李培謙 藥 震 邵元元 等 黃瓜枯萎病拮抗放線菌的篩選及防治效果 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 黃瓜枯萎病拮抗放線菌的篩選及防治效果 李培謙 藥 震 邵元元 馮寶珍 北部灣環(huán)境演變與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣西地表過(guò)程與智能模擬重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南寧師范大學(xué) 廣西南寧 運(yùn)城學(xué)院生命科學(xué)系 山西運(yùn)城 摘要 為篩選黃瓜枯萎病生防菌 采集黃瓜根際土壤分離放線菌 通過(guò)對(duì)峙培養(yǎng)獲得一株具有較強(qiáng)抑菌活性的放 線菌 根據(jù)形態(tài)特征 生理生化特性及 序列系統(tǒng)進(jìn)化分析確定菌株 為卡那鏈霉菌 發(fā)酵液具有強(qiáng)烈的抑菌活性 其 倍稀釋液對(duì)黃瓜枯萎病菌分生孢子萌發(fā)及菌 絲生長(zhǎng)抑制率分別達(dá)到 其 倍稀釋液對(duì)孢子和菌絲抑制率也在 以上 黃瓜苗盆栽防效試 驗(yàn)結(jié)果顯示 菌株 發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病防效可達(dá) 放線菌 對(duì)黃瓜枯萎病菌具有較好的抑菌活 性 具有開(kāi)發(fā)成天然抗菌活性物質(zhì)的潛力 關(guān)鍵詞 黃瓜枯萎病菌 鏈霉菌 抑菌活性 生物防治 中圖分類(lèi)號(hào) 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 文章編號(hào) 收稿日期 基金項(xiàng)目 國(guó)家自然科學(xué)基金 編號(hào) 北部灣環(huán)境演變與 資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和廣西地表過(guò)程與智能模擬重點(diǎn)實(shí)驗(yàn) 室 南寧師范大學(xué) 開(kāi)放基金 編號(hào) 山西省高?？萍紕?chuàng)新項(xiàng)目 編號(hào) 山西省自然科學(xué)基金 編號(hào) 運(yùn)城科技局項(xiàng)目 編 號(hào) 運(yùn)城學(xué)院食品科學(xué)與工程 重點(diǎn)學(xué)科項(xiàng)目 編號(hào) 作者簡(jiǎn)介 李培謙 男 山東濟(jì)南人 博士 副教授 主要從事 生物防治研究 通信作者 馮寶珍 博士 教授 主要從事果蔬病害防治研究 黃瓜真菌性枯萎病 是黃 瓜生產(chǎn)上的毀滅性病害之一 該病害由尖孢鐮刀菌黃 瓜專(zhuān)化型 引 起 該病害在世界黃瓜種植區(qū)廣泛發(fā)生 給黃瓜生 產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失 該病的化學(xué)防治常以多菌靈 咪鮮胺 惡霉靈 代森錳鋅等殺菌劑為主 但高頻 次 大劑量使用化學(xué)藥劑給生態(tài)環(huán)境帶來(lái)巨大壓 力 農(nóng)藥殘留和環(huán)境安全已經(jīng)成了危害人類(lèi)健康的 棘手問(wèn)題 因而 從環(huán)保生態(tài)角度研究廣譜高效 的生防菌對(duì)枯萎病防治具有不可替代的作用 近年來(lái)報(bào)道的對(duì)黃瓜枯萎病具有拮抗作用的 微生物有真菌 細(xì)菌 和放線菌 棘孢 木霉 哈茨木霉 和擬康氏木霉 聯(lián)合接 種對(duì)黃瓜枯萎病防效可達(dá) 而深綠木霉 的水分散粒劑效果優(yōu)于哈茨木霉 葡萄汁有孢漢遜酵母 菌株 在固體培養(yǎng)基上對(duì)黃瓜枯萎病病菌具有完 全抑制作用 芽孢桿菌中巨大芽孢桿菌 多粘 類(lèi)芽孢桿菌 枯草芽孢桿菌 解淀粉芽孢桿 菌 和貝萊斯芽孢桿菌 等均對(duì)黃瓜枯萎病菌具 有抑制作用 而放線菌中對(duì)黃瓜枯萎病具有良好 抑制效果的生防菌以鏈霉菌屬 居多 如黃赭色鏈霉菌 菌株對(duì)黃瓜枯萎 病防效為 比基尼鏈霉菌 菌株對(duì)黃瓜枯萎病菌具有明顯的抑制效 果 對(duì)黃瓜枯萎病菌抑制率達(dá)到 龜裂鏈霉菌 菌株發(fā)酵 產(chǎn)物黃瓜枯萎病菌的拮抗作用明顯 然而 放線 菌資源豐富 種類(lèi)繁多 已研究報(bào)道的種類(lèi)有限 而 且 由于目前使用的一些化合物的高殘留性以及病原 物出現(xiàn)的抗藥性 所以挖掘新抗生素和其他生物活性 代謝物仍然是新藥研究的重要目標(biāo) 本研究以農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上難以防治的黃瓜枯萎病 菌為靶標(biāo) 進(jìn)行拮抗放線菌篩選 并對(duì)高活性菌株 進(jìn)行發(fā)酵復(fù)篩 種類(lèi)鑒定 室內(nèi)及離體防效研究 本研究旨在為黃瓜枯萎病生物防治提供理論依據(jù) 也為拮抗生防菌資源開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ) 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 材料與方法 供試材料 試驗(yàn)于 年 月至 年 月在運(yùn)城學(xué) 院逸夫?qū)嶒?yàn)樓及智能溫室開(kāi)展 年 月于山 西省運(yùn)城市北相鎮(zhèn)黃瓜大棚采集土壤樣品 采用五 點(diǎn)取樣法在健康黃瓜根際取土 取 土樣 裝入無(wú)菌自封袋備用 供試病原菌黃瓜枯萎病菌 保存于筆者所在 實(shí)驗(yàn)室 高氏一號(hào)培養(yǎng)基 可溶性 淀粉 蒸餾水 馬鈴薯葡萄糖 培養(yǎng) 基 馬鈴薯 葡萄糖 瓊脂粉 蒸餾水 小米培養(yǎng)基 葡萄糖 蛋白胨 小麥 蒸餾水 值 放線菌的分離與純化 將風(fēng)干土樣研磨成粉 稱(chēng)取 倒入 無(wú) 菌水中 攪拌溶解后靜置 取上清液 將上清 液梯度稀釋后與 左右高氏一號(hào)培養(yǎng)基混勻后 倒平板 置于 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 周 長(zhǎng)出菌落后轉(zhuǎn) 接到新的高氏一號(hào)平板 具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn) 拮抗放線菌的篩選 拮抗菌株的初篩 根據(jù)參見(jiàn)文獻(xiàn) 的方 法 準(zhǔn)備放線菌和黃瓜枯萎病菌菌餅 將黃瓜枯萎 病菌菌餅接種于 平板中央 同時(shí)將放線菌菌餅 接種于距病原菌約 的四周 培養(yǎng) 對(duì)照組只接黃瓜枯萎病菌菌餅 觀察病原菌菌落 生長(zhǎng)情況 并測(cè)量菌落直徑 每個(gè)處理重復(fù) 次 放線菌發(fā)酵液活性測(cè)定 放線菌 用 高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基于 振蕩培養(yǎng) 然后再按 的接種量接入到裝液量為 的 小米培養(yǎng)基中 三角瓶 在 上述培養(yǎng)條件下發(fā)酵 發(fā)酵結(jié)束后 用快速定性 濾紙抽濾得到發(fā)酵液 所得發(fā)酵液再用 的 無(wú)菌濾器過(guò)濾 置于 冰箱備用 采用濾紙條法和牛津杯法檢測(cè)發(fā)酵液的抑菌 活性 濾紙條法 平板正中接病原菌菌餅 然 后在菌餅兩側(cè)同等距離處貼濾紙條 然后加入 發(fā)酵液浸潤(rùn) 以無(wú)菌水作為對(duì)照 試驗(yàn)重復(fù) 次 牛津杯法 制備 個(gè) 黃瓜枯萎病分 生孢子懸浮液 將 孢子懸浮液均勻涂布在 平板上 然后將 個(gè)無(wú)菌牛津杯均勻放置在 平板上 將 發(fā)酵濾液置于牛津杯中 以 無(wú)菌水為對(duì)照 將平板置于 下恒溫培養(yǎng) 然 后測(cè)量抑菌圈寬度 每個(gè)處理設(shè)置 個(gè)重復(fù) 拮抗菌株的分類(lèi)地位 表型特征及生理生化特征 在高氏一號(hào)培 養(yǎng)基上培養(yǎng) 觀察氣生菌絲 基內(nèi)菌絲顏色 可溶性色素的有無(wú) 根據(jù)文獻(xiàn)描述的方法對(duì)菌株進(jìn) 行初步鑒定 采用插片法觀察菌株 在高 氏一號(hào)培養(yǎng)基的基內(nèi)菌絲形態(tài)和孢子特征 菌株 生理生化特性分析參照 放線菌快速鑒定與系統(tǒng)分 類(lèi) 和 微生物資源學(xué) 中相應(yīng)章節(jié)的描述 進(jìn)行 分子鑒定 利用十六烷基三甲基溴化銨 法提取 基因組 以細(xì)菌 通用引物 和 進(jìn)行 擴(kuò)增 反應(yīng)體系 基因組 引物各 補(bǔ)足至 反應(yīng)程序?yàn)?個(gè)循環(huán) 最后 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳初步檢測(cè)后 送到生工生物工 程 上海 股份有限公司進(jìn)行測(cè)序 測(cè)序結(jié)果在 中進(jìn)行 分析比對(duì) 并下載模式菌株的 序列 采用 構(gòu)建 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)以明確菌株分類(lèi)地位 對(duì)黃瓜枯萎病的拮抗活性及防效測(cè)定 發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病菌絲生長(zhǎng)的影響 培養(yǎng)箱內(nèi)將黃瓜枯萎病病菌在 平板上培 養(yǎng) 周 用打孔器取菌餅 直徑 將無(wú)菌發(fā) 酵原液與 培養(yǎng)基按一定比例混勻制成含藥平 板 使發(fā)酵液稀釋成 倍液 將菌餅 接至平板中央 下培養(yǎng) 后 以十字交叉法 測(cè)量菌落直徑大小 計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率 菌絲生 長(zhǎng)速率計(jì)算公式參照文獻(xiàn) 進(jìn)行 以無(wú)菌水的 處理為對(duì)照 設(shè)置 個(gè)重復(fù) 發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病病菌分生孢子萌發(fā)的 影響 制備濃度為 個(gè) 的黃瓜枯萎病 孢子懸浮液 加入適量上述發(fā)酵液將孢子懸浮液終 濃度調(diào)為 個(gè) 于 暗培養(yǎng) 后 鏡檢 每個(gè)處理觀察 個(gè)視野 分別觀察 個(gè)分生 孢子 統(tǒng)計(jì)孢子萌發(fā)率 如果分生孢子抽出芽管 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 芽管長(zhǎng)度至少為分生孢子長(zhǎng)度的一半 長(zhǎng)出菌 絲 則判定分生孢子已萌發(fā) 以無(wú)菌水為對(duì)照 每個(gè)處理 個(gè)重復(fù) 參照文獻(xiàn)中方法計(jì)算孢子萌 發(fā)率 發(fā)酵液對(duì)盆栽黃瓜苗的防治效果 利用盆栽黃瓜苗測(cè)定 對(duì)黃瓜苗期枯萎病的 室內(nèi)防效 按上述方法制備黃瓜枯萎病病菌孢子 懸浮液 個(gè) 接種感病黃瓜品種 的幼 苗 試驗(yàn)設(shè)置 個(gè)處理 接種病原菌 發(fā)酵液原液 接種病原菌分生孢子懸浮液 每個(gè) 處理使病原菌分生孢子終濃度調(diào)節(jié)為 分別移栽 棵黃瓜幼苗并用 接種液灌根處 理 具體測(cè)試方法參見(jiàn)文獻(xiàn) 試驗(yàn)設(shè)置 個(gè) 重復(fù) 后測(cè)量并記錄發(fā)病情況 計(jì)算病情指 數(shù)和防治效果 病情指數(shù) 病株數(shù) 相應(yīng)級(jí) 數(shù) 總株數(shù) 最高級(jí)數(shù) 防治效果 對(duì)照病 情指數(shù) 處理病情指數(shù) 對(duì)照病情指數(shù) 數(shù)據(jù)處理 采用 統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行 差異顯著性檢驗(yàn) 新復(fù)極差法 結(jié)果與分析 拮抗菌株分離 共獲得 株放線菌純培養(yǎng) 編號(hào)為 通過(guò)形態(tài)觀察 初步去除重復(fù)菌株 根據(jù) 平板對(duì)峙培養(yǎng)結(jié)果 發(fā)現(xiàn)對(duì)黃瓜枯萎病具有明顯拮 抗作用的放線菌有 株 表 其中菌株 抑 菌率達(dá) 因此本研究選擇 進(jìn)行后續(xù) 試驗(yàn) 圖 表 放線菌對(duì)黃瓜枯萎病菌的抑制作用初篩結(jié)果 菌株編號(hào)菌落直徑 抑菌率 注 同列數(shù)據(jù)后不同小寫(xiě)字母表示在 水平上差異顯著 表 表 同 拮抗放線菌復(fù)篩 對(duì)拮抗放線菌進(jìn)行復(fù)篩 結(jié)果表明 發(fā)酵液抑 菌活性顯著 牛津杯周?chē)霈F(xiàn)了明顯的抑菌圈 抑 菌圈直徑可達(dá) 圖 浸潤(rùn)發(fā)酵液的無(wú) 菌濾紙條具有明顯的抑制活性 而對(duì)照組病原菌能 正常生長(zhǎng) 圖 圖 因此 放線菌 發(fā)酵液具有明顯的抑菌活性 可以作為黃瓜枯萎病 候選生防菌用于后續(xù)試驗(yàn) 菌株鑒定 形態(tài)特征 放線菌 在高氏一號(hào)培養(yǎng) 基上菌落呈扁平狀 近圓形 孢子絲乳白色 培養(yǎng)過(guò) 程中無(wú)色素產(chǎn)生 圖 其基絲連續(xù) 氣生菌絲發(fā) 達(dá) 可產(chǎn)生大量孢子 生理生化特征 根據(jù) 放線菌快速鑒定與 系統(tǒng)分類(lèi) 和 微生物資源學(xué) 的相關(guān)章節(jié)方法對(duì)菌 株生理生化進(jìn)行分析 由表 可知 菌株 能使淀粉 纖維素水解 能使牛奶凝固和胨 化 能使明膠液化 不能使硝酸鹽還原 不能產(chǎn)生硫 化氫 能利用 葡萄糖 果糖 蔗糖 不能利 用麥芽糖 鼠李糖 分子鑒定 對(duì)放線菌株 進(jìn)行分子鑒 定 結(jié)果表明 放線菌株 的 核苷酸 總長(zhǎng)為 登錄號(hào) 經(jīng) 比對(duì)分析 發(fā)現(xiàn)與菌株 同源性高者均 屬于鏈霉菌屬 下載 個(gè)典型菌株的 序 列用 軟件 法構(gòu)建進(jìn)化 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 表 菌株 的生理生化特征 生理生化特征結(jié)果生理生化特征結(jié)果 淀粉水解 纖維素利用 硫化氫反應(yīng) 牛奶胨化 硝酸鹽還原 明膠液化 牛奶凝固 麥芽糖 蔗糖 果糖 鼠李糖 葡萄糖 注 表示陽(yáng)性反應(yīng)或可利用 表示陰性反應(yīng)或不可 利用 樹(shù) 圖 結(jié)果表明 菌株 與 親緣關(guān)系最近 聚為一 支 因此將菌株 初步鑒定為卡那鏈霉菌 放線菌 對(duì)黃瓜枯萎病的抑菌活性及盆 栽防效 發(fā)酵濾液對(duì)黃瓜枯萎病分生孢子萌發(fā)的抑 制作用 經(jīng)不同濃度發(fā)酵濾液處理的黃瓜枯萎病 分生孢子萌發(fā)率差異明顯 說(shuō)明 發(fā)酵濾液對(duì) 黃瓜枯萎病菌分生孢子萌發(fā)具有明顯的抑制效果 稀釋 倍的發(fā)酵液處理的黃瓜枯萎病菌孢子萌發(fā)抑 制率達(dá) 當(dāng)發(fā)酵液稀釋 倍時(shí)對(duì)分生孢 子的抑制率為 稀釋 倍時(shí) 對(duì)病原菌分 生孢子萌發(fā)抑制率仍達(dá) 而當(dāng)稀釋到 倍時(shí) 抑制效果明顯減弱 分生孢子萌發(fā)抑制率只 有 抑菌活性顯著降低 表 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病菌生長(zhǎng)的抑制效果 由表 可知 發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病菌菌絲生 長(zhǎng)抑制效果明顯 當(dāng)發(fā)酵液稀釋 倍時(shí) 對(duì)病原菌 菌絲生長(zhǎng)抑制率為 當(dāng)稀釋 倍時(shí) 抑制 率為 當(dāng)稀釋 倍時(shí) 菌絲抑制率下降到 當(dāng)稀釋 倍時(shí) 菌絲抑制率為 抑菌活性顯著降低 表 菌株 發(fā)酵濾液對(duì)黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用 稀釋倍數(shù)分生孢子萌發(fā)抑制率 菌絲生長(zhǎng)抑制率 發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病的防效 將 菌 株發(fā)酵后進(jìn)行黃瓜枯萎病盆栽防效測(cè)定 結(jié)果 表 表明 接種菌株 發(fā)酵原液有效降低了黃瓜 枯萎病的發(fā)病 發(fā)病率明顯降低 防治效果達(dá) 發(fā)酵液拮抗黃瓜幼苗枯萎病效果 明顯 具有生防菌株的潛力 具有良好的應(yīng)用前景 討論與結(jié)論 真菌性枯萎病是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的土傳病害 主要由鐮孢菌屬真菌尖孢鐮孢菌 引起 據(jù)報(bào)道大田作物 園林花 卉 林果及保護(hù)地蔬菜等均能發(fā)生真菌枯萎病 造 成嚴(yán)重?fù)p失 枯萎病病原菌生存能力強(qiáng) 傳播途徑 表 菌株 發(fā)酵濾液對(duì)盆栽黃瓜苗防病效果 處理 病害防治 發(fā)病率 病情指數(shù)防病效果 黃瓜枯萎病菌 發(fā)酵原 液 病原菌 多 一旦發(fā)病很難根治 因此 近年來(lái)利用高活性 生防菌防治枯萎病是治理該類(lèi)病害的重要途徑 篩選高防效拮抗微生物菌株是生防制劑開(kāi)發(fā)的重 要基礎(chǔ) 本研究從黃瓜根際土壤中分離到一株對(duì)黃 瓜枯萎病菌具有強(qiáng)烈拮抗作用的菌株 該菌 株對(duì)黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制作 用明顯 目前國(guó)內(nèi)外枯萎病拮抗放線菌以鏈霉菌 屬生防菌報(bào)道居多 對(duì)黃瓜枯萎病菌具有明顯的抑制效果 菌株 能抑制黃瓜枯萎病菌 而且對(duì)尖鐮孢菌黏團(tuán)專(zhuān)化型 有抑制作用 對(duì)苦 瓜枯萎病具有良好的抑制作用 對(duì)香蕉枯萎病有較好的抑制作用 這些 研究均表明鏈霉菌具有控制土傳病害的巨大潛力 據(jù)報(bào)道 卡那鏈霉菌對(duì)苜蓿炭疽病菌及粉紅鐮孢 尖鐮孢等苜蓿根腐病菌均表現(xiàn)出良好的拮抗效 果 本研究將菌株 初步鑒定為卡那鏈霉菌 該研究首次報(bào)道了用于枯萎病防治的卡那鏈霉菌 鏈霉菌應(yīng)用于生物防治主要是利用活體競(jìng)爭(zhēng) 作用 誘導(dǎo)或提高植物抗病性和代謝產(chǎn)物抑菌作 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 用 本研究中濾紙條和牛津杯試驗(yàn)結(jié)果均能證 明 發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病菌拮抗效果顯著 本研究中共同接種黃瓜枯萎病菌與放線菌時(shí)比單 一接種病原菌組的黃瓜苗發(fā)病率降低了 百分 點(diǎn) 溫室條件下 發(fā)酵液對(duì)黃瓜苗期枯萎病 的防效達(dá)到 表明放線菌 對(duì)病原菌 的生防作用是由于發(fā)酵活性物質(zhì) 據(jù)報(bào)道 放線菌 菌株 發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病防效達(dá) 殺結(jié)節(jié)鏈霉菌 的代謝 產(chǎn)物對(duì)稻瘟病的抑菌作用 都與本研究結(jié)果相 似 而鏈霉菌菌株 菌懸液對(duì)盆栽和大田苦瓜枯 萎病菌的防效和促生作用明顯 說(shuō)明放線菌具有 抑菌促生作用 而影響放線菌抗菌活性物質(zhì)產(chǎn)生 的關(guān)鍵因素是發(fā)酵條件 因此優(yōu)化發(fā)酵條件是提高 活性成分含量的必經(jīng)途徑 本試驗(yàn)通過(guò)小 米培養(yǎng)基發(fā)酵 后續(xù)研究將通過(guò)單因素和正交試驗(yàn) 優(yōu)化發(fā)酵條件 以確定最佳發(fā)酵條件 提高活性成 分含量 再者 生防菌能否在植物根部定殖也是決 定大田試驗(yàn)效果的重要因素 本研究下一步將通 過(guò)熒光蛋白標(biāo)記技術(shù)確定其定殖特性 本研究未 確定該放線菌的抑菌活性物質(zhì) 后續(xù)將通過(guò)層析技 術(shù) 色譜技術(shù)等確定活性物質(zhì)的成分及結(jié)構(gòu) 參考文獻(xiàn) 張春秋 馬光恕 廉 華 等 木霉對(duì)黃瓜幼苗生理特性及枯萎病 防治效果的影響 植物保護(hù) 朱森林 王丹媚 唐秀梅 等 木霉水分散粒劑的培養(yǎng)條件優(yōu)化及 其對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 張俊杰 尚益民 田 寅 等 株黃瓜枯萎病菌拮抗酵母的分離 鑒定及其拮抗作用初探 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 季倩茹 陳 靜 胡遠(yuǎn)亮 等 種芽孢桿菌菌劑對(duì)黃瓜枯萎病的 防效及其作用機(jī)制初探 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 張德珍 李婷婷 代惠潔 等 解淀粉芽孢桿菌 對(duì)黃瓜的防 病促生作用 北方園藝 羅文建 楊 凡 史宣杰 等 黃瓜枯萎病拮抗菌的分離鑒定及其 生物防效 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 張濤濤 張 虹 趙 娟 等 黃赭色鏈霉菌 發(fā)酵工藝及其對(duì) 黃瓜幼苗生長(zhǎng)的影響 科學(xué)技術(shù)與工程 圓 圓 張 虹 蘇道拉呼 等 抑制黃瓜枯萎病的鏈霉菌 及其生防作用研究 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào) 路丹丹 趙艷芳 馬 正 等 龜裂鏈霉菌 抗真菌物質(zhì)的 分離鑒定及其在黃瓜枯萎病防治中的應(yīng)用 中國(guó)生物防治 學(xué)報(bào) 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所放線菌分類(lèi)組 鏈霉菌鑒定手冊(cè) 北京 科學(xué)出版社 李培謙 馮寶珍 李新秀 等 番茄灰霉菌拮抗放線菌 的 篩選及鑒定 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào) 徐麗華 婁 愷 張 華 等 微生物資源學(xué) 北京 科學(xué)出 版社 葉振風(fēng) 吳湘琴 呂冠華 等 梨樹(shù)腐爛病的病原菌鑒定和化學(xué) 藥劑篩選 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 李培謙 馮寶珍 尖孢鐮孢菌果膠裂解酶基因家族鑒定及侵染 表達(dá)模式分析 微生物學(xué)通報(bào) 李曉芳 田葉韓 彭海瑩 等 防治苦瓜枯萎病的拮抗放線菌分 離篩選及鑒定 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào) 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期 胡進(jìn)玲 汪治剛 徐 娜 等 防治紫花苜蓿真菌病害的生防菌 篩選 草業(yè)學(xué)報(bào) 楊祁云 王 成 冼海輝 等 海洋放線菌株 抗菌活性 及其發(fā)酵條件優(yōu)化 中國(guó)海洋藥物 阮宏椿 石妞妞 杜宜新 等 水稻稻瘟病拮抗稀有放線菌的篩 選及防治效果 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào) 王飛飛 庹 利 劉佳萌 等 放線菌 的活性代謝產(chǎn) 物分離及菌株鑒定 中國(guó)抗生素雜志 程 亮 羅明明 吳繼綱 等 海洋放線菌 中抗真菌活 性代謝產(chǎn)物的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定 中國(guó)抗生素雜志 李正鵬 蘇皖平 楊 威 等 小麥全蝕病拮抗細(xì)菌 的鑒定及其生防潛力評(píng)估 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 小麥全蝕病拮抗細(xì)菌 的鑒定及其生防潛力評(píng)估 李正鵬 蘇皖平 楊 威 宋虎衛(wèi) 顧大路 劉廷武 羅玉明 江蘇省環(huán)洪澤湖生態(tài)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 淮陰師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院 江蘇淮安 江蘇徐淮地區(qū)淮陰農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所 江蘇淮安 摘要 為獲得針對(duì)小麥全蝕病的優(yōu)質(zhì)生防資源 從 序列分析 抑菌效果及顯微觀察 活性物質(zhì)穩(wěn)定性等 方面鑒定和評(píng)估內(nèi)生細(xì)菌 及其生防潛力 結(jié)果顯示 內(nèi)生細(xì)菌 為銅綠假單胞菌 對(duì)靶標(biāo)菌禾頂囊殼小麥變種 拮抗效果明顯 引致靶標(biāo)菌菌絲畸形 頂 端膨大 原生質(zhì)外滲 細(xì)胞膜透性增強(qiáng)的現(xiàn)象 同時(shí) 菌株 活性物質(zhì)對(duì)溫度 值 紫外光照 超聲波以及蛋白 酶等外界因素有良好的耐受性 由此可見(jiàn) 內(nèi)生細(xì)菌 是一株對(duì)小麥全蝕病具備良好開(kāi)發(fā)潛力的生防菌株 關(guān)鍵詞 小麥全蝕病 假單胞菌 內(nèi)生細(xì)菌 生物防治 穩(wěn)定性 中圖分類(lèi)號(hào) 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 文章編號(hào) 收稿日期 基金項(xiàng)目 國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金 編號(hào) 江蘇 省高等學(xué)校自然科學(xué)研究面上項(xiàng)目 編號(hào) 作者簡(jiǎn)介 李正鵬 男 河南信陽(yáng)人 博士 講師 主要從事植 物病害綜合治理研究 通信作者 羅玉明 教授 主要從事植物病害生物防治研究 由禾頂囊殼小麥變種 引起的小麥全蝕病 是世界上最重要的小 麥根部病害 因其突出的土壤傳播特性 一直是小 麥亟待解決的防治難題 該病在我國(guó)安徽省 山 東省和河南省等栽培地區(qū)廣泛發(fā)生 目前主要采取 化學(xué)藥劑拌種的方法進(jìn)行防治 而化學(xué)防治易引起 環(huán)境污染及產(chǎn)生抗藥性 隨著人們環(huán)保 綠色意 識(shí)的增強(qiáng) 利用微生物防控全蝕病已成為一條行之 有效的新途徑 假單胞菌是廣泛存在于植物根際 的一類(lèi)微生物 常常具備顯著防治植物病害 促進(jìn) 植物生長(zhǎng)的作用 其生防機(jī)制包括產(chǎn)生拮抗物 質(zhì) 和鐵載體或水解酶 營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng) 生物膜的快 速形成 以及誘導(dǎo)植物抗性 等 因此 本研究在 前期構(gòu)建的微生物資源庫(kù)基礎(chǔ)上 以禾頂囊殼小麥 變種為靶標(biāo)菌 鑒定全蝕病生防菌株 并對(duì)其 拮抗效果和代謝產(chǎn)物穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)估 為進(jìn)一步開(kāi) 發(fā)利用奠定理論依據(jù)和技術(shù)支持 材料與方法 試驗(yàn)材料 供試病原真菌為禾頂囊殼小麥變種 由黑龍江 八一農(nóng)墾大學(xué)柯希望副教授惠贈(zèng) 供試生防細(xì)菌 年 月篩選自江蘇 省環(huán)洪澤湖生態(tài)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室有益微 生物資源庫(kù) 編號(hào) 保存于 冰箱 試驗(yàn)方法 菌株活化 靶標(biāo)菌 將斜面上保存的禾頂囊 殼小麥變種擴(kuò)繁于 培養(yǎng)基上 待菌落直徑長(zhǎng)至 培養(yǎng)皿的一半時(shí) 待用 菌株 發(fā)酵液制備 按照前期研究結(jié)果 將 直徑 的菌餅接種到種子發(fā)酵培養(yǎng)液 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 年第 卷第 期