2022 年 第 63 卷 第 1 期 129 收 稿 日 期 2021 10 12 基 金 項 目 銅 仁 市 科 技 支 撐 計 劃 銅 市 科 研 2020 45 號 貴 州 省 科 技 計 劃 黔 科 合 支 撐 2020 4Y065 貴 州 省 教 育 廳 青 年 科 技 人 才 成 長 項 目 黔 教 合 KY 字 2019 175 作 者 簡 介 譚 智 勇 副 教 授 博 士 E mail daydayupccc 163 com 文 獻(xiàn) 著 錄 格 式 譚 智 勇 諶 瀟 雄 韋 海 霞 等 茄 子 綿 疫 病 的 病 原 分 離 及 鑒 定 J 浙 江 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2022 63 1 129 130 133 DOI 10 16178 j issn 0528 9017 20212356 茄 子 綿 疫 病 的 病 原 分 離 及 鑒 定 譚 智 勇 1a 諶 瀟 雄 2 韋 海 霞 1b 鄭 燕 飛 1b 陳 文 俊 3 譚 軍 4 1 銅 仁 學(xué) 院 a 經(jīng) 濟(jì) 管 理 學(xué) 院 b 農(nóng) 林 工 程 與 規(guī) 劃 學(xué) 院 貴 州 銅 仁 554300 2 貴 州 財 經(jīng) 大 學(xué) 公 共 管 理 學(xué) 院 貴 州 貴 陽 550025 3 銅 仁 市 錦 江 綠 色 蔬 菜 產(chǎn) 業(yè) 發(fā) 展 有 限 公 司 貴 州 銅 仁 554300 4 中 國 熱 帶 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 香 料 飲 料 研 究 所 海 南 萬 寧 571533 摘 要 對 貴 州 碧 江 地 區(qū) 茄 子 綿 疫 病 病 菌 進(jìn) 行 分 離 純 化 培 養(yǎng) 采 用 生 物 學(xué) 分 子 學(xué) 鑒 定 等 方 法 對 其 進(jìn) 行 研 究 結(jié) 果 表 明 引 起 貴 州 碧 江 茄 子 綿 疫 病 的 病 原 菌 為 辣 椒 疫 霉 菌 為 當(dāng) 地 茄 子 綿 疫 病 的 防 治 提 供 了 理 論 依 據(jù) 關(guān) 鍵 詞 病 原 菌 鑒 定 茄 子 綿 疫 病 中 圖 分 類 號 S436 411 文 獻(xiàn) 標(biāo) 志 碼 A 文 章 編 號 0528 9017 2022 01 0129 02 茄 子 是 貴 州 省 聚 焦 種 植 七 個 優(yōu) 勢 單 品 蔬 菜 之 一 全 省 種 植 面 積 達(dá) 4 萬 hm 2 綿 疫 病 為 茄 子 三 大 病 害 之 一 全 生 育 期 均 可 發(fā) 生 苗 期 和 成 株 期 均 可 受 害 一 般 減 產(chǎn) 20 30 發(fā) 病 嚴(yán) 重 時 損 失 超 過 50 主 要 危 害 茄 果 也 能 危 害 葉 莖 花 器 等 部 位 據(jù) 相 關(guān) 文 獻(xiàn) 報 道 辣 椒 疫 霉 菌 1 3 和 煙 草 疫 霉 菌 3 4 均 能 引 發(fā) 茄 子 綿 疫 病 不 同 地 區(qū) 引 發(fā) 的 病 原 菌 有 所 差 異 據(jù) 筆 者 調(diào) 研 了 解 近 年 來 碧 江 區(qū) 茄 子 綿 疫 病 發(fā) 病 較 重 目 前 尚 未 見 貴 州 碧 江 茄 子 綿 疫 病 病 原 菌 的 研 究 報 道 本 研 究 對 該 病 害 的 病 原 菌 進(jìn) 行 了 形 態(tài) 學(xué) 和 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 明 確 引 起 貴 州 茄 子 綿 疫 病 病 原 菌 旨 在 為 生 產(chǎn) 上 防 治 茄 子 綿 疫 病 提 供 理 論 依 據(jù) 1 材 料 與 方 法 1 1 材 料 2020 年 9 10 月 分 2 次 在 貴 州 省 銅 仁 市 碧 江 區(qū) 和 平 鄉(xiāng) 蔬 菜 種 植 基 地 采 集 茄 子 綿 疫 病 病 株 1 2 病 原 菌 的 分 離 選 取 感 病 的 茄 子 果 實 用 75 的 乙 醇 擦 凈 表 面 去 除 表 皮 在 病 健 交 界 處 剪 取 小 塊 組 織 至 PDA 培 養(yǎng) 基 上 25 培 養(yǎng) 待 分 離 物 上 長 出 菌 絲 挑 取 菌 落 邊 緣 進(jìn) 行 純 化 置 于 4 冰 箱 中 保 存 1 3 病 原 菌 形 態(tài) 觀 察 病 原 菌 接 種 至 PDA 平 板 培 養(yǎng) 基 于 25 恒 溫 箱 暗 培 養(yǎng) 定 期 觀 察 病 原 菌 的 菌 落 生 長 記 錄 菌 落 的 顏 色 形 態(tài) 及 生 長 情 況 在 光 學(xué) 顯 微 鏡 下 拍 照 記 錄 病 原 菌 的 菌 絲 和 孢 子 形 態(tài) 1 4 病 原 菌 分 子 鑒 定 參 考 文 獻(xiàn) 4 采 用 rDNA ITS 序 列 分 析 方 法 對 病 原 菌 進(jìn) 行 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 以 ITS1 ITS4 為 引 物 對 菌 株 的 rDNA 進(jìn) 行 擴(kuò) 增 反 應(yīng) 條 件 為 95 預(yù) 變 性 5 min 35 個 循 環(huán) 95 變 性 30 s 58 退 火 30 s 72 延 伸 1 min 循 環(huán) 結(jié) 束 后 72 延 伸 7 min PCR 產(chǎn) 物 用 AxyPrep DNA 凝 膠 回 收 試 劑 盒 回 收 具 體 操 作 按 試 劑 盒 說 明 書 進(jìn) 行 取 各 菌 種 純 化 后 的 PCR 產(chǎn) 物 使 用 測 序 儀 ABI3730 XL 進(jìn) 行 DNA 測 序 將 所 得 序 列 在 NCBI 中 比 對 選 擇 相 似 度 最 大 的 序 列 作 為 物 種 鑒 定 結(jié) 果 2 結(jié) 果 與 分 析 2 1 茄 子 綿 疫 病 癥 狀 田 間 癥 狀 茄 子 綿 疫 病 主 要 為 害 果 實 圖 1 病 部 果 肉 呈 現(xiàn) 黃 褐 色 至 黑 褐 色 腐 爛 狀 部 分 嚴(yán) 重 果 實 上 面 有 白 色 絮 狀 菌 絲 2 2 病 原 菌 形 態(tài) 特 征 病 原 菌 在 PDA 培 養(yǎng) 基 上 培 養(yǎng) 菌 落 為 白 色 表 面 密 被 絨 狀 圖 2 中 A 菌 絲 無 隔 膜 孢 子 囊 呈 橢 圓 形 且 有 明 顯 乳 頭 狀 突 起 圖 2 中 B 按 照 柯 赫 氏 法 則 步 驟 將 所 分 離 到 的 疫 霉 菌 株 編 號 gjq 接 種 茄 子 后 發(fā) 病 癥 狀 與 大 田 的 癥 狀 相 似 從 發(fā) 病 部 位 再 次 分 離 得 到 的 病 原 菌 的 形 態(tài) 與 圖 2 中 A 相 同 130 2022 年 第 63 卷 第 1 期 圖 1 茄 子 綿 疫 病 果 實 癥 狀 2 3 病 原 菌 分 子 鑒 定 將 測 序 所 得 序 列 進(jìn) 行 BLAST 在 線 比 對 通 過 圖 2 茄 子 綿 疫 病 形 態(tài) 學(xué) 鑒 定 結(jié) 果 分 子 系 統(tǒng) 發(fā) 育 圖 3 分 析 發(fā) 現(xiàn) 分 離 獲 得 的 菌 株 gjq 的 rDNA ITS 序 列 與 NCBI 數(shù) 據(jù) 庫 中 對 應(yīng) 登 錄 號 KJ696538 1 LT707536 1 KC677731 1 GU111643 1 和 MH842162 1 序 列 的 相 似 度 為 100 病 原 菌 菌 株 gjq 鑒 定 為 辣 椒 疫 霉 菌 與 棕 櫚 疫 霉 P h y t o p h t h o r a p a l m i v o r a 相 似 度 為 65 圖 3 基 于 rDNA ITS 序 列 構(gòu) 建 的 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹 3 小 結(jié) 分 子 鑒 定 結(jié) 果 顯 示 貴 州 碧 江 茄 子 綿 疫 病 病 原 菌 為 辣 椒 疫 霉 菌 這 與 四 川 的 情 況 相 同 5 據(jù) 報 道 辣 椒 疫 霉 菌 寄 主 范 圍 包 括 葫 蘆 科 茄 科 豆 科 等 18 科 78 種 植 物 寄 主 范 圍 較 廣 6 8 是 一 種 土 傳 卵 菌 以 卵 孢 子 或 厚 垣 孢 子 在 土 壤 病 殘 體 中 越 冬 可 存 活 數(shù) 月 甚 至 更 長 時 間 對 貴 州 碧 江 區(qū) 茄 子 綿 疫 病 的 防 治 建 議 及 時 拔 除 病 株 防 止 其 進(jìn) 一 步 擴(kuò) 散 合 理 輪 作 換 茬 降 低 土 壤 中 病 菌 的 積 累 量 選 用 抗 病 品 種 降 低 病 害 感 染 率 選 用 有 針 對 性 的 藥 劑 開 展 防 控 降 低 病 害 發(fā) 生 率 參 考 文 獻(xiàn) 1 孔 志 強(qiáng) 徐 軍 陳 勝 文 等 茄 子 綿 疫 病 的 顯 微 識 別 與 綜 合 防 治 J 長 江 蔬 菜 2019 9 53 55 2 唐 可 蘭 何 振 華 李 健 生 等 6 種 藥 劑 對 茄 子 綿 疫 病 的 防 治 試 驗 J 湖 南 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2019 10 56 58 3 陸 家 云 植 物 病 害 診 斷 第 二 版 M 北 京 中 國 農(nóng) 業(yè) 出 版 社 1997 431 下 轉(zhuǎn) 第 133 頁 韓 海 亮 等 不 同 種 衣 劑 對 糯 玉 米 苗 期 草 地 貪 夜 蛾 的 防 治 效 果 133 別 是 84 1 90 2 90 3 19 由 于 50 氯 蟲 苯 甲 酰 胺 40 溴 酰 噻 蟲 嗪 和 50 吡 蟲 硫 雙 威 對 玉 米 田 鱗 翅 目 夜 蛾 科 害 蟲 的 防 治 效 果 較 好 本 研 究 將 此 3 種 種 衣 劑 列 為 候 選 種 衣 劑 在 本 研 究 中 出 苗 后 第 10 天 對 照 田 間 幼 苗 草 地 貪 夜 蛾 為 害 株 率 已 經(jīng) 達(dá) 到 38 9 第 17 天 超 過 50 蟲 口 壓 力 較 大 在 此 環(huán) 境 下 50 氯 蟲 苯 甲 酰 胺 40 溴 酰 噻 蟲 嗪 和 50 吡 蟲 硫 雙 威 3 種 種 衣 劑 對 草 地 貪 夜 蛾 有 效 控 制 時 間 為 出 苗 后 10 d 左 右 能 部 分 解 決 玉 米 出 苗 即 被 為 害 問 題 但 持 效 期 低 于 同 類 藥 劑 對 小 地 老 虎 等 地 下 害 蟲 持 效 期 短 可 能 與 藥 劑 降 解 有 關(guān) 現(xiàn) 有 研 究 表 明 較 高 濃 度 的 蟲 嗪 種 衣 劑 對 草 地 貪 夜 蛾 種 群 有 一 定 的 抑 制 作 用 但 隨 著 藥 劑 在 植 株 體 內(nèi) 的 降 解 抑 制 作 用 逐 漸 降 低 20 此 外 草 地 貪 夜 蛾 蟲 口 壓 力 大 取 食 量 大 有 可 能 是 造 成 持 效 期 短 的 原 因 因 此 要 進(jìn) 一 步 篩 選 合 適 的 種 衣 劑 提 高 幼 蟲 防 效 增 強(qiáng) 保 葉 效 果 延 長 持 效 期 解 決 草 地 貪 夜 蛾 在 玉 米 苗 期 的 為 害 問 題 此 外 在 種 衣 劑 防 效 下 降 后 應(yīng) 及 時 配 合 葉 面 防 治 手 段 減 輕 草 地 貪 夜 蛾 造 成 的 為 害 參 考 文 獻(xiàn) 1 郭 井 菲 趙 建 周 何 康 來 等 警 惕 危 險 性 害 蟲 草 地 貪 夜 蛾 入 侵 中 國 J 植 物 保 護(hù) 2018 44 6 1 10 2 姜 玉 英 劉 杰 朱 曉 明 草 地 貪 夜 蛾 侵 入 我 國 的 發(fā) 生 動 態(tài) 和 未 來 趨 勢 分 析 J 中 國 植 保 導(dǎo) 刊 2019 39 2 33 35 3 姜 玉 英 劉 杰 謝 茂 昌 等 2019 年 我 國 草 地 貪 夜 蛾 擴(kuò) 散 為 害 規(guī) 律 觀 測 J 植 物 保 護(hù) 2019 45 6 10 19 4 韓 海 亮 章 金 明 徐 紅 星 等 草 地 貪 夜 蛾 在 浙 江 東 陽 田 間 玉 米 植 株 上 的 發(fā) 生 及 防 治 策 略 J 昆 蟲 學(xué) 報 2020 63 5 613 623 5 韓 海 亮 包 斐 趙 福 成 等 草 地 貪 夜 蛾 藥 劑 防 控 效 果 初 報 J 浙 江 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2019 60 9 1511 1513 6 陳 澤 南 鄒 甜 王 志 偉 等 種 衣 劑 防 病 蟲 害 的 研 究 進(jìn) 展 J 安 徽 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2018 46 32 10 13 7 岳 瑾 王 品 舒 張 金 良 等 不 同 種 衣 劑 對 玉 米 生 長 及 病 蟲 害 防 治 效 果 研 究 J 農(nóng) 業(yè) 科 技 通 訊 2017 6 70 73 8 孫 斌 張 志 剛 王 素 平 等 14 種 懸 浮 種 衣 劑 對 玉 米 地 下 害 蟲 蚜 蟲 和 莖 基 腐 病 的 防 效 評 價 J 中 國 農(nóng) 學(xué) 通 報 2019 35 24 128 132 9 楊 書 成 王 燕 王 建 軍 等 60 g L 戊 唑 醇 懸 浮 種 衣 劑 對 玉 米 絲 黑 穗 病 防 治 效 果 試 驗 J 南 方 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報 2011 42 11 1350 1352 10 王 勇 慶 馬 千 里 譚 煜 婷 等 氯 蟲 苯 甲 酰 胺 對 草 地 貪 夜 蛾 的 毒 力 即 田 間 防 效 J 環(huán) 境 昆 蟲 學(xué) 報 2019 41 4 782 788 11 閆 文 娟 楊 帥 王 勇 慶 等 草 地 貪 夜 蛾 應(yīng) 急 防 控 藥 劑 田 間 藥 效 篩 選 J 應(yīng) 用 昆 蟲 學(xué) 報 2019 56 4 788 792 12 成 瑋 關(guān) 洪 丹 楊 漢 平 等 防 治 玉 米 地 草 地 貪 夜 蛾 藥 劑 試 驗 初 報 J 浙 江 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2020 61 12 2610 2611 2614 13 王 芹 芹 崔 麗 王 立 等 14 種 殺 蟲 劑 對 草 地 貪 夜 蛾 的 殺 卵 活 性 J 植 物 保 護(hù) 2019 46 6 80 83 113 14 DAVIS F M NG S S WILLIAMS W P Visual rating scales for screening whorl stage corn for resistance to fall armyworm J Technical Bulletin Mississippi Agricultural and Forestry Experiment Station 1992 186 1 9 15 李 濤 陳 劍 山 孫 明 凱 等 草 地 貪 夜 蛾 應(yīng) 急 防 控 技 術(shù) 優(yōu) 化 J 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報 2020 47 4 900 901 16 ALINE C L GABRIEL M M TALO D J Microsclerotia production of M e t a r h i z i u m spp for dual role as plant biostimulant and control of S p o d o p t e r a f r u g i p e r d a through corn seed coating J Fungal biology 2020 124 8 689 699 17 吳 嫦 娟 熊 騰 飛 尹 艷 瓊 等 玉 米 種 子 丸 粒 化 包 衣 處 理 對 草 地 貪 夜 蛾 的 防 治 效 果 J 環(huán) 境 昆 蟲 學(xué) 報 2020 42 6 1314 1321 18 何 發(fā) 林 孫 石 昂 于 灝 泳 等 氯 蟲 苯 甲 酰 胺 拌 種 對 3 種 玉 米 地 下 害 蟲 的 防 治 效 果 J 植 物 保 護(hù) 2020 46 1 253 261 19 任 美 鳳 陸 俊 姣 李 大 琪 等 2 種 種 衣 劑 對 小 地 老 虎 幼 蟲 的 毒 力 測 定 及 保 苗 效 果 J 中 國 植 保 導(dǎo) 刊 2017 37 4 68 70 20 巴 吐 西 張 智 寇 爽 等 噻 蟲 嗪 種 衣 劑 對 草 地 貪 夜 蛾 生 命 參 數(shù) 的 影 響 J 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報 2020 47 4 891 899 責(zé) 任 編 輯 張 瑞 麟 上 接 第 130 頁 4 SCHOCH C L SEIFERT K A HUHNDORF S Nuclear ribosomal internal transcribed spacer ITS regionas a universal DNA barcode marker for fungi J Proceedings of the National Academy of Science 2012 109 16 6241 5 席 亞 東 喬 昕 房 超 等 四 川 茄 子 對 綿 疫 病 菌 P h y t o p h t h o r a c a p s i c i 的 抗 性 鑒 定 與 評 價 J 北 方 園 藝 2020 14 8 17 6 席 亞 東 陳 國 華 謝 丙 炎 等 辣 椒 疫 霉 菌 全 球 傳 播 與 危 害 及 生 物 學(xué) 特 性 研 究 進(jìn) 展 J 北 方 園 藝 2016 11 199 203 7 張 曦 王 秀 雪 鄒 春 蕾 辣 椒 抗 疫 病 基 因 初 步 定 位 J 東 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報 2021 52 3 20 25 8 王 會 征 蘭 玉 彬 辣 椒 疫 霉 菌 果 膠 裂 解 酶 PL101 基 因 的 克 隆 及 生 物 信 息 學(xué) 分 析 J 微 生 物 學(xué) 通 報 2020 47 12 4021 4028 責(zé) 任 編 輯 張 瑞 麟