J Z h o n g C F S u n J S u n R S h i K W a n g G X Z h a n g Y T P e d i g r e e a n a l y s i s o f s t r a w b e r r y c u l t i v a r s r e l e a s e d i n C h i n a J JournalofFruitScience 2 0 1 8 3 5 2 1 5 8 1 6 7 i n C h i n e s e 7 黃志城 徐巖 顧曉君 陳海榮 李壽國 褚云霞 顧可飛 草莓屬新品 種D U S測試指南的修訂 J 中國農(nóng)學(xué)通報(bào) 2 0 1 3 2 9 7 1 7 3 1 7 8 H u a n g Z C X u Y G u X J C h e n H R L i S G C h u Y X G u K F R e v i s i o n o f t e s t g u i d e l i n e s o f n e w p l a n t v a r i e t i e s o f s t r a w b e r r y Fragaria L J ChineseAgriculturalScienceBulletin 2 0 1 3 2 9 7 1 7 3 1 7 8 i n C h i n e s e 8 董清華 王西成 趙密珍 宋長年 葛安靜 王靜 草莓E S T S S R標(biāo)記 開發(fā)及在品種遺傳多樣性分析中的應(yīng)用 J 中國農(nóng)業(yè)科學(xué) 2 0 1 1 4 4 1 7 3 6 0 3 3 6 1 2 D o n g Q H W a n g X C Z h a o M Z S o n g C N G e A J W a n g J D e v e l o p m e n t o f E S T d e r i v e d S S R m a r k e r s a n d t h e i r a p p l i c a t i o n i n s t r a w b e r r y g e n e t i c d i v e r s i t y a n a l y s i s J ScientiaAgriculturaSinica 2 0 1 1 4 4 1 7 3 6 0 3 3 6 1 2 i n C h i n e s e 9 沈嵐 焦云 張國芳 基于E S T S S R分子標(biāo)