湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2022 48 2 190 195 DOI 10 13331 ki jhau 2022 02 010 Journal of Hunan Agricultural University Natural Sciences 引用格式 郭垂寶 劉雙清 馬文月 韓軍花 曹海佳 張小艷 廖曉蘭 龍牙百合內(nèi)生拮抗灰葡萄孢菌細(xì)菌的篩選 與鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化 J 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2022 48 2 190 195 GUO C B LIU S Q MA W Y HAN J H CAO H J ZHANG X Y LIAO X L Screening and identification of endophytic bacteria against Botrytis cinerea on Lilium brownii var viridulum Baker and optimization of fermentation conditions J Journal of Hunan Agricultural University Natural Sciences 2022 48 2 190 195 投稿網(wǎng)址 龍牙百合內(nèi)生拮抗灰葡萄孢菌細(xì)菌的 篩選與鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化 郭垂寶 1 劉雙清 1 馬文月 1 韓軍花 1 曹海佳 1 張小艷 1 廖曉蘭 1 2 1 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院 湖南 長沙 410128 2 湖南省生物農(nóng)藥與農(nóng)藥制劑加工工程技術(shù)研究中心 湖南 長 沙 410128 摘 要 采用平板分離法 平板對(duì)峙法從龍牙百合內(nèi)生菌中篩選獲得了具有抑制灰葡萄孢菌活性的 98 號(hào)菌 其 抑菌率為 74 對(duì) 98 號(hào)菌進(jìn)行生理生化測(cè)定及 16S rDNA 序列分析 鑒定為唐菖蒲伯克霍爾德菌 Burkholderia gladioli 通過單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化該菌株的發(fā)酵條件和最適發(fā)酵培養(yǎng)基配方 結(jié)果表明 pH 值為 7 培養(yǎng)溫 度為 32 接種量為發(fā)酵液體積的 6 250 mL 三角瓶裝 100 mL 牛肉膏蛋白胨液體發(fā)酵培養(yǎng)基 180 r min 的搖 床培養(yǎng) 5 d 其抑菌活性最大 優(yōu)化后的最適培養(yǎng)基配方為硫酸亞鐵 0 15 g 玉米粉 20 g 牛肉膏 15 g 水 1 L 關(guān) 鍵 詞 龍牙百合 龍牙百合灰霉病菌 內(nèi)生細(xì)菌 發(fā)酵條件 中圖分類號(hào) S644 1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1007 1032 2022 02 0190 06 Screening and identification of endophytic bacteria against Botrytis cinerea on Lilium brownii var viridulum Baker and optimization of fermentation conditions GUO Chuibao 1 LIU Shuangqing 1 MA Wenyue 1 HAN Junhua 1 CAO Haijia 1 ZHANG Xiaoyan 1 LIAO Xiaolan 1 2 1 College of Plant Protection Hunan Agricultural University Changsha Hunan 410128 China 2 Hunan Biological Pesticides and Pesticide Preparation Processing Engineering Technology Research Center Changsha Hunan 410128 China Abstract Strain 98 with the activity of inhibiting Botrytis cinerea was screened from the endophytic bacteria of Lilium brownii var viridulum Baker by plate separation method and plate confrontation method and the antibacterial rate was 74 The endophyte strain 98 was identified as Burkholderia gladioli by physiological and biochemical assays and 16S rDNA sequence analysis The fermentation conditions and the formula of fermentation medium for strain 98 were optimized by single factor and orthogonal tests The results showed that 100 mL of fermentation medium in 250 mL triangular flasks with pH 7 incubation temperature of 32 and inoculum size of 6 under shaker incubation at 180 r min for 5 days resulted in the greatest inhibition activity The optimized medium was formulated as FeSO 4 0 15 g corn flour 20 g beef paste 15 g in 1 L water Keywords Lilium brownii var viridulum Baker Botrytis cinerea endophytic bacteria fermentation conditions 收稿日期 2020 11 24 修回日期 2021 10 29 基金項(xiàng)目 湖南省科學(xué)技術(shù)廳 三區(qū) 科技人才項(xiàng)目 湘科計(jì) 2021 35 號(hào) 作者簡介 郭垂寶 1993 男 湖南邵陽人 碩士研究生 主要從事龍牙百合連作障礙研究 592508668 通信作者 廖曉蘭 博士 教授 主要從事生防資源的挖掘與利用研究 liaoxl88 第 48 卷第 2 期 郭垂寶等 龍牙百合內(nèi)生拮抗灰葡萄孢菌細(xì)菌的篩選與鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化 191 灰葡萄孢菌 Botrytis cinerea 通常引起植物的 灰霉病 1 其寄主廣泛 可侵染 1400 余種植物 2 在百合生長過程中灰霉病是主要病害之一 3 灰葡 萄孢菌繁殖速度快 產(chǎn)孢量大 發(fā)病周期短 4 化 學(xué)防治仍然是主要的防治方法 利用內(nèi)生拮抗菌防 治灰霉病已有一些報(bào)道 內(nèi)生菌 ZSY 1 對(duì)番茄葉片 和果實(shí)上灰霉病的防效分別為 80 和 75 5 短短 芽孢桿菌 W4 對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長抑制率達(dá)到 93 6 內(nèi)生枯草芽孢桿菌 Em7 對(duì)葡萄的相對(duì)防治 效果為 79 7 NR4 1 對(duì)葡萄灰霉病菌抑菌率達(dá) 69 8 人參內(nèi)生細(xì)菌 GS 1 對(duì)人參灰霉病菌孢子萌 發(fā)的抑制率達(dá) 62 9 龍牙百合是一種 藥食同源 的天然保健品 經(jīng) 濟(jì)價(jià)值高 在湖南省隆回縣龍牙百合年產(chǎn)值已達(dá) 7 億元 10 隨著栽培年限延長 百合病害發(fā)生較頻繁 灰霉病成為其地上部發(fā)生最嚴(yán)重的病害 造成嚴(yán)重 的經(jīng)濟(jì)損失 11 鑒于此 筆者擬采集健康龍牙百合 鱗莖部分 采用平板對(duì)峙法 分離篩選對(duì)龍牙百合 灰霉病菌具拮抗作用的內(nèi)生細(xì)菌 對(duì)其進(jìn)行生理生 化特性及分子生物學(xué)鑒定 優(yōu)化發(fā)酵條件 以期豐 富龍牙百合灰霉病生防菌種資源 為防治龍牙百合 灰霉病提供依據(jù) 1 材料與方法 1 1 材料 于湖南省隆回縣采集龍牙百合及葉片 龍牙百 合灰葡萄孢菌由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院生防 資源篩選及利用實(shí)驗(yàn)室保存 1 2 方法 1 2 1 龍牙百合內(nèi)生拮抗灰葡萄孢菌細(xì)菌的分離 篩選及鑒定 取龍牙百合健康鱗莖 5 g 參照趙新貝等 12 的 方法處理鱗莖 參照張猛等 13 的方法 分離龍牙百 合鱗莖的內(nèi)生細(xì)菌 采用平板對(duì)峙法 篩選對(duì)龍牙 百合灰葡萄孢菌具拮抗作用的內(nèi)生細(xì)菌菌株 選取 對(duì)龍牙百合灰葡萄孢菌拮抗效果好的菌株 按 微 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 14 測(cè)定其生理生化特性 將純 化后的菌株送生工生物工程 上海 有限公司進(jìn)行 16S rDNA 測(cè)序 得到該內(nèi)生菌的基因序列后在 NCBI 上進(jìn)行序列比對(duì) 并在其上獲得該菌的登錄 號(hào) 運(yùn)用 MEGA 6 0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹 1 2 2 內(nèi)生拮抗菌發(fā)酵條件的優(yōu)化 1 發(fā)酵條件的優(yōu)化 以牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng) 基 15 為發(fā)酵培養(yǎng)基 在不同發(fā)酵時(shí)間 1 2 3 4 5 6 7 d 不同接種量 占總體積的 2 4 6 8 10 不同裝液量 50 100 150 200 250 mL 不同 pH 5 6 7 8 9 不同搖床轉(zhuǎn)速 120 140 160 180 200 220 r min 不同發(fā)酵溫度 24 28 32 36 40 下測(cè)定內(nèi)生拮抗菌對(duì)灰葡萄孢菌的 抑菌活性 2 培養(yǎng)基成分的優(yōu)化 以牛肉膏蛋白胨液體培 養(yǎng)基為基礎(chǔ) 以 5 種無機(jī)鹽 1 0 g L ZnSO 4 1 0 g L KH 2 PO 4 1 0 g L MgSO 4 0 1 g L FeSO 4 1 0 g L CaCO 3 5 種碳源 甘露醇 麥芽糖 玉米粉 可溶 性淀粉 蔗糖 20 g L 5 種氮源 牛肉膏 蛋白胨 KNO 3 黃豆粉 NH 4 2 SO 4 10 g L 分別代替基礎(chǔ)培 養(yǎng)基中的無機(jī)鹽 碳源和氮源進(jìn)行發(fā)酵 測(cè)量抑菌 圈直徑 確定最適碳源 氮源和無機(jī)鹽 3 發(fā)酵組分正交試驗(yàn)的優(yōu)化 對(duì)篩選的發(fā)酵培 養(yǎng)基最佳組分進(jìn)行 L 9 3 3 正交試驗(yàn)優(yōu)化 確定最優(yōu) 培養(yǎng)基組分配比 1 2 3 內(nèi)生拮抗菌離體生測(cè)及對(duì)部分作物的安全 性評(píng)價(jià) 摘取果熟期大小及形狀相近 健康的龍牙百合 葉片 5 次氯酸鈉消毒 5 min 無菌水沖洗 3 次 晾干 無菌接種針刺傷 備用 設(shè) 4 個(gè)處理 處理 1 取龍牙百合葉片 3 片 在拮抗菌發(fā)酵液中浸泡 30 s 后 在葉片針刺處接種 灰葡萄孢菌餅 20 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 7 d 處理 2 取 龍牙百合葉片 3 片 在葉片針刺處接種灰葡萄孢菌 菌餅 待發(fā)病后 3 d 將拮抗菌發(fā)酵液噴于葉片上 處理 3 陽性對(duì)照 取龍牙百合葉片 3 片 在葉片針 刺處接種灰葡萄孢菌菌餅 再噴無菌水 處理 4 陰 性對(duì)照 取龍牙百合葉片 3 片 不作其他處理 每 個(gè)處理重復(fù) 3 次 人工氣候箱中 25 12 h 光照 與黑暗交替培養(yǎng) 5 d 后觀察拍照 用 Photoshop 計(jì) 算病斑大小 16 17 192 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2022 年 4 月 選取玉米 黃豆 辣椒 茄子 水稻葉片為材 料 5 次氯酸鈉消毒 5 min 無菌水沖洗 3 次 晾 干 用無菌接種針蘸取拮抗菌發(fā)酵液刺傷植物葉片 進(jìn)行接種 分別重復(fù) 3 次 25 12 h 光照和黑暗 交替培養(yǎng) 3 d 后觀察植物葉片情況 1 3 數(shù)據(jù)處理 采用 Minitab 17 進(jìn)行正交優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì) 運(yùn)用 Microsoft Excel 2016 和 SPSS 21 0 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理 2 結(jié)果與分析 2 1 龍牙百合內(nèi)生拮抗菌的篩選及鑒定結(jié)果 采用平板對(duì)峙法 對(duì)分離得到的內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行 拮抗作用測(cè)定 篩選出 1 株對(duì)龍牙百合灰葡萄孢菌 具拮抗效果的內(nèi)生菌 命名為 98 號(hào)菌 含菌平板 抑菌帶寬 16 93 mm 抑制率可達(dá) 74 圖 1 1 拮抗效果 2 平板帶毒效果 3 對(duì)照 圖 1 龍牙百合內(nèi)生拮抗菌 98 號(hào)菌對(duì)百合灰霉菌的拮抗效果 Fig 1 Antagonism effect of endophytic strain 98 against grey mold pathogen on lily 98 號(hào)菌 28 恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48 h 在牛肉膏 蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上呈淡黃色菌落 圓形 表面光 滑有光澤 不透明 圖 2 1 革蘭染色陰性 圖 2 2 生理生化測(cè)定結(jié)果表明 98 號(hào)菌能水解淀粉 液化 明膠 產(chǎn)生硫化氫氣體 甲基紅與 V P 試驗(yàn)呈陽性 可利用葡萄糖 不能利用乳糖 蔗糖 麥芽糖 木 糖 不能在麥康凱培養(yǎng)基上生長 能產(chǎn)生脲酶 不 能產(chǎn)生氧化酶 圖 2 98 號(hào)菌的形態(tài)特征及革蘭染色結(jié)果 Fig 2 Staining and morphological characteristics of strain 98 將 98 號(hào)菌送至生工生物工程 上海 有限公司測(cè) 序 得到長度為 1497 bp 的片段 提交至 GenBank 獲得登錄號(hào) MW320460 測(cè)序結(jié)果經(jīng) BLAST 同源 性比對(duì)發(fā)現(xiàn) 98 號(hào)菌與唐菖蒲伯克霍爾德菌的同源 性達(dá)到 99 將菌株序列與高度同源性序列進(jìn)行多 重比較并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹 結(jié)果顯示 98 號(hào)菌與 Burkholderia gladioli 聚在同一系統(tǒng)分支上 圖 3 1 2 3 21 第 48 卷第 2 期 郭垂寶等 龍牙百合內(nèi)生拮抗灰葡萄孢菌細(xì)菌的篩選與鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化 193 圖 3 基于 16S rDNA 序列構(gòu)建的 98 號(hào)菌系統(tǒng)發(fā)育樹 Fig 3 Phylogenetic tree for strain 98 based on 16S rDNA sequence analysis 2 2 98 號(hào)菌發(fā)酵的較優(yōu)條件 由表 1 可知 在發(fā)酵時(shí)間為 5 d pH 為 7 裝 液量為 100 mL 和轉(zhuǎn)速 180 r min 時(shí) 抑菌帶寬度顯 著高于其他處理 接種量在 2 4 6 和 8 時(shí) 抑菌帶沒有顯著差異 但 6 抑菌帶寬度最大 因 此 接種量控制在 2 8 最優(yōu)選取 6 發(fā)酵溫 度在 32 時(shí)抑菌帶寬度最大 與 28 無顯著差異 28 與 24 又無顯著差異 但 32 時(shí)顯著高于 24 的 因此最優(yōu)溫度選擇 32 綜上 優(yōu)化后 的發(fā)酵條件為溫度 32 pH 為 7 裝液量為 100 mL 接種量 6 轉(zhuǎn)速 180 r min 發(fā)酵 5 d 表 1 不同培養(yǎng)條件下 98 號(hào)菌的抑菌帶寬度 Table 1 Effect of different culture conditions on antimicrobial activity of strain 98 發(fā)酵時(shí)間 d 抑菌帶寬度 mm 起始 pH 抑菌帶寬度 mm 接種量 抑菌帶寬度 mm 1 23 67 1 15 b 5 19 00 1 00 b 2 21 67 1 53 a 2 24 00 1 73 b 6 19 33 1 15 b 4 22 00 1 73 a 3 24 33 0 58 b 7 21 33 0 58 a 6 23 67 0 58 a 4 25 00 1 00 b 8 18 00 1 00 bc 8 21 67 1 53 a 5 27 33 0 58 a 9 17 33 0 58 c 10 19 00 1 00 b 6 21 33 0 58 c 7 16 67 1 15 c 裝液量 mL 抑菌帶寬度 mm 溫度 抑菌帶寬度 mm 轉(zhuǎn)速 r min 1 抑菌帶寬度 mm 50 24 33 0 58 b 24 19 00 1 00 b 140 24 00 1 00 c 100 30 33 1 53 a 28 20 00 1 00 ab 160 25 00 0 00 b 150 23 33 0 58 b 32 22 00 1 00 a 180 26 00 0 00 a 200 20 67 0 58 c 36 16 00 1 73 c 200 24 67 0 58 bc 250 18 67 0 58 d 40 9 00 1 00 d 220 24 00 0 00 c 不同小寫字母表示處理間差異顯著 P 0 05 由表 2 可知 分別以玉米粉作碳源和牛肉膏作 氮源發(fā)酵時(shí) 98 號(hào)菌的抑菌活性最大 且顯著高于 其他組的 二者為最佳碳源和氮源 以硫酸亞鐵作 無機(jī)鹽發(fā)酵 98 號(hào)菌 其抑菌活性優(yōu)于其他組 與 硫酸鎂 磷酸二氫鉀和碳酸鈣之間無顯著差異 但 顯著高于硫酸鋅 最佳無機(jī)鹽為硫酸亞鐵 194 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2022 年 4 月 表 2 98 號(hào)菌在不同培養(yǎng)基組分下對(duì)灰葡萄孢菌的抑菌活性 Table 2 Antimicrobial activity of strain 98 against Botrytis cinerea by fermentation with different medium components mm 碳源 抑菌帶寬度 氮源 抑菌帶寬度 無機(jī)鹽 抑菌帶寬度 蔗糖 21 67 0 67 b 牛肉膏 23 67 0 33 a ZnSO 4 19 67 0 33 b 可溶性淀粉 21 00 0 58 b 蛋白胨 20 33 0 33 c KH 2 PO 4 20 33 0 33 ab 麥芽糖 19 67 0 33 b 黃豆粉 21 67 0 33 b MgSO 4 20 00 0 58 ab 玉米粉 24 33 0 33 a 硝酸鉀 21 33 0 33 b FeSO 4 21 67 0 33 a 甘露醇 19 67 1 20 b 硫酸銨 21 00 0 00 bc CaCO 3 20 00 1 00 ab 同列不同小寫字母表示處理間差異顯著 P 0 05 選取玉米粉 10 20 30 g L 牛肉膏 5 10 15 g L 和硫酸亞鐵 0 05 0 10 0 15 g L 進(jìn)行正交 試驗(yàn) 結(jié)果 表 3 表明 對(duì) 98 號(hào)菌生長影響效果的 主次為牛肉膏用量 玉米粉用量 硫酸亞鐵用量 適合 98 號(hào)菌生長的最優(yōu)培養(yǎng)基組分是 0 15 g L 硫酸 亞鐵 20 0 g L 玉米粉 15 0 g L 牛肉膏 表 3 98 號(hào)菌培養(yǎng)基優(yōu)化的正交試驗(yàn)結(jié)果 Table 3 Orthogonal test results of optimization of culture medium for strain 98 編號(hào) FeSO 4 g L 1 玉米粉 g L 1 牛肉膏 g L 1 抑菌帶 寬度 mm 1 0 05 10 0 5 0 20 22 2 0 10 10 0 10 0 19 36 3 0 15 10 0 15 0 24 16 4 0 10 20 0 5 0 22 59 5 0 15 20 0 10 0 23 41 6 0 05 20 0 15 0 25 82 7 0 15 30 0 5 0 21 47 8 0 05 30 0 10 0 21 28 9 0 10 30 0 15 0 22 62 K 1 22 44 21 25 21 43 K 2 21 52 23 94 21 35 K 3 23 01 21 79 24 20 R 1 49 2 69 2 85 2 3 拮抗菌離體生測(cè)及其對(duì)部分作物的安全性評(píng) 價(jià)結(jié)果 2 3 1 拮抗菌生測(cè)結(jié)果 生測(cè)試驗(yàn)結(jié)果 圖 4 表明 處理 4 陰性對(duì)照 針 刺處未見病斑 處理 1 2 3 在接種龍牙百合灰霉 病菌菌餅處發(fā)病 病斑以菌餅為中心擴(kuò)散 但病斑 大小有差異 處理 3 陽性對(duì)照 病斑面積最大 處理 1 處理 2 用 98 號(hào)菌發(fā)酵液處理后其病斑均小于處 理 3 且處理 2 病斑面積最小 防治效果最好 1 處理 1 2 處理 2 3 陽性對(duì)照 4 陰性對(duì)照 圖 4 98 號(hào)菌發(fā)酵液對(duì)龍牙百合葉片灰霉病的防治效果 Fig 4 Control effect of fermentation broth of strain 98 against Botrytis cinerea in vitro 2 3 2 內(nèi)生細(xì)菌對(duì)部分作物的安全性 如圖 5 所示 用 98 號(hào)菌發(fā)酵液處理玉米 黃 豆 辣椒 茄子 水稻葉片后未表現(xiàn)出任何病狀 表明 98 號(hào)菌發(fā)酵液對(duì)玉米 黃豆 辣椒 茄子 水稻安全 1 玉米葉 2 黃豆葉 3 辣椒葉 4 茄子葉 5 水稻葉 圖 5 98 號(hào)菌對(duì) 5 種作物葉片的致病性 Fig 5 Pathogenic test of strain 98 on five kinds of plant leaves 1 2 3 4 1 2 3 4 5 第 48 卷第 2 期 郭垂寶等 龍牙百合內(nèi)生拮抗灰葡萄孢菌細(xì)菌的篩選與鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化 195 3 討論與結(jié)論 結(jié)合 16S rDNA 基因序列 生理生化和形態(tài)學(xué) 特征分析 確定 98 號(hào)菌為唐菖蒲伯克霍爾德菌 Burkholderia gladioli 98 號(hào)菌的抑菌活性受其發(fā) 酵時(shí)間 接種量 搖瓶裝液量 pH 轉(zhuǎn)速以及發(fā)酵 溫度的影響 此外 還受硫酸亞鐵 玉米粉 牛肉 膏 3 種培養(yǎng)基組分的影響 百合灰霉病菌主要為害百合的葉和莖稈 形成 半橢圓形病斑 氣候適宜時(shí)病斑迅速擴(kuò)大 發(fā)病嚴(yán) 重時(shí)植株枯死 18 篩選得到的唐菖蒲伯克霍爾德菌 98 號(hào)對(duì)其具有良好的抑菌效果 抑菌帶明顯 最大 抑制率可達(dá) 74 這一結(jié)果與江西師范大學(xué)申請(qǐng)的 一株東鄉(xiāng)野生稻內(nèi)生細(xì)菌唐菖蒲伯克霍爾德菌 Fse32 及其應(yīng)用 專利結(jié)果相一致 該專利指出唐菖 蒲伯克霍爾德菌能顯著促進(jìn)植物生長并對(duì)多種病 原真菌有拮抗活性 19 這表明筆者分離獲得的 98 號(hào)菌對(duì)百合灰霉病具有一定的生防潛力 其抑菌機(jī) 理 防病方式及田間應(yīng)用等有待進(jìn)一步研究 參考文獻(xiàn) 1 黃蓉 胡建坤 黃瑞榮 等 環(huán)境條件對(duì)灰葡萄孢菌 菌核萌發(fā)的影響 J 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吳力紅 李潤根 廖振軍 等 龍牙百合灰霉病病原 菌灰葡萄孢菌的分離與鑒定 J 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021 7 7 10 12 趙新貝 上官妮妮 李月飛 等 番茄灰霉病拮抗細(xì) 菌 18BS 12 發(fā)酵條件的優(yōu)化及防治效果 J 西北農(nóng)林 科技大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2016 44 6 116 124 13 張猛 王瓊 馮發(fā)運(yùn) 等 植物內(nèi)生特基拉芽胞桿菌 的分離 鑒定及防治西瓜枯萎病效果 J 中國生物防 治學(xué)報(bào) 2017 33 3 371 377 14 石若夫 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) M 北京 北京航空航天 大學(xué)出版社 2017 15 全桂靜 蘋果采后病害拮抗細(xì)菌的篩選與防腐效果研 究 J 北方園藝 2013 11 130 132 16 崔華威 楊艷麗 黎敬濤 等 一種基于 Photoshop 的葉片相對(duì)病斑面積快速測(cè)定方法 J 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2009 37 22 4 17 孫家隆 慕衛(wèi) 農(nóng)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)與指導(dǎo) M 北京 化 學(xué)工業(yè)出版社 2009 18 瞿友均 徐源輝 百合灰霉病的發(fā)生特點(diǎn)和綜合防治 方法 J 中國植保導(dǎo)刊 2010 30 4 26 27 19 張志斌 劉斌 朱篤 等 一株東鄉(xiāng)野生稻內(nèi)生細(xì)菌 唐菖蒲伯克霍爾德菌 Fse32 及其應(yīng)用 CN10501 8371B P 2019 05 10 責(zé)任編輯 羅慧敏 英文編輯 羅 維