2022 44 1 D O I 10 13836 j jjau 2022008A cta A griculturae U niversitatis Jiangxiensis http 江 西 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 茄 子 黃 萎 病 苗 期 抗 性 鑒 定 技 術(shù) 的 優(yōu) 化 及 抗 源 篩 選 賁 海 燕 1 曲 紅 云 2 霍 建 飛 1 姚 玉 榮 1 高 葦 1 郝 永 娟 1 王 萬(wàn) 立 1 張 雪 巖 2 胡 建 坤 3 黃 瑞 榮 3 1 天 津 市 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 植 物 保 護(hù) 研 究 所 天 津 300381 2 黑 龍 江 省 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 園 藝 分 院 黑 龍 江 哈 爾 濱 150069 3 江 西 省 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 植 物 保 護(hù) 研 究 所 江 西 南 昌 330200 摘 要 目 的 建 立 快 速 有 效 的 茄 子 黃 萎 病 苗 期 抗 性 鑒 定 技 術(shù) 并 對(duì) 茄 子 資 源 進(jìn) 行 苗 期 接 種 鑒 定 為 抗 病 育 種 提 供 理 論 依 據(jù) 方 法 采 用 溫 室 人 工 接 種 分 別 對(duì) 茄 子 黃 萎 病 苗 期 接 種 鑒 定 的 接 種 菌 株 濃 度 方 法 接 種 苗 齡 及 接 種 時(shí) 間 進(jìn) 行 系 統(tǒng) 篩 選 與 比 較 并 應(yīng) 用 篩 選 出 的 最 佳 技 術(shù) 對(duì) 50 份 不 同 來(lái) 源 的 茄 子 資 源 進(jìn) 行 抗 黃 萎 病 鑒 定 與 評(píng) 價(jià) 結(jié) 果 25 株 強(qiáng) 致 病 力 的 黃 萎 病 菌 株 中 有 7 株 產(chǎn) 孢 效 率 高 從 中 選 取 4 種 不 同 培 養(yǎng) 性 狀 的 菌 株 用 于 接 種 最 佳 接 種 濃 度 為 10 6 個(gè) 孢 子 m L 及 以 上 其 中 菌 株 2015 61 致 病 力 最 強(qiáng) 接 種 濃 度 10 5 個(gè) 孢 子 m L 的 致 病 結(jié) 果 與 其 他 菌 株 最 佳 濃 度 的 接 種 結(jié) 果 相 當(dāng) 提 高 了 試 驗(yàn) 整 體 效 率 接 種 方 法 以 無(wú) 底 缽 傷 根 法 為 最 佳 最 適 接 種 苗 齡 為 3 4 片 真 葉 期 浸 根 時(shí) 間 為 10 m in 利 用 此 抗 性 鑒 定 方 法 從 50 份 不 同 來(lái) 源 茄 子 資 源 中 篩 選 出 免 疫 品 種 2 份 中 抗 品 種 3 份 耐 病 品 種 12 份 該 優(yōu) 化 接 種 技 術(shù) 的 發(fā) 病 情 況 與 田 間 病 圃 結(jié) 果 基 本 一 致 較 準(zhǔn) 確 地 反 映 了 茄 子 資 源 對(duì) 黃 萎 病 的 真 實(shí) 抗 性 結(jié) 論 茄 子 黃 萎 病 苗 期 最 佳 接 種 技 術(shù) 的 確 立 以 及 抗 黃 萎 病 資 源 的 篩 選 為 抗 病 育 種 提 供 依 據(jù) 關(guān) 鍵 詞 茄 子 黃 萎 病 接 種 方 法 無(wú) 底 缽 傷 根 法 抗 性 評(píng) 價(jià) 中 圖 分 類(lèi) 號(hào) S436 411 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 A 文 章 編 號(hào) 1000 2286 2022 01 0062 12 R e s e a r c h o n I n o c u la tiv e M e th o d o f E g g p la n t V e r tic illiu m W ilt a n d E v a lu a tio n o f R e s is ta n c e S o u r c e a t S e e d lin g S ta g e B E N H aiyan 1 Q U H ongyun 2 H U O Jianfei 1 Y A O Y urong 1 G A O W ei 1 H A O Y ongjuan 1 W A N G W anli 1 ZH A N G X ueyan 2 H U Jiankun 3 H U A N G R uirong 3 1 Institute of Plant Protection Tianjin A cadem y of A gricultural Sciences Tianjin 300381 C hina 2 G ardening B ranch H eilongjiang A cadem y of A gricultural Sciences H arbin 150069 C hina 3 Plant Protection Institute Jiangxi A cadem y of A gricultural Sciences N anchang 330200 C hina 收 稿 日 期 2021 07 20 修 回 日 期 2021 09 22 基 金 項(xiàng) 目 國(guó) 家 重 點(diǎn) 研 發(fā) 計(jì) 劃 項(xiàng) 目 2018Y FD 0201200 Project supported by N ational K ey R esearch and D evelopm ent Program 2018Y FD 0201200 作 者 簡(jiǎn) 介 賁 海 燕 orcid org 0000 0003 3506 172X benhaiyan506 通 信 作 者 黃 瑞 榮 研 究 員 主 要 從 事 植 物 病 害 防 治 研 究 orcid org 0000 0002 4700 1962 huangruirong073 賁 海 燕 曲 紅 云 霍 建 飛 等 茄 子 黃 萎 病 苗 期 抗 性 鑒 定 技 術(shù) 的 優(yōu) 化 及 抗 源 篩 選 J 江 西 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2022 44 1 62 73 B E N H Y Q U H Y H U O J F et al R esearch on inoculative m ethod of eggplant verticillium w ilt and evaluation of resistance source at seedling stage J A cta agriculturae universitatis Jiangxiensis 2022 44 1 62 73 第 1 期 賁 海 燕 等 茄 子 黃 萎 病 苗 期 抗 性 鑒 定 技 術(shù) 的 優(yōu) 化 及 抗 源 篩 選 A b s tr a c t O b je c tiv e In this study a rapid and effective technique for identification of eggplant resis tance to verticillium w ilt at seedling stage w as established and eggplant resources w ere inoculated and identi fied at seedling stage thus providing theoretical support for eggplant resistance breeding M e th o d The inocu lation strains concentrations m ethods seedling age and suitable tim e of artificial inoculation in the greenhouse w ere screened system atically Furtherm ore the m ost effective inoculation technique w hich w as screen out w as adopted to identify and evaluate the resistance to V erticillium W ilt of 50 eggplant resources from different sourc es R e s u lt The results show ed that the 7 of 25 strains of V erticillium W ilt w ith high pathogenicity had high sporulation efficiency from w hich 4 strains w ith different culture traits w ere selected for inoculation and the optim al inoculation concentration w as 10 6 spores m L or above A m ong them strain 2015 61 show ed the highest pathogenicity The inoculation result of 10 5 spores m l w as equivalent to 10 6 10 8 spores m L for other strains w hich im proved the overall test efficiency The optim al inoculation m ethod w as the root dipping m eth od w ith bottom less bow l the optim al inoculation age w as 3 4 real leaf stage and the optim al root soaking tim e w as 10 m inutes U sing this m ethod 2 im m unized varieties 3 m iddle resistant varieties and 12 enduring variet ies w ere selected from 50 eggplant breeding m aterials This result w as basically consistent w ith the disease re sistance results in the field tests w hich dem onstrated that the optim ized inoculation technology accurately re flected the real resistance of eggplant resources to V erticillium w ilt C o n c lu s io n The establishm ent of the opti m al inoculation technique for verticillium w ilt in eggplant seedling stage and the selection of resources against V e r tic illiu m d a h lia laid a solid foundation for resistance breeding K e y w o r d s eggplant verticillium w ilt inoculation m ethod root cutting m ethod w ith bottom less bow l resistance evaluation 研 究 意 義 由 大 麗 輪 枝 菌 V e r tic illiu m d a h lia K leb 侵 染 引 起 的 茄 子 黃 萎 病 V erticillium w ilt 是 一 種 世 界 性 土 傳 病 害 1 該 病 原 菌 的 寄 主 范 圍 廣 泛 除 侵 染 茄 子 外 還 可 對(duì) 棉 花 向 日 葵 番 茄 草 莓 馬 鈴 薯 等 600 多 種 作 物 造 成 危 害 2 前 人 研 究 進(jìn) 展 1914 年 美 國(guó) 首 次 發(fā) 現(xiàn) 由 大 麗 輪 枝 菌 引 發(fā) 的 棉 花 黃 萎 病 而 后 在 1935 年 我 國(guó) 因 引 進(jìn) 美 國(guó) 的 棉 花 品 種 而 傳 入 黃 萎 病 菌 3 在 20 世 紀(jì) 50 年 代 初 期 茄 子 黃 萎 病 僅 在 我 國(guó) 東 北 局 部 地 區(qū) 發(fā) 生 隨 著 茄 果 類(lèi) 蔬 菜 種 植 面 積 的 不 斷 擴(kuò) 大 而 迅 速 蔓 延 發(fā) 病 范 圍 也 日 益 南 擴(kuò) 目 前 在 我 國(guó) 茄 子 主 栽 培 區(qū) 均 有 該 病 害 的 發(fā) 生 茄 子 黃 萎 病 發(fā) 病 率 較 高 一 般 年 份 發(fā) 病 率 在 40 50 嚴(yán) 重 年 份 可 達(dá) 70 以 上 致 使 毀 種 失 收 對(duì) 茄 子 產(chǎn) 量 和 品 質(zhì) 均 造 成 嚴(yán) 重 的 影 響 已 成 為 制 約 茄 子 產(chǎn) 業(yè) 發(fā) 展 的 重 要 病 害 1 4 黃 萎 病 屬 于 典 型 的 土 傳 維 管 束 病 害 其 致 病 菌 大 麗 輪 枝 菌 的 主 要 存 活 結(jié) 構(gòu) 和 初 侵 染 源 是 微 菌 核 由 于 其 抗 逆 性 強(qiáng) 在 土 壤 中 存 活 時(shí) 間 較 長(zhǎng) 化 學(xué) 防 治 并 不 理 想 倒 茬 輪 作 雖 然 有 效 但 在 茄 子 生 產(chǎn) 茬 口 安 排 會(huì) 帶 來(lái) 實(shí) 際 困 難 嫁 接 技 術(shù) 是 減 輕 茄 子 黃 萎 病 發(fā) 生 有 效 的 方 法 但 由 于 其 操 作 環(huán) 節(jié) 多 技 術(shù) 要 求 較 高 以 及 增 加 投 入 成 本 等 問(wèn) 題 很 難 在 實(shí) 踐 生 產(chǎn) 中 推 廣 應(yīng) 用 選 育 及 利 用 抗 病 品 種 是 防 治 茄 子 黃 萎 病 最 直 接 安 全 高 效 的 措 施 之 一 其 中 篩 選 抗 病 種 質(zhì) 資 源 是 抗 病 育 種 中 重 要 的 基 礎(chǔ) 工 作 自 然 病 圃 法 是 抗 病 性 鑒 定 中 最 傳 統(tǒng) 應(yīng) 用 最 普 遍 的 方 法 目 前 其 鑒 定 結(jié) 論 仍 是 新 品 種 審 定 時(shí) 主 要 的 依 據(jù) 但 由 于 其 鑒 定 周 期 長(zhǎng) 且 受 季 節(jié) 的 影 響 鑒 定 材 料 數(shù) 量 受 到 限 制 5 此 外 病 圃 中 病 菌 數(shù) 量 的 不 確 定 分 布 不 均 以 及 氣 候 環(huán) 境 條 件 的 變 化 等 一 系 列 因 素 均 會(huì) 影 響 鑒 定 結(jié) 果 的 準(zhǔn) 確 性 本 研 究 切 入 點(diǎn) 苗 期 室 內(nèi) 人 工 接 種 法 不 受 季 節(jié) 影 響 能 更 好 地 控 制 選 擇 壓 并 且 可 大 量 重 復(fù) 性 篩 選 材 料 6 目 前 作 物 黃 萎 病 采 用 的 接 種 方 法 多 為 蘸 根 法 傷 根 法 這 在 棉 花 和 向 日 葵 等 作 物 上 研 究 的 較 為 深 入 而 茄 子 上 的 接 種 鑒 定 方 法 報(bào) 道 較 少 7 10 進(jìn) 一 步 完 善 改 進(jìn) 茄 子 黃 萎 病 人 工 接 種 技 術(shù) 仍 有 必 有 擬 解 決 的 關(guān) 鍵 問(wèn) 題 因 此 本 研 究 以 茄 子 為 試 驗(yàn) 材 料 采 用 現(xiàn) 有 報(bào) 道 的 接 種 方 法 比 較 在 同 一 品 種 上 的 接 種 效 果 并 綜 合 探 究 了 不 同 類(lèi) 型 強(qiáng) 致 病 力 菌 株 菌 液 濃 度 茄 子 苗 齡 等 因 素 對(duì) 接 種 成 效 的 影 響 以 期 優(yōu) 化 最 佳 接 種 技 術(shù) 從 而 構(gòu) 建 高 效 穩(wěn) 定 簡(jiǎn) 便 的 茄 子 黃 萎 病 苗 期 抗 病 性 鑒 定 評(píng) 價(jià) 體 系 為 茄 子 黃 萎 病 基 礎(chǔ) 研 究 抗 病 育 種 與 利 用 及 抗 源 篩 選 等 提 供 63 江 西 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 44 卷 技 術(shù) 支 撐 同 時(shí) 采 用 本 研 究 優(yōu) 化 的 茄 子 黃 萎 病 抗 性 鑒 定 技 術(shù) 對(duì) 收 集 到 的 50 份 茄 子 資 源 品 種 的 抗 性 進(jìn) 行 鑒 評(píng) 通 過(guò) 與 田 間 病 圃 中 各 品 種 的 抗 性 鑒 定 結(jié) 果 進(jìn) 行 比 對(duì) 以 驗(yàn) 證 優(yōu) 化 技 術(shù) 的 實(shí) 用 性 和 鑒 定 結(jié) 果 的 準(zhǔn) 確 性 并 期 待 挖 掘 到 抗 耐 黃 萎 病 的 茄 子 資 源 種 質(zhì) 以 緩 解 當(dāng) 前 生 產(chǎn) 抗 耐 黃 萎 病 品 種 不 足 及 茄 黃 萎 病 育 種 抗 源 材 料 匱 乏 問(wèn) 題 1 材 料 與 方 法 1 1 試 驗(yàn) 材 料 供 試 品 種 茄 子 品 種 龍 雜 茄 10 號(hào) 為 本 課 題 組 培 育 的 耐 病 品 種 供 試 菌 株 不 同 培 養(yǎng) 性 狀 的 強(qiáng) 致 病 力 菌 株 25 株 其 中 A 型 菌 株 11 株 為 菌 核 型 菌 落 生 長(zhǎng) 緩 慢 菌 核 多 B 型 菌 株 7 株 為 菌 核 型 菌 落 為 灰 黑 色 菌 落 生 長(zhǎng) 較 慢 菌 核 多 C 型 菌 株 3 株 為 絲 核 型 氣 生 菌 絲 發(fā) 達(dá) 菌 核 較 多 菌 落 生 長(zhǎng) 較 快 D 型 菌 株 4 株 為 菌 絲 型 氣 生 菌 絲 發(fā) 達(dá) 為 灰 白 色 11 所 有 菌 株 均 由 本 課 題 組 單 孢 分 離 純 化 后 保 存 表 1 1 2 茄 子 黃 萎 病 菌 產(chǎn) 孢 力 的 測(cè) 定 將 25 個(gè) 供 試 菌 株 在 PD A 培 養(yǎng) 基 上 進(jìn) 行 活 化 25 黑 暗 條 件 下 培 養(yǎng) 4 d 后 在 無(wú) 菌 工 作 臺(tái) 中 使 用 滅 好 菌 的 打 孔 器 打 取 菌 碟 每 150 m L 馬 鈴 薯 液 體 培 養(yǎng) 基 中 放 入 2 塊 25 130 r m in 搖 床 培 養(yǎng) 4 d 產(chǎn) 孢 量 較 多 時(shí) 四 層 紗 布 過(guò) 濾 收 集 濾 液 15 m L 用 蒸 餾 水 定 容 至 100 m L 配 制 成 孢 子 懸 浮 液 取 少 量 用 血 球 計(jì) 數(shù) 板 測(cè) 量 計(jì) 算 每 毫 升 孢 子 個(gè) 數(shù) 每 個(gè) 菌 株 3 次 重 復(fù) 1 3 茄 子 黃 萎 病 菌 最 佳 接 種 濃 度 的 篩 選 從 上 述 產(chǎn) 孢 力 強(qiáng) 的 菌 株 中 選 擇 4 種 不 同 培 養(yǎng) 類(lèi) 型 菌 株 各 1 株 A 型 菌 株 2015 078 B 型 菌 株 2015 037 C 型 菌 株 2015 061 D 型 菌 株 2015 102 25 130 r m in 搖 床 液 體 培 養(yǎng) 4 d 后 紗 布 過(guò) 濾 濃 度 分 別 稀 釋 至 10 8 10 7 10 6 10 5 10 4 個(gè) 孢 子 m L 茄 苗 長(zhǎng) 至 3 4 片 真 葉 期 采 用 傷 根 后 10 m L 菌 懸 液 灌 根 接 種 法 每 個(gè) 處 理 32 棵 茄 子 苗 每 個(gè) 處 理 3 次 重 復(fù) 1 4 茄 子 黃 萎 病 菌 接 種 方 法 的 篩 選 在 試 驗(yàn) 溫 室 內(nèi) 茄 苗 長(zhǎng) 至 3 4 片 真 葉 期 采 用 上 述 篩 選 出 的 接 種 菌 株 2015 61 接 種 濃 度 為 1 10 5 個(gè) 孢 子 m L 以 5 種 處 理 方 式 接 種 蘸 根 法 把 茄 子 幼 苗 輕 輕 拔 起 根 部 泥 土 清 洗 干 凈 后 蘸 根 30 m in 灌 根 法 在 根 際 1 cm 部 位 斜 切 一 刀 后 將 10 m L 孢 子 懸 浮 液 進(jìn) 行 灌 根 拌 土 法 把 孢 子 懸 浮 表 1 茄 子 黃 萎 病 菌 2 5 株 菌 株 來(lái) 源 T a b 1 T h e o r ig in o f 2 5 is o la te s o f V e r tic illiu m d a h lia e 形 態(tài) 類(lèi) 型 C ultural type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type B 型 type B 型 type B 型 type 菌 株 名 稱(chēng) Isolates 2015 018 2015 158 2015 020 2015 074 2015 017 2015 178 2015 019 2015 044 2015 101 2015 013 2015 147 2015 037 2015 081 采 集 地 點(diǎn) Location 雞 西 市 虎 林 市 華 南 村 雞 西 市 虎 林 市 華 南 村 雞 西 市 虎 林 市 華 南 村 綏 芬 河 市 朝 陽(yáng) 村 牡 丹 江 市 東 寧 市 北 河 沿 村 牡 丹 江 市 東 寧 市 北 河 沿 村 雞 西 市 密 山 市 鐵 西 村 雞 西 市 密 山 市 新 治 村 牡 丹 江 市 海 林 市 新 合 村 大 慶 市 三 勝 村 大 慶 市 八 村 牡 丹 江 市 盤(pán) 刀 溝 村 大 慶 市 泰 康 縣 萬(wàn) 丈 村 形 態(tài) 類(lèi) 型 C ultural type B 型 type B 型 type B 型 type B 型 type B 型 type C 型 type C 型 type C 型 type D 型 type D 型 type D 型 type D 型 type 菌 株 名 稱(chēng) Isolates 2015 014 2015 054 2015 037 2015 033 2015 182 2015 097 2015 136 2015 061 2015 129 2015 018 2 2015 102 2015 106 采 集 地 點(diǎn) Location 大 慶 市 肇 州 鎮(zhèn) 壯 大 村 綏 化 市 安 達(dá) 市 臥 里 屯 鄉(xiāng) 齊 齊 哈 爾 市 泰 來(lái) 縣 大 榆 樹(shù) 鄉(xiāng) 雙 鴨 山 市 集 賢 縣 先 鋒 村 烏 蘭 察 布 市 平 地 泉 鎮(zhèn) 平 一 村 加 格 達(dá) 奇 區(qū) 白 樺 鄉(xiāng) 鶴 崗 市 綏 濱 縣 興 邊 村 綏 化 市 肇 東 市 太 平 鄉(xiāng) 綏 化 市 肇 東 市 黎 明 鎮(zhèn) 吉 林 市 大 綏 河 鎮(zhèn) 干 溝 村 哈 爾 濱 市 雙 城 市 周 家 鎮(zhèn) 哈 爾 濱 市 賓 縣 64 第 1 期 賁 海 燕 等 茄 子 黃 萎 病 苗 期 抗 性 鑒 定 技 術(shù) 的 優(yōu) 化 及 抗 源 篩 選 液 拌 入 土 壤 中 均 勻 使 土 壤 接 種 終 濃 度 為 1 10 5 個(gè) 孢 子 m L 注 射 法 將 10 m L 孢 子 懸 浮 液 用 滅 菌 針 頭 注 入 茄 苗 莖 基 部 無(wú) 底 缽 傷 根 法 采 用 8 連 排 特 制 營(yíng) 養(yǎng) 缽 將 缽 底 部 長(zhǎng) 出 的 須 根 剪 斷 后 浸 泡 在 菌 懸 液 中 30 m in 以 無(wú) 菌 水 處 理 為 對(duì) 照 組 C K 每 個(gè) 處 理 3 次 重 復(fù) 每 次 重 復(fù) 32 棵 茄 子 苗 1 5 無(wú) 底 缽 傷 根 法 接 種 苗 齡 的 篩 選 采 用 無(wú) 底 缽 傷 根 法 對(duì) 茄 子 不 同 真 葉 期 3 4 片 5 6 片 和 7 8 片 進(jìn) 行 最 佳 接 種 苗 齡 的 篩 選 接 種 菌 株 為 2015 61 接 種 濃 度 1 10 5 個(gè) 孢 子 m L 剪 斷 缽 底 須 根 后 浸 泡 在 菌 懸 液 中 30 m in 每 個(gè) 處 理 32 株 苗 3 次 重 復(fù) 1 6 無(wú) 底 缽 傷 根 法 最 佳 接 種 時(shí) 間 的 篩 選 在 試 驗(yàn) 溫 室 中 茄 苗 長(zhǎng) 至 3 4 片 真 葉 剪 斷 無(wú) 底 缽 須 根 后 分 別 進(jìn) 行 10 20 30 m in 不 同 浸 泡 時(shí) 間 的 處 理 接 種 菌 株 為 2015 61 接 種 濃 度 為 1 10 5 個(gè) 孢 子 m L 每 個(gè) 處 理 32 株 苗 3 次 重 復(fù) 試 驗(yàn) 期 間 茄 苗 按 常 規(guī) 方 法 管 理 但 防 蟲(chóng) 不 治 病 1 7 病 情 調(diào) 查 及 分 級(jí) 標(biāo) 準(zhǔn) 所 有 試 驗(yàn) 均 在 黑 龍 江 省 農(nóng) 科 院 試 驗(yàn) 溫 室 內(nèi) 進(jìn) 行 白 天 平 均 溫 度 27 3 夜 間 平 均 溫 度 為 17 5 接 種 后 待 茄 子 黃 萎 病 典 型 發(fā) 病 癥 狀 出 現(xiàn) 后 進(jìn) 行 第 一 次 病 情 調(diào) 查 之 后 每 10 d 調(diào) 查 一 次 至 發(fā) 病 穩(wěn) 定 不 再 擴(kuò) 展 依 據(jù) 如 下 分 級(jí) 標(biāo) 準(zhǔn) 進(jìn) 行 病 情 級(jí) 數(shù) 調(diào) 查 計(jì) 算 病 情 指 數(shù) 茄 子 黃 萎 病 苗 期 分 級(jí) 標(biāo) 準(zhǔn) 0 級(jí) 植 株 生 長(zhǎng) 健 康 無(wú) 發(fā) 病 癥 狀 1 級(jí) 植 株 1 2 真 葉 發(fā) 黃 卷 曲 或 葉 片 脫 落 2 級(jí) 植 株 3 片 及 以 上 真 葉 發(fā) 黃 卷 曲 或 脫 落 3 級(jí) 整 個(gè) 植 株 的 真 葉 幾 乎 全 部 發(fā) 病 出 現(xiàn) 萎 蔫 黃 化 或 脫 落 而 植 株 頂 部 新 葉 片 健 康 或 發(fā) 黃 但 未 脫 落 全 株 未 完 全 枯 死 4 級(jí) 植 株 全 株 枯 死 或 只 剩 光 桿 發(fā) 病 率 及 病 情 指 數(shù) 按 照 以 下 公 式 計(jì) 算 發(fā) 病 率 發(fā) 病 株 數(shù) 總 株 數(shù) 100 1 病 情 指 數(shù) 相 應(yīng) 病 級(jí) 相 應(yīng) 病 級(jí) 病 株 數(shù) 總 株 數(shù) 最 高 級(jí) 值 100 2 1 8 茄 子 黃 萎 病 抗 病 性 鑒 定 與 評(píng) 價(jià) 采 用 以 上 建 立 的 無(wú) 底 缽 傷 根 法 對(duì) 本 研 究 室 保 存 的 50 份 茄 子 種 質(zhì) 資 源 進(jìn) 行 抗 性 鑒 定 依 據(jù) 這 些 材 料 品 種 在 本 單 位 占 地 700 m 2 的 茄 子 黃 萎 病 標(biāo) 準(zhǔn) 病 圃 的 結(jié) 果 進(jìn) 行 比 較 驗(yàn) 證 茄 子 黃 萎 病 抗 病 性 鑒 定 分 級(jí) 標(biāo) 準(zhǔn) 如 下 免 疫 I D I 0 抗 病 R D I 15 中 抗 M R 15 D I 30 耐 病 T 30 D I 50 中 感 M S 5070 1 9 統(tǒng) 計(jì) 分 析 應(yīng) 用 D PS 統(tǒng) 計(jì) 分 析 軟 件 進(jìn) 行 原 始 數(shù) 據(jù) 處 理 并 用 D uncan 氏 新 復(fù) 極 差 法 進(jìn) 行 差 異 顯 著 性 分 析 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 茄 子 黃 萎 病 菌 株 類(lèi) 型 的 篩 選 試 驗(yàn) 結(jié) 果 表 明 25 株 強(qiáng) 致 病 力 菌 株 中 7 株 有 較 好 的 產(chǎn) 孢 力 表 2 其 中 A 型 菌 株 3 株 B 型 菌 株 2 株 C 型 菌 株 1 株 D 型 菌 株 1 株 25 搖 床 培 養(yǎng) 第 4 天 產(chǎn) 孢 量 達(dá) 到 最 大 孢 子 濾 液 定 容 稀 釋 后 的 濃 度 為 1 1 10 7 2 3 10 7 個(gè) 孢 子 m L 推 算 原 濾 液 孢 子 濃 度 在 7 33 10 7 15 33 10 7 個(gè) 孢 子 m L 茄 子 黃 萎 病 菌 常 見(jiàn) 的 接 種 濃 度 為 1 10 7 個(gè) 孢 子 m L 本 試 驗(yàn) 中 篩 選 到 這 7 株 菌 株 產(chǎn) 孢 快 可 作 為 接 種 試 驗(yàn) 的 接 種 菌 株 其 他 菌 株 由 于 產(chǎn) 孢 量 不 足 或 達(dá) 到 最 佳 產(chǎn) 孢 量 所 需 時(shí) 間 較 長(zhǎng) 影 響 接 種 鑒 定 試 驗(yàn) 效 率 因 此 不 用 于 本 試 驗(yàn) 的 接 種 鑒 定 2 2 茄 子 黃 萎 病 菌 接 種 濃 度 的 篩 選 試 驗(yàn) 選 取 的 四 種 類(lèi) 型 菌 株 均 有 較 強(qiáng) 的 致 病 力 但 植 株 整 體 發(fā) 病 的 嚴(yán) 重 程 度 存 在 一 定 差 異 表 3 其 中 A 型 菌 株 2015 178 發(fā) 病 較 輕 接 種 25 d 不 同 接 種 濃 度 的 平 均 病 情 指 數(shù) 為 61 6 65 8 D 型 菌 株 2015 102 整 體 發(fā) 病 最 重 接 種 25 d 的 平 均 病 情 指 數(shù) 為 73 4 84 4 C 型 菌 株 2015 61 以 菌 液 濃 度 1 10 7 個(gè) 孢 子 m L 接 種 的 病 情 指 數(shù) 最 高 達(dá) 86 9 但 其 致 病 力 與 D 型 菌 株 65 江 西 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 44 卷 2015 102 比 較 在 相 同 菌 液 濃 度 下 無(wú) 顯 著 性 差 異 各 菌 株 不 同 濃 度 接 種 后 發(fā) 病 趨 勢(shì) 基 本 相 似 即 接 種 濃 度 越 大 發(fā) 病 越 嚴(yán) 重 表 3 當(dāng) 接 種 濃 度 為 1 0 10 6 個(gè) 孢 子 m L 及 以 上 時(shí) 各 菌 株 病 情 指 數(shù) 差 異 不 顯 著 發(fā) 病 趨 于 穩(wěn) 定 試 驗(yàn) 中 發(fā) 現(xiàn) 菌 株 2015 61 有 更 好 的 致 病 效 率 表 3 其 處 理 濃 度 為 1 10 5 個(gè) 孢 子 m L 時(shí) 接 種 15 d 和 25 d 的 病 情 指 數(shù) 分 別 為 44 3 和 78 1 與 1 10 6 個(gè) 孢 子 m L 及 以 上 的 病 情 指 數(shù) 差 異 不 顯 著 可 達(dá) 到 同 樣 的 致 病 效 果 因 此 接 下 來(lái) 的 鑒 定 方 法 試 驗(yàn) 和 抗 病 性 鑒 定 試 驗(yàn) 均 應(yīng) 用 菌 株 2015 61 接 種 以 減 少 菌 種 擴(kuò) 繁 工 作 量 提 高 試 驗(yàn) 成 效 2 3 茄 子 黃 萎 病 菌 接 種 方 法 的 篩 選 試 驗(yàn) 調(diào) 查 結(jié) 果 顯 示 5 種 接 種 方 法 均 能 誘 導(dǎo) 茄 苗 發(fā) 病 但 病 害 顯 癥 及 病 情 差 異 較 大 表 4 蘸 根 接 種 發(fā) 病 速 率 快 接 種 第 8 天 即 表 現(xiàn) 出 底 部 葉 片 變 黃 半 邊 退 綠 的 癥 狀 接 種 第 25 天 平 均 病 指 最 高 達(dá) 85 7 灌 根 法 在 接 種 傷 根 時(shí) 較 難 把 控 接 種 第 25 天 的 病 情 指 數(shù) 為 77 1 整 體 表 現(xiàn) 為 發(fā) 病 不 均 勻 注 射 法 接 種 病 情 進(jìn) 展 相 對(duì) 較 慢 病 情 嚴(yán) 重 度 低 于 蘸 根 接 種 和 灌 根 接 種 該 法 操 作 困 難 功 效 低 拌 土 法 接 種 顯 癥 慢 接 種 第 12 天 才 開(kāi) 始 顯 癥 整 體 發(fā) 病 輕 接 種 15 d 和 25 d 的 平 均 病 情 指 數(shù) 分 別 為 20 1 和 62 2 明 顯 低 于 其 他 接 種 方 法 且 發(fā) 病 不 均 勻 無(wú) 底 缽 傷 根 法 接 種 發(fā) 病 速 率 較 快 均 勻 度 好 操 作 簡(jiǎn) 便 接 種 后 第 15 25 天 的 平 均 病 指 分 別 為 44 5 和 80 5 接 種 成 效 與 蘸 根 接 種 和 灌 根 接 種 無(wú) 差 異 病 情 指 數(shù) 與 鑒 定 寄 主 的 實(shí) 際 抗 感 情 況 較 為 一 致 2 4 無(wú) 底 缽 傷 根 法 不 同 接 種 苗 齡 對(duì) 發(fā) 病 的 影 響 結(jié) 果 顯 示 茄 子 植 株 不 同 苗 齡 進(jìn) 行 接 種 對(duì) 黃 萎 病 發(fā) 病 程 度 的 影 響 較 大 表 5 其 中 3 4 片 真 葉 期 發(fā) 病 效 果 最 好 處 理 25 d 后 病 株 率 和 病 情 指 數(shù) 分 別 為 100 59 8 好 于 其 它 處 理 此 時(shí) 清 水 對(duì) 照 處 理 植 株 生 長(zhǎng) 良 好 無(wú) 發(fā) 病 而 4 5 片 真 葉 6 7 片 真 葉 期 病 情 指 數(shù) 在 53 7 以 上 但 其 清 水 對(duì) 照 處 理 植 株 葉 片 出 現(xiàn) 大 面 積 黃 化 花 葉 斑 植 株 老 化 嚴(yán) 重 干 擾 其 病 情 指 數(shù) 的 調(diào) 查 影 響 最 終 的 調(diào) 查 結(jié) 果 因 此 無(wú) 底 缽 傷 根 法 最 佳 接 種 苗 齡 為 3 4 片 真 葉 期 為 宜 2 5 無(wú) 底 缽 傷 根 法 不 同 接 種 時(shí) 間 對(duì) 發(fā) 病 的 影 響 兩 次 調(diào) 查 結(jié) 果 表 明 無(wú) 底 缽 傷 根 法 不 同 浸 泡 時(shí) 間 對(duì) 發(fā) 病 程 度 的 影 響 差 異 不 明 顯 表 6 接 種 第 15 天 浸 根 10 m in 的 病 情 指 數(shù) 為 31 0 發(fā) 病 率 為 90 6 浸 根 30 m in 的 病 情 指 數(shù) 為 33 9 發(fā) 病 率 為 87 5 接 種 第 表 2 不 同 培 養(yǎng) 性 狀 的 強(qiáng) 致 病 力 菌 株 2 5 株 產(chǎn) 孢 量 的 比 較 T a b 2 T h e s p o r e p r o d u c in g r a te s o f 2 5 H ig h ly p a th o g e n ic s tr a in s w ith d iffe r e n t c u ltu r e tr a its w e r e c o m p a r e d 形 態(tài) 類(lèi) 型 C ultural type A 菌 核 型 Sclerotia type B 菌 核 型 Sclerotia type 菌 株 名 稱(chēng) Isolates 2015 18 2015 158 2015 20 2015 74 2015 17 2015 178 2015 19 2015 44 2015 101 2015 13 2015 147 2015 37 2015 81 原 孢 子 濃 度 10 7 個(gè) 孢 子 m L 1 O riginal concentration 1 47 0 23 8 89 0 85 3 78 0 38 3 78 0 38 4 44 0 04 15 33 2 00 3 56 0 38 11 80 0 69 1 78 0 77 1 33 0 2 67 1 33 9 11 0 14 0 69 0 17 稀 釋 后 孢 子 濃 度 10 7 個(gè) 孢 子 m L 1 D iluted concentration 0 22 0 03 1 33 0 58 0 57 0 06 0 57 0 06 0 67 0 31 2 30 0 30 0 53 0 06 1 77 0 40 0 27 0 12 0 20 0 0 40 0 20 1 37 0 32 0 10 0 03 形 態(tài) 類(lèi) 型 C ultural type C 絲 核 型 Interm ediate type D 菌 絲 型 M ycelium type 菌 株 名 稱(chēng) Isolates 2015 14 2015 54 2015 37 2015 33 2015 182 2015 97 2015 136 2015 61 2015 129 2015 18 2015 102 2015 106 原 孢 子 濃 度 10 7 個(gè) 孢 子 m L 1 O riginal concentration 5 33 1 33 2 67 1 33 2 67 0 1 56 1 02 0 89 0 38 3 56 0 38 0 49 0 15 9 33 1 53 1 11 0 38 7 33 1 15 8 44 1 68 3 11 0 77 稀 釋 后 孢 子 濃 度 10 7 個(gè) 孢 子 m L 1 D iluted concentration 0 80 0 20 0 40 0 20 0 40 0 0 23 0 15 0 13 0 06 0 53 0 06 0 07 0 02 1 40 0 53 0 17 0 06 1 10 0 17 1 27 0 25 0 47 0 12 66 第 1 期 賁 海 燕 等 茄 子 黃 萎 病 苗 期 抗 性 鑒 定 技 術(shù) 的 優(yōu) 化 及 抗 源 篩 選 表 3 不 同 接 種 濃 度 對(duì) 茄 子 黃 萎 病 發(fā) 病 程 度 的 影 響 T a b 3 E ffe c ts o f d iffe r e n t in o c u lu m c o n c e n tr a tio n s o n r e s is ta n c e to e g g p la n t V e r tic illiu m w ilt 菌 株 名 稱(chēng) Isolates 2